第二章 微生物的保护和保藏
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法一、原理：1.休眠状态：微生物菌种在低温下可进入休眠状态，减缓代谢活动，延长存活时间。
2.冷冻保存：通过降低温度到零下或较低的温度，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
3.干燥保存：通过去除菌种周围的水分，降低微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
4.冻干保存：先冷冻再干燥保存，通过冷冻降低微生物体内的水分活性，再通过干燥去除冻结水，使菌种能在实验室条件下保存较长时间。
二、方法：1.冷冻保存：（1）使用离心管或培养管制备菌种的蛋白质保护液，可以是细胞培养基、缓冲液等。
（2）将培养物转移到保护液中，使其悬浮均匀。
（3）加入保护剂，如甘油或DMSO（二甲亚砜），提高菌种的冷冻抵抗力。
（4）将混合物分装到小容器或冻存管中。
（5）使用特定的冷冻方案，将菌种快速冷冻，并存储在低温下，通常为零下80℃或更低的温度。
2.干燥保存：（1）用无菌技术转移到无菌条件下的试管中。
（2）将菌种培养在无菌的固体培养基上。
（3）收集培养物，将其平均分布在无菌试管或培养皿中。
（4）将试管或培养皿放在无菌的通风柜中，使培养物在无菌环境下干燥。
（5）将干燥的培养物贮存在干燥无菌容器中。
3.冻干保存：（1）将培养物转移到无菌离心管或培养皿中。
（2）使用细菌培养基将菌种制备为细菌悬浮液。
（3）在细菌悬浮液中加入保护剂，如蔗糖或甘露醇。
（4）将混合物分装到冻干瓶中。
（5）使用低温冷冻机将菌种冷冻为固体，再将其放入冻结干燥机中进行冻干。
（6）将冻干的菌种贮存在密封的冻干瓶中。
4.长期保存：通常，冷冻保存和冻干保存可以实现长期保存，但仍需定期检测和维护保存条件。
在微生物菌种保藏过程中，还需注意以下几点：1.选择合适的保存条件：根据菌种的特性和要求，选择适宜的保存方法和温度。
2.制备合适的保存液：保存液的配方和pH值应与菌种相适应，以保证菌种的存活和精确性。
3.保持无菌操作：在菌种保藏过程中，需保持无菌操作，以防止细菌污染。
细菌学检验-2-微生物菌种的保藏及保管
一、菌种保藏的注意事项
一般应保藏于低温、清洁和干燥处。 无菌操作。 根据菌种状况及时转接。 控制传代次数。 选择典型菌落，防止盲目传代。 受损、衰退、变异细菌需复壮。 用培养基保藏菌种时，应保藏两套。
二、菌种的分类
依据微生物危险程度的大小，分为：
一类：危险程度最高。如：霍乱弧菌 二类：危险程度较高。如：结核分枝杆菌 三类：仅具有一般危险性。如：葡萄球菌 四类：低致病性微生物菌种。如：疫苗
常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、 麸皮、磁珠和滤纸片等。
适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏， 保藏时间几至十几年。
（三）冷冻真空干燥保藏法
是将要保藏的微生物样品先经低温预冻， 然后在低温状态下进行减压干燥。
加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真 空干燥。
适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种 存活时间长，是目前常用的保藏方法。
用于目前尚不能在人工培养基上生长的 微生物。
如：立克次体、病毒等。
四、微生物菌种保藏机构
菌加以 妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以 及便于研究、交换和使用的目的。
四、微生物菌种保藏机构
菌种保藏机构：
中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL）
第二章第九节
微生物菌种的保藏及保管
菌种保藏的目的：
①存活，不丢失，不污染 ②防止优良性状丧失 ③随时为生产、科研提供优良菌种
原理：
选用优良的纯种（最好是休眠体，如分生 孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活 动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变 的环境条件。
其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等）
微生物菌种保藏方法及关键技术
目录
01 一、微生物菌种保藏 方法
02
二、微生物菌种保藏 关键技术
03
三、应用实践及注意 问题
04 四、结论
05 参考内容
微生物菌种是生物科学领域中的重要资源，它们具有广泛的工业和医学应用价 值。然而，微生物菌种的保存和保藏是一项充满挑战性的任务，因为微生物细 胞的生命周期短暂，且对环境条件极为敏感。为了更好地利用和保护这些珍贵 的资源，本次演示将详细介绍微生物菌种保藏方法及关键技术。
2、需要根据菌种的特性和应用需求，选择合适的培养基和培养条件，以保证 菌种的活性和稳定性。
3、在使用液氮保藏方法时，需要注意液氮的纯度和保存容器的密封性等问题， 以免影响菌种的存活率和保藏效果。
4、在菌种保藏过程中，需要注意防止杂菌污染和交叉感染等问题，以保证菌 种的纯度和质量。
5、需要注意菌种的定期检测和维护，及时发现并处理衰退和失活的菌种，以 保持菌种种群的健康和稳定。
三、应用实践及注意问题
在实际应用中，不同微生物菌种的保藏方法具有各自的优势和适用范围。一般 来说，对于一些常见的微生物种类，如细菌、酵母和霉菌等，冷冻保藏和液氮 保藏是常用的保藏方法。在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的保藏方 法和操作条件。此外，还需要注意以下问题：
1、在菌种保藏过程中，需要注意菌种的来源和背景信息的记录和整理，以便 更好地了解菌种的特性和进行相应的管理。
2、种子管理
种子管理是微生物菌种保藏的关键环节之一。良好的种子管理包括对菌种的纯 度、质量、稳定性和活性的监控和维护。在菌种保藏过程中，需要定期对菌种 进行纯度检测，确保菌种的纯度和质量。同时，需要根据菌种的生长特性和环 境条件，制定相应的管理措施，包括培养基的选择、培养温度和湿度的控制等， 以维持菌种的稳定性和活性。
微生物菌种的保藏方法
微生物菌种的保藏方法1微生物菌种的保藏微生物菌种的保藏是生物学研究的重要环节，它也是生物资源的基础。
微生物的保藏需要充分的考虑长期保藏的要求，能有效防止细菌的腐败，缩短菌株检疫和检测所需的时间，还可以提高细菌新特征的研究成果。
但是，由于不同物种之间的差异性，微生物菌种的保藏可能涉及各种复杂的方法，需要更加正确和有效的保藏来保护和维护菌株。
1.1定期替换培养基微生物菌种的保藏通常使用加入防腐剂的培养基进行贮藏，但是由于长时间的贮藏，培养基的成分会逐渐减少，菌株也会逐渐衰老，这可能会影响到菌株的存活率和活跃度。
所以，贮藏前应加入新鲜的培养基和抗生素，定期替换新鲜培养基，以保证菌株的流动性。
1.2贮存条件的控制正确控制贮存条件，如温度、湿度、控制空气的酸碱度等，可以使菌株的活跃性或存活率保持最佳状态。
一般来说，细菌能够在室温（25度）下长期贮存，但是会减慢其增殖和繁殖的速度，同时还要注意湿度，太过潮湿会使细菌存活率降低，尤其是嗜水性细菌；而太过干燥则会造成菌株衰老，影响菌株的存活率并降低其活力。
1.3贮藏容器的选择贮藏容器也是微生物菌种保藏的重要组成部分，不同种类的细菌需要不同种类的容器来保存。
一般来说，普通细菌能够在塑料袋或瓶中长期贮存，只需每隔一段时间就更换新的瓶或袋，但对于致病细菌则必须使用带有封闭口的易破袋。
1.4贮藏环境的更新贮藏环境的更新也是保藏细菌的重要环节。
定期更换菌种本身的培养环境，例如移动菌瓶到新的室温，或将菌瓶置于新的室温环境中，可以有效提高菌种的活跃性，同时也可以更换新的培养基和抗生素，定期更新贮藏环境，有效规避细菌衰老的问题，确保细菌的存活率和增殖率。
以上就是微生物菌种的保藏方法，主要涉及到定期替换培养基、贮存条件的控制、贮藏容器的选择以及环境的更新等，只有正确地运用它们，才能确保菌株的存活率和活动性。
PPT-微生物资源的收集和保藏
微生物资源的收集和保藏张道锋上海交通大学农业与生物学院食品安全与微生物实验室2015.1内容提要1.微生物资源分布2.样品收集和处理3.预处理和选择性培养基4.获得纯培养和初步鉴定5.新物种的识别和鉴定6.菌种保藏和编号7.相关机构和网站8.系统分类学简介微生物资源分布普通环境, 33, 21%植物, 5,3%临床样本,85, 55%动物, 27, 18%不详, 5, 3%矿地水池, 1, 1%有机污染土壤, 5, 3%河流, 5, 3%土壤, 20, 13%尘埃, 2, 1%牛, 5, 3%鱼, 8, 5%猴, 2, 1%其他, 12, 8%水苔,5, 3%痰, 28, 19%组织洗液, 9, 6%组织, 31, 21%伤口感染,6, 4%排泄物, 4, 3%其他, 7, 5%分枝杆菌160多个物种的来源分布样品收集和运输原则：避免外源污染；避免长途运输造成目标群体的消亡样品收集样品运输预处理和选择性培养基•分离目的：定向分离，分离未知菌，分离“混合菌”•基本原则：获得目的菌，排除非目的菌•预处理：富集，减少非目的菌，促进萌发，促进释放；干热，湿热，增菌，噬菌体，表面活性剂，机械破碎，震荡均质……•选择性培养基：针对分离目的选择，pH，盐浓度，特殊营养物质，抑制剂•其他因素：氧气、温度、培养时间获得纯培养和初步鉴定•纯培养：只有一种微生物的培养物，都由一个细胞产生（狭义）；广义？•初步鉴定：生理生化反应，分子标记（16S rRNA，特异靶点）新物种的识别和鉴定•可能的新物种：独特的属性（生理生化，分子）•证据：16S rRNA similarity≤97%；DDH ≤ 70%；ANI ≤ 95%•鉴定：生理生化，细胞化学，分子特征：多相分类EZbioCloud菌种保藏和编号•菌株定义：待选，初入选，入选，模式菌株，专利或生产菌株•编号：自己可读：123，a12，a1-2-b ，M2-4-5实验室可读：ABC001-ABC999国际可读：DSM 45643T ，ATCC 25923T ，CCTCC AA 209045，SJTUF10781菌种保藏•悬液保存（常温）•液体石腊保存（常温）•沙土管保存（有孢子或芽胞）•甘油保存（-70℃、-20℃）•冻干保存（5℃）•液氮保存（甘油管）普通冰箱，超低温冰箱，冷库，组合式冷柜，液氮柜相关机构和网站菌种保藏中心---《布达佩斯条约》•中国典型培养物保藏中心（CCTCC ）•中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)•美国典型微生物菌种保藏中心（ATCC)•德国微生物菌种保藏中心（DSMZ ）•台湾生物资源保存及研究中心（BCRC ）•韩国典型菌种保藏中心(KCTC)•法国巴斯德菌种保藏中心(CIP)•日本微生物菌种保藏中心(JCM)国内其它保藏中心•中国医学细菌保藏管理中心：CMCC•中国工业微生物菌种保藏管理中心：CICC •中国农业微生物菌种保藏管理中心：ACCC •中国海洋微生物菌种保藏管理中心：MCCC •YIM，SCSIO，及其它地方单位保藏中心DSMZStraininfoBiosafety Level•一级低个体危害，低群体危害对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。
动物病原微生物菌(毒)种保藏管理办法(农业部令第16号)
动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（农业部令第16号）动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法(农业部令第16号)2008年11月4日农业部令第16号公布，农业部令2016年第3号修订。
第一章总则第一条为了加强动物病原微生物菌（毒）种和样本保藏管理，依据《中华人民共和国动物防疫法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《兽药管理条例》等法律法规，制定本办法。
第二条本办法适用于中华人民共和国境内菌（毒）种和样本的保藏活动及其监督管理。
第三条本办法所称菌（毒）种，是指具有保藏价值的动物细菌、真菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次氏体、螺旋体、病毒等微生物。
本办法所称样本，是指人工采集的、经鉴定具有保藏价值的含有动物病原微生物的体液、组织、排泄物、分泌物、污染物等物质。
本办法所称保藏机构，是指承担菌（毒）种和样本保藏任务，并向合法从事动物病原微生物相关活动的实验室或者兽用生物制品企业提供菌（毒）种或者样本的单位。
菌（毒）种和样本的分类按照《动物病原微生物分类名录》的规定执行。
第四条农业部主管全国菌（毒）种和样本保藏管理工作。
县级以上地方人民政府兽医主管部门负责本行政区域内的菌（毒）种和样本保藏监督管理工作。
第五条国家对实验活动用菌（毒）种和样本实行集中保藏，保藏机构以外的任何单位和个人不得保藏菌（毒）种或者样本。
第二章保藏机构第六条保藏机构分为国家级保藏中心和省级保藏中心。
保藏机构由农业部指定。
保藏机构保藏的菌（毒）种和样本的种类由农业部核定。
第七条保藏机构应当具备以下条件：（一）符合国家关于保藏机构设立的整体布局和实际需要；（二）有满足菌（毒）种和样本保藏需要的设施设备；保藏高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本的，应当具有相应级别的高等级生物安全实验室，并依法取得《高致病性动物病原微生物实验室资格证书》；（三）有满足保藏工作要求的工作人员；（四）有完善的菌（毒）种和样本保管制度、安全保卫制度；（五）有满足保藏活动需要的经费。
沈萍微生物学第二章
放线菌形态
放线菌生活史
放线菌孢子丝
2、古细菌
3. 原核生物的细胞大：纳米（nm10－9m） 细胞大小的形象比较
大肠杆菌：0.5×2um 芝麻：3mm
常见细菌的大小
球菌：直径 0.5×2um 杆菌：宽×长 0.5～1×1～5um 螺形菌：宽×长 0.5～1×1～50um
六，微生物的保藏技术 1.保藏的目的 2.保藏的原理 3.保藏的方法 传代培养 4℃ 冷冻保藏 -196℃， - 70℃ ， -20~-30℃ 干燥保藏 沙土管，安瓿管 其他方法
第三节
显微镜下的微生物
一， 细菌
细菌的定义： 以二分裂为主要繁殖方式的单细胞原核 微 生物。 1.细菌的形态和排列 三种基本形态：
杆菌
杆菌的基本形态
短杆状、长杆状、棒杆状、梭状杆状、月亮状、竹节状 等；按杆菌细胞繁殖后的排列方式则有链状、栅状、 “八”字状等
杆菌细胞的排列方式
链杆、栅状、八字状、鞘衣包裹的丝状等
短杆菌
长杆菌
梭状芽孢杆菌
Scanning electron micrographs illustrating external features of the rodshaped bacterium E. coli.
球状
一个分裂面 二个分裂面 三个分裂面 无定向分裂面
单杆，链杆，栅状 ，八字 弧菌，螺旋菌
杆状， 螺旋状
单球菌
细胞分裂沿一个平面进行， 新个体分散而单独存在. 如尿素微球菌
显微镜下示意图
双球菌
细胞沿一个平面分裂， 新个体成对排列. 如肺炎双球菌
四联球菌
细胞分裂是沿两个相垂直的平 面进行，分裂后每四个细胞特 征性地连在一起，呈田字形. 如四联微球菌
动物病原微生物菌(毒)种保藏管理办法
动物病原微生物菌(毒)种保藏管理办法中华人民共和国农业部令第16号《动物病原微生物菌(毒)种保藏管理办法》已经2008年11月4日农业部第8次常务会议审议通过,现予发布,自2009年1月1日起施行。
部长 孙政才二★★八年十一月二十六日第一章 总 则第一条 为了加强动物病原微生物菌(毒)种和样本保藏管理,依据《中华人民共和国动物防疫法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《兽药管理条例》等法律法规,制定本办法。
第二条 本办法适用于中华人民共和国境内菌(毒)种和样本的保藏活动及其监督管理。
第三条 本办法所称菌(毒)种,是指具有保藏价值的动物细菌、真菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次氏体、螺旋体、病毒等微生物。
本办法所称样本,是指人工采集的、经鉴定具有保藏价值的含有动物病原微生物的体液、组织、排泄物、分泌物、污染物等物质。
本办法所称保藏机构,是指承担菌(毒)种和样本保藏任务,并向合法从事动物病原微生物相关活动的实验室或者兽用生物制品企业提供菌(毒)种或者样本的单位。
菌(毒)种和样本的分类按照《动物病原微生物分类名录》的规定执行。
第四条 农业部主管全国菌(毒)种和样本保藏管理工作。
县级以上地方人民政府兽医主管部门负责本行政区域内的菌(毒)种和样本保藏监督管理工作。
第五条 国家对实验活动用菌(毒)种和样本实行集中保藏,保藏机构以外的任何单位和个人不得保藏菌(毒)种或者样本。
第二章 保藏机构第六条 保藏机构分为国家级保藏中心和省级保藏中心。
保藏机构由农业部指定。
保藏机构保藏的菌(毒)种和样本的种类由农业部核定。
第七条 保藏机构应当具备以下条件:(一)符合国家关于保藏机构设立的整体布局和实际需要;(二)有满足菌(毒)种和样本保藏需要的设施设备;保藏高致病性动物病原微生物菌(毒)种或者样本的,应当具有相应级别的高等级生物安全实验室,并依法取得《高致病性动物病原微生物实验室资格证书》;(三)有满足保藏工作要求的工作人员;(四)有完善的菌(毒)种和样本保管制度、安全保卫制度;(五)有满足保藏活动需要的经费。
动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（2022年修订）-农业农村部令2022年第1号
动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（2022年修订）正文：----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（2008年11月26日农业部令第16号公布，2016年5月30日农业部令2016年第3号、2022年1月7日农业农村部令2022年第1号修订。
）第一章总则第一条为了加强动物病原微生物菌（毒）种和样本保藏管理，依据《中华人民共和国动物防疫法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《兽药管理条例》等法律法规，制定本办法。
第二条本办法适用于中华人民共和国境内菌（毒）种和样本的保藏活动及其监督管理。
第三条本办法所称菌（毒）种，是指具有保藏价值的动物细菌、真菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次氏体、螺旋体、病毒等微生物。
本办法所称样本，是指人工采集的、经鉴定具有保藏价值的含有动物病原微生物的体液、组织、排泄物、分泌物、污染物等物质。
本办法所称保藏机构，是指承担菌（毒）种和样本保藏任务，并向合法从事动物病原微生物相关活动的实验室或者兽用生物制品企业提供菌（毒）种或者样本的单位。
菌（毒）种和样本的分类按照《动物病原微生物分类名录》的规定执行。
第四条农业农村部主管全国菌（毒）种和样本保藏管理工作。
县级以上地方人民政府畜牧兽医主管部门负责本行政区域内的菌（毒）种和样本保藏监督管理工作。
第五条国家对实验活动用菌（毒）种和样本实行集中保藏，保藏机构以外的任何单位和个人不得保藏菌（毒）种或者样本。
第二章保藏机构第六条保藏机构分为国家级保藏中心和省级保藏中心。
保藏机构由农业农村部指定。
保藏机构保藏的菌（毒）种和样本的种类由农业农村部核定。
第二章菌种选育、保藏与复壮
（一）样品采集
① 原则
样品来源越广泛，获得新菌种的可能性越大。
② 土壤采样方法
土壤的细有菌机、质放线含菌量：和耕通地风、状菜园况和（近5～郊土25壤cm；深度） 土壤的酵p母H和菌植：果被园状树况根的土壤中；
•pH＜7.0 ：霉菌、酵母菌居多 地理条霉件 菌：动植物残体及霉腐土层中； 季•p节H7.条0黑件～曲7.霉5：：细稻菌场、、谷放物线堆菌积丰处富。
黑曲霉
黑曲霉 栖土曲霉 根霉 毛霉 青霉菌 木霉菌 黄曲霉菌 红曲霉
产物 谷氨酸 肌苷酸 淀粉酶 蛋白酶
葡萄糖异构酶
酒精 单细胞蛋白 乳糖酶 柠檬酸 柚苷酶、酸性蛋白
酶 单宁酶、糖化酶 蛋白酶 糖化酶、甾体激素 蛋白酶 葡萄糖氧化酶 纤维素酶 淀粉酶 糖化酶、红曲色素
用途 食用、医药 食用、医药 葡萄糖、糊精、酒精发酵、啤酒酿造 酱油速酿、饲料
❖ 控制传代次数：不超过7代，易变异的不过5代 ❖ 砂土管、冻干管保藏的原种，开启不能超过3次，以防污染。 ❖ 选择良好保藏方法：保证菌不死、不衰、保存活性及原有典型性状 ❖ 良好的培养条件：注意斜面菌株的培养条件（保藏、活化培养基） ❖ 采用不同类型的细胞进行接种
产孢子霉菌 细菌
二、菌种的复壮
❖ 自然选育的定义
利用微生物在一定条件下产生自发变异，通过分离、筛选，排除劣质性 状的菌株，选择出维持原有生产水平或具有更优良生产性能的高产菌株， 达到纯化与复壮菌种、保持稳定生产性能的目的。其主要原理是微生物 群体分离。
❖ 自然选育的方法
（1）通过表现形态淘汰不良菌株； （2）考察目的代谢产物产量； （3）进行遗传基因型纯度试验，考察菌种纯度； （4）传代稳定性试验：斜面传3-5代。
❖ 菌种退化的主要表现 ① 产量下降，目的代谢产物减少，原料转化率下降； ② 生长速度缓慢，目的代谢产物合成能力下降，发酵周期延长； ③ 产孢子能力变弱，孢子形成数量减少； ④ 抗逆性减弱； ⑤ 形态畸形等。
微生物的保藏原理
微生物的保藏原理微生物的保藏原理：微生物保藏是指将微生物保存在适当的环境下，以保持其活力和遗传特性的一种方法。
微生物保藏的目的是为了长期保存有用的微生物资源，以供科学研究、工业应用和教学实验等方面的需要。
一、低温冷冻保藏：低温冷冻保藏是常用的微生物保藏方法之一。
它的原理是通过将微生物培养物暂停在低温环境中，减缓其新陈代谢并有效抑制微生物的繁殖。
常见的低温保藏方法有甘油冻存和液氮冻存。
甘油冻存是将微生物培养物加入含有甘油溶液的冻存管中，然后经过特定的冷冻程序，将培养物保存在低温下。
液氮冻存是将微生物培养物直接置于液氮中进行保藏。
这些低温冷冻方法可以长期保存微生物，并保持其原有的功能和特性。
二、真菌与酵母菌的干燥保藏：真菌和酵母菌常常通过干燥来进行保藏。
干燥保藏的原理是利用干燥条件下的低水分环境，抑制微生物的生长和代谢活动。
首先，将微生物培养物涂布在导电性载体上，然后置于无菌环境中进行干燥。
常见的干燥方法有热浸法和真空浸法。
热浸法是将微生物培养物置于高温环境中，利用蒸发的方式将水分去除。
真空浸法是将微生物培养物放置在真空环境中，通过降低压力使水分蒸发。
这些干燥方法可以在长时间内保存微生物，并保持其遗传特性和功能。
三、冷冻干燥保藏：冷冻干燥保藏是将微生物在冷冻状态下进行干燥，以提高微生物的保藏效果。
冷冻干燥的原理是先将微生物培养物冷冻，然后将其放置在真空环境中，通过升华的方式将水分去除。
这种方法可以在同时保持微生物活性的同时，减少微生物在干燥过程中受到的损伤。
冷冻干燥保藏方法适用于对微生物活性和遗传特性要求较高的保藏。
总结起来，微生物的保藏原理主要包括低温冷冻保藏、真菌与酵母菌的干燥保藏以及冷冻干燥保藏。
这些方法都能够有效地延长微生物的保存时间，并保持其活力和遗传特性，在科学研究和实际应用中起到重要的作用。
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在一定的条件下，以确保其持久的存活和繁殖能力。
微生物菌种的保藏可以用于科学研究、工业应用和生物资源保护等领域。
本文将介绍微生物菌种保藏的原理和方法。
微生物菌种保藏的原理主要包括冷冻保藏、干燥保藏和液氮冷冻保藏等。
冷冻保藏是将微生物菌种保存在低温条件下，常见的温度为-70℃或-80℃。
低温可以减缓微生物的新陈代谢过程，降低细胞内酶的活性，从而延缓细胞的老化和死亡。
冷冻保藏的关键是要使用适当的保藏液，如冻干保藏液、甘油保藏液等，以保护细胞在冷冻过程中的完整性和活力。
干燥保藏是将微生物菌种保存在无水或低水分条件下。
干燥可以通过脱水或真空干燥等方法实现。
干燥保藏的原理是通过降低细胞内水分含量，使微生物处于休眠状态，从而延缓细胞的代谢活动和老化过程。
干燥保藏的关键是要选择适当的干燥剂，如硅胶、脱水剂等，以吸附和吸收细胞内的水分。
液氮冷冻保藏是将微生物菌种保存在液氮温度下，常见的温度为-196℃。
液氮冷冻保藏的原理是通过极低的温度和极低的氧气浓度，使微生物处于极度低温和低代谢状态，从而延缓细胞的老化和死亡。
液氮冷冻保藏的关键是要使用适当的冷冻容器，如液氮罐、冷冻管等，以确保微生物菌种的长期保存。
微生物菌种保藏的方法包括冻干法、冷冻法、液氮冷冻法等。
冻干法是将微生物菌种培养物冻干后保存。
冻干法的步骤包括培养微生物菌种、制备冻干保藏液、将菌种混合冻干保藏液后冻干、密封保存。
冻干法保存的菌种可以长期保存，并且对于某些对冷冻保存敏感的微生物有一定的保护作用。
冷冻法是将微生物菌种保存在低温条件下。
冷冻法的步骤包括培养微生物菌种、制备冷冻保藏液、将菌种混合冷冻保藏液后冷冻、保存在低温条件下。
冷冻法保存的菌种可以长期保存，并且对于某些对冷冻保存敏感的微生物有一定的保护作用。
液氮冷冻法是将微生物菌种保存在液氮温度下。
液氮冷冻法的步骤包括培养微生物菌种、制备液氮保藏液、将菌种混合液氮保藏液后保存在液氮温度下。
发酵工程第2章2 菌种的选育与保藏
2.3传代保藏
将菌种定期在新鲜琼脂培养基上传代，然后在一定的 生长温度下生长和保存的传代保藏方法。
可用于实验室中若干菌种的保藏。 此法最为简单和经济，且不要求任何特殊的设备。 但此方法易发生培养基干枯、菌体自溶、基因突变。
2.3 传代培养法
实验原理：保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于 厌氧细菌）培养好后，置4C˚冰箱中存放，定期 进行传代培养、再存放。 可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体 石蜡来进一步延长保存期。
冷冻干燥过程中必须使用冷冻保护剂，目前国内常 用脱脂乳和蔗糖，国外尚有运用动物血清等。
大部分微生物菌种可以在冻干状态下保藏10年之久 而不丧失活力。而且经冻干后的菌株无需进行冷冻 保藏，便于运输。
培养物的冻干过程
冷冻真空干燥操作流程
配制保护剂 灭菌
菌种 培养 制备菌悬液
分装安培瓶 预冻
真空干燥 测定水分
操作方法 1、斜面保藏法 将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待其充分生长后，
用牛皮纸将棉塞部分包扎好（棉塞换成胶塞效果更好），置 4C˚冰箱中包藏。
保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放线菌及芽孢菌保 存2－4个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月， 假单胞菌两周传代一次。
此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏时间短、易 被污染。
加速保藏试验可用于预测保藏过程中保藏培养物的 稳定性。
在一给定温度下通过对高温下短期活力丧失程度检 测，可以用来预测嗜酸乳杆菌的稳定性。
成功的菌种长期保藏方法之有价值的指标包括：在 保藏6个月、1年或更长时间后存活百分率(或存活单 位)、细胞群体的形态学特征或一些特别的生化特征 应在菌种保藏前后保持同一性，以及实验室中、中 试车间中和生产发酵中产品滴度的稳定性，后者极 为重要。
第二章 工业菌种选育--菌种保藏(4)
(5) 冷冻干燥法 适用于各种微生物，其原理是在低温下迅速地将
细胞冻结以保持细胞结构的完整，然后在真空下使水 分升华干燥。
具体做法是将菌种制成悬浮液，与保护剂(一般 为脱脂牛奶或血清等)混合，放在安瓿瓶内，用低温 酒精或干冰使之速冻，在低温下用真空泵抽干，最后 将安瓿瓶真空熔封，低温保存备用。
2. 工业生产中使用的微生物菌种为什么会发生衰退? 菌种衰退表现在哪些方面? 防止菌种衰退的措施有哪 些?
砂土是砂和土的混合物，砂和土的比例一般为3： 2或1：1，将黄砂和泥土分别洗净，过筛，按比例混 合后，装入小试管内，装料高度约为l cm左பைடு நூலகம்，灭菌、 烘干。
将要保存的斜面菌种刮下，直接与砂土混合；或 用无菌水洗下孢子，制成悬浮液，再与砂土混合。混 合后的砂土管放在盛有五氧化二磷或无水氯化钙的干 燥器中，用真空泵抽气干燥后，放在干燥低温环境下 保存。
绝大多数微生物的菌种，保藏其休眠体（如孢子或芽孢）的效 果要优于营养体。
第二章 菌种的来源与保藏
二. 菌种保藏的方法
(1) 斜面低温保藏法 4 ℃冰箱中保存。一般的菌种均可用此方
法保存1～3个月. (2) 液体石蜡封存保藏法
在斜面菌种上加入蒸汽灭菌后的液体石 蜡，用量高出斜面1 cm，使菌种与空气隔绝， 试管直立，置于4℃冰箱保存。保存期约1年。 此法适用于不能以石蜡为碳源的菌种。
这样菌种的生长和代谢活动处于极低水平，不易 发生变异或死亡，因而能长期保存，一般为5～10年。
(6) 液氮超低温保藏法
微生物在-130 ℃ 以下，新陈代谢活动停 止，这种环境下可永久性保存微生物菌种。液 氮的温度可达，用液氮（-196 ℃）保存微生 物菌种已获得满意的结果。
思考与练习题
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
2、传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。
2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5克）置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤最大持水量的60%为宜），然后高压灭菌。
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在适宜的条件下，以保证其长期存活和遗传特性的保持。
微生物菌种的保藏有着重要的科研意义和应用价值，可以用于微生物学研究、新药研发、环境修复等领域。
微生物菌种保藏的原理主要包括冷冻保存和冷冻干燥保存两种方法。
冷冻保存是将微生物菌种存放在低温环境下，通过降低菌种代谢活动的速度来保持其存活和遗传特性。
冷冻保存的主要步骤包括选择合适的保藏液、培养菌种、制备冷冻物等。
保藏液一般是由无菌培养基和一定浓度的甘油或蔗糖组成，可以提供菌种所需的养分和保护菌体免受冷冻引起的损伤。
培养菌种时需要选择处于活跃生长期的菌株，通过适当的培养条件来使其保持较高的活力。
制备冷冻物时，可以将菌株转移到保藏液中，并在超低温环境下迅速冷冻。
冷冻干燥保存是将微生物菌种冻结后，通过真空干燥的方法除去水分，将菌种转变为无水状态，以提高其耐久性和保存时间。
冷冻干燥保存主要包括培养菌种、冻干物制备和密封保存等步骤。
培养菌种的方法与冷冻保存类似，选择合适的培养基和培养条件来培养活跃菌株。
冻干物制备时，将菌株转移到含有保护剂的培养基中，并通过冻结和真空干燥的过程除去水分，形成冻干物。
最后，将冻干物密封保存，避免受潮和污染。
微生物菌种保藏在实际操作中需要注意一些关键技术和管理要求。
首先，要确保保存的微生物菌株是原始菌株的纯种，并且具有所需的遗传特性。
其次，保藏液或冻干物储存容器应该具备良好的密封性能，以防止水分的进入和菌株的污染。
另外，保存的温度应该稳定在低温，通常为-80℃或更低的温度，以保证菌株的长期存活。
此外，对于长时间保存的菌株，应定期进行复苏培养，以确保其存活和活力。
总之，微生物菌种保藏是一项重要的技术，为微生物资源的保存和利用提供了有效的手段。
通过冷冻保存和冷冻干燥保存等方法，可以长期保留微生物菌种的遗传特性和活力，为微生物学研究和应用提供了可靠的资源。
在实际操作中，应遵循正确的步骤和管理要求，以确保菌种的质量和保存效果。
人间传染的病原微生物菌(毒)种保藏机构管理办法
人间传染的病原微生物菌（毒）种保藏机构管理办法第一章总则第一条为加强人间传染的病原微生物菌（毒）种（以下称菌（毒）种）保藏机构的管理，保护和合理利用我国菌（毒）种或样本资源，防止菌（毒）种或样本在保藏和使用过程中发生实验室感染或者引起传染病传播，依据《中华人民共和国传染病防治法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》（以下称《条例》）的规定制定本办法。
第二条卫生部主管全国人间传染的菌（毒）种保藏机构（以下称保藏机构）的监督管理工作。
县级以上人民政府卫生行政部门负责本行政区域内保藏机构的监督管理工作。
第三条本办法所称的菌（毒）种是指可培养的，人间传染的真菌、放线菌、细菌、立克次体、螺旋体、支原体、衣原体、病毒等具有保存价值的，经过保藏机构鉴定、分类并给予固定编号的微生物。
本办法所称的病原微生物样本（以下称样本）是指含有病原微生物的、具有保存价值的人和动物体液、组织、排泄物等物质，以及食物和环境样本等。
可导致人类传染病的寄生虫不同感染时期的虫体、虫卵或样本按照本办法进行管理。
编码产物或其衍生物对人体有直接或潜在危害的基因（或其片段）参照本办法进行管理。
菌（毒）种的分类按照《人间传染的病原微生物名录》（以下简称《名录》）的规定执行。
菌（毒）种或样本的保藏是指保藏机构依法以适当的方式收集、检定、编目、储存菌（毒）种或样本，维持其活性和生物学特性，并向合法从事病原微生物相关实验活动的单位提供菌（毒）种或样本的活动。
保藏机构是指由卫生部指定的，按照规定接收、检定、集中储存与管理菌（毒）种或样本，并能向合法从事病原微生物实验活动的单位提供菌（毒）种或样本的非营利性机构。
第四条保藏机构以外的机构和个人不得擅自保藏菌（毒）种或样本。
必要时，卫生部可以根据疾病控制和科研、教学、生产的需要，指定特定机构从事保藏活动。
第五条国家病原微生物实验室生物安全专家委员会卫生专业委员会负责保藏机构的生物安全评估和技术咨询、论证等工作。
食品发酵工程-2(微生物菌种的选育及保藏)
02
微生物菌种保藏
低温保藏法
总结词
通过降低温度来抑制微生物的生长和代谢，从而延长菌种保 藏时间。
详细描述
将微生物菌种保存在低温环境下，通常为-18℃至-70℃，可以 显著减缓菌种的生长和代谢速度，从而延长菌种保藏时间。低 温保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存。
干燥保藏法
总结词
通过去除水分来降低微生物的生存能 力，从而延长菌种保藏时间。
详细描述
将微生物菌种干燥至一定含水量，通常 为5%-10%，以降低菌种的生存能力。 干燥保藏法适用于耐干燥的微生物菌种， 如霉菌和酵母菌等。
冷冻真空干燥干燥保藏法
总结词
结合低温、干燥和真空条件来更有效地延长菌种保藏时间。
详细描述
在冷冻真空干燥机中，将微生物菌种在低温、真空条件下进行干燥处理，去除 水分，从而延长菌种保藏时间。冷冻真空干燥保藏法适用于对湿度敏感的微生 物菌种，如病毒和细菌等。
03
微生物菌种鉴定
形态学鉴定
总结词
通过观察微生物的形态、大小、颜色、生长速度等特征，初步判断微生物的种类。
详细描述
形态学鉴定是微生物鉴定的基础方法，通过显微观察，可以了解微生物的形态、大小、排列、运动性等特征，从 而判断其大致的分类。
生理生化鉴定
总结词
通过测定微生物对不同碳源、氮源、能源的利用以及产生的代谢产物，进一步确定微生物的种类。
详细描述
根据产物的性质选择合适的分离纯化方法，如离心、 过滤、萃取、沉淀等。通过实验确定最佳的工艺参数 和操作条件，以提高产物的纯度和收率。同时，可以 探索联合使用多种分离方法，以达到更好的分离效果 。
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对工业微生物生产菌种来说，建议保藏菌种的 形态学和生化特征(如代谢产物的产生、酶活 力、遗传特征及生化指标)应在保藏后加以检 测和确定。
加速保藏试验可用于预测保藏过程中保藏培养物 的稳定性。在一给定温度下通过对高温下短期活 力丧失程度检测，可以用来预测嗜酸乳杆菌的稳 定性。 成功的菌种长期保藏方法之有价值的指标包括在 保藏6个月、1年或更长时间后存活百分率(或存活 单位)。细胞群体的形态学特征或一些特别的生化 特征应在菌种保藏前后保持同一性，以及实验室 中、中试车间中和生产发酵中产品滴度的稳定性， 后者极为重要。
人类生态系统对微生物的影响
微生物资源保护的重要性
维持生态系统平衡 推动生物技术发展---生物酶等 基因资源库 大量微生物资源尚需发掘
微生物资源保护策略
天然微生物资源的保护 保护微生物的栖息生存环境 生产菌种和专利菌种的保护 知识产权保护 加强微生物资源保护法律法规建设和宣传工作 把微生物资源作为国家的战略资源来认识，开发 与保护并重
第二章 微生物资源的保护和保藏
一、微生物资源保护
微生物资源与人类生态系统 微生物资源保护的重要性 微生物资源保护策略
云南大学云南省生物资源保护与利用重点实验室
已建成西南微生物种质资源库、基因与蛋白、微生物发酵和次生代谢 产物研究平台。现拥有2栋独立科研大楼，总面积达5800平方米以 上。设备总值达3000多万元。 实验室的主要研究方向及研究领域为： （1）特色生物的物种与遗传多样性：特色生物的基因多样性，物种 演化和区系演变的规律及其与地理环境变化的关系；动物、植物与微 生物协同进化的关系与规律；特色生物资源保护的策略。 （2）资源微生物利用的基础理论与关键技术：具重要应用前景的微 生物资源评估和生物学基础研究；微生物基因工程菌构建及产业化开 发；植物寄生线虫微生物农药研究；具活性的微生物次生代谢产物及 先导化合物研究。 （3）生物多样性的生态功能与修复：污染及极端环境中植物、微生 物的抗性、适应及多样性变化机制；山区土地植被变化与生物多样性 维持 ；关键区域受损生态系统的退化机制与恢复。
(3)砂土管保藏法 方法：孢子或芽孢悬液 → 加入无菌砂土管中→ 干燥→ 封口 → 保藏 措施：无营养，缺氧，干燥 适用：产孢子（芽孢）微生物 保藏期：1~10年
4. 基因工程菌的保藏
由载体质粒等携带的外源DNA片段通常是遗 传不稳定的、且很易丢失其外源质粒复制 子。质粒基因通常为宿主细胞生长非必需。 一般情况下当细胞丢失这些质粒时，生长 速度会加快。
2. 冻干保藏
冷冻干燥的基本方法：是通过在减压条件下使冻结的细胞悬液中 的水分升华，使培养物干燥。此法是微生物菌种长期保藏的最为 有效的方法之一 冷冻干燥过程中必须使用冷冻保护剂，目前国内常用脱脂乳和蔗 糖，国外尚有运用动物血清等的。 大部分微生物菌种可以在冻干状态下保藏10年之久而不丧失活力。 而且经冻干后的菌株无需进行冷冻保藏，便于运输。 方法：菌种培养 → 用保护剂悬浮 → 加入安醅管中→低温冻结（ -25—-40℃）→抽真空（至0.01mmHg） → 真空封口 → 检 查真空度 → 保藏 措施：低温、干燥，缺氧，有保护剂
微生物资源与人类生态系统
生态系统 在一定时间和空间内，生物与其生存环境以及生 物与生物之间相互作用，彼此通过物质循环、能 量流动和信息交换，形成的一个不可分割的自然 整体。
微生物与人类生态系统的相互影响
微生物对人类生态系统的影响 自然生态系统的主要分解者
自然界中元素的平衡者 土壤肥力的保持者 环境影响自然界微生物的生存
适用：各大类
保藏期：5~15年或更长
培养物的冻干过程
3.
其他保藏方法
(1)斜面保藏法 方法：接种适宜斜面培养基 → 培养 → 4℃保藏 措施：低温：4℃ 适用：各大类 保藏期：1~6个月 用橡皮塞代替棉塞，可适当延长保藏时间 (2)石蜡油封藏法 方法：斜面或半固体接种 → 培养 → 加无菌液蜡高出培养 基 1cm→4~15℃保藏 措施：低温，隔氧 适用：不能利用石油的各大类 保藏期：1~2年 优点：简便
5~15年 简便、 以上 有效
(三）菌种保藏机构的任务
广泛收集实验室和生产菌种、菌株（包括病毒
株以及动、植物细胞株和质粒等）的基础上， 使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交 换和使用的目的。
按微生物用途设立的部分保藏机构（国内） 用途分类 机构名称 英文缩写 普通菌种 中国典型培养物保藏中心 CCTCC 普通菌种 中国科学院微生物所 IMCAS 工业菌种 中国食品发酵工业所 IFFI 农业菌种 中国农科院土壤肥料所 ISF 医学菌种 中国药品生物制品鉴定所 NICPBP 抗生素菌种 四川抗生素工业所 SIA 兽医菌种 中国兽医药品监察所 NCIVBP 林业菌种 中国林业科学研究院 CAF
几个概念
1. 衰退（degeneration）：在微 生物的生长过程中，由于变异的存 在，使原有的优良性状发生负变， 即菌种的衰退。
2. 复壮(rejuvenation)
狭义的复壮 是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种 分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰 退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施； 广义的复壮 是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识 的经常进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种 的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变） 不断地从生产中选种
防止菌种衰退的方法
1 控制传代的次数（一般在DNA的复制过程中，碱基
的错配率是5x10-4，自发突变的频率为10-8~10-9， 采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的次 数）：意即尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的 传代降低到最低限度，以减少自发突变的几率。 2 创造良好的培养条件：在赤霉素生产菌 Gebberellafujikuroi的培养基中，加入糖蜜、天冬 酰胺、谷氨酰胺、5′-核苷酸或甘露醇等丰富营养物时， 有防止菌种衰退的效果；在Aspergillusterricola （栖土曲霉）3．942的培养中，有人曾用改变培养温 度的措施，即从28～30℃提高到33～34℃来防止它 产孢子能力的衰退。
3 利用不同类型的细胞进行接种传代：对丝状微
生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种。在放线 菌和霉菌中，由于它们的菌丝细胞常含几个核或甚至是 异核体，因此用菌丝接种就会出现不纯和衰退，而孢子 一般是单核的，用于接种时，就没有这种现象发生。有 人在实践上创造了用灭过菌的棉团轻巧地对 Streptomycesmi-croflavus“5406”抗生菌进行斜面移种， 由于避免了菌丝的接入，因而达到了防止菌种衰退的效 果；又有人发现，Aspergillusnidulans（构巢曲霉）如以 其分子孢子传代就易退化，而改用子囊孢子移种则不易 退化。
当培养基中加入抗生素时，抗生素提供了一有 利于携带质粒的细胞群体的极有用的生长选择 压。而且在运用基因工程菌进行发酵时，抗生 素的加入可帮助维持质粒复制与染色体复制的 协调。 基因工程菌应保藏在含低浓度选择剂的培养基 中。
菌种保藏注意事项
所有保藏菌种的方法都必须是长期可靠地保持 菌种的优良性状不变。 在保藏时定期检测菌种活力，以确定保藏培养 物的保藏期限和保藏方法的可靠性，以及确定 在实际保藏过程中出现的细胞死亡程度和遗传 稳定性。
菌种的复壮措施
纯种分离
纯菌落的分离方法（平板表面涂布法，平板划线分离法，琼 脂培养基浇注法）-菌落纯 纯细胞的分离方法（利用培养皿或凹玻片等作分离小室进行 单细胞分离；显微操纵器进行单细胞分离；不长孢子的丝 状真菌，则可用无菌小刀切取菌落边缘疏稀的菌丝尖端进 行分离移植，也可用无菌毛细管插入菌丝尖端，菌丝尖端 切割法进行单细胞分离）-菌株纯
二、微生物物种资源的保藏
目的：确保微生物生产性能稳定、不染 菌、不死亡等。 原理：“休眠”
（一）菌种保藏的原理
菌种保藏主要是根据微生物生理生化特点，人工
制造环境条件，使微生物代谢处于不活泼，生长 繁殖受抑制的休眠状态，即采取低温、干燥、缺 氧三个条件，使菌种暂时处于休眠状态。 挑选典型菌种的优良纯种 一般采用微生物的休眠体（如孢子、芽孢等） 创造适于微生物长时期休眠的环境条件（如干燥、 低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂或 酸碱中和剂等）
（二）微生物菌种保藏技术
1. 冷冻干燥或真空干燥保藏；
2. 超低温Байду номын сангаас在液氮中冷冻保藏；
3. 转接培养或斜面传代保藏；
4. 土壤或陶瓷珠等载体干燥保藏。
1. 冷冻保藏
冷冻保藏为保藏微生物菌种的最简单而有效的 方法。 通过冷冻，使微生物代谢活动停止。一般而言， 冷冻温度愈低，效果愈好。为了获得满意的冷 冻结果，通常应在培养物中加入一定的冷冻保 护剂。冷冻保藏时温度要求在-20℃以下，同 时应认真掌握好冷冻速度和解冻速变。 缺点之一： 是培养物运输较困难。
冷冻保藏种类
(1) 普通冷冻保藏技术(-20℃)
(2) 超低温冷冻保藏技术(-60 ℃～-80℃)
(3) 液氮冷冻保藏技术 (-196 ℃)
超低温冷冻保藏技术(-60一-80℃)
要求长期保藏的微生物菌种，一般都要求在-60℃以下进行保藏。 在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是： 1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞； 2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞； 3．加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜； 4．混匀后分装入冷冻试管或安瓿中，于-70℃超低温冰箱中保藏。 某些细菌和真菌菌种可通过此法保藏5年而活力不受影响。 方法：菌种培养 → 15~30%甘油缓冲液悬浮 → 加入保藏管中 → 置 -70℃冰箱保藏 措施：低温（-70℃）、保护剂（15~50%甘油） 适用：细菌、酵母菌 保藏期：约10年
4 采用有效的菌种保藏方法：在用于工业生产
的菌种中，重要的性状都属于数量性状，而这类 性状恰是最易退化的。即使在较好的保藏条件下， 还是存在这种情况。例如，链霉素生产菌—— Streptomycesgriseus（灰色链霉菌）ЛC-1以冷冻 干燥孢子形式经过5年的保藏，在菌群中衰退菌 落的数目有所增加，而在同样情况下，另一菌株 773#只经过23个月就降低23％的活性。即使在－ 20℃下进行冷冻保藏，经12～15个月后，上述 773#菌株和另一种环丝氨酸生产菌908#菌株的效 价水平还是有明显降低。由此说明有必要研究和 采用更有效的保藏方法以防止菌种生产性状的衰 退。