肝细胞损伤与细胞凋亡及肝细胞保护

肝细胞损伤与细胞凋亡及肝细胞保护提要细胞凋亡是细胞死亡的形式之一，多数研究显示，在各种肝疾病中，肝细胞损伤的结果可导致肝细胞凋亡，抑制细胞凋亡可达到保护肝细胞损伤的目的，凋亡抑制剂的运用将为临床上防治各种肝损伤提供新的途径。

细胞凋亡(apoptosis)是细胞死亡形式之一，它以细胞DNA 发生特异性的降解，形态上表现为核固缩、胞膜发泡和凋亡小体形成为特征，是由特定的基因调控，无明显细胞溶解的自杀过程。诸多生理及病理过程均有凋亡参与调节。近来大量的研究表明，细胞凋亡在肝细胞损伤过程中发挥重要作用。

1.细胞凋亡与肝疾病

1.1细胞凋亡与药物性肝炎

二甲基亚硝胺、放线菌酮、硫代乙酰胺等均为常见的肝毒性药物。体内及体外试验均发现它们可诱导肝细胞发生凋亡（1）。给鼠喂饲四氯化碳可产生经典的急性肝损伤动物模型，既往认为这种肝损伤的结果是坏死，近来Shi等（2）的研究向这一观点发出挑战，经运用流式细胞仪、透射电镜、电泳及原位末端标记等技术均检测到这种肝损伤动物模型的肝脏存在细胞凋亡。扑热息痛（醋氨酚，acetaminophen）过量使用可对机体产生严重的肝损害，甚至死亡，其肝损伤机制近年来研究较多，有报道其与凋亡有关（3）。

现在普遍认为，抗肿瘤药的抗癌机理之一为抗肿瘤药诱导肿瘤细胞发生凋亡。也有文献报道抗肿瘤药也可诱导正常肝细胞凋亡，

如Tsuki-date等（4）发现，经秋水仙碱与长春新碱处理后的体外培养的肝细胞，出现细胞凋亡所具有的典型的生化学特征，即梯状DNA 电泳图谱。联系到许多抗肿瘤药的肝毒性，不难推测其与细胞凋亡有联系。

1.2细胞凋亡与病毒性肝炎

有研究间接认为暴发性肝炎的发生与细胞凋亡有关，因为暴发性肝炎患者血液中可溶性Fas配体（sFas l）含量明显高于正常人，并与血液中ALT、AST并行升高，呈明显的正相关（5）。Fas抗体可诱导鼠发生暴发性肝功衰，蛋白水解酶抑制剂可抑制肝细胞凋亡，减轻Fas抗体引起的肝损伤程度（6）。

有研究报道，慢性乙肝与丙肝患者肝活检标本中，肝细胞凋亡率明显高于正常人，前者在平均6‰左右，后者在1‰以下，两组在统计学上有显著差异。慢性病毒性肝炎病检中常见嗜酸性小体，局灶性死亡，现在认为均是调亡的典型表现，而且，经IFN-α治疗后，肝脏的凋亡情况明显改善，肝功能发生好转（7）。这些都提示细胞凋亡与慢性病毒性肝炎有关。

1.3细胞凋亡与酒精性肝病给大鼠长期喂饲酒精，鼠肝细胞凋亡的比例会明显增加。Kawahara等为研究人酒精性肝病的凋亡情况，通过运用对Lewis抗原及断裂的DNA（两者均为凋亡之表现）的检测，发现除脂肪肝外，处于临床各期的酒精性肝病患者活检标本均发现有凋亡的表现，而且有意义的是凋亡多者转氨酶活动增强（8）。

1.4细胞凋亡与胆源性肝损伤胆道梗阻引起肝细胞分泌及

排泄胆汁发生障碍，肝细胞内外胆汁浓度升高。体外实验表现，胆汁中的胆红素与胆汁酸可使培养的鼠肝细胞发生凋亡，表现典型的凋亡时的形态学及生化学变化，且呈浓度依赖与时间依赖效应，浓度越高凋亡越多，作用时间越长，凋亡亦增加（1）。由此可知，肝细胞凋亡亦可能参与了胆源性肝损伤的病理机制。

1.5细胞凋亡与脓毒血症引起的肝损伤Haendeler等（9）利用猪内毒休克动物模型观察了肝细胞凋亡的情况，假手术组凋亡率有轻度的升高为对照组的166%±14%，但脓毒血症组升高更明显，达到295%±11%，而且在脓毒血症组肝细胞电泳时出现了梯状DNA带。

1.6细胞凋亡与肝缺血再灌注损伤缺血再灌注可引起肝损伤。Sasaki等（10）在研究肝缺血再灌注损伤的动物实验发现，缺血再灌注损伤可引起鼠肝细胞凋亡，而且凋亡多发生在再灌注后早期。Kuo等（11）观察了35例临床同种异体肝移植术后肝活检标本的凋亡情况，将缺血再灌注损伤的程度分级，随损伤程度的加重，凋亡的细胞数目增多，轻度损伤者凋亡率为0.3%±0.1%，而中度与重度损伤分别达1.7%±0.3%与6 .7%±1.6%，而且凋亡的程度与缺血再灌注损伤的生化学与病理学参数平行，呈正相关（11）。以上研究均提示细胞凋亡与肝缺血再灌注损伤密切相关。

1.7细胞凋亡与肝移植物排异反应有人对鼠肝移植标本行组织学检查，不仅凋亡信号阳性，而且细胞凋亡比例随排异反应的演进而增加，随排异反应的消退而减少，细胞凋亡反映了排异反应的严重程度（12）。也有研究显示同种异体肝移植鼠动物模型的早期（2～7

天），肝酶学指标升高与凋亡指数升高呈平行状态，第2天、3天、4天、7天的凋亡指数分别为0.25%、0.38%、0.47%及1.58%，而GST的含量依次为74ng/ml、86ng/ml、255ng/ml与1710ng/ml，而且包括肝实质细胞在内，胆管细胞也发生凋亡。这些也说明细胞凋亡与肝移植引起的排异反应有关（13）。

2.细胞凋亡信号的传导

在肝细胞受到损伤时，有些被称为死亡因子的细胞因子被激活，如Fas l/Fas抗体，TNFα、TGFβ1、INFγ等，通过与靶细胞上的受体结合，引起凋亡的发生。

2.1 Fas/Apo-1传导途径Fas/Apo-1抗原也称CD95，是效应细胞表面的一种膜受体，属于神经生长因子一肿瘤坏死因子受体家族。携带突变的Fas基因的转基因大鼠体可抵抗由Fas抗体对肝细胞凋亡的诱导。肝细胞表面存在Fas受体，体内与体外实验均证实Fas 抗体或Fas配基可通过与Fas接合诱导肝细胞凋亡，血清转氨酶增加，引起暴发性肝功衰。大量的研究显示Fas介导的细胞凋亡与病毒性肝炎、酒精性肝病、感染性休克、脓毒血症及全身炎性反应综合征引起的肝损害有密切关系（5）。

2.2 TNFα及其受体传导途径TNFα是具有多种生物学效应的细胞因子，对肝脏的生长、炎性反应及细胞毒性均有调节作用。体内及体外实验均发现，TNFα可诱导肝细胞凋亡，这是因为：（1）TNF α不仅诱导肝细胞死亡，而且能介导Kupffer氏细胞及肝窦内皮细胞发生凋亡；（2）在活体内经予大量的放线菌素D导致肝组织内TNFα