动物实验的基本技术和方法

大小鼠灌胃注意点 1. 用灌胃针。 2. 从嘴角处插入，到达咽部后 改变灌胃针的方向，使其与 食管的走向一致，然后顺利 插入。 3. 成年大鼠由于体型较大，不 易保定。办法：
大小鼠灌胃
1）一人保定，一人灌胃
2）操作者抓取后，将大鼠尾部按 在自己的胸部，达到固定尾 部的目的，然后灌胃。 灌胃量：小鼠0.2-0.4ml/10克， 大鼠1.0ml/100克
2. 3. 4. 5.
剪耳（打孔）法：啮齿类小动物 号码钳法：适用于兔、犬等大动物 耳牌法：适用于羊、牛等大家畜 电子芯片植入法：
四、动物被毛的去除方法
1. 剪毛法：用弯头剪逆毛方向剪 适用于各种实验动物 2. 拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射 3. 剃毛法：剃须刀、手术刀 适用于大动物 4. 脱毛法：脱毛剂
（二）动物实验分组设计的基本类型 1.完全随机化设计 2.按体重分层随机区组设计 3.配对设计
（二）按体重分层随机区组设计 先确定实验的组数，将动物称重，按体重的轻重顺序编号，再用随机化 工具，如随机数字表等，将动物随机分配至处理组及对照组。 • 随机区组法举例 • 以用四氧嘧啶诱发小鼠糖尿病模型，用药物进行治疗观察疗效为例， 实验中可分为5组：正常对照组、模型组、药物治疗低剂量组、高剂量 组和已知可治疗糖尿病药物组，每组10只，5雌5雄。按下列步骤进行 分组： 1）雌雄分开：分组时雌、雄动物分开分别进行。 2）用记号笔在小鼠尾巴上随机编1-25号。 3）按编号称重，记录每只小鼠的体重。 4）按动物体重顺序依次重新编号。 5）共5个实验组分成5个区组，每个区组都有5只体重相近的动物。第一区 组5只动物为1、2、3、4、5号，第二区组为6、7、8、9、10号，余类 推。 6）抄录随机数表。抄录数字的个数等于区组数减1，如5个区组就抄录4个 数字。第5个动物无随机数字，其分组为调剂。以后的区组按顺序依次 抄录数字。 7）将小鼠分到各组中。
• 对实验动物进行麻醉的目的是，消除实验过程 中引起的痛苦和不适，确保实验动物的安全和 动物实验的顺利进行，是动物实验伦理的一个 重要方面。 • 麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉两种。在实验 动物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。 • 应结合实验目的、实验动物种类、日龄及健康 状况等因素进行综合考虑，决定选用的麻醉剂 和麻醉方法。
• 常用脱毛剂配方 配方1：硫化钠8g溶于100mL水中。 配方2：硫化钠：肥皂粉：淀粉的比例为 3：1：7，再加水调成糊状。 配方3：硫化钠10g和生石灰15g溶于 100mL水中。 • 配方1和2适用于家兔和啮齿类动物的脱 毛，配方3适合给犬脱毛。 • 脱毛后用清水将脱毛区清洗干净。
五、实验动物的麻醉方法
• 成为熟练掌握动物实验操作技 术的能手或专家应该是大学/ 研究所每一个动物饲养管理人 员所追求的目标。
动物实验前的准备
1. 所用动物实验设施是否符合本实验要求 普通设施，清洁级、SPF设施，感染性设施， 有毒有害供试品设施，放射性设施 实验室、手术室 2. 所用实验动物的品种、品系、性别、数量等能 否得到 3. 所需要的动物实验技术是否熟练掌握 4. 所用动物实验器具、试剂是否准备好 5. 所用的仪器设备是否处于可运行状态
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三、动物编号常用的标记方法
适用需要个体识别的实验 1. 染料标记法：适合白色被毛的动物，如小鼠、 大鼠、豚鼠、兔等。 黄色：常用3~5%苦味酸溶液 红色：常用0.5%中性红溶液 咖啡色: 2%硝酸银溶液 黑色：煤焦油酒精溶液 优点：简单、易识别 缺点：长期易退色；不能编大号码。
• 全身麻醉简称全麻。全麻是指麻醉药通 过呼吸道吸入、静脉和肌肉注射等途径， 进入实验动物体内，使其产生短时间意 识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑 制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药 从体内排出或在体内代谢破坏后，实验 动物逐渐清醒，不留后遗症。 • 全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途 径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射 麻醉法用非挥发性麻醉药。
• 饲养繁殖实验动物的目的是用实验动物作 为人类的替难者进行各种生物医学研究。 一方面随着生物医学的发展，实验动物的 使用量逐年增加，使用种类也逐年扩大； 另一方面从动物福利和动物实验伦理学考 虑，又需要尽量减少一些不必要的动物实 验，特别是人类的宠物诸如猫、犬、猴等 ，或者在不得不做的动物实验中尽可能将 动物的痛苦、压迫和不适降到最低。
六、实验动物的给药方法
• • • 1. 2. 3. 4. 5. 6. 经口给药法 注射法 其它途径给药方法 呼吸道给药 皮肤给药 脊髓腔内给药 脑内给药 直肠内给药 关节腔内给药
• 经口给药 1. 拌入饲料、饮水中自由摄取 优点：省人力 缺点：因个体差异，摄入量不等 2. 灌胃 优点：能准确定量 缺点：给动物造成一定的痛苦，需 熟练掌握技术
• 动物实验的伦理判断标准： 1.必须权衡实验的目和得出的结论与动物由 此而受到的伤害和死亡。 2.必須清楚而且明确「沒有任何替代方法可 达到所做的动物实验的目的」这个前提。 3.必须将动物的痛苦、压迫和不适减到最低 程度。
二、 动物实验是实践性非常强的技术 和方法，不能仅靠书本理论知识，需 要通过反复实践加以掌握。 目的： • 保证实验的顺利进行。 • 减少动物承受的痛苦。
兔灌胃法 采用用固定器一人操作，或 一人保定一人操作法。 操作者用左手拇指和中指挤 压家兔两颊，将下颌挤开使兔 被动张口，右手将开口器从一 侧口角插入口腔并固定，用泡 在水中的14号细导尿管，经开 口器的孔插入，向前推进约 15cm，可达胃内，确认泡在水 中的导管另一端没有冒气泡， 说明没有误入气管，即可注入 药液。灌胃量为每只每次80150mL。
（1）吸入麻醉法 • 常用药物为乙醚、氟烷和异氟烷等。吸入麻醉法有开放 吸入和气管内插管吸入两种方法。 • 开放吸入：适用于啮齿类小动物，可用乙醚、氯仿 小动物吸入麻醉机国外已有售。 • 气管内插管：适用于犬、猴、羊等大动物，氟烷和异氟 烷是最常用的麻醉药。 • 吸入麻醉的优点： 麻醉平稳、安全可靠、 停止吸入后很快苏醒 • 缺点： 需要一定的仪器设备， 注意自身防护。
6.大动物手术时应配备麻醉师，在麻醉过 程中密切观察动物的反应，如血压、脉 搏、呼吸和体温，及时调节麻醉药剂量， 保证手术顺利进行。 7.动物在麻醉期间、手术后至苏醒期体温 会下降，应注意手术室的室温。 8. 注意术后护理。
• 麻醉意外的抢救 原因： 麻醉药速度过快、剂量过大、麻醉过深 后果： 中枢神经系统抑制导致呼吸系统、循环系统功能障 碍，引起呼吸、心跳停止。 抢救方法： 要针对具体情况，采取对症治疗的措施。 1.立即停止供给麻醉剂 2.人工呼吸，吸氧 3.苏醒剂 4.呼吸中枢兴奋剂如可拉明等和心脏和呼吸兴奋剂， 如0.1%肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注50% 葡萄糖溶液等。
兔灌胃法
1. 口服给药 用右手将口服药片 夹在拇指和食指之间， 把左手放在犬的圈套上， 用拇指和食指压着犬的 上唇，用力使犬的头向 后仰，继而把右手中指 放在犬的下颌向下压。 当犬的嘴张大时，快速 把药片放在舌根隆起的 部位，合上犬的嘴，维 持头后仰姿势，右手在 咽喉部轻轻按摩。借助 犬本能的吞咽动作服下 药片。
按体重分层随机区组分组
动物编号 随机数字 除数 1 0 5 5 2 2 7 5 3 8 4 5 4 3 7 5 5 6 4 1 5 7 6 8 5 8 3 8 5 9 5 1 5 10 11 5 6 5 12 9 6 5 13 8 1 5 1 3 14 8 0 5 0 5 4 15
余数
组别 动物编号 随机数字 除数 余数 组别
在国际上被普遍认可的动物福利包括以下 5个 内容，即： 1.应提供给动物满足生长发育和繁衍后代的营养食 物和清洁的饮水，使其免受饥渴。（吃好喝好） 2.应提供给动物适当的栖息之地和饲养场所，使其 能休息和睡眠。（休息好） 3.应提供预防动物疾病和患病后及时诊疗的措施， 使其免受疾病和伤害的痛苦。（健康成长） 4.应提供给动物安静的饲养环境，无刺激动物发生 应激和恐惧的场面和声音。（平静生活） 5.应提供给动物同类一起自由玩耍、表达天性的空 间和自由。（表达天性）
动物实验基本知识 和操作技术
上海中医药大学实验动物中心 汤家铭
进行动物实验操作前必须注意的事
一、动物福利和动物实验伦理问题 什么是动物福利？ • 动物福利是指动物在整个生命过程中应得到人类的保护， 其基本原则是要善待动物，保证动物的健康和快乐。 • 动物福利的提出是基于这样一个观点，即动物与人一样， 有思维、有情感，应当给予与人一样的生存权。 • 台湾学者夏良宙（1990年）把动物福利概括成两句话： 善待活着的动物， 减少动物死亡的痛苦。 应该再加一句：动物死后应得到妥样本数。 重复的主要作用是估计试验误差、降低试 验误差和增强代表性，提高实验结果的精 确度，保证实验结果能在不同个体中稳定 地重复出来。 • 样本数过少，实验处理效应不能充分显 示；样本数过多，又会增加实际工作中的 困难。因此在进行实验前必须确定最少的 样本例数。最少的样本例数可按一般估测 方法确定，也可通过统计学方法进行测算 确定。
大小鼠麻醉法
（2）注射麻醉法 注射麻醉法是使用非挥发性麻醉药进行全麻 的方法。在动物实验中比较常用。 常用麻醉药： 戊巴比妥钠 硫喷妥钠 氯氨酮 乌拉坦 大动物：静脉注射或肌肉注射 啮齿类动物：腹腔注射
• 实验动物麻醉应注意的事项 1. 大动物麻醉之前应禁食。 2. 麻醉之前应准确称量动物体重，作为计算麻 醉剂用量的依据。 3. 应注意不同麻醉药对动物的作用是不同的， 如戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩 力，使肌肉松弛，而氯胺酮则相反。 4. 大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻 醉前给药如阿托品和苯巴比妥钠。 5. 静脉注射麻醉药是必须缓慢，边注射边观察 动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼 痛的反应，达到麻醉要求时应停止注射。