第十一章 抗生素

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5．变色酸-硫酸呈色反应 如阿莫西林加变色酸-硫酸试剂混合后， 于1500C加热2～3min，呈深褐色。 6．与重氮苯磺酸呈色反应 头孢菌素族7位侧链含有—C6H5—OH基 团时，能与重氮苯磺酸试液产生偶合反应， 显橙黄色。 7．与铜盐呈色 头孢氨苄加醋酸、硫酸铜、氢氧化钠试 液后，生成铜配位盐，显橄榄绿色。
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l测定法
取本品适量，精密称定，加水溶解并 定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液，精密量 取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取苯唑 西林对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积 计算供试品中C19H19N3O5S的含量。
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例2 头孢哌酮
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【性状】 本品为白色或类白色结晶性粉末； 无臭，味微苦；有引湿性。 l本品在丙酮或二甲亚砜中溶解，在甲醇或乙醇 中微溶，在水或乙酸乙酯中极微溶解。
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l测定法
取本品约50mg，精密称定，置100ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取 20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取头孢 哌酮对照品，先加上述磷酸盐缓冲液适量助溶后， 再用流动相定量稀释成每1ml中含0.5mg的溶液， 同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中 C25H27N9O8S2的含量。
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第二节
β-内酰胺类抗生素
本类抗生素包括青霉素族和 头孢菌素族，它们的分子结构中 均含有β-内酰胺环，故统称为β内酰胺类抗生素。
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二、鉴别试验
（一）
钾、钠盐的火焰反应
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（二）呈色反应
1．羟肟酸铁反应
羟胺 青霉素/头孢菌素 碱性环境 羟肟酸 稀酸 高铁离子
紫红色 红褐色
红棕色Байду номын сангаас
氨苄西林 头孢氨苄
头孢哌酮
链霉素在碱性溶液中，链霉糖经 分子重排使环扩大形成六元环，然后 消除N-甲基葡萄糖胺，再消除链霉胍 生成麦芽酚（α-甲基-β-羟基-γ-吡喃 酮）。麦芽酚可与铁离子在微酸性溶 液中形成紫色配位化合物。
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4．坂口（Sakaguchi）反应
本品水溶液加氢氧化钠试液，水 解生成链霉胍。链霉胍和8-羟基喹啉 （或α-萘酚）分别同次溴酸钠反应， 其各自产物再相互作用生成橙红色化 合物。 l 此为链霉素水解产物链霉胍的 特有反应。
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例1 苯唑西林钠
【性状】 本品为白色粉末或结晶性粉末； 无臭或微臭。本品在水中易溶，在丙酮或丁醇中 极微溶解，在乙酸乙酯或石油醚中几乎不溶。 l 比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并定 量稀释成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（附 录VI E），比旋度为+195°至+214°。
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【鉴别】 （1）在含量测定项下纪录的色谱 图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶 液主峰的保留时间一致。 l（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱 （光谱集239图）一致。 l（3）本品显钠盐的火焰反应（附录III）。
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l【检查】
酸度 取本品，加水制成每1ml中含 10mg的混悬液，依法测定（附录VI H ），pH值 应为2.0~4.0。 l水分 取本品，照水分测定法（附录VIII M 第 一法 A）测定，含水分不得过6.0%。
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l【含量测定】
照高效液相色谱法（附录V D ）
测定。 l色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以三乙胺醋酸溶液（取三乙 胺14ml与冰醋酸5.7ml，加水稀释至100ml，摇匀） -乙腈-水（1.2：180：820），并用冰醋酸调节 pH值至3.0±0.2为流动相；检测波长为254nm。
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2．N-甲基葡萄糖胺反应 （Elson-Morgan反应）
庆大霉素与链霉素一样，经水解 后也产生 N- 甲基葡萄糖胺（加洛糖 胺）在碱性溶液中与乙酰丙酮缩合成 吡咯衍生物，与对二甲基苯甲醛的酸 性醇溶液反应，即生成红色缩合物。
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3．紫外分光光度法 庆大霉素分子中 无共轭双键系统，故在紫外区无 吸收。 4．薄层色谱法 5．高效液相色谱法 6．红外光谱法 USP（23）采用红外 光谱法鉴别硫酸庆大霉素。 7．硫酸盐反应 利用硫酸盐能与氯化 钡试液生成白色硫酸钡沉淀进行 鉴别。
头孢菌素族和青霉素族一样，也 可经碱水解，β- 内酰胺环开环后可与 碘产生氧化还原反应，根据消耗的碘 量计算含量。
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（二）汞量法
青霉素分子不与汞盐反应，而其碱性水解产 物青霉噻唑酸及继续水解生成的青霉胺都能与汞 盐定量反应，根据消耗的汞盐量可以计算青霉素 的含量。 青霉素分子中的氢化噻唑环含有一个硫原子， 开环后形成巯基（—SH），用汞盐滴定巯基化 合物，其反应为： Hg2+ + 2R—SH→(RS)2Hg + 2H+
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5．硫酸盐反应 利用硫酸盐能与氯化钡试液 生成白色硫酸钡沉淀进行鉴别。 6．薄层色谱法 链霉素可采用薄层色谱法进 行鉴别。
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（四）含量测定
目前各国药典仍采用微生物检定法。
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庆大霉素
（二）鉴别试验 1．茚三酮反应 本品与链霉素一样具有氨基糖甙 结构，具羟基胺类和 α- 氨基酸的性 质，可与茚三铜生成蓝色缩合物。
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以青霉素钠为例：
NaOH 青霉素 水解 降解物 硝酸汞滴定液 水解物 至第二个等当点 电位滴定法
空白 ：
硝酸汞滴定液
降解物 电位滴定法 青霉素
至第二个等当点
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NOTE：
⒈青霉素的含量 = 总青霉素的百分含量 — 降解物的百分含量 ⒉青霉素含量的计算是以第二次滴定终点为 依据，此时青霉素与巯基汞化物的摩尔比 为1∶1 ⒊水解必须完全 ⒋空白实验目的为了消除供试品中可能存在 的降解产物的干扰 ⒌汞量法不需要青霉素标准品作对照
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2. 硫酸-硝酸呈色反应
头孢菌素能与硫酸 - 硝酸反应后呈色， 可用于区别某些头孢菌素族抗生素。 如： 头孢噻吩钠呈红色 头孢氨苄呈黄色 头孢噻肟钠呈亮黄色
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3．茚三酮反应
某些具有α-氨基的本类药物，如： 氨苄西林遇茚三酮即显蓝紫色。
4. 与斐林试剂反应
本类药物具有类似肽键（–CONH–） 结构，可产生双缩脲反应。开环分解， 使碱性酒石酸铜盐还原显紫色。
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l有关物质
取本品适量，精密称定，加水制成 每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品液；精密 量取适量，加水定量稀释制成每1ml中约含10ug 的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱 条件，去对照溶液10ul注入液相色谱仪，调节检 测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满 量程的20%。
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碱化 提取 稀乙醇 三硝基苯酚 二苄基乙二胺
△
二苄基乙二胺苦味酸盐结晶
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三、含量测定
（一）碘量法 青霉素或头孢菌素分子不消耗碘， 其降解产物消耗碘。例如青霉素族经 碱水解后产生青霉噻唑酸可与碘作用， 根据消耗的碘量计算青霉素的含量。
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反应分两步：
⑴ NaOH 青霉素 水解 ⑵ 青霉素噻唑二钠
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【检查】 酸度 取本品，加水制成每1ml 中含20mg的溶液，依法测定（附录VI H）,pH 值 应为5.0~7.0。 l 溶液的澄清度与颜色 取本品5份，各0.6g,分 别加水5ml溶解后，溶液应澄清无色（附录IX A 第一法）；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录 IX B）比较，均不得更浓。
第十一章
抗生素类药物的分析
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β-内酰胺类抗生素
【掌握】主要的鉴别试验。 【熟悉】化学结构和性质。 【了解】含量测定方法中的碘量法、
电位配位滴定法、硫醇汞盐法。
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氨基糖甙类抗生素
【掌握】麦芽酚反应、坂口反应及主
要的鉴别试验。 【熟悉】化学结构与性质。 【了解】杂质检查和含量测定方法
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2．N-甲基葡萄糖胺反应 （Elson-Morgan）反应
链霉素经水解，产生N-甲基葡萄 糖胺，在碱性溶液中与乙酰丙酮缩合 成吡咯衍生物，与二甲氨基苯甲醛的 酸性醇溶液（Ehrlich试剂）反应，即 生成红色缩合物。 此反应常称为Elson-Morgan反应。
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3．麦芽酚（Maltol）反应
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（三）沉淀反应
1．在稀盐酸中生成白色沉淀
水 青霉素钾/钠 2gtt 溶解 稀盐酸 白↓
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2．有机胺盐的特殊反应
（1） 重氮化-偶合反应： 普鲁卡因青霉素水溶液酸化后，显 普鲁卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反应， 生成偶氮染料红色沉淀。
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（2）与三硝基苯酚的反应：
NaOH 苄星青霉素 乙醚 乙醚液 冷却 蒸去乙醚
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l比旋度
取本品，精密称定，用磷酸盐缓冲溶 液（取1mol/L磷酸二氢钾溶液，用10mol/L氢氧 化钾溶液调节pH值至6.0）-乙腈（90：10）溶解 并定量稀释成每1ml中含30mg的溶液，依法测定 （附录VI E ），比旋度为-30°至-38°。
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l【鉴别】
（1）取本品约10mg，加水2ml与盐酸羟胺 溶液[取34.8%盐酸羟胺溶液1份，醋酸钠-氢氧化钠溶液 （取醋酸钠10.3g与氢氧化钠86.5g，加水溶解使成 1000ml）1份，乙醇4份，混匀]3ml，振摇溶解后，放置 5分钟，加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显红棕色。 l（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主 峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
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（三）酸碱滴定法
青霉素或头孢菌素的β-内酰胺环 可被碱水解，此步水解系定量完成， 可用于含量测定。例如苯唑西林钠。
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（四）可见-紫外分光光度法
硫酸汞盐法的原理为：青霉素族抗 生素在咪唑的催化下与氯化高汞能定量 地反应转化成相应的青霉烯酸硫醇汞盐， 在324～345nm波长范围内有最大吸收。 例如氨苄西林钠。
l精密量取供试品溶液和对照品溶液各10ul，分