荧光显示细胞器与细胞凋亡[资料]

细胞核附近发绿 色荧光的圆形或 短杆状颗粒即为 线粒体
3.内质网的荧光标记
1.材料 培养细胞爬片
P64-67
2. 试剂 储存液：0.5mg/mL DIO-C6(3)存储液， 4℃避光，
标记液：2.5ug/mL DIO-C6(3)， 4℃避光。 0.5%戊二醛
实验方法:
P67
1.取出已培养好细胞的盖玻片，用0.5%戊二醛PBS溶液 固定细胞10分钟， 2.吸去固定液，用PBS液洗3次，每次漂洗时浸泡
电子传递和氧化磷酸化的偶联
实验方法:
P71
1.取出已培养好细胞的盖玻片，用PBS(+)冲洗3次，每 次漂洗浸泡2--3分钟，
2. 加入罗丹明123标记液， 37℃培养箱孵育15分钟， 3.吸去标记液，PBS液洗3次，每次3--5分钟， 4.临时封片：滴1－2滴缓冲液于载玻片上，将含细胞 的盖玻片反扣其上，置荧光显微镜下用100X物镜观 察。
ห้องสมุดไป่ตู้用荧光染料的激发及发射波长
Fluorescent Dye Excitation （激发频谱，nm）
489 506 488 507 491 509 491 509 494 517 494 518 494 519 490 520 110 496 520 494 522 503 522 496 524 500 525 502 527 507 529 506 531 506 533 514 533 514 533 520 548
3--5分钟
2. 滴加DIO-C6(3)荧光染液，室温染色1分钟， 3.吸去标记液，PBS液洗3次，每次5分钟， 4.临时封片：滴1－2滴缓冲液于载玻片上，将含细胞的 盖玻片反扣其上，置荧光显微镜下用100X物镜观察。
4.细胞凋亡
细胞凋亡（Apoptosis）又称程序性细胞死亡 （Programmed cell death简称PCD），是由基因编程 控制的细胞主动参与的自杀过程，是一种生理性调节 机制，与细胞坏死的死亡机制是完全不同。 细胞凋亡是细胞衰老自然死亡的主要方式之一，在机 体中承担着重要的调控作用。它不仅在维持细胞群体 数量的稳定、胚胎发育和免疫系统的克隆选择方面， 而且在肿瘤发生、发展、抗肿瘤药物的治疗等方面均 具有十分重要的作用。
530 550 549 565 542 568 558 568 564 570 550 570 547 572 550 575 565 575 550 575 549 576 555 580 555 580 570 590 581 596 588 608 590 615
Fluorescent Dye
1. 细胞核的荧光显示 P60-62
吖啶橙（Acridine Orange)
吖啶衍生物之一，它既可嵌入DNA双链间与双链DNA结合，经 蓝光激发后发出亮绿色荧光， 又可以静电堆积的方式与单链DNA或RNA 的磷酸根结合，蓝光激 发下发出橘红色荧光，从而清晰的显示DNA,RNA。
异染色质（核内深染）和常染色质（核内浅染）
实验方法: P62
1.将生长有培养细胞的盖玻片（注意细胞面向上）置于 一次性小培养皿内，加入95％乙醇固定15－30分钟，取 出自然干燥； 2.加入1％醋酸酸化30秒；
3.在盖玻片标本上滴加0.01％吖啶橙染液，染色5－10 分钟；
4.去染液，用磷酸缓冲液冲洗1分钟； 5.用1/10氯化钙分化30秒－3分钟； 6.用PBS漂洗玻片3次，每次数秒； 7.临时封片：滴1－2滴PBS于载玻片上，将含细胞的盖 玻片反扣其上，置荧光显微镜下用100X物镜观察。
Excitation （激发频谱，nm）
Emission （发射频谱，nm）
Texas Red® 595 615 Nile Red 549 628 YO-PROTM-3 612 631 YOYOTM-3 612 631 R-Phycocyanin 618 642 C-Phycocyanin 620 648 TO-PROTM-3 642 660 TOTO®-3 642 660 DiD DilC'(5) 644 665 Cy5TM 649 670 Thiadicarbocyanine 651 671 Cy5.5 675 694
细胞核呈绿色（DNA),细胞质呈橙红色。
2.线粒体的荧光标记 P70
罗丹明123－－特异性的线粒体荧光染料, 是膜电位敏感的阳离子荧光素，活细胞线粒体具 有大量质子积累造成的外正内负跨膜电位，吸 引染料并将它保持在线粒体中,经蓝光激发,呈现 黄绿色荧光.可作为线粒体膜电位的灵敏指示.
罗丹明123结构式
Emission （发射频谱，nm）
Cy2TM GFP(Red Shifted) YO-PROTM-1 YOYOTM-1 Calcein FITC FluorXTM AlexaTM488 Rhodamine ABI,5-FAM Oregon Green TM 500 Oregon GreenTM 488 RlboGreenTM Rhodamine GreenTM Rhodamine123 Magnesium GreenTM Calcium GreenTM TO-PROTM-1 TOTO®-1 ABI,JOE
Fluorescent Dye
Excitation （激发频谱，nm） Emission （发射频谱，nm）
BODIPY®530/550 Dil BODIPY®TMR BODIPY®558/568 BODIPY®564/570 Cy3TM TRITC Magnesium OrangeTM Phycoerythrin,R & B Rhodamine Phalloidin Calcium OrangeTM Pyronin Y Rhodamine B Rhodamine RedTM Cy3.5TM ABI,ROX Calcium CrimsonTM
细胞器的荧光标记


熟悉荧光标记各种细胞器的常用方法及原 理 掌握荧光显微镜下各种细胞器的形态及 分布
细胞膜
核被膜
线粒体
膜相结构 细 胞 结 构
内质网 高尔基体 溶酶体 过氧化物酶体 染色质，染色体，核仁，核糖体
非膜相结构 核骨架，核纤层
细胞骨架
微管 微丝
中间纤维
4人一组
1. 2. 3. 4. 细胞核的荧光显示 P60-62 线粒体的荧光标记 P70 内质网的荧光标记 P64-67 细胞凋亡的形态学观察