分子生物学常用试剂的配制分子生物学常用试剂的配制LBLuria

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分子生物学常用溶液的配制

（2）LB（Luria-Bertani）液体培养基的配制：清洗250mL三角瓶，称取适量的yeast extract（酵母提取物）、tryptone（胰蛋白胨）、NaCl，加入200mL蒸馏水，铝箔纸包扎封口后，待高压蒸汽灭菌。

注意：①LB液体培养基常用于大肠杆菌增殖培养；②在LB培养基中，酵母提取物提供维生素和矿物质，蛋白胨提供碳源、氮源及能量，NaCl提供适当的渗透压；③不必定容，可直接加入200mL蒸馏水；④氨苄青霉素等抗生素受热易分解，必须在培养基经高压蒸汽灭菌、且温度降至50℃以下时加入。

（3）溶液I、II、III的配制：清洗适当容积的试剂瓶，称取适量粉末状的葡萄糖，选择适当量程的微量移液器，移取所需体积的母液。

溶液I、III需要在最后用100mL量筒定容，待高压蒸汽灭菌。

溶液II现用现配，室温下放置。

注意：①溶液I、II、III用于质粒的制备；②正确使用微量移液器。

（4）配制TE（pH8.0）溶液，待高压蒸汽灭菌。

注意：①TE溶液用于溶解各类DNA；②由于Tris-HCl和EDTA溶液为常用试剂，故常常先配制高浓度的储存液，4℃冰箱中保存备用；③由于0.5M Tris-HCl（pH8.0）和0.5M EDTA（pH8.0）均已调好p H值，配制pH8.0的TE溶液时不必再调节pH值；④正确使用微量移液器。

（5）配制10×TAE电泳缓冲液，待高压蒸汽灭菌。

注意：10×TAE电泳缓冲液为高浓度的储存液，使用时稀释10倍作为1×TAE工作液，电泳槽中添加电泳缓冲液和配制琼脂糖凝胶所用的电泳缓冲液浓度应一致，都使用1×TAE工作液。

（6）配制6×上样缓冲液，待高压蒸汽灭菌。

注意：电泳上样前，取适量6×上样缓冲液与DNA样品（如质粒溶液、PCR产物、酶切产物等）混合，使上样缓冲液在混合物中的终浓度约为1×。

（7）配制EB储存液（10mg/mL），室温下保存。

分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法

分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.常见试剂配制方法：(1)磷酸盐缓冲液（PBS）的配制方法：-配制PBS需要使用NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4等化学品。

-以10倍浓度配制PBS的浓缩溶液，然后稀释为需要的浓度。

-例如，1倍浓度的PBS可以通过将1升的10倍浓度PBS溶液加入9升蒸馏水来制备。

(2) 神经元无血清培养基（Neurobasal Medium）的配制方法：- 配制Neurobasal Medium需要使用神经元培养基基本成分及其他补充物质。

-根据制造商提供的配方，按照相应比例将各种化学品溶解在无菌蒸馏水中。

-配制好的培养基可以用于维持和培养神经元体外培养。

(3) 洗涤缓冲液（Washing Buffer）的配制方法：-配制洗涤缓冲液需要使用磷酸盐缓冲液（PBS）及其他添加剂。

- 将PBS溶液中加入适当浓度的Tween-20或者Tris-HCl来制备洗涤缓冲液。

-根据实验需求，可以调整洗涤缓冲液的成分和浓度。

(4) 乙醇（Ethanol）溶液的配制方法：-配制乙醇溶液常用的浓度有70%和100%。

- 70%的乙醇溶液可以通过将70ml无菌蒸馏水加入30ml无水乙醇中配制得到。

-100%的乙醇溶液可以直接使用无水乙醇。

2.常见缓冲液配制方法：(1) Tris/Tricine缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Tricine缓冲液需要使用Tris（三羟甲基氨基甲烷）和Tricine（三甘胺酸）等化学品。

- 根据实验要求，在一定PH范围内，按照不同比例混合Tris和Tricine，溶解于适量的蒸馏水中。

(2) 氯化钾缓冲液（KCl Buffer）的配制方法：- 配制KCl Buffer需要使用KCl和其他添加剂。

-将适量的KCl和其他缓冲液成分溶解在蒸馏水中。

-根据实验要求，调整KCl的浓度和缓冲液的PH值。

(3) Tris/Acetate缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Acetate缓冲液需要使用Tris和乙酸等化学品。

分子生物学常用试剂配制

试剂配制：1、1 M Tris-HCl (pH 8.0): 称取Tris-Base 121g, 加入约800 ml 水在磁力搅拌器上搅拌，使其充分溶解后加入浓盐酸调整pH至8.0后加水定溶至1000 ml. 灭菌后于室温保存。

2、0.5 M EDTA (pH 8.0): 称取EDTA-Na2盐187 g 加入约800 ml水，在磁力搅拌器上边搅拌边加入固体NaOH，当EDTA和NaOH均完全溶解，溶液变清时其pH值刚好达到8.0左右，再用pH试纸略加调整即可, 灭菌后于室温保存。

3、5.0 M NaCl:称取NaCl 300 g, 加入蒸馏水约800 ml 于磁力搅拌器上充分搅拌，约5分钟后停止搅拌，静止2~3分钟，倒出上清液，再加入100 ml蒸馏水重复前面的步骤，直到NaCl充分溶解后定溶至1000 ml., 灭菌后于室温保存。

4、DNA Buffer的配制：1 M Tris-HCl (pH 8.0) 100 ml0.5 M EDTA (pH 8.0): 100 ml5.0 M NaCl: 300 mlH2O 500 ml灭菌后于室温下保存3个月左右，用时按往Buffer中加入15g CTAB，10g PVP在电炉上烧开；在通风橱里加入1%的巯基乙醇( 现配现用)。

5、5 X TBE溶液配制：约800 ml蒸馏水中加入Tris-base 54 g，硼酸27.5 g，充分溶解后加入0.5 M EDTA（pH: 8.0）定溶到1000 ml, 调节pH为8.0备用，于室温下短期存放。

使用时配制成1×TBE或0.5×TBE稀释缓冲液。

6、1XTE10ml 1M Tris-HCl (pH 8.0)，2ml 0.5M EDTA (pH 8.0)定溶到1000 ml, 调节pH为8.0备用。

LB(Luria-Bertani)培养基粉剂

Leagene 。

com 北京雷根生物技术有限公司
LB(Luria-Bertani)培养基粉剂
简介：
Luria-Bertani 培养基是最经典的细菌培养基，简称LB 培养基, 可以用于各种细菌培养，是分子生物学常规试剂。

Leagene Luria-Bertani 培养基粉剂主要由1%胰蛋白胨、0.5%酵母提取物、1%氯化钠组成，溶于无菌水即可使用。

如果严格要求无菌，应高压灭菌20min 。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、根据实验具体要求操作。

溶于无菌水并加入合适的抗菌素和菌种进行培养。

2、如需无菌，应溶解于蒸馏水或去离子水，高压灭菌20min 。

注意：
1、注意无菌操作，尽量避免污染。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关：
编号名称 CM0003 Storage Luria-Bertani 培养基粉剂 1L RT
使用说明书 1份编号名称 CA0005 氨苄青霉素溶液(Ampicillin,50mg/ml) CM0002 LB Lennox 培养基 CM0023 SOB 培养基(pH7.0) DH0006
苏木素伊红(HE)染色液 NR0003
Lezol(总RNA 提取试剂) PE0018
SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒 TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)。

分子生物学实验常用试剂、缓冲液的配制方法

实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl（pH8.8）□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500 mM EDTA（pH8.0）20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。

分子生物学实验药品

1 分子生物学实验常用药品（共21种）1M NaOH100ml1M HCl 100ml 浓HCl (11.6M)5 mol/L KAc 400ml（将196.4g醋酸钾溶解于200 ml无离子水中，定容至400ml，高压灭菌后，室温保存。

）1M Tris-Cl (pH8.0) 1000ml （Tris三羟甲基氨基甲烷）1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCLpH7.4 70mlpH7.6 60mlpH8.0 42ml4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

0.5 M EDTA·Na2 (pH8.0) 乙二胺四乙酸二钠1000ml0.5 M EDTA 1 L配制1. 称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌（在磁力搅拌器上剧烈搅拌溶液）。

3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。

注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

植物细胞提取液: 500ml100mM Tris-Cl (pH8.0)50 mM EDTA (pH8.0)500mM NaCl1.25%SDS1mol/Lβ-巯基乙醇(0.1%)？（《分子生物学实验指导》P.114β-巯基乙醇为1 ml）？动物提取液（0.14mol/L NaCl，0.1 mol/L EDTA）1000ml3 mol/L NaAc (pH5.2) 200ml用HAC调pH.（称取NaAc溶于130 ml无离子水中，先加入40 ml冰醋酸，然后再缓慢的调pH.至5.2，最后定容至200 ml）TE 缓冲液(pH8.0): 10mM Tris-Cl (pH8.0) 1 mM EDTA (pH8.0) 1000ml1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

分子生物学常用试剂配制表

LB 培养基PBS 缓冲液1x 10x 胰蛋白胨Tryptone 10g/L液体Na2HPO4（8mM/L ）1.14g/L11.36g/L酵母提取物Yeast extract 5g/L Nacl(136mM/L)7.95g/L 79.56g/L氯化钠Nacl10g/L KH2PO4(2mM/L)0.27g/L 2.72g/L 琼脂20g/L固体Kcl(2.6mM/L)0.2g/L 1.94g/L ddWater 至1L 至1LSDS-PAGE 电泳缓冲液5X NaOH 调节pH 至7.4-7.6Tris 15.1g 用前稀释TBS 缓冲液1X 10X甘氨酸94g Tris 2.42g/L 24.2g/L SDS 5g氯化钠Nacl 8g/L 80g/L ddWater 至1L ddWater 至1L 至1LHcl 调节pH 至7.4-7.6WB 湿转转膜液10X 加500ul Tween-20/L 得PBST/TBST Tris 30.3g/用前稀释甘氨酸144g/L细胞破碎缓冲液ddWater 至1L Kcl(300mM)22.37g/L WB 湿转转膜液使用KH2PO4(50mM) 6.81g/L 10X Trans Buffer 100mlEDTA(1mM)0.292g/L 甲醇200ml ddWater 至1L pH8.0ddWater 700ml 10%SDS 50℃加热可促溶解IPTG （1mM/L ）1ul+1ml 菌液SDS 10g IPTG 2.38g10XddWater 至100ml 灭菌ddWater 至10ml稀释10倍后10ul+1ml 菌液10%过硫酸铵APS3周内使用过硫酸铵APS0.2g Amp （50-100ug/ml ）10X1ul+1ml 菌液ddWater 2ml Amp 1g 灭菌ddWater至10ml1.5MTris-Hcl pH 8.8Hcl 调至8.8稀释10倍后10ul+1ml 菌液Tris 18.8g ddWater 至100ml考马斯亮蓝染色液过滤后可循环使用1M Tris-Hcl pH6.8Hcl 调至6.8甲醇500ml Tris 12.12g 乙酸100ml ddWater 至100ml R-250考马斯亮蓝0.5gddWater 至1L考马斯亮蓝脱色液乙醇比例越高脱色越快3705ZZL甲醇/乙醇100-500ml 乙酸50ml ddWater 至1LTAE 50X ELISA 包被液Tris 242g 先溶解再加乙酸后定容Na2CO3 1.59g pH9.6Na2EDTA·2H2O 37.2g NaHCO3 2.93g ddWater 800ml灭菌ddWater 至1L 乙酸57.1ml ddWater 至1L 生理盐水0.9%氯化钠Nacl 9g 灭菌使用SDS 分离胶浓度分离范围ddWater 1L6%50-150kd 8%30-90kd 鲜血培养基10%20-80kd 培养基100ml 约37℃加血12%12-60kd 鲜血5ml 15%10-40kd巧克力培养基同样5%鲜血于≥90℃时加入琼脂糖凝胶琼脂糖1XTAE 1%核酸染料透析袋处理0.2g 20ml 6/8/11孔1ul 2%(W/V)碳酸氢钠+1mmol/L ED TA(pH 8.0)煮沸10min 0.3g 30ml 13孔 1.5ul 0.4g 40ml 18/25孔2ul 0.3g 20ml 1.5%1ul ddWater 清洗0.4g20ml2%1ul1mmol/LEDTA(pH 8.0)煮沸10min包涵体溶解液包涵体洗涤液磷酸钠（20mm ） 3.27g Hcl 调至pH 7.4EDTA （0.5mM ）0.146g Hcl 调至pH8.0氯化钠(300mM)17.53g Nacl （100mM ） 5.844g 咪唑（10mM ）0.68g Tris （50mM ） 6.06g 尿素（8M ）484.8g TritonX-100（1%）10mlddWater 至1L ddWater 至1L 加入后超声10min ，离心20min 0.1M 氯化钙CaCl2感受态用蛋白复性缓冲液CaCl2 1.1g 照紫外灭菌Nacl （100mM ） 5.85g Hcl调至pH8.灭菌ddWater 10mlTris （50mM ） 6.06g甘油（5-10%）50ml枸橼酸钠抗凝剂109mM/LGSH （2mM)0.6gNa3C6H5O7·2H2O 32.05g 灭菌后用，以实际分子量计算用量GSSG(0.2mM)0.1gddWater 至1L 尿素(6/4/2/0M)计算1：9血使用ddWater 至1L尿素6-4-2-0梯度分别1LELISA 终止液（2mM/L ）H2SO43705ZZL浓硫酸（98%）21.7ml酸入水中！ddWater 178.3ml。

实验室常用试剂和缓冲液配方

实验室常用试剂和缓冲液配方PBS（磷酸盐缓冲液）是一种常用的生物化学缓冲液，用于洗涤和稀释生物化学试样。

配方：-NaCl：8g-KCl：0.2g-Na2HPO4：1.42g-KH2PO4：0.24g将上述物质溶解在1升蒸馏水中，调节pH值至7.4、用1M（摩尔浓度）盐酸或1M氢氧化钠进行调节。

2. Luria-Bertani (LB) 培养基配方LB培养基是微生物学研究中常用的培养基，适用于大多数细菌和酵母菌的培养。

配方：- 水解酪蛋白（tryptone）：10 g- 酵母粉（yeast extract）：5 g-NaCl：10g将上述物质溶解在1升蒸馏水中，用1M盐酸或1M氢氧化钠调节pH 至7.0。

可以选择添加洗涤剂Tween-20（0.1%）以提高溶解度。

SSC缓冲液广泛用于核酸杂交实验等生物学研究中。

配方：-NaCl：175.3g- Na3Citrate·2H2O：88.2 g-EDTA：37.2g将上述物质溶解在1升蒸馏水中，调节pH值至7.0-7.2、可以选择添加DEPC（二硫酰二甲酯）处理，增强其功能。

4.甲醛溶液甲醛溶液常用于生物样品固定以及染色实验。

配方：-甲醛：37%-PBS或水将适量的甲醛加入PBS或水中，制备所需浓度的甲醛溶液。

5. β-羟丁酸钠（β-Hydroxybutyrate）溶液β-羟丁酸钠是一种常用的减少剂，用于生物化学实验中。

配方：-β-羟丁酸钠：1M根据需求将适量的β-羟丁酸钠溶解在合适的溶剂中。

这里只是列举了几个常见的试剂和缓冲液配方，实验室试剂和缓冲液种类丰富多样，具体使用取决于研究目的和实验要求。

在进行实验之前，建议仔细阅读相关文献和制造商提供的说明书，并按照正确的比例和步骤配制试剂和缓冲液。

分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法

分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.离心管清洗液配制方法：将500mL蒸馏水加入500mL乙醇中配制而成。

2.TE缓冲液配制方法：将1 M Tris-HCl (pH 8.0) 溶液和0.5 M EDTA (pH 8.0) 溶液以1:200的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

最终pH值约为8.0。

3.LB培养基配制方法：将10g/L氯化钠、5g/L酵母浸粉、10g/L蛋白胨加入1L蒸馏水中，调整pH至7.0-7.5、将溶液加热，搅拌溶解，然后使用纸滤器滤过，装入含有取10g搅拌均匀的琼脂糖的培养皿中。

灭菌后冷却到45°C左右，然后再倒入培养皿中。

4. 蒸馏水（Milli-Q水）配制方法：使用商用蒸馏水设备如 Milli-Q等，生成去离子水，再通过0.22 μm的滤器进行过滤，获得蒸馏水。

5. LB/Agar培养基配制方法：将10g/L氯化钠、5g/L酵母浸粉、10g/L蛋白胨、15g/L 琼脂加入1L蒸馏水中，调整pH至7.0-7.5、将溶液加热，搅拌溶解，然后使用纸滤器滤过。

将过滤后的溶液倒入培养皿中，灭菌后冷却到45°C 左右。

1.TBE缓冲液配制方法：将1 M Tris-Borate 溶液、0.1 M EDTA 溶液、10% (w/v) Boric acid 溶液按5:19:75的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

最终pH值约为8.0。

2.TAE缓冲液配制方法：将40 mM Tris、20 mM 醋酸和1 mM EDTA 按1:0.5:0.1的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

最终pH值约为8.0。

3. Tris-HCl缓冲液配制方法：将1 M Tris-HCl 溶液加入蒸馏水，调整pH值至所需范围。

4.PBS缓冲液配制方法：将0.2g/LKH2PO4、0.2g/LNa2HPO4、8.5g/LNaCl和0.2g/LKCl加入1L蒸馏水中，调整pH值至7.45. Tris-EDTA缓冲液（TE缓冲液）配制方法：将1 M Tris-HCl (pH 8.0) 溶液和0.5 M EDTA (pH 8.0) 溶液以1:200的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

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值得收藏！—超级常用分子生物学试剂配制方法倾囊相授！分子生物学试验所用水都是去离子水ddH2O双蒸水级别的，所以器皿都要用去离子水冲洗两三遍；配制好试剂的贴标签标注，包括试剂名称、配制日期、配制人；加热和搅拌可以促溶解。

1电泳类DNA电泳试剂成分及终浓度配制100mL溶液用量2mol/L Tris 24.2g1mol/L 乙酸100 mmol/LEDTAddH2O 5.71mL 的冰乙酸（17.4 mol/L ） 3.72gNa2EDTA·2H2O 补足100mL50×Tris -乙酸（TAE ，pH=8.5）缓冲液注意事项1. 准确称量各物质，确保缓冲液处于最佳状态。

2. 不要用Tris 缓冲液来配制2mol/L Tris ，因为常见的Tris 缓冲液用了HCl 调节pH ，成了Tris-HCl 缓冲液，使用纯Tris ，配制Tris-乙酸缓冲液。

蛋白SDS －PAGE 电泳试剂10×Tris -甘氨酸缓冲液成分配制100mL 溶液用量1 LTris 30.2 g甘氨酸 188 gSDS 10g使用时稀释10倍使用Western Blotting10×转膜缓冲液（10×running buffer） (定容至1L)Tris 30.3g甘氨酸 144g不调pH使用时稀释10倍使用1×转膜工作液 (定容至1L，4℃保存)（现配现用）10×转膜缓冲液 100ml无水甲醇 200mlddH2O 700ml10×TBS 缓冲液（1L）Tris-HCl 24.3gNaCl 88g用浓盐酸约14ml调节pH值至约7.4（pH试纸检测即可）1×TBSTTBS+Tween-20 0.1%（1ml for 1L）2培养基类LB培养基将下列组分溶解在0.9L ddH2O中：蛋白胨Tryptone 10g酵母提取物5gYeast Extract氯化钠Nacl 10g2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L ddH2O中：蛋白胨Tryptone 16g酵母提取物10gYeast Extract氯化钠Nacl 5g注意事项如需用4M NaOH（约0.5mL）调整pH至7.0，再补足水至1L。

微生物常用的培养基配方

微生物常用的培养基配方1、用于细菌培养——LB(Luria-Bertani)培养基LB培养基分为液体及固体两种形态的培养基，主要在分子生物学中应用。

(1) LB液体培养基，在90mL双蒸馏水中加入：胰蛋白胨1g氯化钠1g酵母提取物0.5g摇动容器直至溶质溶解后，用1当量NaOH调节pH至7.0，再用双蒸馏水定容至100mL。

而后进行高压蒸汽灭菌。

(2) LB固体培养基在100mL液体培养基的基础上，加入1.5g琼脂粉。

2、用于细菌培养——牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏 1.5g蛋白胨5g氯化钠 2.5g水500mL，pH调至7.4~7.6。

3、用于霉菌或酵母菌培养——马铃薯培养基(PDA)马铃薯（去皮）200g蔗糖（葡萄糖）20g水1000mL将马铃薯去皮切成小块放入锅中，加水至1000mL，煮至沸腾后维持20-30min，注意不时用玻璃棒搅拌防止糊底。

用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，弃去滤渣。

取滤液加糖（培养霉菌用加蔗糖，培养酵母菌用加葡萄糖），补充水至1000mL，自然pH。

4、用于V.P.反应和甲基红试验——葡萄糖蛋白胨水培养基蛋白胨0.5g葡萄糖0.5g磷酸氢二甲0.2g水100mL，调节pH至7.2~7.4，115℃湿热灭菌20min。

5、用于吲哚实验——蛋白胨水培养基蛋白胨10g氯化钠5g水1000mL，调节pH至7.2~7.4，121℃湿热灭菌20min。

6、用于厌氧菌培养——RCM培养基（强化梭菌培养基）酵母粉3g牛肉膏10g蛋白胨10g可溶性淀粉1g葡萄糖5gL-半胱氨酸盐酸盐0.5g氯化钠5g醋酸钠3g琼脂0.5水1000mL，调节pH至6.8±0.1，121℃高压灭菌15min。

分子生物学常用药品配方

分子生物学常用药品配方/data/2007/0513/article_39530.htm一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH 至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

分子生物学实验用试剂

<<分子生物学>>实验课需要的主要试剂序号名称数量价格备注1 无水乙醇500mL×102 醋酸钠500g3 冰乙酸500mL4 氯仿500mL×25 氢氧化钠100g6 异丙醇500mL×27 异戊醇500mL8 氯化钠100g9 葡萄糖100g10 盐酸10mL11 EDTA 200g12 SDS 100g13 胰蛋白胨500g 320.0014 酵母粉500g 170.0015 Tris 200g16 饱和酚250mL×2 110.0017 Amp 1g 20.018 Xgal 200mg 240.0019 IPTG 1g 50.0020 EB 250mg21 琼脂糖100g22 琼脂23 连接酶24 限制酶25 离心管（1.5ml、0.5ml、0.2ml）26 枪头（1ml、100ul、20ul）27 一次性手套28 液氮29需配置的试剂：1.Tris母液：称取Tris（三羟甲基氨基甲烷，分子量121.1）60.55克。

加重蒸水400毫升，加热搅拌溶解，称为Tris母液。

2.10mol/L NaOH溶液称取氢氧化钠（分子量40）20克，先用40毫升重蒸水搅拌溶解后，再加重蒸水定容至50毫升。

3.500mmol/L EDTA（pH8.0）溶液称取EDTA－Ｎa2（乙二胺四乙酸二钠，分子量372.24）18.6克，先用60毫升重蒸水，加10毫升10mol/L NaOH溶液，加热搅拌溶解后，再用10mol/L NaOH溶液调pH至8.0，加重蒸水定容至100毫升，103.4kPa灭菌20分钟。

4.20％SDS溶液称取固体SDS（十二烷基硫酸钠，分子量288.44）20克，加70毫升重蒸水于42℃水溶解，加重蒸水定容至100毫升。

5.3mol/L NaAc溶液称取无水乙酸钠（分子量82.03）24.6克(或称取3H2O·CH3COONa 40.82克)，先加入重蒸水80毫升，加热搅拌溶解，再加重蒸水定容至100毫升，103.4kPa灭菌20分钟。

分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制

分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制1、6*Loading Buffer（DNA电泳用，50ml配方）组分浓度：100mM EDTA, 40%(V/V) 蔗糖, 0.05%（W/V）xylene cyanol FF, 0.05%（W/V）溴酚蓝配制方法：称取25mg溴酚蓝，25mg xylene cyanol FF，5ml 0.5MEDTA，加入约20ml去离子水，加热搅拌，充分溶解，加入20g蔗糖，去离子水定容至50ml。

2、10*PBS（pH7.2～7.4，分子克隆推荐配方）组分浓度：NaCl 137 mmol/L，KCl 27 mmol/L，Na2HPO4 100 mmol/L，KH2PO4 20 mmol/L配置方法：用800ml去离子水溶解80 g NaCl, 2 g KCl，14.4 g Na2HPO4和2.4 g KH2PO4。

用盐酸调节pH 至7.4，加水定容至1 L，高温高压灭菌，室温保存。

3、20*SSC （pH约7.0）组分浓度：300 mmol/L 柠檬酸三钠，3 mol/L 氯化钠配制方法：称取柠檬酸三钠·2H2O 88.23 g，氯化钠175.3 g，加入800 ml去离子水充分溶解，用14 N HCl 调pH为7.0，去离子水定容至1 L，高温高压灭菌后室温保存。

4、10*Tris-甘氨酸转膜液（pH约8.3）1 L组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸配制方法：甘氨酸144.13 g，Tris 30.29 g，去离子水溶解定容至1 L。

使用前，100 ml 10*转膜液，加入200 ml甲醇，700 ml去离子水成为1*转膜液5、10*Tris-甘氨酸-SDS 电泳缓冲液（SDS-PAGE电泳缓冲液，pH约8.6）组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸，1%（W/V）SDS配制方法：称取30.29 g Tris，,144.13 g甘氨酸，5 g SDS，加入800 ml去离子水搅拌溶解，定容至1 L，常温保存。

分子生物学实验室常用试剂的配制

分子生物学实验室常用试剂的配制一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH 调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

分子生物学实验常用实验试剂配制(2019.4.7)

分子生物学实验常用实验试剂配制（一）溶液I（TEG缓冲液）：使用浓度为（25mmol/L Tris-HCl, 10mmol/L EDTA, 50mmol/L葡萄糖，pH8.0）。

1、先称取0.3g Tris加入0.1mol/L HCl溶液14.6mL，配制成pH8.0 Tris-HCl 缓冲液100mL；（1mol/L HCl溶液：即取8.6毫升36%的盐酸加水、搅拌、定容至100毫升即可；或37% 的HCL相当于约12mol/L，即稀释12倍）2、再加入0.37g EDTA·Na2·2H2O和[0.99g（Glucose.H2O，分子量198.17）或0.9g Glucose，分子量180.1572]葡萄糖，灭菌后4℃保存备用。

（二）溶液II （碱裂解液）：使用浓度为（0.2 mmol/L NaOH, 1% SDS）。

配制母液：0.4M NaOH 称1.6g NaOH 定溶于100 mL蒸馏水；2% SDS 称2 g定溶于100 mL蒸馏水。

常温保存，使用时等体积混合。

（三）溶液III（乙酸钾溶液）：使用浓度（pH8.0, [K +]=3mol/L, [Ac -]=5mol/L）。

1、先配制60mL 5 mol/L KAc；称g KAc 定容至60 mL。

2、再加入11.5mL冰乙酸和28.5mL蒸馏水。

4℃保存备用。

（四）LB培养基配制：LB（液体）：称取0.5g 氯化钠，0.5g腋蛋白胨，0.25g酵母提取粉，加水50ml。

LB（固体）：称取0.5g 氯化钠，0.5g腋蛋白胨，0.25g酵母提取粉，0.75g琼脂粉，加水50ml。

（五）琼脂糖凝胶：琼脂糖凝胶的配制是分子实验室比较基本的操作，大体流程如下：称量、熔胶、倒胶、拔梳。

1.称量：我们通常所说的0.8%、1%的胶都是指的质量体积分数，即所称取的琼脂糖粉的质量（g）比所加的TBE缓冲液的体积（mL）即胶的浓度。

缓冲液的体积根据胶板的大小而定。

分子生物学之常用试剂配制二

分⼦⽣物学之常⽤试剂配制⼆三抗⽣素类简介1.抗⽣素溶液的配置⼀般⽤⽆菌⽔或醇类充当溶剂。

2.以⼄醇为溶剂的抗⽣素溶液⽆须除菌处理，⽤⽆菌⽔配的⽤0.45或0.22um⽆菌过滤器过滤除菌（个⼈经验，只要将盛装抗⽣素溶液的容器灭菌处理后可不⽤过滤除菌）。

3.所有抗⽣素溶液均应放于不透光的容器保存，也可⽤锡箔纸包裹。

4.镁离⼦是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使⽤不含镁盐的培养基（如LB培养基）。

5.抗⽣素配制出以后4可保存3个⽉，-20可保存⼀年。

6.配制完成后注意分装。

常⽤抗⽣素1.氨苄青霉素（Amp）（100mg/mL）⽆菌⽔中，最后定容⾄10mL，必要时可以⽤0.45或0.22um⽆菌过滤器过滤。

分装成⼩份于-溶解1g氨苄青霉素钠盐于⾜量的⽆菌⽔20可贮存⼀年，4可贮存3个⽉。

常以25ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于⽣长培养基。

2.羧苄青霉素（Car）（50mg/mL）溶解0.5g羧苄青霉素⼆钠盐于⾜量的⽔中，最后定容⾄10mL。

分装成⼩份于-20贮存。

常以25ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于⽣长培养基。

3.甲氧西林（Met）（100mg/mL）溶解1g甲氧西林钠于⾜量的⽔中，最后定容⾄10mL。

分装成⼩份于-20贮存。

常以37.5ug/mL终浓度与100ug/mL氨苄青霉素⼀起添加于⽣长培养基。

4.硫酸卡那霉素（kan）（10mg/mL）溶解100mg卡那霉素于⾜量的⽆菌⽔中，最后定容⾄10mL。

分装成⼩份于-20贮存。

常以10ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于⽣长培养基。

5.氯霉素（Chl）（25mg/mL）溶解250mg氯霉素⾜量的⽆⽔⼄醇中，最后定容⾄10mL。

分装成⼩份于-20贮存。

常以12.5ug/mL～25ug/mL的终浓度添加于⽣长培养基。

6.链霉素（streptomycin）（50mg/mL）溶解0.5g链霉素硫酸盐于⾜量的⽆⽔⼄醇中，最后定容⾄10mL。

分子生物学实验常用试剂配制

分子生物学实验常用试剂配制(1) 0.01M PBS缓冲液：一袋粉制PBS缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

(2) 0.01M枸橼酸盐缓冲液：一袋粉制枸橼酸盐缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。

0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。

(3)1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl 调至pH8.0,加水至1000ml。

(4) 1‰DEPC水：1mlDEPC加入1000ml新鲜三蒸水中，剧烈震荡20分钟使充分混匀，37o C至少放置2h或过夜，HIRAYAMA HV-50高压灭菌器高温高压30分钟降解DEPC，4℃保存。

(5) 1%琼脂糖凝胶：取琼脂糖0.2g置烧杯中，加入20ml的1×TAE缓冲液，封闭锥形瓶口，放入微波炉内加热，不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，待琼脂糖全部熔化后取出摇匀，冷却至60℃左右，加入10mg/ml溴化乙锭（EB）1µl，EB的终浓度为0.5μg/ ml，充分混匀。

将温热的凝胶倒入已经放好梳子的凝胶槽中，厚度约为3-5mm，注意不要有气泡，将凝胶放置室温待其自然凝固。

凝固后从胶槽中轻轻取出梳子。

(6)0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml。

(7) 50×TAE缓冲液：Tris碱242g，17.4mol/L冰乙酸57.1ml，0.5mol/L EDTA (PH8.0)100ml加蒸馏水至1000ml。