实验动物基本操作技术

e．腹壁静脉
青蛙、蟾蜍
f．冠、脚蹼皮下静脉 鸡、鸭、鹅
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２．取中量血
部位 ａ．后肢外侧皮下小隐静脉 ｂ．前肢内侧皮下头静脉 动物种类 狗、猴、猫 狗、猴、猫
ｃ．耳中央动脉
ｄ．颈静脉
兔
狗、猫、兔
ｅ．心脏
ｆ．断头 ｇ．翼下静脉
豚鼠、大鼠、小鼠
大鼠、小鼠 鸡、鸭、鸽、鹅
ｈ．颈动脉
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2 ．气道不畅或堵塞：常见于麻醉后，因为气管 分泌物增多或气管切口的出血凝块堵塞气管，动物 呼吸不规则、呼吸困难甚至引起的窒息。 3 ．大失血：如因大动脉插管的松脱所造成的大 失血。 4 ．实验药物的作用：如静脉注射乙酰胆碱过量 或动物对其反应过强，引起心搏减弱减慢，继而出 现呼吸、心跳的停止。
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动物编号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 随机数字：78 38 69 57 91 0 37 45 66 82 65 41 组 别：乙 乙 甲 甲 甲 乙 甲 甲 乙 乙 甲 甲 现在以随机数字的奇数代表甲组，偶数代表乙 组，则编号为 3 、 4 、 5 、 7 、 8 、 11 、 12 号分入甲 组，而1、2、6、9、10号分人乙组。因两组数字 不等，继续用随机方法将甲组多余的一只调整给 乙组，从上面最后一随机数字41，接下去抄一个 数为62，以7除之(因甲组原分配7只)得6，即把原 分配在甲组的第6个甲(即11号大鼠)调入乙组。
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2. 根据体重鉴定日龄 ⑴ 小鼠日龄与体重的对应
日龄/d 体重/g 初生 1.8 5 4.0 10 6.0 15 11.0 20 15.0 25 21.0 30 21.0
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妊娠检查方法有
① ② ③ ④ ⑤
外部检查法 摸胎法 阴道检查法
直肠检查法
超声波检查法
⑥
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孕酮含量测定法
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第五节 分组与编号
动物实验之前，必须对实验动物进行随机分组 和编号标记，这是做好实验和实验记录的前提。 一、随机分组 （一） 当分为二组时 例：设有雄性 Wistar 大鼠 12 只，按体重大小依 次编为1，2，3，…，12号，试用完全随机的方法， 分为甲、乙两组。 分组方法：假设所产生的点是随机数字表上第 21行第31 列的78，则从78开始，由上向下抄12 个 随机数字，如下：
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第六节 常规采血方法
一、大、小鼠的采血方法 1．颈静脉或颈动脉采血 2．股静脉或股动脉采血 3．心脏采血 4．尾部采血 5．眼眶采血 6．断头取血
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颈静脉或颈动脉采血
尾 部 采 血
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心脏采血
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二、家兔的采血方法 1．心脏采血 2．耳中央动脉采血 3．耳静脉采血
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二、豚鼠的抓取固定法
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三、家兔的抓取固定法
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第二节 性别鉴定
一、大、小鼠的性别鉴定
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二、兔的性别鉴定
Female
Male
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三、蟾蜍的性别鉴定
雄蟾
婚垫
雄蟾
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雌蟾
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第三节 年龄的大致判断
一、大、小鼠 1. 根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样）
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采血时要注意
采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在 25～28℃，冬季，15～20℃为宜； ② 采血用具有采用部位一般需要进行消毒； ③ 采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥； ④ 若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入 抗凝剂。
①
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１．取少量血 部位 ａ．尾静脉 ｂ．耳静脉 ｃ．眼底静脉丛 d．舌下静脉 动物种类 大鼠、小鼠 兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊 兔、大鼠、小鼠 兔
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采血方法的选择，决定于实验目的所需血量以及 动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、 血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法 等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时 可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自 远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。 而研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐 代谢紊乱，需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳 分压和血液pH值以及 K+、Na+、Cl-离子浓度，必须 采取动脉血液。
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第四节 妊娠检查
雌性动物妊娠后会发生一系列的复杂变化。为
了在配种以后能及时掌握雌性动物是否妊娠、妊
娠的时间及胎儿和生殖器官的异常情况，采用临
床和实验室的方法进行检查，称为妊娠检查，又
称妊娠诊断 (pregnancy diagnosis) 。通过妊娠检查， 可以及时地对雌性动物加强护理或再次配种，以 保护母体和胎儿的正常发育，避免胎儿早期死亡 和流产及减少繁育时间的损失。
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左前腿 上部为1， 左腰部为2， 左后腿为3， 头部为4， 背部为5， 尾基部为6，
右侧从前至后依次为 7 、 8 、 9 。红色表 示十位数,用黄色表示个位数。
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2．个体耳号标记法 3. 个体断趾标记法 4. 耳号钳标记法 5. 挂牌法
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（二）急救措施 1 ．迅速排查、中断、排除诱因。如应用棉签清 除干净气管、气管插管内的分泌物及血凝块。必要 时拔出气管插管冲洗后再行气管插管术。 2．根据下列不同情况采取相应的急救措施： （1）呼吸极慢、不规则，但心跳正常时：给予人 工呼吸-压胸法，适当给予苏醒剂。 （2）呼吸停止仍有心跳时：①实施人工呼吸，必 要时可使用人工呼吸机或吸氧（吸入气中 O2 占 95% ， CO2占5％）；②注射50％葡萄糖液5～10ml；③给肾 上腺素及苏醒剂。 （ 3 ）呼吸、心跳均停止时：用 l ： 10000 肾上腺素 溶液心内注射，其余同（2）。
鸡、鸭、鸽、鹅
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３．取大量血
部位 ａ．股动脉、颈动脉 ｂ．心脏 动物种类 狗、猴、猫、兔 狗、猴、猫、兔
ｃ．颈静脉
ｄ．摘眼球
马、牛、山羊、绵羊
大鼠、小鼠
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4. 最大安全采血量与最小致死采血量 动物种类
小鼠 最大安全采 血量 (ml) 0.2 最小致死采 血量 (ml) 0.3
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二、大失血 （一）诱发原因 多因动脉插管结扎不牢、动物挣扎，导致大动脉插 管的松脱，或在进行动脉插管术时，因未放置动脉夹 或动脉夹夹闭不全而剪切动脉引起。 （二）急救措施 1．立即止血：应迅速手指压迫或捏住出血处（尽 量不要用止血钳，以防损伤动脉和神经），然后仔细 检查分离出血点，于近心端放置动脉夹，再行动脉插 管术。 2．补充血容量：若失血太多，适当加快输液(生理 盐水)速度，增加血容量。 3．注射强心剂：静脉注射1︰10000肾上腺素0.5ml。
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以3除各随机数字，若余数为l，即该鼠归A组；余 数为2，归人B组；余数为3，归入C组。结果A组为4 只， B 组为 3 只， C 组为 5 只。 C 组多一只应调入 B 组。 方法同上。仍采用随机方法；从 10 后面接着抄，为 61。除以5，余数为1，则将第一个C，即第2号鼠调 入B组。调整后各组鼠的编号如下： 组别 鼠的编号 A组 3 9 10 12 B组 l 2 4 6 C组 5 7 8 11 对于将动物随机分为四组或更多组原理基本一致
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一、呼吸、心跳（血压）的改变 动物实验过程中，需密切观察实验动物的呼吸、 心跳及血压的变化，一者它们是实验反应的数据指 标，二者是实验动物状态的主要指征。尤其对呼吸 的观察，因为动物的死亡首先是呼吸的停止。 （一）诱发原因 1 ．麻醉给药速度过快或过量：实施静脉给药麻 醉，可因给药速度过快或过量导致呼吸停止。因此， 为防止麻醉剂过量，注射速度一定不要过快，严密 观察动物状况，若需追加麻醉剂，一次不宜超过总 量的1/5。
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如果甲组多两个，则接下去抄两个数。分别 以8，7除之，余数即指要调入乙组的第几个甲， 余此类推。最后各组的鼠数就相等了。调整后 各组鼠的编号为： 组别 鼠的编号 甲组 3 4 5 7 8 12 乙组 1 2 6 9 10 11
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(二)当分为三组时 例：设有雄性的 SD 大鼠 12 只，按体重大小依次 编为 1 ， 2 ， 3 ， … ， 12 号，试用完全随机的方法， 分为A、B、C三组。 分组方法：假设所定的点是随机数字表第 40行17 列的08，则从08开始，自左到右抄12个随机数字： 动物编号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 随机数字：08 27 01 50 15 29 39 39 43 79 69 10 除 3 余数： 2 0 1 2 0 2 0 0 1 1 0 1 组 别： B C A B C B C C A A C A 调整组别：B
日龄/d 初生 7 20 30 60
体重/g
日龄/d
60～80 100～120 150～200 170～220 240～300
90 120 180
体重/g
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330～400 400～470 520～600
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三、家兔 门齿和爪随年龄增长而增长，是年龄鉴别的重 要标志。青年兔门齿洁白，短小，排列整齐；老 年兔门齿暗黄，厚而长，排列不整齐，有时破损。 白色家兔趾小基本呈红色，尖端呈白色。1岁家 兔红色与白色长度相等； 1 岁以下，红多于白； 1 岁以上，白多于红。还可根据趾爪的长度与弯曲 度来区别。青年兔趾爪较短，直平，隐在脚毛中， 随年龄的增长，趾爪露出于脚毛之外，而且爪尖 钩曲。另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活 泼的为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓 的为老年兔。
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二、编号标记方法 实验动物分组后，为了区分、观察并记录每个个 体的反应情况，必须给每只动物进行编号标记。 1．体表颜料着色法 一般对短期试验的白色动物 可用颜料涂搽被毛的方法标记。常用的涂染化学药 品有： 红色：0.5％中性红或品红溶液； 黄色：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸 酒精饱和液； 咖啡色：2％硝酸银溶液； 黑色：煤焦油酒精溶液。
动物实验基本操作技术
本章主要内容
实验动物的抓取与固定 性别鉴定 常规采血方法 年龄的大致判断 麻醉方法 妊娠检查 处死方法 分组与编号
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第一节 实验动物的抓取与固定
一、大、小鼠的抓取固定
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小 鼠 固 定 盒 固 定
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大鼠固定盒固定
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大鼠
豚鼠 兔 狼狗 猎狗
1
5 10 100 50
2
10 40 500 200
猴
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60
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急救措施
动物实验过程中，可因麻醉药过量、出血过多、 分泌物或血块堵塞气管造成窒息以及某种药物原因 引起动物血压、呼吸不规则等现象，此时应立即进 行急救处理措施。 急救处理措施首先要迅速排查原因，并中断诱因 （如止血、停药、排除分泌物等），然后对症实施 急救措施。
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⑵ 大鼠日龄与体重的对应 日龄/d 体重/g 日龄/d 体重/g 初生 10 20 30 40
6～7 17～25 35～50 55～90 100～150 50 60 70 80
150～210 170～240 210～270 240～320
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二、豚鼠 老年豚鼠牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼神 呆滞，行动迟缓。年轻豚鼠牙齿短白，爪短软，眼 睛圆亮，行动敏捷，被毛有光泽，且紧贴身体。同 样，也可根据体重来推断大致年龄。同日龄豚鼠， 雌性体重略高于雄性。与大鼠一样，其体重受多种 因素的制约。实验对年龄要求比较严格时，必须由 卡片记录提供准确年龄。