呼吸道九联检

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呼吸道病原体检测探讨
主要内容
• 呼吸道感染的概况
• 常见非典型病原体
• 实验室检测方法学
• 间接免疫荧光法—IgM抗体检测
呼吸道病原体感染概况
上呼吸道感染
鼻腔、咽、喉部 ----- 常见病因病毒,少数为细 菌;
下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)
气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、 衣原体、军团菌等微生物引起。 以社区获得性肺炎(CAP)多 见
------《用量子点标记技术检测肺炎支原体抗原》,中国医科大学基础医学院病原生物学教研室,何梦博,曾
晶晶,张晗,杨颖,赵之娜,王桂珍。发表于《中国卫生检验杂志》2012年2月第22卷第2期。 ------Sillis M. The limitation of IgM assays in the serological diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infections[J]. J Med Microbiol,1990,33 ( 4) : 253 -258. ------Lind K,Hoier - Madsen M,Wiik A. Autoantibodies to the mitotic spindle apparatus in Mycoplasma pneumoniae disease[J]. Infect Im-mun,1988,56( 3) : 714 - 715.
国内CAP流行病学
---非典型性肺炎应引起足够重视
40%
肺炎链球菌和非典型病原体为主要致病菌
30%
阳性率(%)
20.7%
20%
10.3%
10% 0%
原 球 杆
9.2%
6.6%
10.2%










7个城市、12个研究中心、665例
刘又宁等.中华结核和呼吸杂志,2006;29(l):3-8.
POSITIVE
wenku.baidu.com
NEGATIVE
POSITIVE
NEGATIVE
POSITIVE
NEGATIVE
POSITIVE
NEGATIVE
POSITIVE
NEGATIVE
特点优势
1、西班牙VIRCELL公司原装进口产品。
2、一卡九项,同步完成多种疑似病原 体鉴别诊断。 3、检测IgM抗体,近期感染的有效指标, 特别适合于住院患者。 4、标本为血清标本,容易采集、容易 保存。
(二)病毒类
流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病 毒、冠状病毒、禽流感病毒等 ①季节性或区域性流行 ②临床症状:干咳为主,少痰或无痰、呼吸困难, 低氧血症
(三)真菌性肺炎
念珠菌,曲菌,新型隐球菌,放线菌,组织胞浆菌,毛 霉菌属等
①多数为条件致病 ②多发生在免疫低下患者和长时间接受广谱抗 生素治疗的患者
呼吸道病原体感染概况
二、非典型病原体
非典型肺炎:泛指所有由某种未知的病原体引起的肺 炎。病原体可能是病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体或 军团菌、真菌等 1、20世纪60年代首次发现了非典型的病原体——肺炎 支原体 2、临床症状差异大 3、在CAP中感染的比例逐年增加,据报道大约占4060%
(一)最常见的非典型病原体
肺炎支原体
介于病毒与细菌之间一种没有细胞壁的病原体; 40%以上的非典型肺炎病例是由肺炎支原体引起的; MP好发于 1岁以上年长儿,近年来发病年龄明显 提前,发病率也有所增加,婴幼儿发病也逐渐 增多。
病原菌培养是目前公认的检测标准,IgM抗体检测
治疗:大环内酯类首选、喹诺酮类药物。
Q热立克次体
肺炎支原体
立克次氏体 衣原体
14-21天
12-19天 30天左右
感染后1周
感染后2周 感染后2-3周
腺病毒
合胞病毒 流感病毒 副流感病毒
2-14天
3-7天 2-8天 3-8天
4-7天
1-7天 2-7天 2-7天
间接免疫荧光法——九项呼吸道病原体 IgM抗体检测
检测原理
阳性反应
阴性反应
检测结果显示
呼吸道病原体感染概况
一、典型“致病菌”
细菌:肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡他 莫拉菌等 症状:典型,咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛,一般都伴有发 热,或有脓血痰 病史:①悠久,古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎 ②重症致死性肺炎很多是细菌性 ③上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细菌性肺炎,现 在报道约在40%左右 ④肺炎链球菌大约占在60%







N=126
N=63
N=56

N=40
N=62




各病原体在CAP中感染率
病原菌 肺炎链球菌 肺炎支原体 流感嗜血杆菌 肺炎衣原体 军团菌 病毒类 混合感染(两种或以上) 其他及不明原因
a
感染率(%) 27 15 12 7 4.8 8.5 17 13
在养老院获得的肺炎
数据来源: 《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》 《肺炎的诊断与治疗研究进展》 《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》 《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
呼吸道病原体实验室检测方法
间接免疫荧光法
抗原与抗体检测标本采集
抗原和病 原体检测
咽拭子 痰 抗体检测
抗原与抗体检测标本采集
抗原与抗体的标本保存
• 抗体—血清 • 抗原—宿主细胞
抗原检测受药物和其他微生物的干扰

最新文献报道“从105份患者病历资料分析显示,肺部有明显病理改 变,有典型临床症状,但用药物(佩罗欣、其仙、明可欣等)治疗后,··· ···出 现阴性结果,说明药物干预后对抗原的检测有一定程度影响。” 另外“由于Mp细胞膜上的糖脂抗原与其它微生物及机体组织存在 非特交叉反应,故血清学检测方法中所用诊断抗原的质量直接影响血清学检 测的特异性。”
呼吸道合胞病毒
RNA病毒,重要的婴幼儿急性呼吸道感染病原体,引起间质 性肺炎及毛细支气管炎等疾病 过90%的儿童在2岁以前感染过RSV,而且都经历过1 次或多次感染,0.1%的感染者会致命超 占病毒性肺炎的 25%-35% ;居儿童病毒性感染第一位 潜伏期3-7天,IgM抗体在发病1周出现,持续2~3个月
Ø 快速准确的呼吸道联检试剂,对于呼吸道感染的病原学诊断, 有着重要的临床指导意 义。 -------呼吸道联检试剂在急性呼吸道感染诊断中的应用价值 河南省郑州市第五人民 医院呼吸内科(郑州450053) 王 敏 Ø MIF法(vircell)与颗粒凝集法和微量凝集法有高度的相关性 -------昆明地区小非典型肺炎病原体临床实验研究 昆明市儿童医院中心实验室 倪 林仙




抗原抗体的检测方法
• 胶体金法:抗体 • 凝集法:抗体 • 微孔板法和磁珠法:抗体、抗原 • 直接免疫荧光法:抗原--抗体 • 间接免疫荧光法 :抗原--抗体--二抗
检测IgG抗体还是IgM抗体?
• IgM • IgG
潜伏期和IgM抗体出现
潜伏期 军团菌 4-10天 IgM抗体出现时间 4-7天
易感人群为老年人、吸烟者、慢性肺部患者、免疫功能低下 、癌症病人、肾透析病人和艾滋病人。
症状表现为:发冷、不适、肌痛、头晕、头痛,伴有烦躁、 呼吸困难、胸痛。90%以上患者体温急剧上升,咳嗽、粘痰 ,偶尔出现腹泻呕吐胃肠道紊乱,重症患者可发生肝功能变化 及肾衰 治疗:大环内酯类如阿奇霉素 红霉素
5、采用间接免疫荧光法,检测抗体, 受干扰较少
6、质控孔和阴阳性对照双重保险 7、试验操作简易,2.5小时完成。
临床应用
一:儿童 儿童呼吸道感染的入院筛查项目 二:呼吸科入院筛查项目 呼吸道感染的入院筛查项目 三:易发生呼吸道感染的病人人群 文献报道: 恶性肿瘤继发下呼吸道感染 肺癌合并肺部感染,发病率60%左右, 肺部感染是妇科肿瘤术后常见并发症 恶性淋巴瘤临床表现有呼吸道感染 呼吸道感染导致肾功能衰竭 呼吸道感染诱发加重肾功能不全 病毒感染时肾病综合征常见并发症
腺病毒
无外壳的双链DNA病毒,与人类呼吸道感染密切有关 多发生于2~48月婴幼,冬春两季常见
约占病毒性肺炎的20%~30%,居第二位
潜伏期3~8天,急骤发热,自第1~2日即39℃以上的高热, 第3~4日呈不规则的高热;60%以上的病例体温超过40℃ 在呼吸、神经、循环、消化等系统都有症状显现 治疗:西多福韦等抗病毒药物或中药疗法
白色念珠菌肺炎
各病原体感染率
一项来至亚太地区的研究表明
Ø 肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌 Ø 近年来随着检测手段的提高,非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的 常见致病菌之一
欧洲一项回顾性评价1511例CAP患者病原学研究结 果(1996-2001)
共计610例患者有病原学证据可供评价,其中细菌/非典型病原体致感染患者采 用常规方法检测病原体,混合感染和化脓性肺炎患者具有血清学诊断证据
临床应用科室
应用科室:呼吸科,儿科,消化科,肿瘤科, 血液科,肾病科,结核科,感染科,心内科, 耳鼻喉科,神经科,外科,风湿免疫科,新生 儿科,肝胆外科等易发呼吸道感染的临床科室 。
标本要求
• 1、静脉采血。 • 2、采血量:试验用血清30ul,2ml即可。 • 3、避免高脂高溶和污染血清。
国内发表的有关九联检的文章举例
肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌和立克次体等 ①感染比例高,超过50% ②临床症状:干咳为主,少痰或无痰,肺外症状较常见 明显,尤其军团菌感染,表现相对较重,多脏器受累 明显。可有高热、耳鸣、相对缓脉、血尿、腹痛、腹
泻、肝酶升高、电解质紊乱、精神神经症状等
③β-内酰胺类 (青霉素类、头孢类)等药物无效 ④治疗:喹诺酮类、大环内酯类
治疗:利巴韦林
流感病毒
球形RNA病毒 根据其核蛋白的抗原性可以分为三类:甲型、乙型、丙型 甲型感染包括野生鸟类、驯养家禽、猪、马等温血动物和人。在 新宿主体内变异产生新类型的毒株和新抗原,使人群对其普遍敏感 而广泛流行 乙型常致流感局部暴发,病毒不变异,一般不会感染人以外的动 物 治疗:甲流:扎那米韦、奥司他韦、金刚烷胺、金刚乙胺 乙流:扎那米韦、奥司他韦 乙流 乙流乙流乙流那米韦、奥司他韦,金刚烷胺、金刚乙胺
介于最小细菌和病毒之间一类的细胞内寄生原核细胞型微生 物 大部分病例发于春天或初夏,流行分布全世界 节肢动物如蜱,虱、蚤、螨和家畜类羊、牛是主要传染源, 宠物和屠宰场。 多见于男性青壮年,潜伏期12~39天,平均18天
多急骤起病,发热、头痛、寒颤,肌痛、胸痛,体温可升至
40℃持续1~3周 少数患者有关节痛和胃肠道、 呼吸道症状, 以及肝脏和中枢神经系统症状,可见血小板减少,白细胞减少,
临床应用
2:其他科室 1 心内科 先天性心脏病常引起肺炎并迁延反复发作,呼吸道感染常诱发心肌 炎 2 呼吸道感染常诱发眼部疾病 3 脑外伤病人常并发呼吸道感染 4 很多鼻炎患者常并发呼吸道感染 5 肺炎支原体可引起支原体脑炎 6 风湿病患者可引起下呼吸道感染 7 肝胆外科术后常并发呼吸道感染 8 川崎病常伴随呼吸道感染,并易发心血管病变 9 老年糖尿病患者冬季易发呼吸道感染,并发展为肺部感染 10 血液病患者院内感染以呼吸道感染最为常见
呼吸系统疾病死亡率排第四位 《2013年北京市卫生工作统计资料简编》
儿童肺炎是全球儿童死亡第一病因
常见的非典型病原体
嗜肺军团菌 肺炎支原体 Q热立克次体
腺病毒 呼吸道合胞病毒 流感病毒(甲型、乙型) 副流感病毒
肺炎衣原体
嗜肺军团菌
广泛分布于天然淡水域或人工水域,空调冷凝水,革兰氏 阴性短小杆菌。 其中1 型在人军团菌肺炎中占70% ~ 90%。
副流感病毒
*单链的RNA病毒,感染随年龄的增长而逐 渐下降 *急性呼吸道感染的儿童中, 40%感染过 HPIV; *住院的急性呼吸道疾病患儿中, 20%由 HPIV 感染引 起; *而在 5 岁以下儿童中HPIV 感染占因发热和( 或) 急性呼 吸道疾病住院总数的6.8% , *第1和第 3 型常见于幼儿,局部流行发生于托儿所、儿科病 房、小学及其他儿童场所,第3型为地方性流行 治疗:利巴韦林、干扰素、蛋白酶抑制剂等
贫血以及肝脏天冬氨酸氨基转移酶水平升高
治疗:氯霉素、四环素、强力霉素效果突出
肺炎衣原体
5-15岁青年易被感染,尤其是人群聚集处 多起病缓慢,潜伏期30天左右 临床多出现流感样的症状,发热一般低于38度,数天至数周后出现 持续性干咳,若不及时治疗会持续数月 阳性率一般在1-3%左右 治疗:大环内酯类红霉素、罗红霉素、阿奇霉素 大环内酯类抗生素①红霉素:衣原体肺炎的抗生素应首选红霉素。重 症或不能口服者,可静脉给药。②罗红霉素③阿奇霉素
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