【西大2017版】[1138 ]《生物技术制药概论 》网上作业及课程考试复习资料(有答案]

1：[论述题]
基因工程的基本流程是什么？
参考答案：
2：[论述题]
举出三种当前流行的单克隆抗体药物名称和适应症
参考答案：
阿达木单抗：商品名修美乐（Humira），是抗人肿瘤坏死因子(TNF)的人源化单克隆抗体，是人单克隆D2E7重链和轻链经二硫键结合的二聚物。

由英国Cambridge Antibody Technology(CAT)与美国雅培公司联合研制，2003年1月首次在美国上市，随后相继在德国、英国和爱尔兰获准上市。

主要用于治疗类风湿性关节炎和强直性脊柱炎。

利妥昔单抗：利妥昔单抗( rituximab, RTX, 商品名美罗华) 是1997年被批准用于治疗肿瘤的抗CD20人鼠嵌合型单克隆抗体, 其在治疗B 细胞性淋巴瘤中已显示出优越的疗效和良好的治疗耐受性。

随着对B细胞及其作用机制认识的深入, 利妥昔单抗的治疗范围已从B细胞恶性肿瘤扩展至类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、特发性血小板减少性紫癜等自身免疫性疾病。

曲妥珠单抗：曲妥珠单抗（Herceptin/ 赫赛汀）是一种人源化针对HER-2 受体的单克隆抗体，2002年美国FDA 批准Herceptin 使用，曲妥珠单抗通过拮抗肿瘤细胞生长信号传导从而抑制肿瘤生长、影响细胞周期、下调肿瘤细胞表面HER-2蛋白表达及减少VEGF产生等途径发挥作用，适用于HER-2过表达的乳腺癌。

3：[论述题]
简述生物技术在制药领域的应用
参考答案：
利用基因工程技术生产多肽/蛋白质类药物或疫苗；利用蛋白质工程制造新型活性多肽/蛋白
类药物；利用细胞工程技术制备抗体类药物；利用酶工程技术获得活性药物分子或药物中间体；利用发酵工程提高生产工艺水平；现代生物技术在新药研发中的作用.
4：[论述题]
单克隆抗体的优点与缺点分析
参考答案：
优点：①McAb为高纯度单一抗体，在氨基酸序列以及特异性方面均为一致，检测灵敏度极高；②可以通过杂交瘤细胞的大规模培养进行生产；③杂交瘤细胞可以用液氮深冻法进行长期保存；④可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受体；⑤可以用不纯的抗原制备纯的McAb。

缺点：①McAb特异性太强，有时不能检出微生物突变株；②有时不能产生与抗原交联的功能；③易受pH、温度及盐浓度的影响，或亲和力较低、半衰期短；④McAb制备程序复杂、工作量大。

因此，可以采用常规抗体解决的问题就无须制备McAb。

5：[论述题]
比较转化、转导、转染三种不同方式基因导入宿主的方法？
参考答案：
转化作用（transformation）：将携带某种遗传信息的DNA引入宿主细胞，通过DNA之间同源重组作用，获得具有新遗传性状生物细胞的过程称为转化作用。

转化是生物界客观存在的自然现象。

转导作用（transduction）：自然界中，通过噬菌体或病毒的感染作用将一个细胞的遗传信息传递到另一个细胞的过程称为转导（transduction）。

即通过噬菌体（病毒）颗粒感染，把DNA导入被感染的宿主细胞的过程。

转染作用（transfection）：转染作用是将外源DNA分子导入真核细胞的过程，原核生物中转化的同义词。

6：[论述题]
目的基因的制备方法有哪些？
参考答案：
答案：从基因组中直接分离；通过RNA合成DNA；基因的化学合成；聚合酶链反应（PCR）钓取。

7：[论述题]
简述基因工程药物的分离纯化原则。

参考答案：利用蛋白质的不同物理化学特性选择所用的分离纯化技术；早期阶段要尽量减少处理的体积，方便后续的纯化；在纯化的后期阶段，再使用造价高的纯化方法。

8：[论述题]
简述或者图示基因工程制药的基本流程。

参考答案：
基因工程药物的生产涉及DNA重组技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大部分。

上游技术指的是外源基因重组、克隆后表达的设计与构建（狭义基因工程）；下游技术则包括含有重组外源基因的生物细胞（基因工程菌或细胞）的大规模培养以及外源基因表达产物的分离纯化、产品质量控制等过程。

广义的基因工程是一个高度统一的整体，上游DNA重组的设计必须以简化下游操作工艺和装备为指导思想，而下游过程则是基因工程蓝图的体现和保证，这是基因工程产业化的基本原则。

1：[填空题]
名词解释: 生物技术药物；PCR；单克隆抗体；质粒；培养基；GLP; 基因工程；抗体药物；发酵工程；GMP
参考答案：
生物技术药物：生物技术药物（biopharmaceutics）是利用生物体、生物组织、细胞或其成分，综合应用生物学、生物化学与分子生物学、微生物学与免疫学、物理化学与工程学和药学的原理与方法加工制造而成的一大类用于预防、诊断、治疗和康复保健的制品。

质粒：质粒（plasmid）是染色体外能独立自主复制并遗传的环状双链DNA分子。

单克隆抗体：由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。

PCR：在四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）存在下，以寡聚核苷酸为引物及单链DNA为模板，经DNA聚合酶催化合成DNA上互补链的过程称为聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR ）技术。

培养基：培养基（Medium）是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。

GLP：GLP (Good laboratory practice of drug) 药品非临床研究质量管理规范。

指对从事实验研究的规划设计、执行实施、管理监督和记录报告的实验室的组织管理、工作方法和有关条件提出的法规性文件。

基因工程：又称基因拼接技术或DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。

抗体药物：用于治疗的单克隆抗体、抗体片段、基因工程改造的抗体、免疫偶联物以及融合蛋白均可统称为抗体药物（antibody-based drugs）。

发酵工程：发酵工程(fermentation engineering)又称为微生物工程，是利用微生物制造工业原料与工业产品并提供服务的技术，是生物技术的基础工程。

GMP：药品生产质量管理规范，其英文名称为good manufacturing practices for drugs,简称GMP，于1962年首先由美国食品药品管理局（FDA）提出作为药品质量管理的法定性文件。

1：[论述题]
如何进行发酵工艺的控制？
参考答案：答案：包括培养基，溶氧，pH和温度等多参数的控制。

2：[论述题]
生物技术药物的质量标准研究的主要内容是什么？
参考答案：
答案：研究生物技术药物产品的均一性；研究建立生物技术药物产品生物学活性或者免疫学活性测定方法；．研究建立生物技术药物产品的国家标准品或参考品；建立生物技术药物目标产品生产相关杂质限量分析方法和标准；在以上研究的基础上制定出保证上述生物技术药物产品安全有效并与WHO标准相一致的质量控制标准和药物分析方法。

3：[论述题]
基因工程制药常见的三大表达系统各有哪些优缺点？
参考答案：
大肠杆菌表达体系酵母表达体系哺乳动物细胞表达体系
优点遗传背景清晰、成本低
廉、可选载体及宿主多细胞生长快、易于培养、
遗传操作简单、使用穿
梭质粒载体、能对蛋白
质进行正确加工、修饰、
合理的空间折叠
产物最接近于天然蛋白、
易纯化、扩增和表达能力
高、耐较高的剪切力和渗
透压力、内源蛋白分泌少
缺点缺乏翻译后修饰加工，
信号肽不能切掉，不能
分泌表达、不能糖基化产物蛋白质不均一、信
号肽加工不完全、内部
降解、易形成多聚体
技术要求高、生产成本
高、生产规模小
4：[论述题]
系统分析你掌握的几种重组阳性克隆子的筛选和鉴定方法参考答案：
（1）．根据重组子遗传重组表型改变的筛选法
1）利用抗生素抗性基因进行筛选
2）通过α互补使菌产生颜色来筛选
3）利用报告基因筛选克隆子
（2）．根据重组子结构特征的筛选法
1）琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小
2）限制性内切酶分析
3）印迹杂交方法
4）PCR法
（3）．根据目的基因表达产物采用免疫化学方法筛选。

5：[论述题]
6. 生物技术药物与化学药物的主要区别是什么？
参考答案：
答案：原料来源不同；技术方法不同；活性检测不同；质量控制标准不同。

6：[论述题]
蛋白质含量测定的方法有哪些？
参考答案：
蛋白含量主要用于原液比活性计算和成品规格控制，测定方法主要有Folin-酚试剂法（Lowry法）、染色法（Bradford法）、双缩脲法、紫外吸收法、HPLC法、荧光法和凯氏定氮法等，其中Lowry法和Bradford法是质量检定中常用方法.
7：[论述题]
查阅并分析你所知道的至少四种生物技术药物（至少含重组蛋白药物、抗体药物、疫苗各一种等）的药学知识与应用（名称、、适应症、作用机理、上市公司概况、应用分析等）。

参考答案：查阅药品批准信息或者网站信息，分析每一种药物相关资料得5分（名称、、适应症、作用机理、上市公司概况、应用分析等），4个药物共20分。