流产绒毛细胞染色体分析规范流程
131例早期自然流产绒毛细胞培养及染色体核型分析
131例早期自然流产绒毛细胞培养及染色体核型分析朱蕊;曾爱群;杜晶春【摘要】目的：分析早期自然流产患者的绒毛细胞染色体异常核型分布。
方法：取早期自然流产孕妇绒毛组织,用胶原酶和胰蛋白酶消化后于CO2培养箱中培养7 d,贴壁细胞加秋水仙素处理后用G-显带方法观察染色体核型,分析染色体数目和结构异常情况、性别比例及与孕妇的年龄关系。
结果：131例绒毛细胞标本中,129例标本培养成功,其中染色体核型异常标本61例,异常核型中三体占52.4%,其次是单体（18%）和三倍体（16.4%）;流产胚胎中女性〉男性（P〈0.05）,但是男性或女性胚胎中正常核型和异常核型比较差异无统计学意义;从35岁以上孕妇获取的标本中染色体核型异常比例显著高于35岁及以下孕妇（P〈0.05）。
结论：绒毛细胞染色体核型分析可初步判断早期自然流产患者的流产病因,对该孕妇此后的成功妊娠有指导意义。
【期刊名称】《贵州医科大学学报》【年(卷),期】2017(042)010【总页数】4页(P1179-1182)【关键词】自然流产绒毛染色体核型 Giemsa染色胚胎妊娠【作者】朱蕊;曾爱群;杜晶春【作者单位】[1]广州医科大学附属第一医院妇产科,广东广州510120 [2]广州医科大学金域检验学院,广东广州510182;;[1]广州医科大学附属第一医院妇产科,广东广州510120 [2]广州医科大学金域检验学院,广东广州510182;;[1]广州医科大学附属第一医院妇产科,广东广州510120 [2]广州医科大学金域检验学院,广东广州510182【正文语种】中文【中图分类】R714.21自然流产是妇产科的一种常见疾病，其发生率占妊娠总数的10%～15%，其中早期流产(妊娠于12周前终止)又约占自然流产总量的80%以上。
自然流产的病因有很多，包括遗传因素如染色体异常和单基因突变、母体因素如子宫解剖异常、内分泌因素如孕激素分泌不足和甲状腺功能低下，感染因素如TORCH感染(TORCH是指一组病原体：T即刚地弓形虫，O即others，比如乙型肝炎病毒、HIV病毒、梅毒螺旋体等；R即风疹病毒，C即巨细胞病毒，H即单纯疱疹病毒)，免疫因素如封闭抗体缺乏等，在众多因素之中，遗传因素之一的染色体异常是引起早期自然流产的主要原因[1]。
绒毛穿刺怎么做
绒毛穿刺怎么做【导读】在怀着激动的心情，等待着宝宝的降临。
可是随着胎儿的长大，对孕期检查就愈加疑惑。
为什么怀孕要做绒毛穿刺?绒毛穿刺检查目的是什么？它有什么作用呢？更重要的是，绒毛穿刺的检查怎么做？带着这些疑问，我们来看看吧！绒毛穿刺也叫绒毛膜穿刺术，你可能听到医生说CVS，其实也是同一样东西。
绒毛穿刺的作用，主要是用于确诊胎儿是否有染色体异常、神经管缺陷以及某些能在羊水中反映出来的遗传性代谢疾病。
那么，绒毛穿刺怎么做？下面由妈网百科告诉你吧！检查的时候用一根很细的针穿刺到胎盘的组织中去，取适量的绒毛组织出来进行检查。
绒毛穿刺检查方法总共有4种，可以经阴道，也可以经腹进行，具体如下：1、经子宫颈法。
2、经腹部法;腹部皮肤局麻，穿刺针经腹壁进入胎盘绒毛部分，用空针管吸取少量绒毛送检。
3、经阴道法;在超声扫描引导下，医生将导管（一种易弯曲的细管）经阴道、子宫颈送入胎盘绒毛部分，用空针管吸取少量绒毛送检。
有子宫颈病变，生殖道感染，如生殖道疱疹、淋病、慢性宫颈炎等，不宜经阴道取样。
4、经膀胱法。
最早也最常使用的是经子宫颈法。
以上几种方法，都需要抽取胎盘位置的绒毛，取20～40毫克的绒毛量。
绒毛穿刺有必要做吗绒毛穿刺有必要做吗？绒毛穿刺检查是产检的一种，但不是必检项目。
但是如果是以下情况的人群，则建议最好要进行绒毛穿刺的检查。
有以下情况的人群最好是要进行绒毛穿刺检查：1、曾生育过先天性缺陷儿尤其是生育过染色体异常患儿。
2、夫妇一方是染色体异常者或平衡异位的携带者。
3、性连锁遗传疾病携带者，于孕中期确定胎儿性别时。
4、曾生育过神经管缺陷或此次孕期血清甲胎蛋白值明显高于正常妊娠者。
5、35岁以上的高龄孕妇。
6、唐氏综合征筛查高危。
妈网百科温馨提醒：绒毛穿刺检查是一项技术含量较高的产检项目，准妈妈们不要贪便宜而去一些不知名的医院，而应该去正规的医院进行有效科学的检查，以确保宝宝的顺利诞生。
绒毛穿刺检查目的是什么最近有不少准妈妈咨询，绒毛穿刺检查检查目的是什么？下面就由妈网百科告诉你绒毛穿刺检查目的是什么吧！我们来看看：绒毛穿刺可进行细胞遗传诊断，基因分析及先天生化代谢疾病分析。
高通量测序在稽留流产绒毛组织染色体检测中的应用分析
高通量测序在稽留流产绒毛组织染色体检测中的应用分析熊英;谭世桥;吕康模【摘要】目的:应用新一代高通量测序技术对稽留流产患者绒毛组织染色体进行分析,为临床诊治提供依据.方法:选择本院行手术终止妊娠的稽留流产患者作为研究对象,收集绒毛组织标本-80℃保存,解冻检测DNA总量和浓度.构建并获得全基因组重测序文库行Illumina HiSeq平台测序.将高通量测序所得数据进行生物信息学分析,获得染色体拷贝数变异数据,分析稽留流产患者染色体特点.结果:共检测成功54例稽留流产患者绒毛组织,检测成功率88.5％,染色体异常检出率77.8％(42/54).其中染色体数目异常31例(73.8％,31/42),主要为非整倍体数目异常,1例同时有15和18三体异常;染色体结构异常11例(26.2％,11/42).染色体非整倍体检出率57.4％(31/54),其中以X染色体单体(22.6％)及16号染色体三体最为常见(22.6％).染色体双三体1例(1/54).结论:在稽留流产绒毛组织中染色体异常占较大比例,异常多为非整倍体,其中近50％是X染色体单体及16号染色体三体.高通量测序技术不仅可以检测染色体数目和结构异常,还可以检测100kb染色体片段的微缺失和微重复,具有较好的技术优势.【期刊名称】《中国计划生育学杂志》【年(卷),期】2018(026)007【总页数】5页(P607-611)【关键词】稽留流产;绒毛;染色体异常;高通量测序【作者】熊英;谭世桥;吕康模【作者单位】四川省成都市妇女儿童中心医院 610091;四川大学华西第二医院;四川省成都市妇女儿童中心医院 610091【正文语种】中文稽留流产是自然流产的一种特殊类型[1]，在我国的临床发生率为13%，且近年来呈现上升趋势[2]，严重影响孕妇的身心健康。
明确流产病因，有利于缓解孕妇心理负担，有助于对患者进行合理的治疗和遗传咨询，并通过对再次妊娠流产风险的预测，为下一胎优生优育提供科学指导。
86例孕早期自然流产患者绒毛染色体分析
86例孕早期自然流产患者绒毛染色体分析作者：董枫来源：《中国实用医药》2014年第10期【摘要】目的对孕早期自然流产患者绒毛染色体情况进行分析探讨，为今后的临床诊治工作提供可靠的参考依据。
方法抽取本院收治的孕早期自然流产患者86例，取无菌绒毛组织，经培养法展开染色体分析，并对分析结果进行统计分析。
结果本组86例患者绒毛组织培养成功者79例，成功率91.86%，染色体异常27例，异常率为34.18%。
结论导致自然流产的主要原因为染色体异常，孕早期绒毛染色体检查会为临床流产筛查、治疗方案的选择等提供可靠的参考依据，值得关注。
【关键词】孕早期；自然流产；绒毛染色体；产前诊断；临床价值已有调查结果显示，胚胎染色体异常为诱发自然流产的一个主要原因，同时为出生缺陷的主要危险因素。
有研究指出，对胚胎染色体异常情况进行了解将会在染色体疾病的产前诊断、治疗方案的选择、预防出生缺陷等方面提供可靠的参考依据[1]。
本次研究中出于对孕早期自然流产患者绒毛染色体情况进行分析探讨的目的，对86例孕早期自然流产患者绒毛组织展开了染色体分析，现汇报分析结果如下。
1 资料与方法1. 1 一般资料选取2011年7月～2013年12月间本院收治的孕早期自然流产患者，抽取其中的86例作为研究对象，患者年龄在20～42岁之间，平均（28.7±14.8）岁，孕周5～12周，平均（7.9±1.4）周，所有患者均经保胎治疗后失败，自愿接受临床研究，并签署了知情同意书。
1. 2 方法1. 2. 1 研究方法采集以上统计研究对象自然流产绒毛组织，培养后展开染色体分析，并对分析结果进行回顾性分析。
1. 2. 2 检测方法标本采集：对患者实施常规人流清宫术中，采取无菌夹夹取绒毛组织，放置在10 ml无菌离心管中，而后加入适量的无菌生理盐水，在封口处理后立即送检。
绒毛组织的培养：在无菌的超净台上，将绒毛组织放置在无菌培养皿中，经生理盐水进行漂洗，将血细胞和蜕膜除去，仔细挑取绒毛组织，放置在另一个无菌培养皿中，粉碎至粥样，吸入到离心管内，加入浓度为0.25%的胰酶1 ml和浓度为25%的胶原酶1 ml，经无菌吸管吹打均匀后在37℃条件下消化2 min，加2 ml小牛血清结束消化，离心处理后弃去上清液，加适量羊水培养基与细胞悬液混匀，放置在培养瓶中37℃条件下CO2培养箱中连续培养，等待细胞贴壁后换液、传代，细胞收获、染色体制备均与羊水细胞方式相同。
流产后有必要做流产物染色体检查吗？
流产后有必要做流产物染⾊体检查吗？很多孕妇在不幸流产后都很想知道⾃⼰为什么会流产。
为了查明流产原因，医⽣会建议做流产物染⾊体检测。
什么是流产物染⾊体检测？为什么要做这个检测？做了就⼀定能查明流产原因，下次就可以避免出现这样的情况了吗？针对这⼀系列的疑问，常州市妇幼保健院医学遗传中⼼来为⼤家做如下解答。
为什么⼀定要重视患⼉/死胎遗传检测？也许这是避免下⼀胎异常的唯⼀机会了租房上⾃如，0押⾦房租⽉付⼴告什么是染⾊体？染⾊体（chromosome）是遗传物质，是⼈类基因的载体，⼈类的常染⾊体是成对存在的。
⼈体的体细胞染⾊体数⽬为23对，其中22对为男⼥所共有，称为常染⾊体（autosome）；另外⼀对为决定性别的染⾊体，男⼥不同，称为性染⾊体（sex chromosome），男性为XY，⼥性为XX。
展开剩余83%图1 正常男性（左）和正常⼥性（右）染⾊体核型异常的胚胎染⾊体来源于哪⾥？胚胎染⾊体的异常分为⽗母遗传和新发突变。
⽗母遗传引起的胚胎染⾊体异常多见于⽗母染⾊体存在平衡易位、倒位或缺失。
新发突变是指在配⼦形成或受精卵分裂过程中发⽣的突变，常见的原因有卵⼦⽼化（产妇⾼龄）、精⼦染⾊体异常以及体内外的因素（如孕妇叶酸代谢障碍、环境因素等）。
流产后为什么医⽣建议做染⾊体检查？第⼀，流产物染⾊体检查能够让医⽣⼤致掌握流产的原因。
引起流产的原因很多，如胚胎异常，母体全⾝性疾病，内分泌失调，⼦宫异常，⼦宫畸形及遗传、免疫因素等，其中胎⼉⾃⾝的染⾊体异常是导致早期流产的最重要因素，妊娠12周以前不明原因流产的胎⼉染⾊体变异约占50%-70%。
因此，流产物染⾊体检查虽然不能够查明所有可能导致流产的原因，但是能查出胚胎是否存在染⾊体异常，是否因为染⾊体异常⽽导致的流产，这样就能够让医⽣⼤致掌握流产的原因。
第⼆，流产物染⾊体检查对下次妊娠具有指导意义。
如果流产物染⾊体检查没有问题，医⽣会考虑是否是因为母体内分泌紊乱、⾃⾝免疫系统异常等原因导致流产，找到原因后在下次妊娠时经过医⽣有效治疗和严密监测，往往会取得不错的效果。
流产物需要行染色体（CNV）检测和保胎或终止应理性的建议
流产物需要⾏染⾊体（CNV）检测和保胎或终⽌应理性的建议患者1问：我孕8周胎停了，流产时听说要送检流产物做染⾊体检查，医⽣说第⼀次流产，不必要送，就没有送检。
患者2问：我孕16周胎⼉畸形，引产了，什么时候可以备孕。
引产后没有保留任何标本和资料，想再次怀孕⼜怕再出现胎⼉畸形，我应该怎么办？相同于上述或类似问题，我们⼏乎每天的⼯作中都会遇到多例，为了减少每天⼤量类似彼费⼝⾆的解释，必须对此做⼀下统⼀解回复。
王若光-若光医学研究中⼼抱歉，我只能站在事实⾓度，对事不对⼈，请在听如下观点之前相信医⽣的处理都是基于患者有益⾓度，所有医⽣都是真善美的化⾝，这是我个⼈的切⾝体会。
医⽣是这个社会最纯粹，最值得信任的⾼知群体。
对于上述咨询的统⼀回复如下：如上述问题所述那样处理，有可能会丢失证据，胎停、流产、复发性流产及孕期各类胎⼉缺陷，或超声异常时，如果有条件均应将流产物（绒⽑组织）送检染⾊体检查（CNVs），更应该对异常胎⼉分析表型和基因诊断。
⼤⽉份流产或引产后，规范有序对胎⼉表型特征进⾏收集梳理，存在⾻骼异常时要⾏X线检查，同时进⾏精准解剖，明确胎⼉缺陷所在。
⼀定要汇集胎⼉异常的全部资料，与胎⼉表型建⽴关联性。
汇集更多的证据时，利于科学分析妊娠失败的真正原因。
1、留取绒⽑或胎⼉样本，是确因基础⽆论是胎停或复发性流产，对于各种妊娠失败，如果条件允许时，均应对流产物绒⽑或胚胎或胎⼉进⾏必要的分⼦诊断。
建议流产物绒⽑应送检⾏染⾊体CNV检测。
有必要时或更深度的检测如全外显⼦测序，结合家系分析，这样利于明确失败原因。
因胎⼉畸形或各种异常问题引产后，要对胎⼉进⾏全⾯分析并规范表型收集，必要时须对胎体精细解剖、确认异常所在。
建议结合孕期超声检查报告、产后胎⼉表型，以及细致、专业的胎体病理证实胎⼉异常所在。
留取胎⼉、胎盘标本，记录异常后，进⼀步⾏基因诊断。
建议必要时夫妻⼀起进⾏基因检测。
只有确认胎⼉畸形原因，才能利于分析如何再次健康备孕。
流产绒毛细胞染色体分析规范流程
1 检验目的和方法1.1 检验项目：流产绒毛细胞染色体制备及分析。
1.2 检验方法:培养瓶法，G显带2 检验原理和检验目的2.l 检验原理绒毛细胞由受精卵发育分化的滋养层细胞及绒毛间质中的胚外中胚层细胞组成,绒毛细胞和胎儿组织同源,通过绒毛检测，可客观反映胎儿情况。
绒毛既可以直接制片进行染色体观察,也可以经培养制备染色体，进行产前诊断。
2.2 检验目的用于胚胎停止发育的染色体诊断，规范流产绒毛细胞染色体制备程序，获得足够的染色体核型进行分析，保证及时准确的发出报告。
3检验前程序3.1 绒毛采集要求3.1.1无菌条件子啊吸取流产绒毛组织少量放入无菌离心管内，加入适量无菌生理盐水保存样本。
3.1.2采集前核对患者姓名、性别、年龄以及离心管上的标签。
3.1.3严格执行各种操作技术常规及无菌技术，染色体标本采集、交接过程应防止污染。
3.2 拒收样本的规定3.2.1接收标本时应注意核对装有绒毛无菌管上的患者是否一致，发现错误应及时拒收标本并与采集者取得联系。
3.2.2检查绒毛标本是否符合实验要求，所取组织是否为蜕膜等。
不符合要求将标本退回，通知临床医生，并登记在《不合格标本登记本》。
3.2.3检查合格后，在产前诊断系统上记录。
3.3 让步标本的规定3.3.1培养过程中发现的轻度污染；3.3.2绒毛量少于5mg或未见典型绒毛组织等。
上述几种情况均视为让步条件，应先接收样本并接种，待标本处理完毕，确定是否能制备出足够多的能满足分析要求的核型再作进一步处理。
若核型数量不足或质量不理想，应及时联系手术医师择期重新抽取样本并培养。
3.4 样本储存规定3.4.1采集的样本应常温下及时运送至实验室进行接种。
3.4.2标本采集后应尽快接种培养。
3.4.3未能当天进行接种的样本应放于4℃冰箱中，保存时间不超过3天。
4 实验用品酒精灯，烧杯，天平，离心机，CO2培养箱，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器，离心管，吸管，量简，培养瓶，试剂瓶，染色缸，剪刀，镊子，手术刀，培养皿等5 实验试剂5.1 培养基：GBICO AmnioMAX-II COMPLETE 羊水培养基,BIO-AMF-2 羊水培养基。
稽留流产胎儿绒毛染色体核型分析
稽留流产胎儿绒毛染色体核型分析吴莉莎,陈焕卿,苏朝晖 (云浮市妇幼保健计划生育服务中心产前诊断中心,广东 云浮 572300)[摘 要] 目的:分析流产胎儿绒毛染色体核型㊂方法:抽取因胚胎停止发育而进行人工流产的72例流产胎儿绒毛作为此次的观察对象,按照入院先后顺序的不同,将其随机分为观察组与对照组,每组各36例㊂对照组采用常规多重连接探针扩增法,观察组采用长期培养法进行制备㊂对两组的染色体核型分析结果进行对比㊂结果:对照组36例标本中成功15例;观察组的36例标本全部获得成功㊂两组染色体异常共有37例,异常率达51.39%;异常核型中,性染色体单体占9.72%(7/72),三体占27.78%(20/72),三倍体占41.67%(30/72),嵌合体占20.83%(15/72)㊂结论:长期培养法在分析染色体核型过程中效果更优于多重连接探针扩增法,而染色体异常是导致稽留流产的主要因素之一,并且绒毛染色体核型分析有利于查明患者胚胎停育的真实原因,也为遗传咨询提供了科学依据㊂[关键词] 直接法制备;长期培养法;稽留流产基金项目:云浮市医学科学技术研究项目[项目编号:2018B34] 稽留流产又名过期性流产,其主要是由于产妇宫内胚胎死亡后未能及时排除而造成的一种症状㊂该现象具体表现有以下三种:正常的早孕过程㊁有先兆流产以及无任何症状㊂随着产妇停经时间的延缓,其子宫便不再增大,早孕反应也随之消失㊂稽留流产作为临床上妊娠期常见的并发症,在引起流产的诸多因素中,染色体异常是其中最为典型的一种㊂据相关研究表明,早期流产胚胎检查都会存在50%左右的染色体异常现象,所以夫妻任何一方均有可能将自身体内含有的染色体异常遗传到子代,最终导致流产的发生[1]㊂因此,明确流产病因对产妇的下次妊娠具有一定的意义[2]㊂为进一步探寻我院稽留流产背后真实的原因,本文对72例流产胎儿绒毛进行细胞遗传学检测,从中分析出胎儿染色体核型异常与稽留流产之间所存在的关系㊂现报告如下㊂1 资料与方法1.1 一般资料:将2017年1月1日~2018年7月17日在我院治疗并留院观察的72例稽留流产患者作为研究对象,对其进行清宫术过程中,在无菌条件下采集绒毛㊂将使用多重连接探针扩增法制备的36例视为对照组,将其余36例使用长期培养法制备患者作为观察组㊂入选标准:①均进行胚胎遗传诊断为稽留流产;②对此次研究均知情并已签署知情同意书㊂排除标准:①其他系统组织器官病变者;②存在免疫系统异常者㊂观察组年龄15~35岁,平均(26.13±2.12)岁;孕周7~10周,平均(8.23±0.45)周;行体外受精胚胎移植术助孕20例,行卵母细胞单精子显微镜注射受孕16例㊂对照组年龄20~40岁,平均(26.25±2.56)岁;孕周8~11周,平均(8.56±0.20)周;行体外受精胚胎移植术助孕21例,行卵母细胞单精子显微镜注射受孕15例㊂将两组患者的一般资料进行比对,发现组间数据差异无统计学意义(P >0.05),具有可比性㊂1.2 制备方法:所有患者采集的标本均要求夫妻双方各抽取外周血2ml,用EDTA 抗凝(禁止用肝素抗凝)4℃冷藏保存,与绒毛标本同时送检,目的是排除母源污染㊂ 对照组采用多重连接探针扩增法进行检测,具体操作步骤如下:采用荷兰MRC 公司生产,P095型号的MLPS 非整倍测试盒,该试剂盒中包括36条探针,其中13㊁18㊁12以及X 染色体上分别存在8条,另外4条位于Y 染色体上,可检测出者5种染色体拷贝数量的变化规律㊂①DNA 变形多重探针杂交:取准备检测的DNA 100ng 置入PCR 管内,再加上TE 缓冲液5μl,待PCR 管上98℃后,变性5min,然后在快速降温到25℃进行维持㊂待取出PCR 管后,再次加入多重探针以及MLPA 缓冲液1.5μl,在此过程中将其充分混匀,95℃变性1min,60℃杂交1h,最终54℃进行维持㊂②多重探针连接:在上述的PCR 管内再次加入连接酶1μl,与纯水配成40μl 反应体系后,54℃反应15min,然后98℃5min 消灭连接酶㊂③多重PCR 反应:取上述连接产物10μl,分别加入4μl PCR 缓冲液额联合26μl 纯净水一同配置成40μl 反应体系并进行PCR 扩增㊂扩增的具体条件为95℃30s,60℃30s,72℃60s,35个循环㊂72℃延伸20min,以15℃进行维持㊂ 观察组采用长期培养法进行制备,具体操作步骤如下:在无菌操作台面上减去10mg 的绒毛组织,并剪碎大约为1mm 3,并加入绒毛消化液,放置于温度为37℃的水浴锅中进行震荡消化10min,待消化完毕后,分别将组织与细胞接种于两个培养皿内㊂每一个皿内都还有4ml 培养基㊂再将两个培养皿一同放入温度为37℃的CO 2恒温箱内并进行培养8d 左右,当细胞长到60%左右的密度,并且处于分裂旺盛的状态时,再加入0.1μg /ml 的秋水仙素进行处理,处理时间为4h,在倒置显微镜下观察多分裂期间,加入0.25%一枚小花培养皿内的少量细胞,吸入离心管中进行离心,留下的沉淀物加入0.075mol /L 氯化钾混合并放入水浴锅中低渗处理,待处理时间12min 后,按照常规外周血中期相同的制作方法,使用固定液固定,再离心,最后滴片㊂G 显带后光学显微镜下两名医护人员进行双盲分析,观察30个中期分裂相以及分析5个染色体核型㊂1.3 观察指标:①分析72例流产胎儿绒毛染色体核型;②观察两组染色体核心分析情况㊂1.4 统计学处理:将相关数据用SPSS20.0统计学软件进行分析处理,使用均数±标准差(x ±s )表示计量资料,使用t 检验进行组间数据对比;计数资料则用率(%)表示,使用χ2检验进行数据间的对比;若P <0.05,说明两组数据的差异具有统计学意义㊂2 结果2.1 72例流产胎儿绒毛染色体核型分析:72例稽留流产患者中出现染色核型正常35例,正常率为48.61%;染色核型异常37例,异常率为51.39%㊂在染色核型异常患者中,出现单体7例,占9.72%;三体20例,占27.78%;三倍体30例,占41.67%;嵌合体15例,占20.83%㊂2.2 两组染色体核型分析情况2.2.1 多重连接探针扩增法染色体核型分析:多重连接探针扩增法的36例标本中,成功15例,失败21例㊂失败标本里面,有10例因受到外界污染,有5例因绒毛量以及分裂相对较少,有6例因未出现分裂象㊂15例成功进行染色体核型的病例当中,有5例核型正常,有10例核型异常㊂见表1㊂表1 多重连接探针扩增法染色体核型分析序号受孕方式孕周(周)核型分析1IVF-ET646,XX,21q+2IVF-ET845,XY,-133IVF-ET846,XX,11q+4自然受孕845,XO5自然受孕746,XY,inv(9)2.2.2 长期培养法制备染色体核型分析:长期培养法制备的36例标本,因细胞均生长较为良好,所以无绒毛受到感染,培养成功率100.00%㊂对成功培养的36例染色体,G显带后,与高光显微镜观察下发现30个中期分裂相,分析5个核型㊂其中正常核型15例,异常核型11例㊂见表2㊂表2 长期培养法制备染色体核型分析序号受孕方式孕周(周)核型分析1IVF-ET747,XX,+21 2747,XX,+15 3647,XX,+4;46,XX 41047,XX,+153 讨论 胚胎遗传物质异常是导致产妇自然流产的主要原因,通常认为早期流产胚胎中约有50%存在染色体异常的现象,也有相关研究表明染色体异常的实际状况会高于此项数据,但受到常规细胞遗传学方法的限制,从而影响了整体的检出率[3]㊂而本次研究结果显示培养成功的绒毛染色体中异常发生率达51.39%,也与相关报道结果基本相符㊂由此可见,在明确流产病因的情况下能更好地进行遗传咨询以及相关指导的工作,其对于自然流产组织的遗传学分析均有重要的意义[4]㊂ 现如今应用荧光原位杂交技术可对绒毛进行产前诊断,并且取得了一定的成效,该方法具有快速㊁简便㊁操作灵活的三大优点,但因其使用成本较高,所以在基层医院不作为常规诊断方式[4]㊂目前最常见的绒毛组织染色体诊断方式有多重连接探针扩增法和长期培养法㊂多重连接探针扩增法的制备收获的是细胞滋养层中的上皮下包,只需几个小时便可进行处理并从中得到中期细胞,该方法虽快速便捷,但所制备的染色体质量较差并且形态不够完整,细胞的分裂象也较少,因此影响了显带及核型的分析,从而无法准确地分析染色体结构,同时受到三倍体的影响,对照组使用的多重连接探针扩增法制备失败的21例标本中,就有11例因分裂象较少或无法分裂而无法进行染色体异常核型分析工作[5]㊂长期培养法所培养出的绒毛细胞是从酶处理后绒毛组织内分离出来的,因绒毛核中心变为纤维细胞在体外培养,所以分化能力较强,在培养过程中分化也能得到大量的中期细胞,并且获得的细胞分裂相相对较多,形态较为完整,有利于核型的分析[6]㊂不仅如此,长期培养法制备出现的胎盘局限三倍体较直接法少㊂观察组制备的36例标本全部培养成功并且可作为分析核分裂的依据,其培养成功率高达100%㊂除此之外,数目异常也是导致胚胎早期流产的原因之一,其可能由于数目异常的胚胎遗传性缺陷大,所以导致较高的致死率㊂本文研究结果显示的胚胎染色体异常率为51.39%,但因标本数量较少,有待进一步证实[7]㊂因此,在进行产前遗传咨询时,对孕早期产妇进行细胞遗传学染色体分析,可降低染色体异常胎儿的发生率㊂ 综上所述,在对流产胎儿绒毛染色体核型分析中,采取长期培养法制备可为流产患者提供更为有效的优生优育指导,有利于指导再次妊娠[8]㊂4 参考文献[1] 刘玉昆,刘梅兰,杜 涛,等.不同年龄和流产次数的复发性流产患者绒毛染色体核型分析[J].现代妇产科进展, 2017,21(12):925.[2] 刘玉昆,刘梅兰,杜 涛,等.125例复发性流产患者绒毛染色体核型分析[C].中华医学会第十次全国妇产科学术会议,2017,11(13):13.[3] 刘玉昆,刘颖琳,杜 涛,等.早期妊娠自然流产患者的超声表现与绒毛染色体核型分析[J].中山大学学报(医学科学版),2017,34(1):94.[4] 徐两蒲,林 元,彭淑华,等.112例早期绒毛细胞染色体检查及其结果分析[J].中国妇幼保健,2017,25(6):813. [5] 孟 茜,王绪云,骆秀翠,等.早期自然流产胚胎染色体核型分析[J].山东医药,2017,51(51):37.[6] 沈国松,陈爱琴,张 甦,等.75例孕早期自然流产和胚胎发育不良的绒毛细胞染色体核型分析[J].浙江医学,2017, 27(5):326.[7] 沈国松,张 甦,邱惠麒,等.一种简便易行的绒毛细胞染色体核型检查技术[J].中国计划生育学杂志,2017,12 (6):369.[8] 潘维君,黄 存,张元宝,等.124例自然流产者绒毛染色体核型分析[J].中国生育健康杂志,2016,27(3):269.[收稿日期:2018-11-16 编校:陈 伟/郑英善]。
156例自然流产绒毛细胞培养及染色体核型分析
作者单位：528415 广东中山，南方医科大学附属小榄医院检验科通信作者：郑文婷，Email ：****************DOI ：10.3969/j.issn.1674-7151.2021.01.017156例自然流产绒毛细胞培养及染色体核型分析郑文婷 尹志军 黄雪珍【摘要】 目的 探讨染色体核型分析在自然流产查因中的应用。
方法 选择2019年1—12月于南方医科大学附属小榄医院就诊的156例自然流产患者作为研究对象，对所有患者进行绒毛细胞培养与G 显带核型分析，计算培养成功率，分析染色体异常检出率及主要异常类型。
结果 156例自然流产孕妇中绒毛培养成功144例，培养成功率为92.3%，其中28～34岁和35～40岁年龄段患者的标本培养成功率分别为96.1%（98/102）和85.2%（46/54）；9例因染菌导致培养失败，3例因胚胎停育时间过长、标本活性差、细胞不贴壁导致培养失败。
检出染色体异常70例，异常检出率为48.6%，其中常染色体非整倍体44例、性染色体非整倍体16例、三倍体7例、四倍体1例、染色体结构异常2例，异常核型以X 单体〔22.9%（16/70）〕、16三体〔20.0%（14/70）〕、22三体〔15.7%（11/70）〕、21三体〔10.0%（7/70）〕和三倍体〔10.0%（7/70）〕为主。
结论 染色体异常是导致自然流产的重要原因，对流产绒毛进行染色体核型分析有助于查明自然流产的原因，以便指导患者以后的生育并进行必要的产前诊断。
【关键词】 自然流产； 绒毛； 核型分析； 细胞培养Cell culture and karyotype analysis of spontaneous abortion villi in 156 casesZheng Wenting, Yin Zhijun, Huang Xuezhen. Clinical Laboratory, Xiao Lan Hospital Affiliated to Southern Medical University, Zhongshan 528415, Guangdong, ChinaCorrespondingauthor:ZhengWenting,Email:****************【Abstract 】 Objective To investigate the application of karyotyping in detection of the causes for spontaneous abortion. Methods 156 patients of spontaneous abortion villi admitted in Xiao Lan Hospital Affiliated to Southern Medical University from January to December 2019 were selected as research objects. The villus cell culture and G -banding karyotype analysis were performed in all patients, the success rate of culture was calculated, the detection rate of chromosomal abnormalities and main types of abnormalities were analyzed. Results In 156 patients of spontaneous abortion, 144 cases of villus culture were successful, the success rate was 92.3%. Nine cases failed due to infection of bacteria, 3 cases failed due to prolonged embryo suspension, poor specimen activity and non adherent cell culture. The success rates of specimen culture of 28-34 year old and 35-40 year old patients were 96.1% (98/102) and 85.2% (46/54). Forty -four cases were detected as autosomal aneuploidy, 16 cases were sex chromosome aneuploidy, 7 cases were triploidy, 1 case was tetraploid and 2 cases were structural abnormality. The abnormal karyotypes were mainly X monomer [22.9% (16/70)], 16 trisomy [20.0% (14/70)], 22 trisomy [15.7% (11/70)], 21 trisomy [10.0% (7/70)] and triploid [10.0% (7/70)]. Conclusions Chromosomal abnormality is an important cause for spontaneous abortion. Karyotype analysis of abortion villi is helpful to identify the causes of spontaneous abortion and guide the patients who will be pregnant again and to make necessary prenatal diagnosis.【Key words 】 Spontaneous abortion; Villi; Karyotyping; Cell culture自然流产是指妊娠不足28周、胚胎/胎儿体重不足1 000 g 的宫内妊娠自然终止，分为早期自然流产（＜12周）和晚期自然流产（12～28周）。
流产绒毛细胞培养及染色体核型分析155例
1 乐杰，主编． 妇产科学［M］． 北京： 人民卫生 出版社，2008．
2 向阳，王凤云，郝娜，等． 早孕绒毛细胞直接 植被染色体方法的改进［J］． 中国实用妇科 与产科杂志，1998，14（ 5） ： 273．
3 冯丽云，杨晶，等． 自然流产患者绒毛组织 的细胞遗传学分析［J］． 中国优生与遗传杂 志，2002，10（ 6） ： 53．
4 易翠兴，潘敏． 广州地区 97 例自然流产绒 毛细胞培养及核型分析［J］． 中国优生与遗 传杂志，2007，15（ 9） ： 41 － 42．
5 Qumsiyeh MB，Kim KR，et al． Cytogenetics and mechanisms of spontaneous abortions： increased apoptosis and decreased cell proliferation in chromosomally abnormal villi［J］． Cytogenet Cell Genet，2000，88 （ 3 － 4 ） ： 230 － 235．
样过程 污 染 及 胚 胎 死 亡 时 间 长 等 有 关。 因此无菌方式选择适当孕周及非死亡时 间过长的胚胎进行绒毛细胞染色体核型 分析有助于提高培养成功率。
采用酶消化绒毛法结合干贴壁法，可 以弥补后者染色体分裂相形态不佳、不利 于正确分析的缺点，提高了产 前 诊 断 质 量。根据流产绒毛的核型结合孕妇的自 然情况作出风险评估，以期为其下次妊娠 进行指导［7］。
巧克力囊肿的 MRI 诊断： 认为巧克 力囊肿 MR 表现具有如下特征： ①病灶可 单发或 多 发，呈 囊 状 生 长［3］。卵 巢 巧 克 力囊肿的多房及分隔常见，且呈大囊外多 个囊肿聚集即“卫星囊”为卵巢巧克力囊 肿的特 征 性 表 现 之 一［4，5］。② MRI 信 号 表现多种多样，主要由于脉冲序列和病灶 内成分的 不 同，如 急 性、亚 急 性、慢 性 血 肿、反复出血 可 至 血 肿 内 成 分 复 杂、铁 含 量不同 以 及 纤 维 组 织 增 生 等 因 素 造 成。 主要表现为均匀信号的短 T1 长 T2 类圆
早期自然流产胎儿绒毛细胞培养及染色体核型分析
早期自然流产胎儿绒毛细胞培养及染色体核型分析梁彩红禤洁甜汤丽霞杨光（广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所，佛山市528000）【摘要】目的探讨早期自然流的原因及流产胎儿绒毛染色体核型检查的意义。
方法应用长期培养法对60例早期自然流产的胎儿绒毛组织进行绒毛细胞培养，并对培养成功的绒毛细胞制备染色体及核型分析。
结果60例自然流产的绒毛组织中绒毛细胞培养成功56例（93．3%），56例中检出异常核型32例（57．1%），其中常染色体三体16例、多倍体6例、嵌合体6例、性染色体单体2例、结构异常2例；正常核型24例（42．9%），其中男性核型5例、女性核型19例。
结论胚胎染色体异常是早期自然流产的主要原因，早期流产胎儿绒毛染色体检查有利于查明流产的原因，合理指导下次妊娠。
【关键词】流产；绒毛细胞；染色体；核型分析【中图分类号】R714．21【文献标识码】A【文章编号】0253-4304（2011）06-0691-03Chorionic Villus Cell Culture and Analysis on Chromosomal Karyotype in Early Spontaneous AbortionLIANG Cai-hong，XUAN Jie-tian，TANG Li-xia，YANG Guang（Institute of Clinical Medicine，the First People＇s Hospital of Foshan City，Guang dong，Foshan528000，China）【Abstract】Objective To study the cause of early spontaneous abortion and the value of chromosomal karyotype analysis of the chorionic villus samples．Methods The chorionic villus specimens that were obtained through60cases of early spontaneous abortion were cultured for karyotype analysis．Results Of the60cases，chorionic villus was successfully cultured in56cases（93．3%），and abnormal embryo karyotypes were identified in32cases（57．1%）．16cases were antosomal triploid，6case were multiplod，6cases were mosaic，2cases were sexual chromosome abnormalitie，and2 cases were structural aberrations；normal karyotypes were identified in24cases（42．9%），5cases were males and19 cases were females．Conclusion Embryo chromosomal abnormality is a major cause of early spontaneous abortion，and karyotype analysis of the villus helps identify the causes of abortion and ensure the success of the next pregnancy．【Key words】Abortion；Chorionic villus；Chromosome；Karyotype analysis自然流产是临床妊娠最常见的并发症之一，且流产绝大部分是发生在怀孕早期（孕15周以内）［1－2］。
孕早期流产60例绒毛染色体核型和病原体检测分析
３绒毛 染色体核型分析
实验组 ６ ０倒绒 毛中有 ８倒细
胞无分裂 相． １倒 因吸到绒毛 量过少 只作病原体 检测， 余下 可分析的 ５ 倒绒毛中染色体核型 正常 ２ １ ６倒（Ｏ ９ ％） 常 ５ ８ 异
体积 ２ 。 ５ ４对 引物由中科院上海 分院细胞研究 所合成． 序
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中 国优 生 与 遗传 杂 志 ２０ ０１年 第 ９卷 第 ４期
孕早期流产 ６ 例绒 毛染色体核型和病原体检测分析 Ｏ
王 雅荪 王 ， 勤 倪培华 李 ，
莉
（ 国 际 和 平 妇 幼 保 健 院 ． 海 ．０ ０ ０ ２ 上 海 第二 医科 大学 附 属 瑞 金 医院 检 验 系） １ 上 ２０３ ，
ｌ 年龄分布 －
实验组平均年龄为 ２ ２±４８ ８６ ． ６岁． 对照
组为 ２ ．３ ０岁。经 ｔ 验， ７９ ±６６ 检 两组０ ０ ） 提示 两组在 作 比较时不受 年龄 ．５ ，
因 素 的干 扰 。 ２ 病 原 体 检 测 ．
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中国优生与遗传杂志 ２０ 年第 ９卷第 ４期 ０１
１ ０倒 （９ ６ ％） 可 疑 异 常 １ 倒 （９ ４ ％） １ 异 常 中 Ｌ １ １ 和 ５ ２ ．１ 。 ０例 ８
三体型 ４倒 （ 中 ｌ 为 ４ ， Ｘ ４ ， 十１ 其 倒 ６ Ｘ ／７ Ⅺ（ ８嵌合 体） ２ 、１三 体型和 ２ ２三体型各 ２删，６三体 型和 ５ 一各 １ 。可疑异 １ ｐ 例
２病 原 体 感 染 与 绒 毛 染 色 体 核 型 的 关 系 ． 流 产 组 较 高 比例 的 Ｌ 和 Ｃ Ｕ Ｔ感 染 和 绒 毛 染 色 体 接 型 异 常使 人怀 疑 Ｌ 和 Ｃ Ｕ Ｔ感 染 与 绒 毛 染 色 体 核 型 异 常 是 否 有 关 ． 病 原 体 是 否 通过 干 扰 成 熟 卵 子 或 受 精 卵 分 裂 。 而 使 即 从
(整理).11.04fish技术检测自然流产中绒毛染色体异常与男女双方叶酸含量的临床应用研究技术报告 - 1109.
自然流产绒毛染色体异常与血液中叶酸水平的相关性研究技术报告一、选项背景导致自然流产的原因较多，如遗传基因缺陷、母体因素、胎盘内分泌功能不足、环境因素、免疫因素等，有关资料研究显示男女方叶酸缺乏也会导致自然流产。
其中遗传基因缺陷导致自然流产时，多为三体、三倍体及X单体等染色体数目异常，其次为断裂、倒置、缺失和易位等染色体结构异常。
遗传基因缺陷的胚胎多数结局为自然流产，极少数可能继续发育成胎儿，但出生后也会发生某些功能异常或合并畸形。
国外数据表明，孕妇前三个月、中三个月、后三个月自然流产染色体异常率分别为60%、10%-20%、5%-10%。
其中较为常见的染色体异常有X单体，发生率约为20%；16号染色体三体，发生率约为16%；18号染色体三体，发生率约为3%；21号染色体三体，发生率约为5%；22号染色体三体，发生率约为5%。
通过检测这些自然流产胎儿的常见染色体异常情况，可以为下一代妊娠进行遗传咨询提供资料。
如果孕妇自然流产是由于染色体异常引起的，那么下一代有染色体异常的风险较普通人群高；若孕妇下一代为自然怀孕则可选择绒毛或羊水做产前诊断，如果下一胎选择体外受精（in-vitro fertilization,IVF）,则可做胚胎植入前遗传学诊断(Preimplantation Genetic Diagnosis,PGD)。
流产染色体分析目前主要是对流产绒毛进行培养，分析染色体异常的情况，但此项技术比一般羊水培养核型分析困难，在我国只有少数产前诊断中心掌握并能应用，因此大多数产前诊断中心及妇产科没有开展针对流产组织细胞的培养及核型分析检测。
荧光原位杂交（FISH）技术是目前国际上比较先进的检测染色体异常的方法，其灵敏度高，所需细胞量少，无需培养，技术容易被掌握。
从标本的制备到原位杂交结果分析完成可在48小时内完成，比常规的G-显带染色体核型分析快得多。
我们这里FISH测定染色体探针主要针对13、16、18、21、22、X、Y染色体，对于整倍体来说FISH不够全面，所以在取材时同时做快速绒毛检测验证FISH结果。
医院细胞遗传室绒毛细胞培养及染色体制备作业指导书
医院细胞遗传室绒毛细胞培养及染色体制备作业指导书1目的规范绒毛细胞培养与染色体制备（胶原酶法）过程，为临床绒毛细胞染色体核型分析可靠性提供质量保证。
2测定方法CO2培养/手工收获3测定原理绒毛细胞由受精卵发育分化的滋养层细胞及绒毛间质中的胚外中胚层细胞组成，绒毛细胞与胎儿组织同源，通过绒毛检测，可客观反映胎儿情况。
绒毛既可以直接制片进行染色体的观察，也可以经培养制备染色体，进行产前诊断。
4性能特征经G显带处理后可见300-550条显带。
5样本类型及受检者准备在超声引导下，无菌操作吸取孕7-9周孕妇绒毛组织，注入15ml一次性离心管中，立即送检。
6仪器与耗材酒精灯，烧杯，天平，离心机，恒温培养箱，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器（5ml），无菌离心管，无菌吸管，量筒，培养瓶，试剂瓶，眼科镊，眼科剪，35mm2一次性平皿等。
7试剂7.1 100ml完全培养基：在超净工作台内，用移液管将培养基和其他各试剂分装入100毫升无菌瓶中（商业培养基或F10培养基70ml，进口胎牛血清30ml，用3.5%碳酸氢钠调节pH 为7.2-7.4）7.2胶原酶Ⅱ：在超净工作台内，用注射器吸取100mlD-hanks 液于无菌容器中，加入一支胶原酶Ⅱ粉末100mg，充分混匀溶解，终浓度为200U/ml(约为1mg/ml),过滤分装成1ml/管，置-20℃冰箱保存。
7.3秋水仙素浓度：20μg/ml7.4低渗液：0.075mol/L的KCl溶液7.5卡诺固定液7.6 0.25% EDTA-trypsin7.7双抗：青霉素和链霉素，终浓度为100U/ml，7.8 1×PBS或生理盐水7.9 D-hanks液8仪器与耗材酒精灯，烧杯，天平，离心机，恒温培养箱，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器（5ml），无菌离心管，无菌吸管，量筒，培养瓶，试剂瓶，眼科镊，眼科剪，35mm2一次性平皿等。
9操作步骤9.1标本处理和细胞培养9.1.1取3个平皿编号1、2、3号，分别加入10ml 1×PBS，再依次加入500U/ml、300U/ml、100U/ml的双抗（含1万u 氨苄青霉素+硫酸链霉素），轻摇混匀。
流产细胞染色体核型分析 项目简介
流产绒毛染色体核型检查项目简介
自然流产是妇产科的一种常见病，其发生率约占临床妊娠的15%左右，多数发生于12孕周以内。
诱发自然流产的可能原因众多，包括
1、遗传基因缺陷，染色体异常；
2、母体因素比如母体妊娠期患有严重全身性疾病、生殖器官异常、内分泌异常、
过量吸烟、饮酒、创伤休克等；
3、免疫功能异常；
4、环境因素如化学物质的过多接触等。
大量的文献及研究表明，胚胎染色体异常是自然流产的主要原因。
临床意义
正是由于胚胎染色体异常是自然流产的主要原因，而且主要表现为流产绒毛染色体的数目异常，因此对染色体异常的流产胚胎进行明确判断，将能对至少50%以上的早期自然流产夫妇进行病因确诊，并得到有针对性的明确的生育指导，所以自然流产的孕妇都应该进行流产绒毛染色体的检查。
筛查时期和适应人群
流产妇女在取出流产胚胎时送检绒毛或胎儿组织。
标本采集要求
耗材：标本杯+生理盐水标本：绒毛组织或胎儿组织
备注：12周内，送绒毛组织或整个胚胎；12周以上，取绒毛组织、皮肤组织1*1cm、内脏或心脏血（3ml以上）
临床项目收费标准。
胚胎停育患者绒毛组织染色体检测分析
胚胎停育患者绒毛组织染色体检测分析李肖华1，石子佳2，王俊霞1，程青青1，郑宗朋1，高健11 河北省人民医院生殖遗传科，石家庄 050051；2 邯郸市第一医院胎儿医学科摘要：目的 分析胚胎停育患者绒毛组织染色体检测结果。
方法 选取胚胎停育患者的流产绒毛组织240例份，采用基因组拷贝数变异测序检测染色体。
结果 240例份胚胎停育患者流产绒毛组织中，染色体异常181例份、染色体正常59例份。
181例份染色体异常绒毛组织中，染色体数目异常97例份，其中常染色体三体76例份、性染色体单体18例份、三倍体3例份；结构异常120例份；部分标本同时出现染色体数目异常和结构异常。
育龄（208例）和高龄（32例）胚胎停育患者流产绒毛组织中染色体异常分别为157例份、24例份。
育龄者常染色体三体61例份、性染色体单体16例份、三倍体3例份，高龄者分别为15、2、0例份，两者常染色体三体例份数比较，P <0.05。
胚胎停育1次、2次、3次、4次、≥5次患者（136、51、33、15、5例）流产绒毛组织染色体异常例份数分别为100、46、22、9、4例份，胚胎停育2次者分别与胚胎停育3次、4次者比较，P 均<0.05。
胚胎停育1次、2次、3次、4次、≥5次患者流产绒毛组织染色体数目异常例份数分别为58、26、11、2、0例份，胚胎停育1次者、2次者分别与胚胎停育4次者比较，P 均<0.05。
CNV 一共检测出120例份，其中18例份为致病性，2例份为可能致病，87例份为临床意义未明，13例份为可能良性。
结论 胚胎停育患者流产绒毛组织染色体异常率较高，异常类型为染色体数目异常或结构异常，常染色体多数以三体发生常见，其中16-三体发生率最高，其次为22-三体、15-三体、21-三体等；性染色体异常以X 单体为常见。
育龄和高龄胚胎停育患者流产绒毛组织染色体异常无差异，但不同胚胎停育次数患者流产绒毛组织染色体异常存在差异。
胎儿染色体检查
方法1：取材：取新鲜绒毛组织，加少量生理盐水送检。
如遇休息日，可4度冰箱冷藏存放不超过3日。
项目名称：绒毛荧光原位杂交检测（双色）费用：2200元检测内容：13.16.18.等七对染色体的数目优点：1、适用范围广，胎儿存活与否均适用，与是否使用引产药物无关。
2、成功率接近100%。
3、快速，可2~7天发报告。
缺点：费用高，检测内容有限。
意义：可检出80%以上的胚胎染色体异常流程：医生下医嘱→打条码（门诊患者需在妇科门诊打条码）→取材→连同条码一起送检（机关楼三楼细胞遗传室）执行科室：第二遗传室报告发放：一周内发电子报告，病房可打印。
门诊患者可在报告机刷卡打印。
方法2：取材：胎儿新鲜血项目名称：培养细胞的染色体分析费用：550元检测内容：23对染色体的数目、结构优点：费用低，检测内容相对较全。
缺点：1、适用范围窄，仅限于取未用引产药前的胎儿新鲜血或未用药的流产胎儿新鲜血，死胎不适用。
2、成功率不保证100%。
3、报告时间长。
流程：在引产用药前与郭邑主任取得联系，约定脐带血穿刺时间→医生下医嘱→打条码→会同遗传实验室人员进行超声引导下脐带血穿刺，连同条码送检如果是未使用引产药的患者，可以在胎儿出生前与遗传实验室取得联系，到遗传实验室领取培养基小瓶，存放于4度冰箱内，待胎儿出生后取新鲜血1毫升，无菌条件下注入于小瓶内，每瓶接种毫升血，轻轻混匀（切记一定要保证无菌，否则会导致培养失败）。
医生下医嘱→打条码，连同条码一起将小瓶尽快送检。
如果不能立即送检，可4度冰箱内保存不超过2日。
执行科室：第二遗传室报告发放：10~15个工作日内发电子报告，病房可打印。
门诊患者可在报告机刷卡打印。
补充说明：1、上述检测项目为自费项目，需要医生事先向患者交代清楚。
2、在患者与家属自愿接受检查的前提下按上述流程留取标本送检。
细胞遗传室电话：2140。
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1 检验目的和方法
1.1 检验项目：流产绒毛细胞染色体制备及分析。
1.2 检验方法:培养瓶法，G显带
2 检验原理和检验目的
2.l 检验原理
绒毛细胞由受精卵发育分化的滋养层细胞及绒毛间质中的胚外中胚层细胞
组成,绒毛细胞和胎儿组织同源,通过绒毛检测，可客观反映胎儿情况。
绒毛既
可以直接制片进行染色体观察,也可以经培养制备染色体，进行产前诊断。
2.2 检验目的
用于胚胎停止发育的染色体诊断，规范流产绒毛细胞染色体制备程序，获得足够的染色体核型进行分析，保证及时准确的发出报告。
3检验前程序
3.1 绒毛采集要求
3.1.1无菌条件子啊吸取流产绒毛组织少量放入无菌离心管内，加入适量无菌生理盐水保存样本。
3.1.2采集前核对患者姓名、性别、年龄以及离心管上的标签。
3.1.3严格执行各种操作技术常规及无菌技术，染色体标本采集、交接过程应防止污染。
3.2 拒收样本的规定
3.2.1接收标本时应注意核对装有绒毛无菌管上的患者是否一致，发现错误应及时拒收标本并与采集者取得联系。
3.2.2检查绒毛标本是否符合实验要求，所取组织是否为蜕膜等。
不符合要求将标本退回，通知临床医生，并登记在《不合格标本登记本》。
3.2.3检查合格后，在产前诊断系统上记录。
3.3 让步标本的规定
3.3.1培养过程中发现的轻度污染；
3.3.2绒毛量少于5mg或未见典型绒毛组织等。
上述几种情况均视为让步条件，应先接收样本并接种，待标本处理完毕，确定是否能制备出足够多的能满足分析要求的核型再作进一步处理。
若核型数量不足或质量不理想，应及时联系手术医师择期重新抽取样本并培养。
3.4 样本储存规定
3.4.1采集的样本应常温下及时运送至实验室进行接种。
3.4.2标本采集后应尽快接种培养。
3.4.3未能当天进行接种的样本应放于4℃冰箱中，保存时间不超过3天。
4 实验用品
酒精灯，烧杯，天平，离心机，CO2培养箱，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器，离心管，吸管，量简，培养瓶，试剂瓶，染色缸，剪刀，镊子，手术刀，培养皿等
5 实验试剂
5.1 培养基：GBICO AmnioMAX-II COMPLETE 羊水培养基,BIO-AMF-2 羊水培养基。
0.4%柠檬酸钠，O.4%KCl 甲醇，冰乙酸，胰蛋白酶粉剂 (GBICO TRYPSIN 1∶
250)，3% Tris，磷酸缓冲液，1O% Giemsa染色液。
5.2 0.25% EDTA-胰酶。
5.3 秋水仙素:25mg秋水仙素粉加500ml生理盐水，高压灭菌，避光保存。
5.4 低渗液 O.4%KCl与O.4%柠檬酸钠按1:1比例制备
0.4%KCl:lOg KCL溶于2500ml蒸馏水，混匀，备用。
0.4%柠檬酸钠:10g柠檬酸钠溶于2500ml熬馏水，混匀，备用。
5.5 固定液：甲醇，冰乙酸以3:l混，每一份标本需40ml固定液。
5.6 PH7.4 磷酸盐缓冲盐（PBS)：(NaH2PO4 1.6g+ Na2HPO4 3.1g+蒸馏水1000ml）。
5.7 胰蛋白酶粉剂(AMRESCO TRYPSIN 1:250 1瓶放于-4℃储存)。
5.8 胰蛋白酶使用液(把10mg胰蛋白酶粉加入50ml生理盐水溶解，并加入0.5ml
3% Tris调节PH值至7.4，每次使用前制备)。
5.9 3%Tris：3g Tris粉剂,加蒸馏水100ml溶解。
5.10 10%吉姆萨染色使用液(5ml吉姆萨染色原液混合45ml PH7.4磷酸盐缓冲液，
每次使用前制备，并混匀)。
吉姆萨染色原液(2g吉姆萨染料磨碎，加60ml甘油磨成糊状，80℃烤箱放2小时，取出加60ml甲醇，混匀后放37℃培养箱备用)。
6 实验设备
37℃ CO2恒温箱，烤箱，水浴箱，离心机，光学显微镜等。
7 标准操作程序
7.l 接种
经低倍镜下鉴定为绒毛枝后，在灭菌一次性平皿中用手术刀片切成l-2mm 3小枝或小块，用20ml注射器移入25cm3培养瓶中，加入GBICO AmnioMAX-II complete 培养基5ml，使组织块泡在培养液中（共接种两瓶)，放入37℃ CO2恒温箱培养。
7.2 换液
37℃培养6-7天，观察贴壁情况，如贴壁情况好，第7天换液。
换上GBICO AmnioMAX-II complete 培养基5ml或BIO-AMF-2培养基5ml，观察生长情况，若见上皮样或成纤维样细胞生长并生长良好即可收获。
7.3 收获
时间约第9-10天。
每培养瓶加秋水仙素(50μg/ml)2-4滴，混匀后放回37℃CO2恒温箱培养2小时，2小时后进行处理。
倒出培养液至15ml离心管中，每瓶加1ml预温37℃的EDTA一胰酶，消化8-15分钟。
倒回培养液以中和胰酶的消化作用,吸管吹打细胞，镜下观察细胞脱落情况。
如为脱落即延长消化时间,倒入离心管，离心2000转/分钟，5分钟，去上清。
7.4 低渗
加入l:l的0.4% KCL:0.4% 柠檬酸钠2ml(各lml)(37℃水浴预温),低渗5分
钟(轻轻吹打细胞)。
注:沉渣多可各加2ml,共4mI。
7.5 预固定和固定
加0.5ml固定液，弹匀,离心2000转/分钟,5分钟,去上清；加固定液8ml，静置10-20分钟(最好放于37℃水浴箱内)，离心20OO转/分钟,5分钟，去上清:加固
定液8ml，轻轻吹打3次后离心20OO转/分钟,5分钟。
7.6 滴片
去上清液,沉渣加入少量固定液(0.1-0.3ml)稀释，预温烤箱到80-90℃，将悬液均匀滴在冰水(三蒸水)浸泡过的玻片上，即放入烤箱烤2-3小时，（滴片完毕,将烤箱调到70-80℃),关烤箱。
7.7 显带
50ml生理盐水+10mg胰蛋白酶(3小匙+0.5m1 3%Tris调PH至7.4),水浴溶解,玻片浸入消化约5秒,用水冲干净,即放入染色液中。
7.8 染色
原液Giemsa 1 吸管+50ml PH7.0 磷酸缓冲液,染色5-10分钟(新配的染液,染色时间短些，放置较久的染液,染色时间需延长)，取出冲水用电吹风吹干。
7.9 染色体分析
取制备好的坡片置光学显微镜下观察分析20个核型或更多，经显微摄像获取两个完整核型图像，上传结果及图像到产前诊断系统(GZPD)。
7.10 结果发放
经审核后发放报告。
8 方法的局限性
本检查为G显带320-400条带范围，不能排除微小染色体异常或基因突变所致的疾病。
9 注意事顼
9.l 在显微镜下鉴定绒毛枝以及严格无菌操作是培养成功的关键。
9.2 妊娠10周后平滑绒毛膜逐渐退化，仅留下叶状绒毛，逐渐发育成胎盘，故孕周稍大的流产绒毛或胚胎停止发育时间过久的标本不易于培养，有培养失败的可能。
9.3绒毛生长最适宜的PH为7.4，高于8.0和低于7.0均不适于人毛细胞生长。
9.4 对绒毛检查结果有异常应复查羊水或脐带血。
10 参考文献
10.1 《医学细胞遗传学实验室工作手册》2006.04；
10.2 《中华人民共和国卫生行业标准》2010.06.08。