液相色谱法与几种检测器
高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法通常使用以下检测器：
1. 紫外光吸收检测器（UV检测器）: 这是最常用的检测器之一。
它利用样品分子在特定波长下吸收的紫外光的数量来检测分离出来的化合物。
2. 荧光检测器:此检测器利用分离出来的化合物的荧光强度来检测分离出来的化合物。
这可以使它有效地检测探测极小浓度的化合物。
3. 电导检测器: 此检测器通过检测样品中离子的电导率来检测分离出来的化合物。
这种检测器通常用于离子交换色谱。
4. 质谱检测器（MS检测器）：在某些情况下，需要识别和定量化合物。
在这种情况下，使用质谱检测器非常有用。
它将化合物的分子质量与一个反应谱库进行比较，以进行准确的定量和鉴定。
5. 折射率检测器（RI检测器）: 检测样品分子与溶剂的差异折射率。
该检测器对于不具有紫外吸收或荧光的化合物是很有用的。
通则0512高效液相色谱法
高效液相色谱法：系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。
超高液相色谱仪：是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
（1）色谱柱反相色谱柱：以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径和长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。
（2）检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
不同液相检测器的区别
不同液相检测器的区别公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]高效液相色谱仪的常用检测器有哪几种，有什么区别高效液相色谱仪常用检测器种类及分析检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet_visibledetector,UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm-800nm)。
它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。
当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
液相色谱仪各种检测器的应用范围
液相色谱仪各种检测器的应用范围HPLC中常用的检测器分有如下几种，紫外吸收检测器（UVD)、二极管阵列检测器(PDAD）、荧光检测器（FLD）、示差折光检测器（RID）、蒸发光散射检测器（ELSD）、质谱检测器(MSD）等.下面就分别介绍简单介绍一下。
光学类检测器1、紫外吸收检测器（UVD）是目前HPLC中应用最广泛的检测器.它的主要特点是灵敏度高，线性范围宽，对流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。
它要求被检测样品组分有紫外吸收,属于选择性检测器。
2、二极管阵列检测器（PDAD)是20世纪80年代才出现的一种光学多通道检测器，它可以看作是UVD的一个分支。
在对每个洗脱组分进行光谱扫描,经计算机处理后，得到光谱和色谱结合的三维图谱。
其中吸收光谱用于定性（确证是否是单一纯物质)，色谱用于定量，常用于复杂样品(如生物样品、中草药）的定性定量分析.3、荧光检测器（FLD）同样属于选择性检测器，其灵敏度在目前常用的HPLC检测器中是最高的，应用也较多,仅次于UVD。
它适用于能激发荧光的化合物.很多与生命科学有关的物质，如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。
荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用，尤其在用荧光衍生后，可以检测很微量的氨基酸和肽.通用型检测器1、示差折光检测器(RID）是一种通用型检测器，只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用。
生命科学中常遇到各类糖类化合物,没有紫外吸收，一般常用示差折光检测器。
它的通用性比UVD广，但灵敏度要低,对温度变化敏感，并与梯度洗脱不相容,因而限制了它的使用.2、蒸发光散射检测器(ELSD）也是一种通用型的检测器，可检测挥发性低于流动相的任何样品,而不需要样品含有发色基团。
ELSD的响应值与样品的质量成正比,因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物.ELSD灵敏度比RID高，对温度变化不敏感，基线稳定,可用于梯度洗脱。
现在ELSD已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测.3、质谱检测器（MSD）是另一种通用型检测器，在灵敏度、选择性、通用性及化合物的分子量和结构信息的提供等方面都有突出的优点。
HPLC中常用的检测器
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4:电化学检测器
理论基础
a: 法拉第第一定律
在电介过程中，电极上起反应的物质量 （W）与通过电介池的电量（Q）成正比。
b: 法拉第第二定律 各种不同的电介质溶液中，通过相同的电量 时，电极上析出的电极产物的当量数相同。 （96487库仑）
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3:二极管阵列检测器（diode-array detector, DAD）
原理: 光电二极管阵列（或CCD阵列，硅靶摄像管等）作为检测元件的 UV-VIS检测器。它可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光， 再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列 快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。
c: 对仪器的稳定性（如温度和压力的稳定性）依赖较小
d: 选择性好，优于紫外
例子：花生酱提取物中衡量黄曲霉素的荧光检测法
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缺点: a:适用范围有一定的局限性 –只适用于有荧光基团＆衍生化之后 有荧光基团的化合物 b: 定量分析时线性范围较窄
它适合于 稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋 白质等荧光物质 的测定
不到20%的物质使用这种检测手段,许多药物如喹诺酮类药物采用这种检 测方法.
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在垂直的方向上 进行检测
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优点: a: 灵敏度非常高(灵敏度在目前常用的HPLC检测器中最高 )，其 检出限可达10-9g/ml，(比紫外检测器高2—3个数量级，适合于痕量 分析 ) b: 可以用于梯度洗脱
ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度 或者检测未知物。
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发展历程:
第一台ELSD是由澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家 研制开发的，并在八十年代初转化为商品.
第二十章高效液相色谱(第五版)
（2）L2 = 30cm:
R1 2 L1 ( ) R2 L2
L2 30 R 2 R1 1.33 1.88 L1 15
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紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
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光电二极管阵列检测器
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(二) 荧光检测器 fluorophotometric detector 特点： • 灵敏度高（高于紫外检测器）
• 只适用于能产生荧光或其衍生物能发
荧光的物质。
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(三) 蒸发光散色检测器 evaporative light scattering detector
流动相 （样品）
流动相蒸发除去
加热
组分形成气溶胶
强光
特点： 测定散射光强 • 灵敏度低 I = k mb • 通用型：如糖类、 氨基酸等分析
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(四) 化学发光检测器
组分 + 发光试剂 激发态产物 光辐射
n1/2 -1 k2 R = —— (——) (——) 4 1+k2
：主要受溶剂种类的影响
k ：主要受溶剂配比的影响
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选择流动相时应注意的几个问题
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏 柱子。如使固定液溶解流失； （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉 淀并在柱中沉积。
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第二节 HPLC的固定相和流动相及其选择
一、化学键合固定相：目前应用最广、性能最佳的固定相；
a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
气相色谱与液相色谱
.一、分别原理：1.气相：气相色谱是一种物理的分别方法。
利用被测物质各组分在不一样两相间分派系数（溶解度）的渺小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行频频多次的分派，使本来只有渺小的性质差异产生很大的成效，而使不一样组分获取分别。
2.液相：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达′107Pa）;色谱柱是以特别的方法用小粒径的填料填补而成，进而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高敏捷度的检测器，可对流出物进行连续检测。
二、应用范围：1.气相：气相色谱法拥有分别能力好，敏捷度高，剖析速度快，操作方便等优点，可是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳固性差的物质都难于应用气相色谱法进行剖析。
一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采纳衍生化法或裂解法。
2.液相：高效液相色谱法，只需求试样能制成溶液，而不需要气化，所以不受试样挥发性的限制。
关于高沸点、热稳固性差、相对分子量大（大于400以上）的有机物（些物质几乎据有机物总数的75%～80%）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分别、剖析。
据统计，在已知化合物中，能用气相色谱剖析的约占20%，而能用液相色谱剖析的约占70～80%。
三、仪器结构：1.气相：由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据办理系统构成。
进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。
柱箱：色谱柱是气相色谱仪的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过频频多次分派后获取分别，进而达到剖析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。
因为色谱柱的两头分别连结进样器和检测器，所以进样器和检测器的下端（接头）均插入柱箱。
柱箱能够安装各样填补柱和毛细管柱，并且操作方便。
色谱柱（样品）需要在必定的温度条件下工作，所以采纳微机对柱箱进行温度控制。
并且因为设计合理，柱箱内的梯度很小。
关于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。
液相检测器的原理
液相检测器的原理
液相检测器的原理是通过测量样品在溶液中的光学、电化学或质谱特性来分析样品的成分。
该原理基于样品溶解在溶剂中的理论，即溶解度和分配系数等。
常见的液相检测器有紫外-可见光谱检测器（UV-Vis）、荧光
检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
紫外-可见光谱检测器主要利用样品对紫外-可见光的吸收或透
射特性进行分析。
样品分子在特定波长的光照射下，吸收或透射的光强度与样品浓度相关。
通过测量样品的吸收光谱或透射光谱，可以得到样品的浓度信息。
荧光检测器利用样品吸收紫外或可见光后，通过激发产生荧光。
荧光的发射强度与样品浓度成正比，通过测量样品的荧光发射强度来计算样品浓度。
电化学检测器通过测量溶液中的电流或电位变化来获得样品的分析信息。
常见的电化学检测器包括电导检测器、电解质测定仪和电位检测器等。
质谱检测器将样品分子离子化后，通过质谱仪进行分析。
质谱检测器能够在不同的质荷比下获得样品的质谱图，从而确定样品的分子式和相对分子质量。
总之，液相检测器利用样品在溶液中的光学、电化学或质谱特
性来分析样品的成分，是液相色谱、毛细管电泳等技术中重要的组成部分。
各种液相色谱检测器介绍
各种液相色谱检测器介绍各种液相色谱检测器介绍液色迷人/紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector 简称紫外检测器（UV），是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器。
因为大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外吸收性质，所以该检测器是液相色谱中应用最广泛的检测器，几乎所有液相色谱仪都配置了这种检测器。
它不仅有较好的选择性和较高的灵敏度，而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此既可用于等度洗脱，也可用于梯度洗脱。
其检测灵敏度在mg/L至mg/L范围。
可见光检测器visible light detector可见光检测器visible light detector 又称分光光度检测器，是基于溶质分子吸收可见光的原理设计的检测器。
能够直接采用可见光检测的溶质不是很多，而且多数灵敏度也不高，但采用具有高摩尔吸光系数的有机试剂（配位体和螯合剂）作为衍生化试剂进行柱前或柱后衍生操作的衍生化光度检测法是相当有用的，特别是在金属离子配合物液相色谱中的应用是相当成功的。
低压梯度low-pressure gradient低压梯度low-pressure gradient 又称外梯度，是在低压状态下完成流动相强度调整的梯度装置。
只需一个高压泵，与等度洗脱输液系统相比，就是在泵前安装了一个比例阀，混合就在比例阀中完成。
因为比例阀是在泵之前，所以是在常压（低压）下混合之后再增压输送到色谱柱的。
蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题虽然阵法光散射检测器(Evaportive light Scattering,ELSD)已经开发生产15年，但是对于许多色谱工作者来说，它仍是一个新产品。
第一台ELSD是由澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家研制开发的，并在八十年代初转化为商品，八十年代以激光为光源的第二代ELSD面世。
仪器分析习题答案气象色谱液相色谱
P67-681. 色谱法区别于其他分析方法的主要特点是什么？色谱法是以其高超的分离能力为特点，他的分离效率远远高于其他分离技术如蒸馏、萃取、离心等方法。
色谱法有许多优点：⑴分离效率高；⑵应用范围广；⑶分析速度快；⑷样品用量少；⑸灵敏度高；⑹分离和测定一次完成，可以和多种波谱分析仪器联用。
5.根据速率理论，提高色谱柱效的途径有哪些？范氏方程式对于分离条件的选择具有指导意义，填充均匀程度，固定相（担体）粒度，载气种类，载气流速、柱温、固定相液膜厚度等因素对色谱柱效能，峰扩张程度都有影响。
组分在色谱柱内运行的多路径及浓度梯度造成的分子扩散和组分在气、液两相间的质量传递不能瞬间达到平衡，是造成色谱扩张、柱效能下降的主要原因。
10. 某气相色谱柱的范第姆特方程式中的常数如下：A=0.01cm，B=0.57cm2·s－1，C=0.13s。
计算最小塔板高度和最佳线速度。
答：H= A + B/u + Cu,H≥A + 2(BC)1/2，其中，B/u = Cu时，等式成立。
代入参数，H=0.55cm ；u=2.09cm/s。
12.某物质色谱峰的保留时间为65秒，半峰宽为5.5秒。
若柱长为3米，则该柱子的理论塔板数多少？答：n = 5.54(t R/Y1/2)2，代入各数据，得n=774。
13.某试样中，难分离物质对的保留时间分别为40秒和45秒，填充柱的塔板高度近似为1毫米。
假设两者的峰底宽度相等。
若要完全分离（R=1.5），柱长应为多少？答：L = 16R2[r21/( r21 - 1)]2H有效，r21= 45/40，R=1.5, H有效= 1mm, 则L=2916mm14.气液色谱柱长2米。
当载气流量为15mL/min时，相应的理论塔板数为2450块。
而当载气流量为40mL/min时，相应的理论塔板数为2200块。
试计算最佳载气流速是多少？在最佳载气流速时色谱柱的理论塔板数是多少（A=0）？答：气相色谱下，H= L/n=A + B/u + Cu = B/u + Cu，最佳载气流速为u=(B/C)1/2, 方法参见第10题或P81，得200/2450= B’/15 + 15C’200/2200= B’/40 + 40C’,这里，V=60Au，B’= 60AB, C’= C/60A, A为柱截面积，V为流量解得，B’=0.836 ,C’=1.75 x 10-3 ,60Au =(B’/C’) 1/2=V，因此，V=22mL/min；H=0.0765cm →n=2614.P831.气相色谱仪的核心部件是什么？色谱柱是气相色谱仪的核心部件。
高效液相色谱法
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特点： 特点： 氰基键合相选择性与硅胶类似 键合相选择性与硅胶类似， ① 氰基键合相选择性与硅胶类似， 但极性更小。相同流动相， 但极性更小。相同流动相，组分保留 时间小于硅胶。 时间小于硅胶。 氨基键合相 主要用于糖类分析， ② 氨基键合相 主要用于糖类分析， 糖类分析专用柱 分析专用柱。 是糖类分析敏度： 紫外、荧光、电化学、 紫外、荧光、电化学、质谱等高灵敏 度检测器使用。 度检测器使用。 最小检测量： 最小检测量： 10-9 ~10-11 g 4. 高度自动化： 高度自动化： 采用色谱专家系统为核心的色谱智 能化和仿真优化技术， 能化和仿真优化技术，使 HPLC不仅能 不仅能 自动处理数据，绘图和打印分析结果， 自动处理数据，绘图和打印分析结果， 而且还可以自动控制色谱条件。 而且还可以自动控制色谱条件。
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2. 流动相极性与容量因子的关系 流动相极性大，洗脱能力增加， 流动相极性大，洗脱能力增加， k 减小，tR 减小；反之， k 与 tR 均 减小， 减小；反之， 增加。 增加。 极性小的组分先出柱
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四、正、反相色谱法 正相HPLC（normal phase HPLC） （ 正相 ） 固定相： 固定相：极性 常用：改性硅胶 硅胶、 常用：改性硅胶、氰基柱 流动相: 非极性（或弱极性） 流动相 非极性（或弱极性） 常用： 正己烷 常用： 流动相极性小于固定相极性
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第二节 分离机制 一、液-固吸附色谱法 固吸附色谱法
(Liquid-Solid Chromatography)
（一）吸附机理 根据吸附剂对样品中各组分的吸 根据吸附剂对样品中各组分的吸 附能力差异而分离 而分离。 附能力差异而分离。 吸附过程是被分离组分的分子 与流动相分子争夺吸附剂表面活性 中心(active center)的结果。 的结果。 中心 的结果
制备型高效液相色谱法及其在中药研究中的应用
制备型高效液相色谱法及其在中药研究中的应用一、本文概述制备型高效液相色谱法（Preparative High Performance Liquid Chromatography, Prep-HPLC）是一种重要的色谱分离技术，以其高效、快速、自动化的特点在多个领域，特别是中药研究中发挥着越来越重要的作用。
本文旨在全面介绍制备型高效液相色谱法的基本原理、技术特点以及其在中药研究中的应用情况。
文章将概述制备型高效液相色谱法的基本原理和操作流程，包括色谱柱的选择、流动相的优化、样品的制备和分离等关键环节。
文章将重点讨论制备型高效液相色谱法在中药研究中的应用，包括中药成分的分离纯化、质量控制、药物代谢动力学研究等方面。
文章还将对制备型高效液相色谱法在未来的发展趋势和挑战进行展望，以期为相关领域的科研人员提供有益的参考和启示。
二、制备型高效液相色谱法的基本原理与技术制备型高效液相色谱法（Preparative High Performance Liquid Chromatography，Prep-HPLC）是高效液相色谱法（HPLC）的一个重要分支，它主要用于大规模分离、纯化和制备样品。
其基本原理基于混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配平衡，通过高压泵将流动相推动，使待测样品在固定相和流动相之间不断进行吸附、解吸、再吸附的分配过程，从而实现各组分的有效分离。
制备型高效液相色谱法通常使用更粗的色谱柱和更高的流速，以实现更大规模的分离和制备。
与分析型高效液相色谱法相比，制备型高效液相色谱法更注重样品的纯度和回收率，而不仅仅是各组分的定性和定量分析。
在制备型高效液相色谱法中，选择合适的固定相和流动相至关重要。
固定相的选择应根据样品的性质和目标组分的特性来确定，常用的固定相包括硅胶、氧化铝、聚合物等。
流动相的选择则要考虑其与固定相的相容性、对目标组分的洗脱能力以及分离效果等因素。
制备型高效液相色谱法还涉及到柱层析、梯度洗脱、循环洗脱等技术。
高效液相、气相色谱法及红外色谱仪的简单介绍
高效液相色谱法
二、高效液相色谱法的特点
特点：高压、高效、高速
Feature of HPLC
高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
概述
• 高效液相色谱法（HPLC）是60年代末以经典液相色谱法 为基础，引入了气相色谱的理论与实验方法，流动相用高 压泵输送，采用高效固定相和在线检测等手段发展而成的 分离分析方法 。 • 与气相色谱法相比具有：适用范围广，样品预处理简单， 分离效率高，流动相选择范围广，检测方法多为非破坏性 的，流出组分可回收等优点。
研究范围
• 近红外区：主要研究稀土和过渡金属离子的化合物， 水，含氢原子团化合物的定量分析。 • 中红外光区（又称红外光谱区）：绝大多数有机化 合物和无机离子的基频吸收带都出现在该区，由于 基频振动是最强的吸收，适宜进行定性、定量分析。 • 远红外光谱区：由于低频骨架振动能很灵敏地反应 出结构变化，所以对异构体的研究特别方便，还可 用于金属有机化合物的、氢键、吸附现象的研究， 但由于该光区弱，一般不在此范围内进行分析。
2.主要部件
（1）高压输液泵
主 要 部 件 之 一 ， 压 力 ： 150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒 度很小的固定相（ <10 μm）
，液体的流动相高速通过时， 将产生很高的压力，因此高 压、高速是高效液相色谱的 特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、 流量稳定可调、耐腐蚀等特 性。
三种重要仪器的原理及使用 方法
气相色谱法 高效液相色谱法
红外吸收光谱法
目录
1 2 3
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
气相色谱法
气相色谱仪 气相色谱检测器
4
气相色谱的应用
定义
以惰性气体为流动相、以固定液或固 体吸附剂作为固定相的色谱法称为气 相色谱法（GC）。
高效液相色谱法测定汽水中的苯甲酸
2.讨论 思考题 1.为什么高效液相色谱流动相在使用前必 须经过脱气处理？ 2.改变流动相的配比，苯甲酸的保留时间 是否发生变化？若发生变化将如何变？
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6.005 6.015 6.015 6.012 6.010
五、结果记录及讨论
1.数据记录及处理 根据汽水中苯甲酸的峰面积从标准曲线上 查的其浓度，据下列公式计算： x=CV/m x---样品中苯甲酸的含量，g/kg C---从标准曲线上查得的样品浓度,mg/ml m---样品质量，g V---样品稀释总体积，ml
3.标准曲线的绘制 分别吸取苯甲酸标准使用液 （0.1mg/ml) 2.00、4.00、6.00、8.00、 10.00ml于10ml具塞比色管中，用超纯 水定容至刻度，混匀。过滤后分别取 10ul进样，测定不同浓度标准溶液的 峰面积。以苯甲酸标准溶液的浓度为 横坐标，相应峰面积为纵坐标绘制标 准曲线。
1.熟悉高效液相色谱操作条件的选 择，以达到化合物的良好分离效果
2.掌握高效液相色谱测定汽水中苯甲 酸的方法
二、实验原理
苯甲酸是一种常用的防腐剂，被广泛 应用于饮料及日常调味品中。我国食 品卫生标准规定饮料如汽水中苯甲酸 的最大使用量为0.2 g/kg。本实验利用 高效液相色谱法测定汽水中苯甲酸的 含量，以检测其饮用安全性。
4.样品的处理与测定 取汽水样品约10g于小烧杯中，微温搅拌除 去二氧化碳，用（1+1）氨水调pH至约7， 加超纯水定容至25ml，离心后，取10ul 进样 分析。
苯甲酸浓度(mg/ml)
峰面积（微伏· 秒） 保留时间(min)
高效液相色谱法介绍(一)
使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用 一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的 作用，常用的溶剂组合 洗脱剂：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为： 石油迷<己烷<苯<乙醚<THF（次氢呋喃）<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统 极性较大的用甲醇：氯仿系统 极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
七、常见故障的排除
故 泵启动不良
障
故 障 原 因 （1）溶剂水平面太低 （2）溶剂中有气泡析出 （1）色谱柱超负荷 （2）非缓冲流动相使酸性 或碱性样品的色谱峰 发生拖尾 （1）柱子超负荷 （2）样品组分在柱子上积 聚，柱子沾污柱效变 坏 （3）柱填料与流动相未完 全达到平衡 （1）柱子被玷污，柱效下 降 （2）固定相流失 （3）梯度系统对色谱柱 （固定相）不合适. （4）柱温过高 （5）流动相强度太高
峰形不好，出现平头峰或拖 尾峰
分离度下降
保留时间减少
故
障
故 障 原 因 （1）温度不稳 （2）泵启动不良 （3）溶剂中有气泡 （1）长时间的基线漂移可 能由于室温波动引起 （2）池座垫圈漏液 （3）流通池污染 （4）UV灯不亮 （1）样品阀，进样垫或注 射器被污染 （2）溶解样品溶剂的洗脱 峰 （3）样品溶液中有气泡 （4）梯度洗脱溶剂不纯 （特别是水） （1）电源线内部折断 （2）灯启动器有毛病 （3）UV灯泡有毛病 （4）保险丝断开
a.光源（氘灯）发出的光经聚光透镜聚焦，由可旋转组合滤光片滤 除杂散光，再通过入口狭缝至下面反射镜，经反射到达光栅，光 栅将光衍射色散成不同波长的单色光，当某一波（190nm~600nm） 的单色光经平面镜反射，反射至分束器时，透过光分束器的光通 过样品的流通池，最终到达检测样品的光电二极管测量；被光分 束器反射的光到达检测基线波动的参比光电二级管；当获得测量 和参比光电二极管的信号差，即为样品的检测信息。 b.可变波长紫外吸收检测器的某一时刻只能采集某一特定波长的 吸收信号。 光栅的偏转可由预先编制的采集信号程序加以控制，以便于采 集某一特定波长的吸收信号，并可使色谱分离过程洗脱出的每 个组分峰都获得最灵敏的检测。
EP 2.2.29 液相色谱法
液相色谱法液相色谱法（LC）是一种根据两种互不相溶的相之间种类分布的不同而进行色谱分离的方法。
在这两种互不相溶的相中，移动相是一种渗过色谱柱中固定相的液体。
液相色谱法（LC）主要基于吸附、质量分布、离子交换、尺寸排阻或立体化学相互作用的原理。
仪器液相色谱法的仪器包括：泵系统、进样器、色谱柱（可用柱温控制器）、检测仪和数据采集系统（也可用积分仪或图形记录器）。
移动相从一个或多个贮器流出，通常以恒速经过色谱柱，再流经检测仪。
泵系统液相色谱法所用的泵系统需以恒定流速输送移动相，应尽量减少压力波动，如将加压溶剂通过脉冲减幅装置进行传送。
管道和接头要能承受泵系统产生的压力。
液相色谱泵可以与能将系统中裹入气泡排出的设施相连接。
微处理器控制系统能根据设定好的程序准确地输送恒定（等度洗脱）或不同成分（梯度洗脱）的移动相。
梯度洗脱时，泵系统从多个贮器发送溶剂，将泵调到低压或高压即可对溶剂进行混和。
进样器用可在高压下使用的进样系统在（或靠近）色谱柱顶部将样品溶液注入流动着的移动相中。
使用手动操作的固定回路变量装置或自动进样器进样。
手动分次注入回路会降低进样量的精确度。
固定相液相色谱法中使用的固定相有多种，包括：二氧化硅、氧化铝或多孔石墨，用于正常相色谱法。
该方法是根据吸附和（或）质量分布的不同进行分离。
——树脂或带酸基（或碱基）的多聚体，用于离子交换色谱法。
该方法是在待分离的离子与移动相中的离子之间的竞争基础上进行分离。
——多孔硅石或多聚体，用于尺寸排阻色谱法。
该方法是根据分子量之间的不同进行分离的，与空间排阻法色谱法相对应。
——多种由多聚体、硅石或多孔石墨经过化学变性的固定相，用于反相液体色谱法。
该方法是主要根据移动相和固定相之间的分子隔离来进行分离。
——经过特殊化学变性的固定相如纤维素或直链淀粉衍生物、蛋白质或肽、环糊精等，用于旋光对映体的分离（手性色谱法）大多数分离都基于一种隔离机制，即用化学变性硅作固定相，用极性溶剂作移动相。
高效液相色谱仪常用检测器的种类及分析
高效液相色谱仪经常使用检测器的种类及分析之樊仲川亿创作检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变更转化为可供检测的信号，经常使用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet－visibledetector，UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器经常使用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并装置一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm～800nm)。
它有两个流通池，一个作参比，一个作丈量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。
当组分进入丈量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不克不及做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不克不及小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。
它采取光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描收集数据，得到吸收值(A)是保存时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
液相色谱仪检测(维生素)试题
液相色谱仪检测（维生素）试题一、填空（67*1=67分）1.色谱法是一种分离的方法，具有两相，一是固定相，一是流动相，两相作相向运动，其分离的原理是待测组分与两相的相互作用力不同而进行分离的。
2.液相色谱是根据待测组分的保留时间进行定性分析；根据待测组分的浓度与其峰面积或峰高呈正比进行定量测定，定量的方法主要有内标法、外标法和归一化法三种。
3.高效液相色谱法测定婴幼儿食品中及乳制品中维生素A和E的检出限分别为1.0 μg/100g和10 μg/100g。
4.根据维生素A、E的化学性质，维生素A、E的标准溶液需在-10℃以下避光条件下储存，其标准储备液使用前需校正。
5.维生素测定A、E时，样品先皂化，然后经无水乙醚或石油醚萃取，维生素A、E采用反相色谱法分离测定。
6.维生素A又称视黄醇，室温时，1%的维生素A乙醇溶液的最大吸收波长为325 nm.。
维生素E又称生育酚，1%的维生素A乙醇溶液的最大吸收波长为294 nm.。
7. 1 μg视黄醇当量= 3.33IU维生素A= 1.147μg维生素A醋酸酯，0.74 mg α-TE= 1 mg dl-α-生育酚（合成）= 1.1 IU维生素E。
8.食品中维生素A测定过程中，样品先要皂化，皂化的目的是维生素A在食品中常以视黄醇或混合视黄醇酯的形式存在，皂化是为了使酯转化成游离醇，同时分解大量的如三酸甘油酯之类的组分，使维生素A从食品混合物中游离出来。
9.维生素AE皂化和浓缩过程中，加入焦性没食子酸或维生素C的作用是防止维生素氧化分解；加入乙醇的作用是皂化反应中的乳化剂，保证酯类和氢氧化钾有充分的接触面积，推进反应的进行。
10.现有一牛奶样品需测定其中维生素A 的含量，称取25- 30 g样品，分2—3次加入20-30 g KOH 固体颗粒，然后沿壁加入50 mL含有1g焦性没食子酸的无水乙醇溶液，边摇边加，然后在80 ℃水浴上回流30min，立即冷却至室温。
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检测器一
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet－visibledetector， UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色 谱仪都配有这种检测器。 特点：灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱， 对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于 制备，并能与任何检测器串联使用。但是只能用于检测有紫 外吸收的物质，且流动相的选择有一定限制，流动相的截止 波长必须小于检测波长。
分析：所建立的方法简便、快速、灵敏度高，适用于鸡蛋中 阿莫西林残留的高灵敏度检测。
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HPLC-UV-ELSD法同时测定青蒿中青蒿素、青蒿乙 素和青蒿酸的含量
用HPLC-UV-ELSD法同时测定青蒿药材中青蒿素、青蒿乙 素和青蒿酸的含量。采用NucleodurC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μ m ID);以乙腈-0.1%乙酸水(50∶50)为流动相;紫外检 测波长209 nm,蒸发光散射检测器漂移管温度50℃。 分析：青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸能够达到很好分离。本法 简单、准确、快速,可同时测定青蒿药材中青蒿素、青蒿乙 素和青蒿酸的含量。
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检测器三
ELSD是一种通用型检测器，定量依据为峰面积（峰 高）或其比值的对数与进样量或浓度的对数成正比。 原理：首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加 热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗 粒在光散射检测池中得到检测。 应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三 脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂， 营养滋补品，及组合分子库等。
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进步与期待：如今更强调的是多种检测器 联用来达到更好的分析分离效果，比如 LC-MS,GC-MS,GC-LC等等。希望我们能 在学习的基础上有更好的创新，学以致用。
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参考资料
1、中药制剂分析第二版蔡宝昌 2、谢恺丹,陈学森,徐东等.高效液相色谱荧光检测法 检测鸡蛋中阿莫西林残留[J]. 食品科学, 2012, 33(22): 264-268. 3、张东,杨岚,杨立新等.HPLC-UV-ELSD法同时测定 青蒿中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的含量[J].药学学 报2007,42(9):978 -981.
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应用实例及发展
高效液相色谱荧光检测法检测鸡蛋中阿莫西林残留
鸡蛋经乙腈提取，饱和二氯甲烷萃取，水杨醛酸性条件 下沸水浴衍生化后，以0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液(A)和乙 腈溶液(B)为流动相，流速为1.0mL/min，荧光检测激发波长 为354nm, 发射波长为445nm。阿莫西林在5.0～800ng/mL质 量浓度范围内，本方法线性关系良好，相关系数为0.9997。
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检测器二
◆ 荧光检测器(fluorescencedetector，FD) 荧光检
测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生 荧光的化合物。某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生 成荧光衍生物，再进行荧光检测。 ◆ 特点：其最小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量分析； 一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数 量级，但其线性范围不如紫外.
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常用的液相色谱仪
高效液相色谱仪由输出泵、进样装置、 色谱柱 、梯 度冲洗装置、检测器及数据处理和微机 控制单元组 成。
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常见的几种检测器的原理及应用范围
检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化 为可供检测的信号。 分类： A.选择性检测器：组分性质 1.紫外可见吸收检测器(UVD) 2.荧光检测器(FD) B.通用型检测器：总体性质 3.蒸发光散射检测器（ELSD） 4.电化学检测器(ED) 5.示差折光检测器(RID)
◆ 液相色谱法的分离机理是基于混合物中各 组分对两相亲和力的差别。
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◆ 根据固定相的不同， 液相色谱分为液固色 谱、液液色谱和键合相色谱。应用最广的 是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为 基质的键合相色谱。 ◆ 根据固定相的形式液相色谱法可以分为 柱 色谱法、纸色谱法及 薄层色谱法。按吸附 力可分为吸附 色谱、分配色谱、离子交换 色谱和凝胶渗透色谱。
液相色谱法与几种检测器的学习
组员：李欢欢、戴雅吉、郭宣宣 施香琴、马婷婷
内容介绍
◆ 液相色谱法的简单介绍 ◆ 检测器的原理及应用范围 ◆ 应用实例及发展 ◆ 参考资料
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液相色谱法：
简单的说就是用液体作为流动相的色谱法。 1903年俄国化学家M.C.茨维特首先将液相色谱法用于分离叶 绿素。
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液相色谱法的分离机制