抗生素微生物效价测定法中一剂量法及二剂量法计算公式的推导
第四章抗生素效价的微生物检定法
４、特定单位 以特定的抗生素样品的某一质 量定为一单位。
复习旧课:
1、抗生素是指主要由_____生成的———————— ________________________一类________化合物 称之。
2、作为医疗用抗生素应具有————、————、— ———、————特点。
第四章： 抗生素效价的微生物检定法
教学目标：
１.解释抗生素概念、叙述医疗用抗生素特点、 了解抗生素的主要作用机制
２.叙述抗生素的效价和单位及其表示方法 ３.熟知抗生素效价检定操作流程与基本要求 ４.述说测定原理。 教学重点： 抗生素概念、医疗用抗生素特点、抗生素的效价 和单位及其表示方法 抗生素效价检定操作方法与基本要求
浊度法：系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生 长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小， 比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以 测定供试品效价的种方法。
管碟法：是利用抗生素在含敏感试验菌的琼脂培养 基中的球面扩散渗透作用，从而形成一定的抑菌圈。 通过琼脂培养基，可观察并测量出抑菌圈的大小。 在一定的抗生素浓度范围内，对数剂量(浓度)与抑 菌圈的表面积或直径成正比。
② 高、低剂量所形成的抑菌圈之差最好大于 2 mm，有些抗生素的差数可较小；
③ 高、低剂量之比一般用2:1，当高、低剂量 所致的抑菌圈差别较小时，可用高低剂量之 比为4:1的比率。
操作步骤： 1. 称量 2. 稀释 3. 双碟的制备 4. 放置钢管 5. 滴加抗生素溶液 6. 抑菌圈测量
图4－6：钢管放置器 （北京先驱威锋技术开 发公司生产开发）
教学难点： 抗生素效价检定操作方法 二剂量法效价计算公式 抗生素的主要作用机制
抗生素微生物效价测量实验的研究
抗生素微生物效价测量实验的研究抗生素微生物效价测量实验的研究一、实验简介：抗生素微生物效价检定法是以抗菌活性为指标来衡量抗生素中有效成分效力的一种方法。
此方法恰好与临床应用的要求相符合，能够确定抗生素的医疗价值，虽然随着仪器分析的发展，部分抗生素含量测定被物理、化学方法所代替，但微生物效价检定法仍然作为抗生素含量测定的经典方法之一被各国药典所采用。
抗生素微生物效价测定法可分为稀释法、比浊法和渗透法三类[1]，通常稀释法用于测定药物的MIC，各国药典均未收载该方法。
除中国药典外，《USP》23 版第六增补版，《BP》1998，《EP》1997第三版，《日抗基》1998均收载了比浊法，其优点是采用液体培养基，无扩散因素的影响。
试验过程短于渗透法。
轩书堂[2]也曾用比浊法测定过泰乐星效价，但该法要求仪器设备较高，且菌种容易污染，故一直未被中国药典所采用。
《日本药局方》虽然收载了该方法，但几乎没有机构使用。
渗透法也称扩散法，其中管碟扩散法即管碟法是国内外最常用的方法。
中、美、英、日和欧洲药典均收载了该方法。
管碟法是利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用，将抗生素稀释液加入已放置含有高度敏感性的试验菌培养基的小管内，经培养后，在抗生素扩散到达的适当范围内，形成一定浓度的球型区，产生透明的抑菌圈。
通过测量抑菌圈的大小可进行效价计算。
管碟法分为一剂量法，二剂量法，三剂量法三种。
一剂量法是用已知效价的标准品溶液制备出标准曲线，并在同样条件下测出供试品溶液所致抑菌圈直径的平均值后，再求出其与标准品溶液所致抑菌圈直径平均值之差，以换算出效价。
该方法较为繁琐，目前除《日抗基》1998及《USP》23 版收载外，其他药典均未收载，而《中国药典》自1997年版后已经淘汰了该方法。
基于抗生素对微生物作用所产生的抑菌圈的大小是随着抗生素剂量的变化而变化，是可以测量的，二剂量法采用标准品与供试品对比试验的平行线原理，实验设计出其浓度与反应的直线关系。
抗生素的生物效价测定法(管碟法)
抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。
这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。
所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。
由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法原理及操作大致与稀释法相同。
比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。
这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。
这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。
经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。
抗生素效价
用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml 及0.7u/ml。
链霉素的效价测定抗生素微生物检定法本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
第一法管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液取枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。
用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠杆菌（Escherichia coli）悬液取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
抗生素微生物检定(2·2)法的快速计算
抗生素微生物检定(22)法的快速计算
郑永安
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】1992(7)4
【摘要】抗生素的效价测定目前各国药典均采用微生物检定法。
由于微生物检定
法是以微生物体为工具,不可避免地存在着一定的生物差异性,影响结果的精确度。
因此,必须借助生物统计方法来减低生物差异对检定结果的影响,并用它来控制实验
误差的允许范围,使生物检定结果也能达到一定的精确程度。
为此各国药典附录都
收载有生物检定统计法,并规定了其可信限率;中国药典1985年版也收载了生物检
定统计法,但仅要求抗生素效价测定要进行可靠性测验,而没有明确规定其可信限率。
【总页数】3页(P41-43)
【关键词】抗蓖素;微生物;检定;计算
【作者】郑永安
【作者单位】陕西省药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R978.1
【相关文献】
1.抗生素微生物检定(2·2)法的快速汁算 [J], 郑永安
2.影响抗生素微生物检定法(管碟法)测定准确性的常见原因分析 [J], 常艳;姚尚辰;
胡昌勤
3.管碟法对抗生素药品效价的微生物检定 [J], 王新霞;宋雪玲
4.抗生素微生物检定二剂量管碟法常用菌种培养的研究 [J], 李婧;杜娟;陈征
5.高效液相色谱-荧光检测法与抗生素微生物检定法测定那西肽预混剂含量的比较研究 [J], 林仙军;周芷锦;王彬
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
31 抗生素效价的测定
A=1u/ml
continue
A B
第一组 0.4u/ml
B
A C A
A B
A B
B
A C A
A
B
A B
B
A
A B
第二组 0.6u/ml
A C
A C
A C
A C
A CБайду номын сангаас
C A
A C
第三组 0.8u/ml
A D
D A
A D
A D
D A
A D
A D
D A
A D
共18个培养皿，分为6组:B、C、D、E、F、G
continue
第四组 1.0u/ml A E
E
A F A G A
A E
A E
E
A
A
E
A E
E
A F A
A E
第五组 1.2u/ml
A F
A F
A F
F A
A F
A F
A F
第六组 1.4u/ml
A G
A G
A G
G A
A G
A G
G A
A G
continue
加好，盖盖，37度培养16~18h，精确测量各个 抑菌圈的直径。 分别求出每组3个培养皿中1U/mL标准品抑菌圈直 径的平均值n1，n2，n3，n4，n5，n6，再求出 6组中1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值a，总平 均值与每组1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值的 差，即为各组的校正值。即： a1=a-n1； a2=a-n2； a3=a-n3； a4=a-n4； a5=a-n5； a6=a-n6；
稀释法 比浊法 管碟琼脂扩散法（中国）
管碟法测定抗生素效价详解
4．放置钢管 用钢管放置器，将干热灭菌的镊子或适宜方法将钢 管装于玻璃管中，放于钢管放置器上，将双碟打开，放入双碟台上， 托起双碟台，使钢管平稳落在培养基上，注意使各个钢管下落的高 度基本一致，钢管放妥后，双碟静置 5 ～10 min, 使钢管在琼脂内稍 下稳定后，再开始加抗生素溶液。 5．滴加抗生素溶液 每批供试品取6~10个双碟，滴加溶液可调式 移液器，在滴加之前须用滴加液洗2~3次。滴加溶液的顺 序:SH→TH→SL→TL。滴加溶液至钢管口平满，注意滴加溶液间隔不 可过长，因溶液的扩散时间不同影响测定结果。
一、试验前准备
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 双碟的挑选
内径约90mm，硬质玻璃或 塑料培养平皿，水平透明， 无色斑气泡
• 物品的清洗、灭菌
培养皿、钢管、刻度吸管清 洗后160℃干热灭菌2小时或 121℃高压蒸汽灭菌30min， 放置室温备用；陶瓷瓦盖要 定期清洗干燥。
牛津杯的挑选
内径（6.0±0.1）mm，高 （10.0±0.1）mm，外径 （7.8±0.1）mm，重量差异不超 过±0.01g，光洁平坦
• 磷酸盐缓冲液（pH6.0） 取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢 钾8g，加水使成1000ml，滤过。 • 磷酸盐缓冲液（pH7.0） 取磷酸氢二钠 （Na2HPO4*12H2O）9.39g与磷酸二氢钾3.5g，加水使
缓冲液的制备
成1000ml，滤过。
• 磷酸盐缓冲液（pH7.8） 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二
3． 双碟的制备 在半无菌室内进行，应注意微生物及抗生素的 污染，培养基应在水浴中或微波炉中融化，避免直火加热。 底层：用灭菌大口吸管（20ml）或其他灭菌分装器，吸取已融化的 培养基20ml注入双碟内，等凝固后更换干燥的陶瓦盖，放于35～37℃ 培养箱中保温，使易于摊布菌层。 菌层 : 取出试验用菌悬液，按已试验妥的菌量 [ 按 (2.2) 法标准品溶 液的高浓度所致的抑菌圈直径在18～22mm；用灭菌吸管吸取菌悬液加 入已融化并保温在水中(一般细菌48～50℃，芽孢可至60℃)的培养基 内，摇匀作为菌层用。用灭菌大口10ml吸管或其他分装器，吸取菌层 培养基5ml，使均匀摊布在底层培养基上，置水平台上并用陶瓦圆盖 覆盖，放置20 ～ 30min，待凝固，备用。
二剂量法效价计算公式
二剂量法效价计算公式
二剂量法效价计算公式是一种常用的疫苗效价计算方法。
该方法基于疫苗接种后对病原体的免疫反应程度，通过对疫苗接种组和对照组的抗体滴度进行比较，得出疫苗的效价。
其计算公式为：
[疫苗效价]= [对照组抗体滴度] / [疫苗接种组抗体滴度] ×[疫苗接种剂量比例]
其中，对照组抗体滴度表示未接种疫苗的动物或人群中抗体的滴度，疫苗接种组抗体滴度表示接种疫苗后动物或人群中抗体的滴度，疫苗接种剂量比例表示疫苗接种组和对照组接种疫苗的剂量之比。
二剂量法效价计算公式的应用范围较广，适用于多种疫苗的效价计算，例如流感疫苗、狂犬疫苗、百日咳疫苗等。
但需要注意的是，该方法仅能用于相同疫苗批次的效价比较，不同批次的疫苗计算效价时需要重新建立标准曲线。
- 1 -。
抗生素生物效价测定[参考]
![抗生素生物效价测定[参考]](https://img.taocdn.com/s3/m/ed9845a5dc88d0d233d4b14e852458fb770b38f5.png)
抗生素生物效价测定[参考]抗生素生物效价测定是用来测定抗生素杀菌或抑制菌落生长能力的一种方法。
该方法通过对一定菌种进行抗生素浓度递减系列的稀释，然后观察菌落生长情况来测定抗生素的生物效价。
测定结果可以确定出单位药物中所含抗菌物质的含量，并且通过该结果可以明确指导抗生素的使用。
抗生素生物效价测试的操作步骤如下：实验仪器:清洁平板、无菌匙、无菌棉签、培养皿、移液器、蒸气灭菌器、执卡器、点斑枪。
试验材料:抗生素标准品（如青霉素）、待检物（例如新的抗生素类别）、接种菌种、琼脂片。
操作步骤:1.准备琼脂平板，把琼脂熔化后加入相应的接种菌液并充分混合,倒入无菌平板中，等待琼脂凝固。
2.将待检物或标准品分别通过滴定法配制成一系列浓度递减的抗生素溶液,分别置于移液器或执卡器中。
3.在琼脂平板上均匀涂上少量接种菌液,用无菌点斑枪在琼脂平板上进行不同抗生素浓度的斑点法, 每个浓度上进行三个重复点斑法,保证试验的可靠性和精确度,同时在控制组和空板上也进行斑点法，以和实验组对比。
4.在施抗生素后，将琼脂平板放入恒温器中进行培养。
观察24小时后菌落生长的情况并记录下来。
5.统计不同浓度下的抗生素和菌落生长的比率，画出不同浓度与生长抑制之间的关系曲线。
6.计算抗生素的生物效价，通常以最低有效抑制浓度（MIC）为单位。
其计算公式如下：生物效价=标准品浓度/待检样品浓度。
7.将实验结果与临床使用常规剂量比较，如得出实验效价与常剂相近或更高，则证明该抗生素是有效的。
反之，如果效价较低，则应进一步测试，或对该抗生素进行结构修饰或改进。
抗生素生物效价测定是非常重要的实验手段，它可以确定抗生素的药效值并为临床用药提供科学依据。
在新药物的研发和临床实践中，抗生素生物效价测定是不可或缺的方法，也是提高治疗效果和减少药物滥用的重要手段。
抗生素微生物效价测定法中一剂量法及二剂量法计算公式的推导_百.
所得计算公式。
一二 , 音。
』一 , 。
斜率一 , 抑菌圈直径之差、一斜率一吕抑菌圈直径之差。
‘ “ , 百示叶・ ,。
不亩翁 , 一 , 行渝一留斜率抑菌圈直径平方之差 , 兀公式 , 主要是斜率部分不同 , , 斜率 , 恰是斜测定法中一剂量法和二剂量法的计算公式率的倒数体现于座标图上由于将抗生素轴上所得的标准曲线与习轴上所得的曲线 , , 并与以往的一些推导相比较绍了斜率导最小二平方法。
, 加以讨论 , 介浓度的对数置于 , 的计算公式及其简化公式的推惯上使抗生素浓度置于用直线方程十其斜率必然不同前者的值将是后者的倒数。
本文承卫生部药品生物制品所郑昌亮同志审阅特此 , 来推导所得的一 , 感谢。
剂量法计算公式与上海药检所用回归直线方程一。
推导所得完全相同但推张绪敏参考资料抗菌素微生物效价测定法 , , 导过程明显简化二剂量法的推导方式与以往用氏扩散动力学方程来推导的相同由于二 , 人民卫生剂量法可以消去斜率与截距的影响得的计算公式与以往的完全相同。
, 因而所按本文的推导方式推导过程 , 可将一剂量法和二剂量法的推导 , 统一于同一直线方程下来进行。
简化了整个抗菌素效价的生物检定抗菌素讲演集人民卫生出版社上海化工学院等抗菌素的生物效价测定法抗菌素生产工艺学上海市药品检验所药理组抗菌素微生物检定标准曲线法计算方法的参考资料江苏省药品检验所抗菌素检验与药品生物检 , , 出版社郑昌亮 , , , , , 小结定法杨纪坷数理统计方法在医学科学中的应用上海科技出版社 , , , 本文用一元线性回归法推导抗生素效价废水处理技术在抗生素工业中的应用顾其详邵沈霖垦上海医药设计院林上海制药三厂 , 本文概述抗生素工业废水的特性废水生化处理的基本原理的进展 , 、介绍抗生素研究参考。
、生产及环境保护工作的同志们操作条件和装置以及简要回顾国 , 同时 , 列举国外抗生素废水处理设 , 施的部分实例或试验结果一、抗生素工业废水的内容和特性、外抗生素废水净化技术的研究情况供从事抗生素生产由发酵和提取精制等过程。
抗生素微生物检定标准操作规程完整
抗生素微生物检定标准操作规程1 简述抗生素微生物检定法系在适宜条件下，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。
依试验设计原理不同，可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法。
后二者被列为抗生素微生物检定的国际通用方法。
中国药典也采用这两种方法。
抗生素微生物检定管碟测定法系琼脂扩散法，是利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。
此法系根据抗生素在一定浓度围，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。
抗生素微生物比浊法是将一定量的抗生素加至接种有试验菌的液体培养基，混均后，经培养，测量培养基浊度。
此法系根据抗生素在一定的浓度围，其浓度或浓度的数学转换值与试验菌生长产生的浊度（浊度与细菌群体质量及细菌细胞容积的增加之间存在直接关系）之间存在线性关系而设计，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，计算出供试品的效价。
抗生素效价以“单位（u）”或“微克（µg）”表示。
抗生素管碟测定法2 仪器与用具2.1 操作室光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开，其中一部分为一般操作室，一部分为半无菌操作室。
半无菌操作室应设有紫外线灭菌灯，并附设空气净化（空气净化级别为100级～10，000级）及空调设备，控制室温在20～25℃之间，达到无菌或半无菌状态。
操作台应稳固，台面用玻璃板，并用水平仪调节至水平。
注意操作，避免室抗生素污染。
2.2 双碟径约90mm，高16～17mm硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，水平透明，无色斑气泡。
碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一白纸，碟加水2～3ml，再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。
用过的双碟经高压灭菌倒出培养基后，置清洗液中浸泡过夜，冲洗，沥干，至150℃～160℃干热灭菌2小时或高压121℃蒸气灭菌30分钟，备用。
抗生素效价计算过程
USP Cylinder-plate assay 美国药典 管碟法---（标准曲线法）1、 美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：首先制备5个标准溶液浓度（U/ml ），分别为S1、S2、S3、S4和S5，其中S3为中间浓度。
除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不相连的三个分别加入Si （i 为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3。
待检样品（Unknown ）加样方式如Si ，具体放置方法如下图1：图1：标准及样品管碟放置方式图例2、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例： 下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果：表2：抗生素效价检测测量结果表Replicate1Replicate2Replicate3Set S1 Set S2 Set S4 Set S5 Sample U1备注：Zone1、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值；Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值；U1表示待测样品1。
2.1 进行初始计算：对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si和U1直径的平均值。
例如：15.867=（16.1,15.6,15.8,16.0……15.8）9个数据的平均值14.167=（14.6,14.1,13.5,14.5……14.1）9个数据的平均值2.2 变异性的适用性检查：然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差（包括标准对照和样品的），进而计算出其相对标准偏差值（RSD，该值应不超过10%）。
例如：标准偏差0.200 = s(16.1, . . ., 15.8)相对标准偏差1.3% = (0.200/15.867) *1002.3 进行平板间的差异校正：计算公式如下。
X C = X S– (X R– P)X C = 标准品平均值的校正值X S = 原始的标准品的平均值X R = 对照值的平均值P = 校正值例如：14.022 = 14.167 – (15.867 – 15.722) = 14.167 – 0.1452.4 建立标准曲线：标准曲线由2.3计算的标准品平均值的校正值Xc和标准品浓度值的对数值构成。
实验室抗生素
抗生素效价抗生素是一种生理活性物质，它对生命现象很敏感，可以用抗生素的生物效能表示它的效价，其最小效价单元就叫做“单位”(U)。
经由国际协商规定出来的标准单位，称为“国际单位”(IU)o通常各种抗生素的单位，是根据国家抗生素标准品测定出来的，是衡量药物有效成份的一种尺度。
抗生素的剂量常用重量和效价来表示。
化学合成和半合成的抗菌药物都以重量表示，生物合成的抗生素以效价表示，并同时注明与效价相对应的重量。
效价是以抗菌效能(活性部分)作为衡量的标准，因此，效价的高低是衡量抗生素质量的相对标准。
效价以“单位”(U)来表示。
理论效价理论效价是指抗生素纯品的重量与效价单位的折算比率。
一些合成、半合成的抗生素多以其有效部分的一定重量（多为1μg）作为一个单位，如链霉素、土霉素、红霉素等均以纯游离碱1μg作为一个单位。
少数抗生素则以其某一特定的盐的1μg或一定重量作为一个单位，例如金霉素和四环素均以其盐酸盐纯品1μg为1单位。
青霉素则以国际标准品青霉素G钠盐μg为1单位，参见表2-2。
表2-2一些常用抗生素的理论效价表链霉素碱 1000单位/mg 链霉素硫酸盐 798单位/mg土霉素碱 1000单位/mg 土霉素碱（含二分子结晶水） 927单位/mg土霉素盐酸盐 927单位/mg 红霉素碱 1000单位/mg红霉素碱（含二分子结晶水） 953单位/mg 红霉素乳糖酸盐 672单位/mg金霉素盐酸盐 1000单位/mg 四环素盐酸盐 100O单位/mg四环素碱 1082单位/mg 青霉素钠 1670单位/mg青霉素钾 1598单位/mg 普鲁卡因青霉素 1009单位/mg苄星青霉素（长效西林） 1211单位/mg 新霉素 1000单位/mg卡那霉素 1000单位/mg 多粘菌素B 10000单位/mg庆大霉素 1000单位/mg 巴龙霉素 1000单位/mg说明：表中各抗生素的理论效价系折算的标准。
各抗生素的盐类的理论效价是根据标准计算出来的。
抗生素生物效价测定(详细参考)
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素效价测定技术—抗生素效价微生物检定法
知识点3：浊度法
四、检定操作方法
（一）线性试验
除另有规定外，取适宜的大小厚度均匀的已灭菌试管，在各试验
管内精密加入含试验菌的液体培养基9. 0ml，再分别精密加入各浓
度的标准品溶液1.0ml，立即混匀，按随机区组分配将各管在规定
条件下培养至适宜测量的浊度值（通常约为4小时）。
知识点3：浊度法
（三）空白试验
线关系，可采用t检验。
4．测定结果的计算及可信限率估计。
5．实验计算所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的1 10%，则检验
结果仅作为初试，应调整供试品估计效价，予以重试。
知识点3：浊度法
6．原料药效价测定一般需双份样品，平行实验以便核对。对不符
合规定的样品应至少有2次符合规定的结果，才能发出报告。
供试品低剂量溶液
（即SH→TH→SL→TL）
6.测量抑菌圈 双碟透明度好，无破损和不透明现象；抑菌圈应圆满，无破
圈或圈不完整现象，否则应弃去该双碟。
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
技能点1：二剂量法操作规程
在恒温培养箱中培养至规定时间
技能点1：二剂量法操作规程
• 测量抑制圈
的污染，放双碟的台面应用水平仪调水平。
玻璃/塑料
平皿(d=90mm
h=16-17mm)
菌层
5ml
含菌培养基
底层
20ml
灭菌培养基
技能点1：二剂量法操作规程
制备底层
制备菌层
技能点1：二剂量法操作规程
4.放置钢管
5.滴碟、培养
毛细滴管（或滴管）滴碟
滴加顺序：按标准品高剂量溶液→供试品高剂量溶液→标准品低剂量溶液→
管碟法抗生素微生物检定法讲座
因标准品与供试品同质，最低抑菌浓度 c＇相同，又在同一双碟上培养 Logc＇4πDTH
相等，所以②-①得：
M2＇
1
Logθ＝ Log─── ＝ ──── ( T22 - S22)
Ⅰ
M2
9.21DT
其中θ为供试品与标准品效价比率。
同理可推算出低剂量反应式：
M1＇
1
Logθ＝ Log─── ＝ ─── ( T12 - S12)
原因是相邻的小钢管之间的距离过小或形成的抑菌圈过大，相邻两小钢管扩散的抗生素溶液
互相叠加，超过该抗生素溶液对试验菌的最低抑菌浓度而形成卵圆或椭圆形抑菌圈。防止方
法有：使用钢管放置器安置钢管，使各钢管之间的距离均匀一致而避免过小；控制抑菌圈大
圈直径在 18～22mm 之间。
⑥培养温度不均匀，此操作会导致形成卵圆或椭圆形抑菌圈。其原因是温度影响细菌的
②小钢管底部二端面不平，此操作会导致形成卵圆或椭圆形抑菌圈。其原因是抗生素溶 液在琼脂培养基上扩散速度不一致。操作时使用加工相同的小钢管可防止此现象的发生。
③双碟、小钢管或其它器具被抗生素或其它杀菌剂污染。此操作会使抑菌圈破裂，有时 甚至使试验菌大部或全部被抑制，无法形成抑菌圈。因此，操作时一定要防止材料、器具、 环境被抗生素污染。
⑸试验菌也是影响抑菌圈直径的一重要因素。及时更换试验菌，使用新鲜菌液，可提高 试验的灵敏度，增大抑菌圈直径。例如，使用新开启的枯草芽孢杆菌测定乙酰螺旋霉素效价 时形成的抑菌圈大圈直径比使用旧的试验菌(2 年以上)提高 1～2mm。
⑹通过控制培养基中菌的浓度来控制抑菌圈直径。例如，乙酰螺旋霉素、泰乐菌素、螺 旋霉素形成的抑菌圈较小，为了提高抑菌圈直径，培养基中菌的浓度为 0.1～0.2％，需要 时还可以把原菌液稀释 3～5 倍。盐霉素、麦白霉素形成的抑菌圈较大，为了降低抑菌圈直 径，可以把菌液浓度提高至 2～3％。 三、抑菌圈清晰度的控制：
抗生素生物效价测定
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径 6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式 2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式 2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。