QPCR拷贝数计算

QPCR拷贝数计算因为硕士的课题是qRT-PCR,所以至今总有人问我如何计算拷贝数的问题，

特此,转载这篇博文,以备不时之需

做qRT-PCR 的时候经常需要计算DNA 拷贝数（Copy Number),比较烦,用下面的方法这就方便多了。其实计算方法是相通的，只不过一个是带有分步推理过程，一个是直接计算而已!

一、分步推理如何计算核酸拷贝数

1A260吸光度值=dsDNA 50ug/ml=ssDNA 33ug/ml=ssRNA 40ug/ml

核酸浓度＝(OD260)×稀释倍数×（33 或40 或50)=ng/ul

MW 代表克/摩尔，单位dolton：1dolton 即表示1g/mol

1 摩尔=6。02×1023摩尔分子(拷贝数）

平均分子量（MW):dsDNA=碱基数×660 道尔顿/碱基

ssDNA=碱基数×330 道尔顿/碱基

ssRNA=碱基数×340 道尔顿/碱基

得到拷贝数计算公式：6。02×1023拷贝数/摩尔×(浓度)/（MW g/mol)= copies/ml。

即(6.02×1023)×(g/ml）/（DNA length×660)=copies/ml.

或(6。02×1023）×(ng/ul×10-9）/（DNA length×660)=copies/ul.

例：3000 碱基质粒，浓度100 ng/ul

MW=3000bp×660dalton/bp=1。98×106daltons，即1mol=1.98×106g；

(100ng×10—9)g/1。98×106＝摩尔数

copy 数＝摩尔数×6。02×1023＝3×1010copies/ul.

如何计算拷贝数？

计算方法：（6.02×1023拷贝数/摩尔)×(浓度 g/ml）/(MW g/mol）=copies/ml

[平均分子量(MW g/mol）：dsDNA=(碱基数)×(660 道尔顿/碱基）；ssDNA=(碱基数）×(330 道尔顿/碱基）；ssRNA=（碱基数）×（340 道尔顿/碱基)]