呼吸道九联检SOP
呼吸道九联检sop
呼吸道九联检操作程序呼吸道感染概述一、气管和支气管等咽喉呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、、上呼吸道感染常见的分为上呼吸道感染和下呼吸道感染呼吸系统，。
指鼻腔是急性上呼吸道感染、），tract infectionupper（acute respir 常见病因是呼吸道最常见的一种传染病咽或喉部急性炎症的概称。
，不仅性别职业和地区为病毒少数由细菌引起患者不分年龄。
、，、。
下呼吸道感染是最常见具有较强的传染性而且可引起严重并发症。
，肺炎支气管炎慢性支气管炎的感染性疾患包括急性气管——、，、、军团菌等微生物引衣原体由病毒支气管扩张等细菌支原体、、、，、治疗时必及时治疗的原则起其防治应遵循预防为主准确诊断，，、、须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
免疫荧光法介绍一、又称荧光抗体免疫荧光技术）technique（Immunofluorescence生物化学是标记免疫技术中发展最早的一种它是在免疫学技术、。
，很早以来就有一些学者和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
利用抗原抗体反应进行组织或试图将抗体分子与一些示踪物质结合，年首次采用荧光素进行标等于细胞内抗原物质的定位1941。
Coons 这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为记而获得成功。
用荧光抗体示踪荧光抗体技术technique）。
fluorescent（antibody 用已或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；这两知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合种方法总称免疫荧光技术，，用于检测或定也可以与其他蛋白质结合用于检测或定位各种抗原，，位抗体但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用所以人们习惯称，，为荧光抗体技术或称为免疫荧光技术用免疫荧光技术显示和检查。
，细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞或组织）（化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同还可进一步分做若干种。
，与放射免疫法相比荧光免疫法无放射性污染并且大多操作简便，，，便于推广该技术的主要特点是特异性强敏感性高速度快主。
呼吸道感染IgM九项联检试剂使用说明终稿
呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】通用名称：呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：PNEUMOSLIDE IgM商品名称：PNEUMOSLIDE IgM【包装规格】10人份/盒【预期用途】采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
已报道的非典型性肺炎的病原体有很多，其中最常见的有：嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
Q热立克次体Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。
在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。
微量免疫荧光法（MIF）是最灵敏和最特异的诊断方法。
腺病毒腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。
呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。
流感病毒它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。
由于它易于与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难。
因此，实验室诊断就显得非常重要。
副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎（哮吼）。
3型具有流行性，1和2型具有地域性。
【检测原理】间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
呼吸道九联检简要操作规程
呼吸道九联检简要操作规程一采血要求1. 静脉血，指尖血（儿童）2. 拒收溶血标本。
脂血标本不影响检测。
二所需实验仪器和设备1. 荧光显微镜2. 洗盒，湿盒3. 摇床4. 15微升和150微升量程的移液器5. 1000毫升量筒，1000毫升玻璃容器三准备工作：提前30分钟取出试剂盒恢复至室温，同时将试剂②中的成分加入1L蒸馏水，摇匀直至完全融化。
四试验步骤：25ul血清+25 ul PBS溶液↓混匀取混合后的液体30ul↓加150ul吸附剂[⑦]↓混匀，静置1分钟离心4000转10-15分钟↓在载玻片上每孔加15ul上清液↓放入湿盒37度温育60分钟↓用PBS洗液冲洗载玻片后，浸泡在PBS洗液中并放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗↓自然晾干或吹干，每孔加入15ul结合物[⑤]↓放入湿盒37度温育30分钟↓用PBS洗液冲洗载玻片，浸泡在PBS洗液中并放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗自然晾干或吹干↓加封闭介质盖上盖玻片观察结果注意事项：1，加样时，移液器不要触碰离心管底部的沉淀和九联检包被孔2，实验结束后，九联检片子最好在2-3小时内观察，第二天观察不影响结果判断。
若需保存，需冷冻避光。
3，结果判断第2,5,6,7,8,9包被孔的阳性细胞为荧光均匀分布在包被细胞上，并且为明显的绿色；阳性细胞数占3%以上时，报阳性，其余阴性。
4，PBS常温放置一星期不影响实验结果，但要保证在此期间不被污染5.若实验室没有摇床，洗涤过程中中间换一次PBS，同样能达到洗涤效果，而不需要震摇郑州安图绿科生物有限公司。
呼吸道九联检技术手册
一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、非典型呼吸道病原体已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。
嗜肺军团菌嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)是一种兼性细胞内致病菌，有鞭毛，革兰氏阴性，军团菌科军团菌属多形态性的短小球杆菌。
其不抗酸，无孢子，无荚膜，类似于杆菌。
不能分解明胶、糖类或是尿素，同时，不可参加酵解反应。
嗜肺军团菌无色，也非自身荧光，氧化酶与过氧化氢酶测试阳性，β-内酰胺酶阳性。
专性需氧，在自然界可长期存活，如在蒸馏水中可存活100d以上，污水中可存活一年，对热和一般消毒剂敏感。
菌落特征为灰白色，有光泽，湿润，圆形，凸起，并有特殊臭味，革兰氏染色不明显，多用镀银法或Giemsa法染色。
广泛分布于天然淡水环境或人工水域中，在阿米巴体内寄生，亦可感染人巨噬细胞，在其胞内繁殖和杀死人巨噬细胞，是引起军团菌病（军团菌肺炎）的重要病原体。
军团菌病在国内外时有爆发流行，中央空调冷凝塔水系统是引起军团菌病的主要传染源，病死率较高。
目前已知军团菌有48个种70多个血清型，其中嗜肺军团菌有15个血清型，血清型-1是引起社区获得性肺炎和院内感染性肺炎的重要病原体。
呼吸道九联检
呼吸道九联检的局限性
检测时间较长需要等待结果 检测费用较高可能增加患者负担 检测结果可能受到样本采集、保存等因素的影响
检测结果可能存在假阳性或假阴性需要结合临床症状和病史进行综合判断
如何扬长避短发挥呼吸道九联检的最大价值
优势：快速、 准确、全面 地检测呼吸 道疾病
局限性：可 能存在假阳 性和假阴性 结果
智能化：随着人工智能技术的发展呼吸道九联检技术将更加智能化可以实现自动 检测、分析、报告等
远程医疗：随着远程医疗技术的发展呼吸道九联检技术可以实现远程检测、诊断 和治疗提高医疗服务的效率和便捷性。
呼吸道九联检在未来的应用前景
技术进步：随着 科技的发展呼吸 道九联检的准确 性和灵敏度将不 断提高
应用范围扩大： 未来呼吸道九联 检的应用范围将 不断扩大包括但 不限于医院、社 区、家庭等
呼吸道九联检在临床诊断中的应用
呼吸道感染：用于诊断呼吸道 感染性疾病如流感、肺炎等
过敏性疾病：用于诊断过敏性 鼻炎、哮喘等疾病
呼吸道肿瘤：用于诊断肺癌、 喉癌等呼吸道肿瘤性疾病
呼吸道慢性疾病：用于诊断慢 性阻塞性肺疾病、支气管扩张 等疾病
呼吸道九联检在流行病学调查中的应用
呼吸道九联检是一种快速、准确的检测方法可以检测多种呼吸道病原体。 在流行病学调查中呼吸道九联检可以用于筛查疑似病例确定感染源。 呼吸道九联检还可以用于监测疫情发展趋势为制定防控措施提供依据。
原体
检测试剂：使 用呼吸道九联 检检测试剂对 样本进行检测
检测结果：根据 检测试剂的反应 结果判断患者是 否感染了呼吸道 九联检中的病原
体
报告结果：将 检测结果报告 给医生以便医 生进行诊断和
治疗
呼吸道九联检的检测结果解读
呼吸道九联检操作规程-SOP
广州市医院检验科免疫室（SOP）文件撰写人：审核人：批准人：批准日期： 2011年 8月8日启用日期： 2011年 8月8日二零一一年八月八日制文件编号: HDHY-MYJY-P004-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第2页共 2页* 简明操作程序（将风干改成晾干）编写人修改内容及修改人批准人生效日期广州市胸科医院检验科操作标准程序文件文件编号: HDHY-MYJY-P007-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 2页* 有效性判断每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。
观察到的荧光模式应为：阳性对照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核、胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性对照：军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
* 样本结果判断阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
【检验结果的解释】1.每一批产品在放行前都要经过更加严格的内部质量控制（Q.C.）的检验。
质控品可溯源到经过内部确认的参考血清盘。
2. 如果所有细胞或第10孔出现荧光表明存在抗核或抗细胞抗体，不能判为阳性，应用其他方法进行检测。
检验与临床通讯(呼吸道九联检)
检验与临床通讯科室：检验科编辑：审核：2016年第1期九项呼吸道感染病原体IgM检测及临床意义呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
尽管呼吸道病原的检测方法多种多样，但确诊感染病原仍非常困难。
细菌的病原体分离培养及病毒的培养组织细胞培养法过去常作为“金标准”，但因其操作复杂、培养时间长、技术难度大、阳性率低等缺点而很难实现。
近年来由于免疫技术的发展，特别是免疫标记技术的广泛应用，如直接、间接免疫荧光法、抗碱性磷酸酶桥联酶标法等标记技术，检测方便，快速且成本低廉适，适合于临床要求，因此在临床上有重要意义。
各检测指标临床意义、采血要求和发检测报告时间如下：嗜肺军团菌（LP）测定（间接免疫荧光法）预期用途人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
临床上军团菌感染主要有两种表现形式：肺炎型和庞蒂亚克热型。
军团菌肺炎潜伏期为2~10天，IgM抗体在感染后1周左右出现，并可持续存在3~6个月。
参考范围：正常参考值：阴性肺炎支原体（MP)测定（间接免疫荧光法）预期用途：肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
肺炎支原体可在呼吸道黏膜上皮内潜伏，部分患者无明显症状；但大部分患者为显性感染。
在3岁以下儿童以上呼吸道感染多见，成人以肺炎表现为主。
呼吸道九联检
关于开展呼吸道病原体九联检的通知为满足临床要求，给临床和病患提供更好的检验服务，检验科开展了呼吸道九项病原体的检测，在免疫项目中开呼吸道九联检（收费375元）即可，医保项目，抽血当日即可出报告。
抽血：血清2-3ml（红盖试管）。
呼吸道九项病原体的临床意义??? 采用西班牙VIRCELL公司生产的间接免疫荧光法检测试剂，同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM抗体，可检测的病原体包含：1、嗜肺军团菌?2、肺炎支原体?3、Q热立克次体?4、肺炎衣原体?5、腺病毒?6、呼吸道合包病毒?7、甲型流感病毒??8、乙型流感病毒??9、副流感病毒1、2、3型。
?1、嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清I型，非典型性肺炎常伴随有全身症状，10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清I型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法是唯一的标准技术。
临床上军团菌感染主要有两种表现形：肺炎型和庞蒂亚克热型。
前驱症状：乏力、头痛、全身肌肉酸痛，于1～2日内突然发热，可达40℃以上，多呈稽留热。
病程早期即可出现多系统受累症状，为本病的突出特点。
绝大多数患者有咳嗽，起初为干咳，半数患者转成非脓性粘稠痰或略带脓性痰，痰中常含少量血丝，个别可咯血。
少数患者有胸痛，呼吸困难较为多见。
肺部可闻及细湿罗音。
继之可出现明显肺实变体征。
约25%有恶心、呕吐及腹泻等消化道症状，有的腹泻为唯一首发症状。
神经症状多见于极期，有时非常突出，包括不同程度意识障碍、肌张力增强或阵颤、步态不稳等，可有暂时性肢体软瘫;个别可有腹泻、清水样便。
或者失眠、眩晕、记忆力减退、意识朦胧、项强、震颤等神经系统表现.2、肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，肺炎支原体可在呼吸道黏膜上皮潜伏，部分患者无明显症状；但大部分患者为显性感染。
3岁以下儿童以上呼吸道感染多见，成人以肺炎表现为主。
发病初期有咽痛、头痛、发热、乏力、肌肉酸痛、食欲减退、恶心、呕吐等症状。
发热一般为中等热度，2~3天后出现明显的呼吸道症状，突出表现为阵发性刺激性咳嗽，以夜间为重，咳少量黏痰或黏液脓性痰，有时痰中带血，也可有呼吸困难、胸痛。
呼吸道感染IgM九项联检试剂使用说明终稿
呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】通用名称：呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：PNEUMOSLIDE IgM商品名称：PNEUMOSLIDE IgM【包装规格】10人份/盒【预期用途】采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
已报道的非典型性肺炎的病原体有很多，其中最常见的有：嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
Q热立克次体Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。
在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。
微量免疫荧光法（MIF）是最灵敏和最特异的诊断方法。
腺病毒腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。
呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。
流感病毒它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。
由于它易于与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难。
因此，实验室诊断就显得非常重要。
副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎（哮吼）。
3型具有流行性，1和2型具有地域性。
【检测原理】间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
呼吸道九联检结果判断标准
呼吸道九联检结果判断标准
观察结果时，先在10倍镜下对载玻片进行观察，找到视野后再换至40倍镜下观察结果。
建议先观察第十孔（质控孔），这样有利于判断本底（减少杂质荧光的干扰或者病人自身抗体的干扰），其余各孔的观察顺序可以根据自己的习惯进行调整。
400倍镜下，九联检各孔的阳性判断标准如下：
第1、3、4孔：形态符合标准；亮度明亮；数量上均匀布满整个视野，400倍镜下每个视野内荧光个数超过70个
附注：1孔：形态为典型的杆状，3孔：形态为典型的球杆状，4孔位典型的球状。
详见下图：
图表1嗜肺军团菌（1孔）图表2立克次体（3孔）
图表3肺炎衣原体（4孔）
第2孔：国外显微镜下：荧光形态符合标准，亮度明亮，荧光细胞比例超过50%；国内显微镜：荧光形态符合标准，亮度可以，荧光细胞比例超过10% 附注：荧光形态为胞围荧光模式
图表4肺炎支原体（2孔）
第5、6、7、8、9孔：国外荧光显微镜：荧光形态符合标准，亮度明亮，荧光细胞比例超过3%即400倍镜下，每个视野中约5个阳性细胞；国内荧光显微镜下：荧光形态符合标准，亮度较亮，荧光比例超过1%，即400倍镜下，每个视野中约2-3个阳性细胞
附注：荧光形态为胞核、胞浆或胞膜混合荧光模式
图表5腺病毒（5孔）图表6呼吸道合胞病毒（6孔）
图表7甲型流感病毒（7孔）图表8乙型流感病毒（8孔）
图表9副流感病毒（9孔）
第10孔、质控孔：正常情况下为一些红色的细胞
图表10质控（第十孔）。
呼吸道九联检
关于开展呼吸道病原体九联检的通知为满足临床要求，给临床和病患提供更好的检验服务，检验科开展了呼吸道九项病原体的检测，在免疫项目中开呼吸道九联检（收费375元）即可，医保项目，抽血当日即可出报告。
抽血：血清2-3ml（红盖试管）。
呼吸道九项病原体的临床意义采用西班牙VIRCELL公司生产的间接免疫荧光法检测试剂，同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM抗体，可检测的病原体包含：1、嗜肺军团菌 2、肺炎支原体 3、Q热立克次体 4、肺炎衣原体 5、腺病毒 6、呼吸道合包病毒 7、甲型流感病毒 8、乙型流感病毒 9、副流感病毒1、2、3型。
1、嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清I型，非典型性肺炎常伴随有全身症状，10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清I型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法是唯一的标准技术。
临床上军团菌感染主要有两种表现形：肺炎型和庞蒂亚克热型。
前驱症状：乏力、头痛、全身肌肉酸痛，于1～2日内突然发热，可达40℃以上，多呈稽留热。
病程早期即可出现多系统受累症状，为本病的突出特点。
绝大多数患者有咳嗽，起初为干咳，半数患者转成非脓性粘稠痰或略带脓性痰，痰中常含少量血丝，个别可咯血。
少数患者有胸痛，呼吸困难较为多见。
肺部可闻及细湿罗音。
继之可出现明显肺实变体征。
约25%有恶心、呕吐及腹泻等消化道症状，有的腹泻为唯一首发症状。
神经症状多见于极期，有时非常突出，包括不同程度意识障碍、肌张力增强或阵颤、步态不稳等，可有暂时性肢体软瘫; 个别可有腹泻、清水样便。
或者失眠、眩晕、记忆力减退、意识朦胧、项强、震颤等神经系统表现.2、肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，肺炎支原体可在呼吸道黏膜上皮潜伏，部分患者无明显症状；但大部分患者为显性感染。
3岁以下儿童以上呼吸道感染多见，成人以肺炎表现为主。
发病初期有咽痛、头痛、发热、乏力、肌肉酸痛、食欲减退、恶心、呕吐等症状。
发热一般为中等热度，2~3天后出现明显的呼吸道症状，突出表现为阵发性刺激性咳嗽，以夜间为重，咳少量黏痰或黏液脓性痰，有时痰中带血，也可有呼吸困难、胸痛。
呼吸道九联检(简单)
检测结果显示1.2.3.4孔
POSITIVE
NEGATIVE
POSITIVE
NEGATIVE
POSITIVE
NEGATIVE
POSITIVE
NEGATIVE
检测结果显示5.6.7.8.9标准相 同
POSITIVE
NEGATIVE
POSITIVE
NEGATIVE
PPOOSSIITIVE TIVE
NNEEGGAATTIVI E VE
上海公立医院
上海肺科医院
上海东方医院
广州市儿童医院
广东省人民医院
南京市儿童医院
浙江大学第二附属医院
湖北省人民医院
湖北省儿童医院
武汉市同济医院
山东省立医院
河南省人民医院
广西区妇幼保健院
青海省妇女儿童医院
广西区人民医院
等300家医院。
载玻片
西班牙 VIRCELL，S.L.概况
VIRCELL 成立于1991年，专业从事微生物诊 断试剂的开发和生产。
拥有近200个品种，涵盖多种检测方法：
• 酶联免疫分析 • 免疫荧光分析 • 细胞培养 • 分子生物
产品在全球范围销售，目前已销往50多个国家。
原装进口，中国独家代理
质量管理体系
1999年通过ISO 9002: 1994质量认证； 2009年更新ISO 9001: 2008质量认证；
2003年获得CE认证； 2005年获得ISO 13485: 2005认证；
试剂盒的设计理念
多种病原同时联合检测，节省时间、便于 快速准确诊断；为临床呼吸道病原体鉴别、 诊断提供导向性帮助。
CAP的发病率为4.7%-11.6%，其中22%-51%的 CAP需住院治疗；住院CAP死亡率7%，重症CAP死 亡率29%。（数据来自西班牙）
呼吸道九联检 (1)
3，实验片子最好在48小时内观察，若需保存，需避光 放置在2-8摄氏度下不超过7天.
4，结果判定，对结果荧光细胞数占3%以上时，报阳 性，其余阴性。
临床应用
一：儿童 儿童呼吸道感染的入院筛查项目
九项呼吸道感染病体IgM抗体检 测试剂盒临床应用
安图生物：客户服务部
研究背景
➢上呼吸道感染
鼻腔、咽、喉部 ----- 常见病因病毒，少数为细菌 ；
➢下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)
气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、 衣原体、军团菌等微生物引起。
以社区获得性肺炎(CAP)多见
研究背景
研究背景
国内CAP的混合感染
共入组665例病人，其中完成非典型病原体检测的为610例 刘又宁等．中华结核和呼吸杂志，2006;29(l):3-8．
研究背景
➢在CAP病原学中，非典型病原体占3％-40 ％ ➢大多数研究显示
肺炎支原体感染发病率居首位，占2％-30％ 肺炎衣原体占6％-22％ 军团菌属散发感染的病原体，发病率约为2％-15％ 混合感染占15％-38％
图表 2肺炎支原体（2孔）阴\阳
第5、6、7、8、9孔：国外荧光显微镜：荧光形态符合标准，亮 度明亮，荧光细胞比例超过3%即400倍镜下，每个视野中约5个 阳性细胞；国内荧光显微镜下：荧光形态符合标准，亮度较亮， 荧光比例超过1%，即400倍镜下，每个视野中约2-3个阳性细胞
附注：荧光形态为胞核、胞浆或胞膜混合荧光模式
➢5-15岁青年易被感染，尤其是人群聚集处 ➢多起病缓慢，潜伏期30天左右 ➢临床多出现流感样的症状，发热一般低于38度， 数天至数周后出现持续性干咳，若不及时治疗会持 续数月 ➢阳性率一般在1-5%左右
呼吸道九联检——套餐式组合更高效、特异、全面！
呼吸道九联检——套餐式组合更高效、特异、全面！今年随着我们检验科新的检验项目的陆续开展，在我们检验科同事们的共同努力下，呼吸道九联检终于开始在我院开展了。
套餐式组合让临床呼吸道感染的检测更加高效、特异、全面。
一、呼九简介1、呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
2、呼吸道九联检也叫九项呼吸道病原体IgM抗体联合检测：（嗜肺军团菌血清1型IgM抗体+肺炎支原体IgM抗体+Q热立克次体IgM抗体+肺炎衣原体IgM抗体+腺病毒IgM抗体+呼吸道合胞病毒IgM抗体+甲型流感病毒IgM抗体+乙型流感病毒IgM抗体+副流感病毒1、2和3型IgM抗体）。
3、采用间接免疫荧光法，主要针对九项病原体的IgM检测。
由于机体受到抗原刺激后最早产生的抗体是IgM，但是IgM的半衰期短（约5天）若血清中特异性IgM类抗体含量增高，表明有近期感染，这有助于感染性疾病的早期诊断。
以下是关于九项病原体名称及其潜伏期和产生IgM的时间。
九项病原体IgM抗体产生时间病原体潜伏期IgM产生时间嗜肺军团菌4-10天1周左右肺炎支原体14-21天1周左右Q热立克次体12-19天2周左右肺炎衣原体30天左右2-3周腺病毒2-14天4-7天呼吸道合胞病毒3-7天4-8天流感病毒2-7天4-8天副流感病毒2-7天4-8天二、临床意义1、嗜肺军团菌是社区获得性肺炎的重要致病菌。
在欧洲和北美军团军肺炎占社区获得性肺炎前3,4位，ICU重症社区获得性肺炎的第三位，而医院获得性肺炎的 1～5 %也由嗜肺军团菌所致。
呼吸道联检操作规程SOP资料
________________医院检验科_____室（SOP）文件撰写人：审核人：批准人：批准日期：2007年7月31日启用日期：2007年8月 1 日二零零七年七月一日制4.标本的要求：需由专业人员无菌静脉穿刺采集血液。
使用消毒或无菌技术能保持样本的完整性。
血清样本采集后如不在8小时内检测应2~8 ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20ºC）保存。
不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM。
不要使用高血脂或污染的血清。
若样本中含有微粒要离心使之澄清。
4.仪器：荧光显微镜5.试剂厂家及名称：西班牙VIRCELL公司6.操作步骤：1. 使用前，将所有试剂平衡至室温。
载玻片平衡至室温后再打开。
2. 样本的稀释：按1:1比例稀释血清样本，即25µL血清加入25µL PBS2中。
阴阳性对照34不需要稀释。
3. 用抗人IgG吸附剂7处理稀释后的血清：将30µL稀释后的血清加入150µL吸附剂中，彻底混匀。
阴阳性对照3和4不需吸附剂处理。
处理后的血清要离心10-15分钟除去沉淀，以防干扰检测。
4. 在载玻片1的每孔中加15µL吸附剂处理过的血清（一份样本对应一个载玻片）。
在一个载玻片的每孔中加入15µL不稀释的阳性对照3，在另一个载玻片的每孔中加入15µL不稀释的阴性对照4。
5. 将载玻片放入湿盒中，37℃温育90分钟。
6. 用PBS 2的缓慢水流冲洗载玻片1（避免直接冲入孔内）后，浸泡在PBS中并放置在水平摇床上轻轻摇动10分钟。
再用蒸馏水缓慢水流冲洗（避免直接冲入孔内）。
7. 载玻片1自然晾干。
8. 每孔加入15µL抗人IgM FITC结合物溶液5M（不需稀释）。
9. 将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。
10. 重复6和7的洗涤步骤。
11. 加几小滴封闭介质6，小心盖上盖玻片。
12. 尽快用荧光显微镜在400倍放大率下观察结果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，并且大多操作简便，便于推广。
该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。
主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。
但近年来发展了几种特殊的荧光免疫测定，已经很好改善了这些缺点，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，应用在临床检验中。
1．原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。
由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。
免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
其根据反应体系的不同可分为：直接法：将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。
间接法：如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗原—抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。
如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。
根据抗原抗体反应后定量方法的不同可分为：荧光抗体技术(荧光显微镜技术)：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。
免疫荧光测定技术：抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法。
2.荧光物质许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。
只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。
所用荧光物质介绍：异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）：为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。
分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光，有两种同分异结构，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性、与蛋白质结合能力等方面都更好，在冷暗干燥处可保存多年，是应用最广泛的荧光素。
其主要优点是：①人眼对黄绿色较为敏感，②通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
三、呼吸道九联检产品介绍九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒，采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、贵阳市第二人民医院检验科微生物作业指导书文件编号：JYYY-3-WS-06版本/修订号：A/0生效日期：20110517主题内容呼吸道感染病原体九联检操作程序第页肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
用于呼吸道感染疾病的辅助诊断。
1.检测原理间接免疫荧光法（IFA）（图1）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。
在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜观察结果。
图1：九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒检测原理2. 试剂盒组成及用途3. 操作步骤3.1 实验前准备1）实验所需物品准备：1000ml量筒、1000ml烧杯、离心管、微量移液器、温育湿盒、洗瓶、水平摇床、恒温箱、盖玻片、荧光显微镜。
2）PBS洗液的准备：将1瓶PBS粉末倒入烧杯中，加入1L蒸馏水中，摇匀直至完全溶解，配好后储存在2-8ºC备用。
3）使用前，将所有试剂平衡至室温，将恒温箱调至37℃。
3.2 实验步骤1）样本的稀释：按1:1比例稀释血清标本，即25µL血清加入25µL PBS 中。
阴阳性对照不需要稀释。
2）用吸附剂处理稀释后的血清：将30µL稀释后的血清加入150µL吸附剂中，彻底混匀。
阴阳性对照不需吸附剂处理。
处理后的血清要离心10-15分钟除去沉淀，以防干扰检测。
3）在载玻片的每孔中加15µL吸附剂处理过的血清。
在一个载玻片的每孔中加入15µL不稀释的阳性对照，在另一个载玻片的每孔中加入15µL不稀释的阴性对照。
4）将载玻片放入湿盒中，37℃温育90分钟。
5）用PBS洗液的缓慢水流冲洗载玻片（避免直接冲入孔内）后，浸泡在PBS中并放置在水平摇床上轻轻摇动10分钟。
将载玻片用蒸馏水缓慢水流冲洗（避免直接冲入孔内）。
6）载玻片自然晾干。
7）每孔加入15µL FITC结合物溶液（不需稀释）。
8）将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。
9）重复6和7的洗涤步骤。
10）加几小滴封闭介质，小心盖上盖玻片。
11）尽快用荧光显微镜在400倍放大率下观察结果。
如果不能立即观察，可将其避光放置于2-8ºC不超过24小时。
4．结果判断4.1有效性判断每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。
观察到的荧光模式应为：阳性对照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核、胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性对照：军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
阳性结果荧光图谱：阴性结果荧光图谱：贵阳市第二人民医院检验科微生物作业指导书文件编号：JYYY-3-WS-06版本/修订号：A/0生效日期：20110517主题内容呼吸道感染病原体九联检操作程序第页4.2样本结果判断阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
5.本试剂盒应用中所需注意事项有哪些？答：在使用本产品中所需注意事项如下：1）本产品用于体外诊断，仅限专业人员使用。
2）在使用前，建议用户仔细阅读和理解说明书，严格按照程序进行操作才能获得可靠的检测结果。
特别是样本和试剂的正确吸取以及仔细的洗板、温育的时间控制对获得准确结果都很重要。
另外使用前，应将所有试剂平衡至室温，载玻片要平衡至室温后再打开。
3）每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。
观察到的荧光模式应与说明书要求相符合，否则检验无效。
4）洗涤时注意不要直接对着孔直接冲洗，以免冲洗掉已经固化反的应复合物。
5）单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的诊断。
应采集双份样本（急性期和康复期）同时检测来观察血清转化或抗体水平的明显升高。
6）仅使用试剂盒内的组分，不要混用不同试剂盒或不同厂家的试剂组分。
只有PBS、吸附剂、封闭介质和载玻片可与其他批次VIRCELL IFA试剂盒通用，其它组分同批次可以混用。
使用时，最好在无菌条件下操作试剂以防微生物污染。
仅使用试验所需量的吸附剂、PBS、质控血清和结合物，剩余的试剂不要倒回瓶中。
PBS溶解后储存在2～8 ºC一般为4个月，使用前需检查，如出现浑浊请勿使用。
7）每步操作必须使用干净吸头，仅使用干净的耗材，最好是一次性使用的耗材。
8）包装如有损坏请勿使用。
9）切勿用嘴吸移液管加样。
10）本试剂盒中的吸附剂、结合物和质控血清含有动物源性物质，质控血清还含有人源性物质。
尽管本试剂盒中的人血清质控品已经测试为HBsAg、HCV抗体和HIV抗体阴性,质控血清和病人样本仍应作为潜在感染性物质进行处理。
孔内包被的经灭活的嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒 1、2和3型，也仍应视为具有潜在感染性并小心处置。
目前没有方法可以确保这些或其他感染性物质不存在，因此所有的材料应视为具有潜在感染性进行处置，应遵守当地关于临床废弃物处理的法规。
11）结合物、吸附剂、封闭介质和质控品含有叠氮钠（浓度＜0.1%），避免接触酸和重金属。
12）封闭介质含有甘油，请勿接触酸和暴露在高温下。
13）伊文斯蓝（浓度＜0.1%）是一种致癌物。
请勿接触皮肤和眼睛。
万一接触到该溶液，用水彻底冲洗并到医院检查。
14）仅按本说明书进行操作，不遵守规定的温育时间和温度会导致错误的结果。