离体蛙心灌流及讲义某些离子

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离体蛙心灌流及某些离子药物对离体蛙心活动的影响

30
在蛙心插管中滴加乳酸，使心肌力发生改变的原因是（）。
收缩
H+抑制Ca2+的内流
H+与Ca2+竞争肌钙蛋白
H+抑制K+的内流
去甲肾上腺素肾上腺素
BDE
去甲肾上腺素肾上腺素
ABC
H+抑制Na+的内流
H+与Ca2+竞争钙调蛋白
AB
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在蛙心插管中滴加碳酸氢钠，使心肌 OH-中和H+，使H+
收缩力发生改变的原因是（）。
浓度减少
H+减少促进Ca2+内流
H+减少促进Ca2+与肌 OH-促进Ca2+的内
钙蛋白的亲和力
流
OH-促进Ca2+ 与肌钙蛋白的亲和力
ABC
32
蛙心夹夹住心尖不在观察一些离子、药物对离体蛙心活宜过多，以免过度每次更换任氏液量动的影响时，应注意的事项包括（）牵拉造成心室损伤应该保持一致
心室舒张的程度
11
在离体蛙心灌流实验中，记录心搏曲线时，曲线的密度代表
心肌收缩的强弱
12
在离体蛙心灌流实验中，记录心搏曲线时，曲线的基线代表
心肌收缩的强弱
心跳节律心跳节律
心跳频率心跳频率
心室舒张的程度心室舒张的程度
E 5
静脉窦左主动脉上任意部位均可 β
β
β 以上均有可能 HCO3以上均错误
在蛙心插管中滴加ACh引起心肌收缩力
4 的改变是ACh与心肌上哪种受体结合的 M
N
α
V
结果。
在蛙心插管中滴加肾上腺素引起心肌

不同离子对蛙离体心脏活动的影响

不同离子对蛙离体心脏活动的影响08科2摘要：本次实验采用用蛙类斯氏离心心脏灌流法，采用1%、2%、4%三种不同浓度的钾、钠、钙溶液分别进行灌流实验。

结果表明：高浓度的氯化钠能够使心脏收缩和舒张的幅度均减小，但心脏频率基本山不变；KCl使蛙心活动减弱，甚至停在基线处。

并且浓度越大，减弱越快，基线越往上移动；氯化钙使蛙心收缩力和舒张增强，心率明显加快，且浓度越大影响越明显。

关键字：蛙心灌流不同离子浓度心脏活动影响前言蛙心离体后，用理化因素类似于两栖类动物血浆的任氏液灌注时，在一定时间内，仍保持有节律的舒缩活动，而改变灌流液的理化性质后，心脏的节律性舒缩活动亦随之改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持正常心脏活动的必要条件。

心脏的主要功能是兴奋和收缩。

兴奋以离子为基础，因此细胞外或血浆内的离子浓度变化对心脏有重要影响，其中钾钠钙最为重要。

因而，我们设计不同浓度的钾、钠、钙溶液对心脏进行灌流的实验。

初步研究这三种离子对心脏兴奋性的影响，以期加深对心脏正常功能的了解和初步探讨异常功能的形成原理。

1、实验材料和方法1.1【材料】1.1.1实验动物：蛙1.1.2实验器材：生物机能系统或BL-420生物信号采集系统，张力换能器，探针，外科剪，小手剪，烧杯，滴管，蛙心套管，蛙心夹，铁支架，试管夹，眼科镊，丝线，双凹夹，蛙板，蛙足钉等。

1.1.3实验药品：任氏液，氯化钠（1%，2%，4%），氯化钙（1%，2%，4%），氯化钾（1%，2%，4%），生理盐水等。

1.2【方法】（1）取蟾蜍1只，使头向下，将蛙针于枕骨大孔处向前插入颅腔左右摇动，破坏脑组织，再将针插入脊椎管，以破坏脊髓，动物全身软瘫。

（2）仰位固定于蛙板上，先用普通剪刀将胸部皮肤剪开，再将胸部肌肉及软骨剪去，用虹膜剪剪破心包膜暴露心肌。

（3）于主动脉干以下绕一线，左右放平，备结扎用。

在主动脉右侧分支下，再穿一线，尽量在远心端扎紧，左手提线，右手以眼科剪于左主动脉上向心剪一Ｖ形切口，将盛有任氏液的蛙心套管，通过主动脉球转向左后方，同时用镊子轻提动脉球，向插管移动的反方向拉，即可使插管尖端顺利进入心室，用主动脉干下的线结扎固定。

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兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流：
[K+ ]o↑ AP平台期缩短 Ca2+内流↓
兴奋-收缩耦联↓ 收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流与心肌β 1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑ 兴奋-收缩耦联↑ 收缩力↑
4期 If 、I CaT通道↑
观察项目
一、描记正常心搏曲线
曲线幅度 —— 收缩的程度曲线疏密 —— 心率曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
实验对象蟾蜍
实验仪器设备
RM6240生物采集系统张力换能器蛙类手术器械蛙心插管试管夹缝合线蛙心夹铁支架滴管
实验药品
任氏液 l％KCl 3％CaC12 l：10,000 E l：10,000 ACh 3％乳酸 2.5％NaHCO3
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.破坏脑和脊髓 2.暴露心脏
相关理论知识
心肌细胞的生理特性表现为：自动节律性、兴奋性、传导性和收缩性。心肌细胞外离子浓度的变化和因体内生物活性物质（如激素）引起的细胞膜离子通透性的改变，对心肌细胞的生物电活动和生理特性必然会产生明显的影响。
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因 1.心肌的自动节律性

蛙心灌流医学知识宣讲讲义

每一步实验结果观察明显后均需立即用新鲜任氏液换洗，待心跳恢复正常后方可进行下一步实验
结果与讨论
心肌的收缩活动是由钙离子触发的，由于心肌细胞的肌浆网不发达，还需要细胞外钙离子内流触发。因此心肌收缩的强弱与细胞外钙离子的浓度成正比。
正常蛙心收缩曲线
曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。曲线密度：代表心跳频率。曲线的规律性：代表心跳的节律性。曲线的基线：代表心室舒张的程度。曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。
另外，肾上腺还有促使肌钙蛋白与Ca2+的释放，提高肌浆网膜对Ca2+的回收，使心肌舒张速度增快，舒张完全,此处区别于单纯高钙的情况,因此不会发生钙僵.
加强4期的内向电流，使自动去极化速率加快，窦房结自律性频率变高，心率加快
肾上腺素
心肌细胞上的β受体相结合
ATP
[cAMP]
促肌钙蛋白对Ca2+的释放心肌膜上Ca通道开放概率增加提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度
乙酰胆碱
心肌细胞膜上M型受体结合
ATP
抑制腺甘酸环化酶[cAMP]
激活细胞膜上的一种K+通道，
促进胞内K+外流，最大复极心肌膜上Ca通道开放概率降低
电位更负，使得窦房结自律性
频率降低，心率减慢。并且抑
制4期的内向电流也导致心率减慢。
肌浆中Ca2+浓度降低
慢反应细胞0期动作电位的上升幅
度减少，上升速
3. 高K+，心跳明显减弱，甚至出现心脏停止于舒张状态的现象。
一：细胞外K＋浓度升高时，K+与Ca2+有竞争性结抗作用， K+可以抑制细胞膜对Ca2+的转运，使进入细胞内的Ca2+ 减少，心肌的兴奋－收缩耦联过程减弱，心肌收缩力降低。

离体蛙心灌流及某些离子、药物对离体蛙心活动的影响

离体蛙心灌流及某些离子、对离体蛙心活动的影响perfusion of frog’s heart 主要内容相关理论知识实验部分实验目的实验对象实验仪器与药品实验步骤结果分析与讨论相关理论知识正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋，心脏的自动节律性活动，需要有一个合适的理化环境。

蟾蜍心脏离体后，用任氏液灌流，在一定时间内仍能保持节律性兴奋和收缩活动。

由于心脏的正常活动还有赖于内环境因素的相对稳定，改变灌流液的成分可引起心脏活动的改变。

相关理论知识心肌细胞的生理特性表现为：自动节律性、兴奋性、传导性和收缩性。

心肌细胞外离子浓度的变化和因体内生物活性物质（如激素）引起的细胞膜离子通透性的改变，对心肌细胞的生物电活动和生理特性必然会产生明显的影响。

相关理论知识影响心肌细胞电生理特性的原因 1.心肌的自动节律性（1）最大复极电位与阈电位的差距（2）4期自动除极速度 2.心肌的兴奋性（1）静息电位水平：依赖于细胞外K浓度（2）Na通道的性状相关理论知识影响心肌细胞电生理特性的原因 3.心肌的传导性主要取决于动作电位0期除极速度和幅度 4.心肌的收缩性依赖于细胞外钙离子浓度相关理论知识离子对心脏活动的影响钾离子K参与心肌细胞的复极化和自律细胞的4期自动去极化过程，其改变不仅取决于细胞内外K浓度梯度，还与细胞膜对K通透性有关，因此其影响是多方面的相关理论知识离子对心脏活动的影响钙离子 Ca2对Na内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作用，对静息电位无影响。

Ca2o ↑，可使心肌细胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。

相关理论知识迷走神经和乙酰胆碱迷走神经兴奋时，节后纤维释放Ach激动心肌细胞膜上M型胆碱受体，产生负性变力、负性传导、负性变时等效应。

心交感神经与去甲肾上腺素心交感神经节后纤维释放的递质是去甲肾上腺素，激动心肌细胞膜上的受体，产生正性变力、正性传导、正性变时等效应。

实验目的1.本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法。

离体蛙心灌流(精)

离体蛙心灌流实验目的学习离体蛙心灌流的方法；观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。

观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。

实验器材动物：蟾蜍器材：斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.65%NaCl 溶液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液实验方法与步骤1、离体蛙心的制备：双毁髓→左主动脉结扎→左右两主动脉下方活结备用→剪口，插管（管内盛任氏液与肝素）→结扎备用线（套管＋左右主动脉）→剪断动脉→结扎并剪断静脉。

2、固定套管并用任氏液换洗血液；进入RM6240系统。

3、观察并记录正常心搏曲线；4、向套管内分别加入以下溶液（0.65%NaCl溶液2d 、5%NaCl溶液2d 、1%KCl溶液1-2d 、2%CaCl2溶液1d 、1:5000肾上腺素溶液1-2d 、1:10000乙酰胆碱溶液1-2d ），观察并记录曲线变化。

实验结果此图为蛙心正常心搏曲线此图为换入0.65% Nacl溶液后蛙心收缩曲线的变化由波形图可知，Nacl可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度减小。

此图为加入5%Nacl溶液后蛙心收缩曲线的变化有波形图可知，向任氏液中加入5%Nacl之后心搏曲线的幅度大大降低。

此图为加入Kcl溶液后蛙心收缩曲线的变化KCl导致心脏肌细胞收缩能力减弱，心率减慢。

此图为加入Cacl2溶液后蛙心收缩曲线的变化可使心肌收缩能力增强，心率加快，导致心率曲线幅度由上图可知，CaCl2增加。

此图为加入肾上腺素后蛙心收缩曲线的变化由波形图可知，肾上腺素可使心肌收缩力增强，心率加快。

此图为加入乙酰胆碱后蛙心收缩曲线的变化由上图可知，乙酰胆碱可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度降低。

实验结果分析离体蛙心仍可具有揭露性收缩，是因为作为蛙心正常起搏点的经脉都（其功能相当于人体心脏的窦房结）能产生自动节律，通过传导系统维持心脏的波动，心脏正常德节律性兴奋和收缩活动必须在适宜的礼花环境才能维持，一旦适宜的环境被干扰或破坏，心脏后东就会受到影响。

离体蛙心灌流及某些离子

离体蛙心灌流及某些离子
主要内容
相关理论知识实验部分
实验目的实验对象实验仪器与药品实验步骤
结果分析与讨论
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因
1.心肌的自动节律性
（1）最大复极电位与阈电位的差距（2）4期自动除极速度
2.心肌的兴奋性
（1）静息电位水平：依赖于细胞外K+浓度（2）Na+通道的性状
观察项目
一、描记正常心搏曲线
曲线幅度 —— 收缩的程度曲线疏密 —— 心率曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流： [K+ ]o↑
AP平台期缩短 Ca2+内流↓
兴奋-收缩耦联↓
收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流与心肌β1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑
ห้องสมุดไป่ตู้兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
4期 If 、I CaT通道↑ 4期自动去极速度↑
相关理论知识
离子对心脏活动的影响
钙离子 Ca2+对Na+内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作
用，对静息电位无影响。 [Ca2+]o ↑，可使心肌细胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。

离体蛙心-灌流和影响

松结；在左主A下再穿一线结扎。
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管 1.2 在主动脉根部剪一斜口，将插管插入动脉圆锥，在心室收缩时将插管插入心室，结扎固定。
实验步骤
二、连接仪器和装置
1.用试管夹将蛙心管固定在铁支架上
2.把张力换能器固定铁支架支台上，在心室舒张期将与换能器相连的蛙心夹夹在心尖上。
用，对静息电位无影响。 [Ca2+]o ↑，可使心肌细胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。
相关理论知识
迷走神经和乙酰胆碱
迷走神经兴奋时，节后纤维释放Ach,激动心肌细胞膜上M型胆碱受体，产生负性变力、负性传导、负性变时等效应。
心交感神经与去甲肾上腺素
心交感神经节后纤维释放的递质是去甲肾上腺素，激动心肌细胞膜上的ß受体，产生正性变力、正性传导、正性变时等效应。
曲线幅度 —— 收缩的程度曲线疏密 —— 心率曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因
1.心肌的自动节律性
（1）最大复极电位与阈电位的差距（2）4期自动除极速度
2.心肌的兴奋性
（1）静息电位水平：依赖于细胞外K+浓度（2）Na+通道的性状
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因

离体蛙心灌流

实验一离体蛙心灌流（八木氏）一、目的在维持离体心脏循环的条件下，观察不同的阳离子（Na+、K+、Ca2+）；酸、碱及肾上腺素，乙酰胆碱等神经递质对心脏活动的影响，同时记录心输出量与心率的变化。

二、原理心脏离体后，如用人工灌流法保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍能有节律地自动收缩和舒张，且可维持较长的时间。

离体心脏活动所需的灌流液。

应同动物内环境一致改变灌流液的成分，则可引起心脏活动的改变。

三、实验用品蛙（蟾蜍）、蛙心夹、蛙板、蛙心套管、常规手术器械（蛙）、试管夹、双凹夹、铁支架、小烧杯、滴管、张力换能器。

D-95生理记录系统、任氏液、5%NaCl、l%KCl、1%CaCl2、0.01%肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、3%乳酸、2.5%NaHCO3、滴管、棉球、棉线等。

四、方法与步骤（一）离体蛙心的制备1、暴露心脏取青蛙（或蟾蜍）一只，用蛙针从枕骨大孔插入破坏延髓后，仰卧固定于蛙板上，依次剪开胸前区皮肤和肌肉。

开胸暴露心脏。

然后用镊子提起心包膜，再用虹膜剪刀将其剪破，使心脏完全暴露出来。

2、蛙心插管用蛙心夹在心舒张期夹住心室尖。

将心脏轻轻提起，辨认与心脏相连的诸血管。

出入蛙心脏的血管共有九条（左主动脉、右主动脉、左、右前腔静脉、后腔静脉，左、右肺静脉，左、右肝静脉）然后将蛙心夹之连线用胶泥（或胶布）固定在蛙板上，以便操作。

用虹膜剪将连在左肝静脉上的心包膜剪去（注意：不要损伤静脉窦）。

用镊子将已浸湿任氏液的一条线穿过左肝静脉的下方，用另一条线穿过左主动脉下面，尽量向远端结扎，并结扎除左主动脉及左肝静脉外的全部血管。

左主动脉做输出管（动脉插管）。

左肝静脉做输入管（静脉管）插管。

首先用小镊子提起左肝静脉，用虹膜剪刀朝向心端剪一“V”型切口，把盛有任氏液的蛙心静脉从此插入，注意勿损伤静脉窦。

用线结扎固定。

冲洗心脏，洗净余血。

再翻正心脏，在左主动脉上离动脉圆锥1厘米处，朝向心端剪一“V”形切口，将蛙心动脉插管插入，用线结扎固定。

离体蛙心灌流及某些离子药物对离体蛙心活动影响

实验结果
实验项目
任氏液 2% CaCl2 1% KCl 1：10000 E 1：10000 Ach 2.5% NaHCO3
3% 乳酸
收缩强度处理前处理后
心率处理前处理后
结果分析与讨论
1.任氏液：正常对照 2. 3%CaCl2灌流： [Ca2+ ]o ↑
Ca2+内流↑ [Ca2+]i↑
兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流： [K+ ]o↑
AP平台期缩短 Ca2+内流↓
兴奋-收缩耦联↓
收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流与心肌β1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑
兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
4期 If 、I CaT通道↑ 4期自动去极速度↑
曲线幅度 —— 收缩的程度曲线疏密 —— 心率曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因
1.心肌的自动节律性
（1）最大复极电位与阈电位的差距（2）4期自动除极速度
2.心肌的兴奋性
（1）静息电位水平：依赖于细胞外K+浓度（2）Na+通道的性状
相关理论知识

蛙类离体心脏灌流实验

蛙类离体心脏灌流实验蛙类离体心脏灌流实验一、实验目的1、探究不同溶液对心肌特性的影响2、掌握离体心脏灌流的技术二、实验原理（一）两栖类动物无冠状循环两栖类动物无冠状循环，心肌直接从流经心腔的血流中获取营养。

即心室肌直接从心室腔中获得营养。

故用任氏液置换心室中的血液后，心室插管中的灌流液便成为心室肌的细胞外液。

（二）心肌对细胞外离子浓度和体液因素敏感（三）钾、钙和钠离子对心肌特性的影响由于心肌细胞生物电活动和收缩过程与离子密切相关，因此，细胞外液中离子浓度升升高或降低均会影响到心肌的电生理特性和收缩性。

（1）钾离子的影响K＋与静息电位的形成有关。

细胞外液K＋浓度[K＋]0变化对心肌生理特性的影响较为复杂。

高钾：[K＋]0轻度或中度增高时，膜内、外K＋浓度差减小，静息电位绝对值减小，与阈电位差距缩短，因此，兴奋性增高。

[K＋]0显著升高时，由于静息电位绝对值减小过多（膜内达-55mV 左右），Na＋通道失活，因而兴奋性降低甚至消失。

另外，还使0期去极化速度和幅度减小，传导性降低，导致兴奋传导减慢，甚至传导阻滞。

此外，[K＋]0增高还可提高膜对K＋的通透性，加速K＋外流，动作电位平台期缩短，因此，不应期缩短。

此外由于平台期缩短，减少了Ca2＋的内流，加上细胞外K+与Ca2+在膜上有竞争性抑制作用，导致心肌收缩功能减弱；（2）钙离子的影响细胞外Ca2＋在细胞膜上对Na＋内流有竞争性抑制作用，称为膜屏障作用。

[Ca2＋]0增高时，Na＋内流受抑制，细胞0期除极速度与幅度减小，使兴奋性及传导性均降低。

[Ca2＋]0增高使Ca2＋内流增多，因此慢反应细胞0期去极化加快加强，传导性增高，而快反应细胞平台期缩短，有效不应期缩短，复极加速。

Ca2＋内流增多，使心肌收缩能力增强。

[Ca2＋]0降低时，所引起的变化与高钙时相反。

（3）钠离子的影响细胞外液中钠浓度差梯度的变化一般对心肌活动影响不明显。

只有当[Na＋]0明显增高时，膜内外钠的浓度差梯度增大，因此，快反应细胞Na＋内流加快，0期去极速度和幅度均增加，导致传导性和自律性增高。

实验七蛙类离体心脏灌流实验

实验七蛙类离体心脏灌流一．目的要求：1．学习掌握离体蛙心灌流法；2．观察Na+、K+、Ca+及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。

二．基本原理：心肌具有自动节律性收缩活动的特性，可用人工灌流的方法研究心脏活动的规律及其特点，还可通过改变灌流液的成分或加入某些药物来观察其对心脏活动的影响。

三．动物、器材和试剂：1．动物：蟾蜍2．器材：常有手术器械、蛙心夹、蛙心插管、张力换能器、滑轮、蛙盘、滴管、烧杯。

3．试剂：任氏液、5％NaCl溶液、2％CaCl2溶液、1％KCl溶液、1:100000肾上腺素溶液、1:100000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液。

四．方法与步骤：1．双毁髓，将蟾蜍固定于蜡盘；2．暴露心脏，分离心脏周围的大血管。

在左主动脉下方穿一线，距动脉圆锥2~3mm 处结扎。

再从左、右两主动脉下方穿一线，打一活结备用。

在前、后腔静脉下穿一线，结扎，保留静脉窦。

用眼科剪在动脉圆锥前端，沿向心方向剪一斜口，然后将盛有少量任氏液－肝素溶液的蛙心插管由此开口处插入动脉圆锥。

当插管尖端到达动脉圆锥基部时，应稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内（可用另一只手轻轻捏住心室，感觉插入位置，不可插得过深，以免心壁堵住插管尖端）。

3．用滴管吸去套管中的血液，更换新的任氏液。

提起打活结的备用线，将左右主动脉连同插入的插管扎紧，再将连线固定于插管的小钩上。

剪断结扎线以外的血管及所有牵连的组织，将心脏离体。

用任氏液反复冲洗心室内余血，使灌流液不再有血液，至心室发白。

加入一定高度的任氏液，标记。

4．用蛙心夹夹住心室尖，接滑轮，固定于张力感受器。

5．连接仪器，调整初长度，开始实验。

在任氏液中加入几滴5％NaCl溶液，观察曲线变化，当曲线出现明显变化时，立即吸去灌洗液，用任氏液反复冲洗，至曲线恢复正常。

加任氏液至标记高度。

同法做CaCl2、KCl、肾上腺素、乙酰胆碱，记录。

五．注意事项：1．插入时应注意方向，不能用力过大，也不可强硬插入；2．插管时要防止凝血，需互相配合；3．扎插管时应扎紧，防止实验时滑出；4．液面高度应保持一致；5．加药时应有前后对照；6． KCl 、乙酰胆碱的影响较剧烈，应注意快速清除。

生物学实验离体蛙心灌流

另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流液的成分，则可以引起心脏活动的改变。
乙酰胆碱：与心肌细胞的M2受体结合，产生负性变时、变力和变传导效ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
实验原理自律细胞：组成特殊传导系统的心肌细胞
肾上腺素：主要与心肌的β1受体结合，产生正性变时、变力和变传导效应。观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流液的成分，则可以引起心脏活动的改变。
斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.
制备蛙心标本时，勿伤静脉窦；
RP或MDP与阈电位之差
具体作用机制见《大学生工理学作》P2细36~2胞39、：P248普通的具有收缩能力的心肌细胞
肾上腺素：主要与心肌的β1受体结合，产生正性变时、变力和变传导效应。
制备蛙心标本时，勿伤静脉窦；
心率：自律细胞4期自动除极速度
固定套管并用任氏液换洗血液；
斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.
工作细胞：普通的具有收缩能力的心肌细胞
动物与器材
牛蛙斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任
制备蛙心标本时，勿伤静脉窦；各溶液作用一旦出现，应立即用新鲜任氏液
换洗，以免心肌受损，而且待心跳恢复正常后方能进行下一步实验；蛙心插管内液面应保持恒定；每次更换或滴加溶液必须做标记；
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离体蛙心灌流
实验目的
学习离体蛙心灌流的方法；观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的
影响。观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏
活动的影响。
实验原理
作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被仍能产生节律性兴奋和收缩。

蛙心灌流试验

相关理论知识
离子对心脏活动的影响
钙离子 Ca2+对Na+内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作用，对静息电位无影响。 [Ca2+]o ↑，可使心肌细胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。
相关理论知识
迷走神经和乙酰胆碱
迷走神经兴奋时，节后纤维释放Ach,激动心肌细胞膜上M型胆碱受体，产生负性变力、负性传导、负性变时等效应。
实验步骤
二、连接仪器和装置
1.用试管夹将蛙心管固定在铁支架上 2.把张力换能器固定铁支架支台上，在心室舒张期将与换能器相连的蛙心夹夹在心尖上。
注意事项
1.蛙心插管内液面勿过高或过低，每次换液时，必须用任氏液冲洗3次。 2.每次加药，心搏曲线出现变化后立即将插管内液体吸出。 3.随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 4.换能器头端应向下倾斜以免液体进人换能器。 5.各种试剂的滴管不要混淆,以免影响实验结果。
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.观察心脏的解剖结构
（腹面）
（背面）
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.蛙心插管 1.1 在主A干下穿一线打一松结；在左主A下再穿一线结扎。
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管
1.2 在主动脉根部剪一
斜口，将插管插入动脉
圆锥，在心室收缩时
将插管插入心室，结扎固定。
离体蛙心灌流及某些离子、药物对离体蛙心活动的影响
(perfusion of frog’s heart)
主要内容
相关理论知识实验部分
实验目的
实验对象实验仪器与药品实验步骤
结果分析与讨论
相关理论知识