植物磷含量的测定钼锑抗比色法
植物磷含量的测定钼锑抗比色法
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钼锑抗比色法水质测磷方程式 概述说明
钼锑抗比色法水质测磷方程式概述说明1. 引言1.1 概述水质是关系到人类健康和生态环境的重要指标之一。
其中，磷是水体中常见的污染物之一，其过量存在会引发水华、富营养化等环境问题。
因此，对于准确测量磷的含量以及监测和控制磷的排放具有重要意义。
本文将介绍钼锑抗比色法作为一种有效测定水质中磷含量的分析方法，并提供了该方法方程式以及其在实际应用中的案例分析，同时讨论了如何通过优化与改进策略来提高该方法的准确性和灵敏度。
1.2 文章结构本文章共分为五个部分组成。
第一部分为引言，概述了背景及目标，并简要介绍了文章结构。
第二部分将详细介绍钼锑抗比色法在水质测磷中的理论基础、实验方法、结果与分析等内容。
第三部分将通过具体案例对钼锑抗比色法在不同场景下的应用进行详细分析与说明。
第四部分将探讨方程式优化与改进策略，并提出可能适用于该方法的新试剂配方和反应条件，以及利用新技术提高钼锑抗比色法的灵敏度和准确性。
最后一部分为结论与展望，总结了研究的主要结果并展望了未来在该领域的发展方向。
1.3 目的本文旨在全面介绍钼锑抗比色法作为一种测定水质中磷含量的有效方法，并通过具体案例分析其在实际中的应用。
同时，本文还探讨了如何通过优化与改进策略来提高该方法的准确性和灵敏度。
通过对这些内容的详细阐述，希望能够提供给读者一个全面了解钼锑抗比色法水质测磷方程式及其应用的参考，并对未来该领域的研究方向产生启示。
2. 钼锑抗比色法水质测磷方程式2.1 理论基础：钼锑抗比色法是一种常用于水质测磷的方法，它基于钼锑混合试剂与磷酸盐之间的反应产生的蓝紫色化合物。
这种方法广泛应用于环境监测、污水处理和饮用水安全等领域。
该反应过程中，钼锑混合试剂与磷酸盐在碱性条件下发生反应生成蓝紫色络合物。
络合物的颜色与磷酸盐的浓度成正比关系。
通过光密度或吸光度测量绘制标准曲线，并利用其与待测样品之间的光密度或吸光度差异来确定样品中磷酸盐的含量。
2.2 实验方法：（详细介绍钼锑抗比色法测磷的实验步骤）首先，准备好所需材料和仪器设备，包括钼锑混合试剂、标准品溶液、分光光度计等。
植株全磷含量测定钼锑抗比色法
植株全磷含量测定钼锑抗比色法
植株全磷含量测定是一种常用的分析方法，钼锑抗比色法是其中一种常用的测定方法。
该方法基于钼酸钠在酸性条件下与磷酸盐形成复合物，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物，通过比色法测定其吸光度来计算样品中磷的含量。
该方法的具体步骤如下：
1. 样品制备：将植株样品取适量，经过研磨、筛选等处理后，按照规定的方法进行矿酸或硝酸-过氧化氢消化。
2. 样品处理：取消化后的样品，加入硝酸、氯化钾等试剂，使磷酸盐转化为磷酸根离子。
3. 钼锑试剂的制备：将钼酸钠、醋酸和硫酸混合，加入氯化锑钠，制备钼锑试剂。
4. 反应：将处理后的样品加入钼锑试剂中，经过适当时间的反应后，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物。
5. 吸光度测定：将反应产物在特定波长下进行比色测定，根据标准
曲线计算样品中磷的含量。
该方法的优点是简单、快速、精确，适用于大面积的植物磷素含量测定。
但是该方法也存在一些限制，例如样品中的其他化合物可能会影响测定结果，需要进行干扰消除等处理。
土壤速效磷的测定实验报告
一、实验目的了解土壤速效磷的测定方法，掌握比色法测定土壤速效磷的操作步骤，熟悉土壤中磷素形态及其土壤供磷能力与土壤速效磷的关系，为土壤施肥提供科学依据。
二、实验原理土壤速效磷是指土壤中可被植物吸收利用的磷素，主要包括水溶性磷、弱酸溶性磷等。
比色法测定土壤速效磷是基于土壤中的磷素与钼锑抗试剂发生反应，生成蓝色络合物，其颜色深浅与土壤速效磷含量成正比。
三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、钼锑抗试剂、氢氧化钠、盐酸、磷酸二氢钾、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、振荡器、分光光度计、烧杯、容量瓶、滴定管、移液管等。
四、实验步骤1. 土壤样品处理取适量土壤样品，放入烧杯中，加入10倍体积的蒸馏水，振荡混合，过滤。
取滤液备用。
2. 标准溶液配制准确称取0.439克磷酸二氢钾，溶解于1升容量瓶中，定容。
此溶液为100 mg/L 磷标准溶液。
3. 标准曲线绘制取6个比色皿，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL的磷标准溶液，再加入1.5 mL钼锑抗试剂，用蒸馏水定容至10 mL。
室温下放置10分钟，用分光光度计在波长690 nm处测定吸光度。
以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4. 土壤样品测定取5个比色皿，分别加入1.5 mL土壤滤液，再加入1.5 mL钼锑抗试剂，用蒸馏水定容至10 mL。
室温下放置10分钟，用分光光度计在波长690 nm处测定吸光度。
根据标准曲线，计算土壤速效磷含量。
五、结果与分析1. 标准曲线绘制以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
标准曲线线性良好，相关系数R²=0.998。
2. 土壤样品测定根据标准曲线，计算土壤样品的速效磷含量。
实验结果如下：样品1：0.8 mg/kg样品2：1.2 mg/kg样品3：0.6 mg/kg样品4：1.0 mg/kg样品5：0.9 mg/kg六、讨论与结论1. 通过本次实验，掌握了比色法测定土壤速效磷的操作步骤，了解了土壤中磷素形态及其土壤供磷能力与土壤速效磷的关系。
有效磷的测定(Olsen法)
土壤有效磷的测定（Olsen法）（pH 8.5 0.5molL-1NaHCO3浸提—钼锑抗比色法）一、实验目的及说明土壤中有效磷的含量，随土壤类型、气候、施肥水平、灌溉、耕作栽培措施等条件的不同而异。
通过土壤有效磷的测定，有助于了解近期内土壤供应磷的情况，为合理施用磷肥及提高磷肥利用率提供依据。
土壤速效磷的测定中，浸提剂的选择主要是根据土壤的类型和性质测定。
浸提剂是否适用，必须通过田间试验来验证。
浸提剂的种类很多，近20年各国渐趋于使用少数几种浸提剂，以利于测定结果的比较和交流。
我国目前使用最广学的浸提剂是0.5molL-1NaHCO3溶液（Olsen法），测定结果与作物反应有良好的相关性[1]，适用于石灰性土壤、中性土壤及酸性水稻土。
此外还使用0.03molL-1NH4F-0.025molL-1HCl溶液（Black法）为浸提剂，适用于酸性土壤和中性土壤。
同一土壤用不同的方法测得的有效磷含量可以有很大差异，即使用同一浸提剂，而浸提时的土液比、温度、时间、振荡方式和强度等条件的变化，对测定结果也会产生很大的影响。
所以有效磷含量只是一个相对的指标。
只有用同一方法，在严格控制的相同条件下，测得的结果才有相对比较的意义。
在报告有效磷测定的结果时，必须同时说明所使用的测定方法。
二、方法原理石灰性土壤中磷主要以Ca-P（磷酸钙盐）的形态存在。
中性土壤Ca-P、Al-P（磷酸铝盐）、Fe-P（磷酸铁盐）都占有一定的比例。
0.5molL-1NaHCO3（pH8.5）可以抑制Ca2+的活性，使某些活性更大的与Ca结合的P浸提出来；同时，也可使比较活性的Fe-P和Al-P起水解作用而被浸出。
浸出液中磷的浓度很低，须用灵敏的钼蓝比色法测定，其原理详见土壤全磷的测定章节。
当土样含有机质较多时，会使浸出液颜色变深而影响吸光度，或在显色出现浑浊而干扰测定，此时可在浸提排荡后过滤前，向土壤悬液中加入活性碳脱色，或在分光光度计800nm 波长处测定以消除干扰。
2种植物磷含量的检测方法比较研究
2种植物磷含量的检测方法比较研究李会娟【摘要】钼锑抗检测法和钒钼黄检测法2种比色法的比较研究结果表明，2种比色方法的检测结果完全一致，钼锑抗比色法适宜检测磷含量较低的样品，如小麦、玉米、花生秸秆及小麦、玉米籽粒；钒钼黄比色法适宜检测磷含量较高的样品，如花生籽粒。
%comparative study of 2 kind of colorimetric comparison method including molybdenum antimony resistance detecting method and vanadium molybdenum yellow detecting method showed that, the result of two colorimetric comparison method was consistent, molybdenum antimony resistance detecting method was suitable to detect the samples with low phosphorus content, such as wheat, corn ,peanuts, maize and wheat straw. Vanadium molybdenum yellow colorimetry method was suitable to detect the samples with higher phosphorus contain, such as peanut kernel.【期刊名称】《现代农业科技》【年(卷),期】2012(000)011【总页数】2页(P16-17)【关键词】植物磷含量;钼锑抗比色法;钒钼黄比色法;比较【作者】李会娟【作者单位】河南省南阳市农产品质量检测中心,河南南阳473000【正文语种】中文【中图分类】S132;Q946.912磷是生命体必需的大量元素，是蛋白质、核酸、辅酶、核苷酸、磷脂等一系列重要生物质的结构组分，在植物的许多主要功能中，担任储存和运输能量的功能、代谢的作用，对种子的形成不可或缺。
土壤有效磷测定方法
①紫外可见分光光度计；②恒温振荡机或往返式振荡机；③带盖塑料瓶；④酸度计；⑤具塞；⑥比色管25mL;⑦150mL试剂三角瓶。
3相关试剂的制定
3.1 无磷活性炭粉
将活性炭粉先用1:1盐酸浸泡24h，然后移至平板，抽气过滤，用水淋洗4-5次，再用浸提剂浸泡24h，在平板漏斗上抽气过滤，用水洗尽碳酸氢钠，并至无磷为止，烘干备用。
土壤有效磷测定方法
氮、磷、钾、钙等大量元素，是植物生长发育不可缺少的，虽然作物对这些元素需要的量相差很大，但是它们对作物生长发育起的作用同等重要，而且不可相互代替。过多地使用某种营养元素，不仅会对作物产生毒害，还会妨碍作物对其它营养元素的吸收，引起缺素症。例如磷过多会降低钙、锌、硼的有效性。土壤有效磷的测定，不仅可了解近期磷素供应水平状况，而且是植物合理施肥的依据之一。因此，推广测土配方施肥，大力宣传植物所需营养元素的重要性及测定土壤营养元素的含量迫在眉睫。现就土壤有效磷的测定方法介绍如下：
4.2标准曲线的绘制
分别吸取5ug/mL磷标准溶液0mL，0.50mL，lmL，1.50mL，2mL，2.50mL，3.00mL于25ml比色管中，加入浸提剂10mL，显色剂5mLJ慢慢摇动使C02逸出再以水稀释至刻度，充分摇动，逐尽C02，定容，既为含磷0.00，0.10,0.20,0.30,0.40，0.50，0.60ug/mL磷的标准系列溶液。在室温高于20%处放置30min后，进行比色，测量吸光度值和浓度值，绘制标准曲线或建立回归方程。
1 方法原理及适用范围
碳酸氢钠提取采取钼锑抗比色法。石灰性土壤中的有效磷，多以磷酸一钙和磷酸二钙状态存在，可用pH值8.50，浓度0.05mol/L的碳酸氢钠提取到溶液中。磷酸一钙可直接溶于碳酸氢钠水溶液中，而磷酸二钙与碳酸氢钠反应成为磷酸钠而溶解，钙则成为碳酸钙的沉淀而析出。其反应式为：
LYT 1232-2015 有效磷 方法验证
1检验依据本方法依据L Y/T 1232-2015 有效磷的测定钼锑抗比色法测定2仪器和设备紫外-可见分光光度计；电子天平；酸度计3分析步骤参考L Y/T 1232-2015 有效磷的测定钼锑抗比色法测定4. 验证结果4.1 校准曲线及线性范围4.1.1酸性土壤试样（pH＜6.5）校准曲线，数据见表1表1 校准曲线数据回归方程: y = 0.0104x+0.0039 r=0.99974.1.1中性、石灰性土壤试样（pH≥6.5）校准曲线，数据见表2表2 校准曲线数据回归方程: y = 0.0104x+0.0036 r=0.9998 4.2 检出限实验4.2.1 酸性土壤试样（pH ＜6.5）在10个空白样品中分别加入4倍检出限浓度的标准物质进行测定，按 HJ 168-2010规定MDL=S t n ⨯-)99.0,1(进行计算，结果如下：表3 方法检出限测定结果（N=10）由 W=m计算得出方法检出限为：0.5 mg/kg其中：C — 从标准曲线求得显色液中磷的含量，μg ；m — 试样质量，g ；m=5.0g ；t — 分取倍数，50/10=5。
4.2.1中性、石灰性土壤试样（pH ≥6.5）在10个空白样品中分别加入4倍检出限浓度的标准物质进行测定，按 HJ 168-2010规定MDL=S t n ⨯-)99.0,1(进行计算，结果如下：表4 方法检出限测定结果（N=10）由 W=m计算得出方法检出限为：0.5 mg/kg 其中：C — 从标准曲线求得显色液中磷的含量，μg ；m — 试样质量，g ；m=2.5g ；t — 分取倍数，50/10=5。
4.3 精密度实验4.3.1 酸性土壤试样（pH<6.5）取4个浓度水平的样品,按照步骤3，分别做6次平行实验，计算出有效磷的平均值，最大绝对偏差，最大相对偏差，相对标准偏差，结果见表5表5 精密度测试数据4.3.2 中性、石灰性土壤试样（pH≥6.5）取4个浓度水平的样品,按照步骤3，分别做6次平行实验，计算出有效磷的平均值，最大绝对偏差，最大相对偏差，相对标准偏差，结果见表6表6 精密度测试数据4.4 准确度实验取2个有证标准物质，按照步骤3，分别做6次平行实验，计算平均值，相对误差，检测结果见表7。
植物组织中无机磷含量的测定
目的意义磷参与植物体内多种代谢，促进碳水化合物的合成、转化和运输，施磷对提高作物产量和品质有明显的效果。
通过本实验掌握植物体内磷含量测定的方法及其原理。
一、实验原理测定磷含量的方法主要有磷钼蓝比色法(适宜含磷量较低)和钒钼黄比色法(适宜含磷量较高)等。
可直接用于植物组织可溶性磷的测定。
如用于植物材料全磷含量测定，需将材料用浓H2SO4—H202消煮转化为可溶性磷。
1．磷钼蓝比色法在适宜的酸性条件下，磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼酸按，并被抗坏血酸或氯化亚锡等还原剂还原，生成蓝色的磷钼蓝，并在650 nm处有最大吸收蜂，其颜色深浅与含磷量成正比，可直接比色测定。
2．钒钼黄比色法待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸，溶液黄色的深浅与磷酸含量成正比，生成物在440nm波长有吸收高峰。
可用比色法定量磷。
此法的优点是黄色稳定，对显色条件要求不十分严格，操作简便，干扰物少，灵敏度较低，工作范围随选用的吸收波长而异。
选用波长（nm）400nm 440nm 470nm 490nm测磷工作范围（mg/g）0.75-5.5 2.0-15 4-7 7-20二、材料、设备及试剂1．材科玉米、接骨木、瓜类、葡萄等幼苗；各种植物的根、茎、叶、种子及全株过60-80目筛干粉。
2．设备电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、容量瓶、刻度试管、漏斗、小纸等。
3．试剂(1)2.5％钼酸铵溶液称取(NH4)2M o O4鸣’25g用蒸馏水溶解并定容至1000ml。
(2)10mg/L磷标准液精确称取烘至恒重的分析纯KH2PO40.4398g加蒸馏水溶解定容至1000m1，摇匀；取此液10ml定容至100ml即为10mg/L磷标准液。
(3)10％抗坏血酸溶液（现用现配)。
‘(4)定磷试剂按下列顺序及比例将各试剂混合即成。
蒸馏水、6mol/L硫酸、2.5％钼酸铵、10％抗坏血酸按2:1:1:1(体积比)混合，贮于棕色瓶内。
若变为棕黄色即不能使用。
植物样全磷测定方法
植物样全磷测定—钼锑抗比色法1、方法原理植物中的磷以有机态为主，用H2SO4-H2O2氧化剂消煮植物样品时，其中的有机物经脱水碳化、氧化分解，变成CO2和H2O,使磷素转化为磷酸盐，然后用钼锑抗比色法测定。
2、仪器设备（1）分光光度计（2）消煮管（3）半微量定氮蒸馏器（4）半微量滴定管3、试剂（1）H2O2[30%,分析纯]（2）浓硫酸[1.84g/cm3]（3）钼锑贮存溶液：浓硫酸153mL缓慢倒入约400mL蒸馏水中，同时搅拌。
放置冷却。
另称10g钼酸铵溶于60摄氏度的300mL蒸馏水中，冷却。
将配好的硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中，同时搅拌。
随后加入酒石酸锑钾（5g/L）100mL。
避光贮存。
（4）钼锑抗显色剂：1.50g抗坏血酸加入到100mL钼锑贮存液中。
随配随用，有效期一天。
（5）二硝基酚指示剂：0.2g二硝基酚溶于100mL水中（6）磷标准贮存溶液：0.4390g磷酸二氢钾（105摄氏度烘干2h）溶于200mL蒸馏水中，加入5mL浓硫酸，转入1L容量瓶中定容。
此为磷标准贮存液（100mg/L）,可以长期贮存。
（7）磷标准液：取磷标准贮存液准确稀释20倍，即磷标准溶液（5mg/L）不宜久存。
4、操作步骤（1）H2SO4-H2O2消煮称取烘干磨碎植物样品0.15g置于消煮管中，加入8mL浓硫酸，浸泡一晚上。
于360摄氏度消煮1h，稍冷后加入10滴H2O2，消煮20min，稍冷，重复加入H2O2，直至溶液无色或清亮。
将消煮液洗入100ml容量瓶中，用水定容，摇匀，静置。
（2）吸取上一步消煮液10ml于50ml容量瓶中，加水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用氢氧化钠（2mol/L）和硫酸（0.5mol/L）调节pH至溶液刚成微黄色。
然后加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容。
放置30min后，在分光光度计用波长700nm比色，以空白溶液为参比液，读取吸收值，在工作曲线上查找出显色液的P值。
碳酸氢钠浸提——钼锑抗比色法(Olsen法)
碳酸氢钠浸提——钼锑抗比色法（Olsen法）1.方法提要碳酸氢钠溶液除可提取水溶性磷外，也可以抑制Ca2+的活性，使一定量活性较大的Ca-P 盐类中的磷被浸出，也可时一定量活性Fe-P和Al-P盐类中的磷通过水解作用而浸出。
由于浸出液中Ca、Fe、Al浓度较低，不会产生磷的再沉淀。
浸提液中的磷可用钼锑抗比色法定量测定。
土壤浸出的磷量与土液比、温度、振荡时间及方式有关。
本法严格规定土液比为1：20，浸提溶液温度为25℃±1℃，振荡提取时间为30min。
2.适用范围本方法适用于石灰性土壤有效磷含量的测定；中性土壤及水稻土也可参照使用。
3.主要仪器设备分光光度计或紫外——可见分光光度计；恒温（控温25℃±1℃）往复式或旋转式振荡机，或放置在恒温室的普通振荡机，满足180 r·min-1 ± 20 r·min-1的振荡频率或达到相同效果；塑料瓶；无磷滤纸。
4.试剂(1)氢氧化钠溶液NaOH=100g·L-1：称取10g氢氧化钠溶于100ml水中。
(2)碳酸氢钠浸提剂NaHCO3=0.50mol·L-1,pH=8.5称取42.0g碳酸氢钠溶于约950ml水中，用100g·L-1氢氧化钠溶液调节pH至8.5，用水稀释至1L。
贮存于聚乙烯瓶或玻璃瓶中备用。
如贮存时间超过20d，使用时必须重新校pH。
(3) 钼锑抗试剂的配制A试剂：①钼酸铵溶液: 溶解12.0g分析纯钼酸铵于250ml的无离子水中；②酒石酸氧锑钾溶液：溶解0.291g分析纯酒石酸氧锑钾于100ml无离子水中；③把上述两种已溶解的试剂加到1000ml 5.76N H2SO4中（注：160ml的浓硫酸/每升），混匀并定容2000ml.即得试剂A. 此试剂放在不透明的塑料瓶中可以存放至少4个月。
B试剂：钼锑抗显色剂：溶解1.32g分析纯抗坏血酸于上述250ml试剂A中，混匀即可。
测定土壤速效磷实验报告
一、实验目的1. 掌握土壤速效磷测定的原理和方法。
2. 了解土壤中磷素形态及其土壤供磷能力与土壤速效磷的关系。
3. 学会使用比色法测定土壤速效磷含量。
二、实验原理土壤速效磷是指土壤中可被植物吸收利用的磷素，主要包括土壤溶液中的磷酸根离子和一些易溶的无机磷化合物、吸附态的磷。
土壤速效磷的测定方法有化学法、物理法、生物法等。
本实验采用比色法测定土壤速效磷含量，主要原理是利用钼锑抗比色法测定土壤溶液中的磷含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、标准磷溶液、钼锑抗试剂、盐酸、氢氧化钠、硝酸、硫酸、无水乙醇、水等。
2. 实验仪器：塑料杯、电子天平、移液器、分光光度计、容量瓶、烧杯、玻璃棒、漏斗等。
四、实验步骤1. 准备标准溶液：准确称取0.439克磷酸二氢钾（KH2PO4），转入1升容量瓶中，用水定容，得到100 mg/L的磷标准溶液。
2. 样品处理：准确称取5.00 g土壤样品于100 mL烧杯中，加入25 mL 0.5mol/L NaHCO3溶液，搅拌均匀，放置30 min。
3. 浸提：将烧杯放入恒温振荡器中，在25℃下振荡1 h。
4. 过滤：用滤纸和漏斗将溶液过滤，取滤液待测。
5. 测定：取一定量的滤液，加入适量的钼锑抗试剂，在680 nm波长下测定吸光度。
6. 标准曲线绘制：取一定量的标准磷溶液，依次加入适量的钼锑抗试剂，在680 nm波长下测定吸光度，以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
7. 土壤速效磷含量计算：根据标准曲线，查得样品溶液的磷含量，计算土壤速效磷含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得出标准曲线方程为A=0.0117C-0.0052，相关系数R²=0.9987。
2. 土壤速效磷含量测定：根据标准曲线，查得样品溶液的磷含量为1.23 mg/L，计算得出土壤速效磷含量为245.0 mg/kg。
3. 结果分析：本次实验测定的土壤速效磷含量较高，说明该土壤供磷能力较强，有利于植物吸收利用。
有效磷测定过程中常见的问题及解决方法
有效磷测定过程中常见的问题及解决方法摘要：近年来，由于生态环境遭到破坏，土壤中养分含量分布不均，土壤污染问题亟需解决。
土壤中有效磷的含量作为土壤中一项重要的基本指标，越来越被人们所重视。
土壤中有效磷测定的常用方法是根据土壤的酸碱性用不同的浸提剂提取后，用钼锑抗比色法测定，操作繁琐，耗费时间，试剂量大，影响因素较多。
本文就有效磷测定步骤及测定时所遇到的问题，做了以下探讨和总结。
关键词：有效磷；含量；浸提。
1前言磷是自然界中极为重要的一种大量元素。
土壤中磷含量过低会造成植物生长缓慢，磷含量过剩会造成植物对微量元素的吸收减少，导致作物减产，甚至会随地表径流以及矿物质的淋滤向下迁移造成水体磷含量超标。
磷作为易被植物作物吸收利用的养分，土壤中磷含量会随着种植制度以及作物的影响不断发生变化。
因此其含量的相对稳定水平可间接反映出土壤供磷能力的强弱，同时也可以将这个范围作为土壤是否需要施磷肥的重要参考依据。
土壤中的有效态的磷是指在特定的环境条件下，使用浸提液可将其浸提出来，并通过特定的测试方法，计算出土壤中有效磷的含量。
土壤中有效磷并不是具有一定具体形态的磷元素，对于酸性土壤（pH＜6.5），宜采用氟化铵盐酸浸提法；对于碱性土壤（pH≥6.5），宜采用碳酸氢钠浸提法[1]。
因为检测方式不同会导致在同一土壤样品中得到的含量也会不同。
因此，土壤中有效磷的含量只有通过相同的实验条件才能测出较为稳定的相对结果。
2试验设备和试剂2.1试验设备：土壤粉碎机；恒温水浴振荡器；多波长紫外可见分光光度计；超声波清洗器等；2.2实验试剂：氢氧化钠；浓硫酸；碳酸氢钠，钼酸铵；L（+）抗坏血酸；酒石酸锑钾；磷酸二氢钾；二硝基酚等。
试剂应按照规定的方式配制和保存。
3样品制备将土壤样品置于风干盘中，平铺为二至三厘米厚度的薄层，挑出其中的碎石、砂砾和动植物残体等杂物。
待样品完全风干后，用四分法将其充分粉碎混合均匀，并过10目的标准筛，最后装入聚乙烯自封袋中以待备用。
磷的测定(钼锑抗分光光度法_)
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ug
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721分光 光度计
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实验原理
钼锑抗分光光度法的原理
植物样品经消煮使各种形态的磷转变成磷酸 盐。在一定酸度下,待测液中的正磷酸与钼酸铵 和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸,后者在室温 下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物,可用吸 光光度法测定。
数据处理
Wp =
×1000
式中: Wp ——植物磷的质量分数,g/kg; c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质 量浓度, mg/L; V1——消煮液定容体积, ml; V2——吸取测定的消煮液体积, ml; V3——显色液体积, ml; m——称样量,g;
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六、思考题
１、用分光光度计测吸光度时，如果比色皿中有气 泡对结果有什么影响？
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五、注意事项
１、室温低于13℃时，可在20～30℃水浴中，显色15min 2、操作所用的玻璃器皿，可用1+5的盐酸浸泡2h，或用不含 磷酸盐的洗涤剂刷洗 3、比色皿用后应以稀硝酸或铬酸洗液浸泡片刻，以除去吸附 的磷钼蓝显色物
硫酸-高氯酸-钼锑抗比色法测定土壤全磷的注意事项
硫酸-高氯酸-钼锑抗比色法测定土壤全磷的注意事项摘要针对应用硫酸-高氯酸-钼锑抗比色法测定土壤全磷过程中影响测定值的因素进行了阐述,包括样重、消煮时间、定溶浓度、显色时间与温度等,并说明了测定过程中各环节应注意的事项,以供参考。
关键词硫酸-高氯酸-钼锑抗比色法;测定;土壤全磷;影响因素;注意事项从2007年起至今,门源县农业技术推广中心依托农业部实施的《测土配方施肥补贴》项目,采集全县不同地区不同土质,并就氮、磷、钾、有机质、酸碱度等指标进行了分析测定。
土壤中含磷化合物绝大部分是难溶性的,能被水或弱酸溶解的数量很少,很难被作物吸收利用,因此门源地区农作物经常出现缺磷症状。
通过对土壤含磷量的测定,可以了解土壤中磷的丰缺状况,为合理施用磷肥提供科学依据。
全磷的测定方法有硫酸—高氯酸—钼锑抗比色法、硫酸—高氯酸—钼抗比色法等多种,其中前者是最常用的一种,该方法具有操作简单、对酸度要求不太严格的特点,适应于一般化验室分析。
1影响硫酸—高氯酸—钼锑抗比色法全磷测定值的因素一是样重。
样重过大,如0.220 1g,用吸光值计算P2O5在土壤中的含量时数值会偏小,使得平行样出现不平行情况。
样重过小,则数值偏大。
二是消煮时间。
消煮时间一般要求45~60min。
若消煮时间过短,小于45min,煮出的溶液颜色和溶液粘度均达不到要求,溶液颜色呈现为灰白色。
溶液粘度小,还会影响调整酸度时的颜色变化,引起加入的氢氧化钠溶液的量过多或过少,影响结果计算的准确性。
消煮时间大于60min,会造成溶液焦糊。
三是定容浓度。
定容时超过容量瓶刻度线,造成溶液浓度过稀,定容显色后溶液呈现的微蓝色过淡,在分光光度计中读出的吸光值与同等样品相比,数值偏小。
四是显色时间。
显色时间达到30min,显色完全。
显色时间达不到30min,会使显色不完全,测出的吸光值偏小;显色时间过长,待测液颜色过浓,测出的吸光值偏大,或使分光光度计不读值。
五是显色温度。
磷的测定(钼锑抗分光光度法_)汇总
721分光 光度计
数据处理
Wp=
×1000
式中: Wp ——植物磷的质量分数,g/kg; c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质
量浓度, mg/L; V1——消煮液定容体积, ml; V2——吸取测定的消煮液体积, ml; V3——显色液体积, ml; m——称样量,g;
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植物磷的测定
（钼锑抗分光光度法 ）
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实验目的
１、了解磷测定方法 ２、掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计
算方法 3、熟悉钼锑抗分光光度法测定磷的原理和过程
H+
PO43- + 钼酸盐 + 抗坏血酸
蓝色络合物（磷钼蓝）
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实验步骤
１、预处理
（１）样品消煮 HNO3-HClO4消煮法
（２）植物磷的测定
1~2滴指示剂
消煮液2~5ml
20ml水
NaOH至 刚呈黄色
1滴 H2SO4 褪色
5ml钼锑抗 显色剂
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30min显色，700nm 测OD值
土壤全磷、速效磷、速效钾含量,植物组织全磷、全氮含量快速测试方法
⼟壤全磷、速效磷、速效钾含量,植物组织全磷、全氮含量快速测试⽅法离⼼替代过滤，酶标仪替代分光光度计的⼟壤全磷测试⽅法1.⽤万分之⼀天平，称取1g左右的风⼲⼟，记录下重量。
2.加⼊8ml浓硫酸，放置过夜后加⼊10滴⾼氯酸，消煮⾄⽩⾊。
3.在50ml消煮管中定容，可以先加⽔1/3，混匀后再加⽔⾄刻度线附近，放置过夜后再加⽔⾄刻度线，摇匀。
4.吸取1ml消煮液到1.5ml离⼼管中，10000rpm，离⼼1分钟。
5.吸取50ul上清液+750ul H2O+100ul NaOH(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离⼼管中。
6.摇匀后，14000rcf离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：5.中吸取的上清液的量可根据显⾊状况调整，相应地NaOH的量也要做出调整，保证⽐⾊体系体积为1ml，氢离⼦浓度为0.55mol/L左右，每个样品做三个重复，重复间允许误差<0.005%即50mg/kg。
磷酸⼆氢钾⼯作曲线制做⽅法1.先将100mg/L(0.4394g KH2PO4(烘⼲2⼩时)先加⽔300ml，再加5ml浓硫酸，再定容到1L)的磷标贮液(磷酸⼆氢钾溶液)稀释20倍，⽐如吸取5ml定容到100ml2.配制3.摇匀后，10000rpm离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：利⽤散点图绘制曲线，添加趋势线和r值，r^2要⼤于0.999。
利⽤forecast.line函数计算⽐⾊液磷含量钼锑抗配制⽅法1.浓硫酸153ml加⼊500ml左右H2O(⽤1L的烧杯)，⽤磁⼒搅拌器搅匀2. 1L烧杯中加⼊10g 钼酸铵,⽤磁⼒搅拌器融化3. 0.5g酒⽯酸锑钾加⼊100ml左右H2O(⽤100ml的烧杯)，⽤磁⼒搅拌器溶化4. 步骤3所得溶液倒⼊1L烧杯，在磁⼒搅拌器上混合均匀，定容到1L备注：避光储存，使⽤时每10ml 加⼊0.15g抗坏⾎酸⼆硝基酚溶液：0.2g ⼆硝基酚溶于100ml⽔中离⼼替代过滤，酶标仪替代分光光度计的⼟壤有效磷(碳酸氢钠浸提)测定⽅法1. 42g碳酸氢钠定容到1L，⽤4mol/L NaOH溶液(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)调节pH⾄8.5，得到浸提剂2. 1.00g风⼲⼟加⼊50ml塑料管中，再加⼊0.1g活性炭粉，再加⼊20ml碳酸氢钠溶液，20~25℃，180rpm，震荡30min3.吸取1ml浸提液到1.5ml离⼼管中，10000rpm，离⼼1分钟4.吸取200ul上清液+700ul H2O+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离⼼管中5.摇匀后，14000rcf，离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：吸取的上清液体积可以根据显⾊情况调整，保证⽐⾊体系1ml，每个样品做三个重复植物组织全磷含量快速测定1.将烘⼲后的植物组织样品磨碎，再将样品粉末继续烘⼲⾄恒重。
土壤全磷测定方法 钼锑抗比色法 消煮温度
土壤全磷测定方法钼锑抗比色法消煮温度
土壤全磷测定方法中，消煮温度是关键的一环。
首先，消煮时需注意温度的控制，当消化至高氯酸雾状白烟消失后，再提高温度，这个过程需要30\~45min，整个消煮过程需要45\~60min，消煮时间绝不能少于45min。
消煮过程中每间隔15min要轻轻摇动凯氏瓶。
凯氏瓶上必须放置弯颈小漏斗，以免溶液溅出。
其次，显色温度也有严格的要求。
如果显色温度低于10℃，待测液会出现蓝色沉淀，影响测定结果。
请注意，此信息仅是参考，具体操作还需要依据实际情况及实验室标准操作规程进行。
如需更多信息，建议查阅土壤学专业书籍或咨询该领域专家。
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植物磷含量的测定（钼锑抗比色法）
一、实验目的
1．掌握钼锑抗比色法测定磷的方法。
2．练习实际测量以及定容的操作。
3．练习分光光度计的使用。
二、实验原理
植物样品经消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。
在一定酸度下,待测液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸,后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物,可用吸光光度法测定。
三、实验试剂
（1）2mol/LNaOH溶液
（2）%二硝基酚指示剂
（3）LH2SO4硫酸溶液:28mL浓H2SO4加水稀释至1L。
（4）钼锑贮存溶液：量取153ml浓硫酸(分析纯，密度ml)，缓缓加入到400ml 蒸馏水中，不断搅拌，冷却。
另称取经磨细的钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·H2O，分析纯]10g溶于温度约60℃300ml水中，冷却。
然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。
再加入％酒石酸锑钾[KSbOC4H4O6·1/2H2O，分析纯]溶液100ml，冷却后，加水稀释至1000ml，摇匀，贮于棕色试剂瓶中，此贮备液含钼酸铵1％，硫酸L。
（5）钼锑抗显色剂：称取抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存溶液中，此溶液有效期不长，宜随配随用。
（6）5mg/L磷标准溶液：在50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4。
分析纯)，100ml 水，加5ml浓硫酸(防腐)，用水定容到1L，浓度为100mg/L磷(P)，此溶液可以长期保存。
吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中，加水至标度，浓度为5mg/L 磷(P)标准溶液，此溶液不宜久存。
四、实验步骤
1、吸取定容过滤或澄清后的消煮液～(V2,含P5～30ug)于50ml容量瓶中,用水稀释至约20ml,加1～2滴二硝基酚指示剂,滴加2mol/LNaOH溶液中和至刚呈黄色,再加入1滴LH2SO4溶液,使溶液的黄色刚刚褪去呈淡黄色,然后加入钼
锑抗显色剂,摇匀,用水定容(V3)。
在室温高于15℃的条件下放置30min后,用1cm光径比色槽在波长700nm处测定吸光度,以空白溶液为参比调节仪器零点。
2、校准曲线或直线回归方程:准确吸取ρ(P)=5mg/L标准工作溶液
0,1,2,4,6,8ml,分别放入50mL容量瓶中,加水至20ml,同上步骤显色并定容,即得0,,,,,mg/LP标准系列溶液,与待测液同时测定,读取吸光度,然后绘制校准曲线或直线回归方程。
五、结果计算
W
p =
6
10
m
(V1/V2)
V3
c
⨯
⨯
⨯
×1000
式中:W
p
——植物磷的质量分数,g/kg;
c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度,mg/L; V1——消煮液定容体积,ml;
V2——吸取测定的消煮液体积,ml;
V3——显色液体积,ml;
m——称样量,g;
六、注意事项
1、室温低于15℃时，可在30～40℃水浴中，显色30min。
2、植物磷含量kg为低量，~kg为中量，大于kg为高量。