比格犬实验技术规范和主要应用

（1）经口给药
①灌胃 一般要借助于开口器、灌胃管进行。先将犬固定，再将开口器固定 于上下门齿之间。然后将灌胃管(常用导尿管代替)从开口器的小孔插 入动物口中，沿咽后壁而进入食道。 插入后应检查灌胃管是否确实插入食道。可将灌胃管外开口放入 盛水的烧杯中，若无气泡产生，表明灌胃管被正确插入胃中，未误入 气管。此时将注射器与灌胃管相连，注入药液。
Beagle实验技术规范和主要应用
龚宝勇 gongbaoyong@163.com
广州医药工业研究院 国家实验用Beagle犬种子中心
实验技术规范 主要应用
实验技术规范
1、动物实验前的准备 2、抓取与保定 3、麻醉 4、给药方法 5、给药剂量 6、各种样本的采集方法 7、安乐死及尸体处理
1、动物实验前的准备
给药途径
静脉注射
静脉注射
静脉注射
静脉注射
麻醉注意事项
(1) 准备麻醉急救药：抗副交感神经药，如阿托 品、东莨菪碱等；升压药，如肾上腺素、去甲肾 上腺素、麻黄素、多巴胺等；中枢兴奋药，如可 拉明、咖啡因、回苏灵等。
（2）Beagle犬在麻醉前禁食12h，麻醉前 准确称取Beagle犬体重。 （3）麻醉剂的用量除参考一般标准外，还 应考虑Beagle犬的个体差异。
采粪
收集自然排出的新鲜粪便或用棉签插入肛 门采集少量粪便。
7、安乐死及尸体处理
安乐死： ①犬只在轻度麻醉下，实行颈动脉放血，直至死亡。 ②向犬只的静脉内注入80～150ml空气，使其循环障 碍，至休克、死亡。
尸体处理： Beagle犬尸体用塑料袋密封好，贴上标签。存放于冰 柜，做好记录。当动物尸体收集到一定数量时，将动物尸 体运送到广州市卫生处理厂进行无害化处理。
48.0 144.5 734.0 126.0 107.0
112.0 105.0
96.0 289.0 268.0 252.0 202.0 790.0 777.0
注：*表示人与动物的不同体重，以kg表示，第三行以下数据单位为ug.kg-1.d-1。
6、各种样本的采集方法
（1）采血 （2）尿液采集 （3）精液采集 （4）胸水采集 （5）采粪
犬只用保定架保定，保定架 由不锈钢支架和帆布组成。 帆布按犬四肢的距离开四个 孔，固定在支架上。 保定犬只时，让其四肢固定 在帆布的四个孔中。
3、麻醉
表1 犬常用麻醉药的剂量及注射途径
麻醉药名称 用量 戊巴比妥 30mg/kg 硫喷妥钠 25mg/kg 水合氯醛 125mg/kg 乌拉坦 1g/kg 异氟烷 1.0～2.5％ 的异氟烷和 氧/氧化亚 氮混合气体 吸入
犬采精图
胸水采集
犬麻醉后，仰卧保定，手术部剃毛，用75%酒精消 毒，左手将手术部位皮肤向侧方移动，右手持穿胸套管 针，在犬的左侧第8肋间或第7肋间的中1/3处垂直刺入， 穿刺肋间肌时有一定阻力，阻力消失，表明已刺入胸腔， 可抽取胸水。
注意穿刺时避免损伤血管和神经，穿刺时 宜用夹子或手指控制进针深度，避免穿透 膈或损伤肺脏。
8、尸体检查及脏器标本采集与检查方法
实验后对动物进行尸检，通过犬只的病理解剖 观察，分析死亡原因，对实验结果进行判断等。 （1）尸体外部检查 （2）内脏器官的采集 （3）颅腔检查及脑组织采集
（1）尸体外部检查：包括毛色、营养状 态、皮肤、可视粘膜及天然孔及尸体变化 如尸僵、尸冷、尸腐等。
（2）内脏器官的采集 Beagle犬剖检一般取背卧位，先切断肩胛骨 内侧和髋关节周围肌肉，使四肢摊开，然后沿腹 中线由剑状软骨到肛门切开腹壁，再沿左右最后 肋骨切开腹壁到脊柱部，使腹腔器官完全暴露。 一般先采集胸腔脏器后取腹腔脏器。
②口服法 口服给药一种方法是把药物混入饲料或溶干饮水中让动物自由摄 取，此法优点是简单方便，缺点是剂量不能保证准确，且动物个体间 服药量差异较大。 另一种方法是在给予片剂、丸剂、胶囊剂时，可将药物用镊子或手 指送到舌根部，迅速关闭口腔，将头部稍稍抬高，使其自然吞咽。
（2）注射给药
①皮下注射 皮下注射一般选取皮下组织疏松的部位，犬 可在大腿外侧、颈背作皮下注射。皮下注射用左 手拇指和食指轻轻提起动物皮肤，右手持注射 器，使针头水平刺入皮下。推送药液时注射部位 隆起。拨针时，以手指捏住针刺部位，可防止药 液外漏。
（1）根据实验目的和要求准备实验室和饲养室，并进行彻底清洗消毒。 可以用甲醛熏蒸（用量为每立方米10毫升。用法是按室内体积计算甲 醛用量放入特定容器中，再按甲醛毫升数的一半数称取高锰酸钾所需 克数放入玻璃或铁制容器中，将窗户封闭严后，将甲醛倒入高锰酸钾 容器内，立即退出，封闭房门，12小时后通风后方可使用。） 或75%酒精（30ml/m3）喷雾消毒。 消毒后开空调通风换气，保持室内温度度16~28℃，相对湿度为 40~70。
犬脏器摘取参考顺序
①胸腺：将胸骨向头部翻开，露出贴附于 胸骨下的胸腺，用眼科镊分离胸腺和胸 骨，将镊子伸入胸腺下方，取出胸腺。 ②心脏：用解剖镊夹起心脏，逐一切断心 脏周围的血管，取出心脏。
③肺脏：用解剖镊夹住气管末端，一手提起气管 将肺脏向下拉，另一手持眼科剪依次分离肺脏和 胸壁，将气管和肺一起取下。 ④腹腔脏器：由膈处切断食管，由骨盆腔切断直 肠，提出食管和直肠，将肝、脾、胃、肠、胰腺 全部取出。
10 20.2 40.4 60.6 80.8
12 79.0 38.0 57.0 76.0 95.0
15 77.7 35.4 53.1 70.8 88.5
0.02 730.3 260.6 390.9 527.2 651.5 1303
10.5 21.0 31.5 42.0 52.5
38.4 115.6 107.2 100.8
⑤腹腔注射 可由助手固定动物，使其腹部朝上，实 验者即可进行操作。注射位置为：脐后腹 白线两侧边1—2cm处进行腹腔注射。
5、给药剂量
不同种类的实验动物一次给药能耐受的 最大剂量不同，灌胃太多时易导致胃扩 张，静脉给药剂量过多时易导致心力衰竭 和肺水肿。现将不同种类实验动物一次给 药最大耐受量列出，以供参考。
采血
部位：前肢头静脉或后 肢小隐静脉，将犬保定在 四孔保定架上，消毒。助 手握紧抽血区上部，使静 脉充盈，针头刺入血管， 抽血，每只犬可采血 10~20ml。犬还可在耳 缘静脉采血。
尿液采集
代谢笼采集尿液：将动物放在特制的笼内饲养，动物
排便时，可通过笼子底部的大小便分离漏斗，将尿液与粪
便分开，达到采集尿液的目的。
（3）颅腔检查及脑组织采集 从头顶部正中线切开皮肤，前至鼻尖后至颈部，将皮肤和皮 下组织向两侧拉开暴露颅顶，剥离附着在头颅和颈部脊柱上的 肌肉，沿顶骨和顶间骨闭合处切开颅骨，剪除顶骨，暴露脑 部，将眼科镊插入脑与颅骨的间隙分离脑组织，并切断延髓， 一手持解剖镊支起头部，鼻尖向下，另一手持眼科镊仔细分离 脑组织，使其从颅腔中脱出，切断视神经，将整个脑组织端 出。
（4）在使用麻醉剂过程中，随时观察Beagle犬 的反应。 （5）在麻醉期间，将犬舌头拉出，防止窒息。麻 醉后Beagle犬体温下降，药做好保温措施。
（6）静脉注射麻醉药时要缓慢，同时观察 肌肉紧张性、角膜反射和对皮肤夹捏的反 应，当反应减弱或消失时，立即停止注 射。
4、给药方法
（1）经口给药 （2）注射给药
每次饲喂后，对食盒进行清洗，每天冲洗 粪便1-3次，每周清洁和消毒一次笼具和自 动饮水器，每笼饲养1只动物。
2、抓取与保定
抓取犬只时要求尽量徒 手，戴手套、穿长袖工作 服。 在任何情况下，抓取犬只 的动作都要尽量轻柔。 用双手抓住犬的前肢腋窝 处提起，或用双手托住犬 的腹部。 禁止抓揪耳朵和尾巴。
5、给药剂量
表2 不同种类实验动物一次给药能耐受的最大剂量(ml)
动物名 称 小鼠 大鼠 兔 猫 猴 犬
灌胃
皮下注射
肌肉注 射 0.2 0.5 2．0 2．0 3．0 4．0
腹腔注 射 1 2 5 5 10 —
静脉注 射 0.8 4.0 10 10 20 100
0.9 5.0 200 150 300 500
（3）Beagle狗检疫的程序和方法： Beagle犬在消毒检疫间内进行初步检查， 未见异常者进入观察室内进行检疫观察， 发现异常者应移入隔离室进行观察，确定 不符合要求的淘汰。
全面检查动物的健康状况，主要检查的内容有：精神状态 和营养状况；皮毛：有无光泽、脱毛、红肿、出血、结 痂、干燥；眼：结晶体是否浑浊、角膜是否充血、损伤、 有无眼屎、流泪等；耳：有无损伤、耳壳有无曲折等；四 肢：有无弯曲、脱臼、外伤等；肛门：有无下痢、便血、 脱肛等。
核对实验动物相关资料：如实验动物质量合格证明，实验 动物生产许可证复印件、实验动物质量监测合格证复印 件、实验动物环境设施监测合格证复印件、送货单等。在 接收检疫间内打开笼，将Beagle犬从笼内取出，用0.1% 新洁尔灭对动物进行喷淋消毒，用毛巾擦干。
经观察未见异常的动物，移Hale Waihona Puke Baidu已经安排的观察室中进行检 疫观察。经观察有异常的动物，应留在接收检疫间内进行 检疫观察。在相应的笼具上插上标签，标签的内容应包 括：研究专题号、专题负责人、动物种系、动物性别、耳 号、购入日期等。
检疫期为2周，检疫过程中发现有动物异常现象时，应判明异常的原 因，经专题负责人同意后适当延长检疫期。 在检疫中发现有死因不明的动物时，按实验动物死亡处理的标准操作 规程处理。 不同品种（品系）或不同来源的实验动物不得饲养于同一饲养室内。
（4）除实验有特殊要求外，应保持充足的干净饮 用水。每天喂饲料量为体重的3~5%，一般每天 饲喂两次，按一天总食量平均分成两份，上下午 两次给予，如因实验等原因可适当调整。
表3
人用剂量与不同种类动物间剂量的关系
种 类 体 重 50 11.2 22.4 33.6 44.8 56.0 ug.kg-1.d-1 60
人
猴
犬
小鼠
70 10 20 30 40 50 100
80 9.6 19.2 28.8
4 28.9 57.8 86.7
5 26.8 53.6 80.4
6 25.2 50.4 75.6
1.5 5.0 10 10 50 100
与动物对同药物的耐受性相差很大。一般说来，动物的耐受性比人大，也就 是单位体重动物的用药量比人要人，近几年来新药药效研究中多以下列公式 算： D2=D1×K2／K1×W1/W2 D为药物剂量，K为常数，W为动物体重(kg)(1指人；2指动物。人及不同 种类动物的K值不同，人1．6、猴11．2、兔10．1、大鼠9．1、小鼠 9．1、鼠9．8、猫9．8。如一例体重为70kg的人，某药剂量为 20ug．kg-1．D-1，—只5kg重的猴为53．6 ug．kg-1．D-1，一只 10kg重的犬为40．4ug．kg-1．D-1，而一只20g重的小鼠为260．6 ug．kg-1．D-1(见表3)人用剂量与不同种类动物间剂量的关系。
（2）向有资质的生产单位订购符合实验要求的Beagle犬。 Beagle犬到达后，首先检查运输笼情况，完好无损的才 可接收。对照订货条件与到达的动物一一进行核实。 核实的内容有：订货人、研究专题、日期、动物种系、动 物数量、动物性别、等级、体重范围、免疫驱虫档案等， 并确认已安排的动物观察室是否准备妥当。
②皮内注射 先在犬需要注射部位脱毛，用针头直刺 入皮内，注入药物后，皮肤表面鼓起小 泡，停留片刻拔出针头。
③肌肉注射 一般选择肌肉丰满而无大血管通过的臀 部或大腿外侧，针头插入回抽无血即可注 射。
④静脉注射 犬可前肢头静脉和后肢小隐静脉注射。将犬固 定在四孔保定架上，注射部位剃毛，消毒，助手 紧握注射部位后部，使血管充盈，将针头插入血 管，后抽有回血，放开压迫即可注入药物。注射 后，用纱布或脱脂棉压迫止血。
导尿法：犬轻度麻醉后，插一根输尿管即可收集 尿液。压迫膀胱法：轻度麻醉后，实验人员用手 在犬下腹部加压，当压力够时，膀胱括约肌松 弛，尿液即可自动排出。 还可以用输尿管插管法、膀胱插管法、膀胱穿刺 法采集尿液等。
精液采集
成年公犬置于其熟悉的安静环境下，置一放情母犬在 旁，实验人员合适的力度紧握一紧一松挤压公犬阴茎膨大 部，公犬很快就勃起射精，公犬精液分三段，只有中段有 精子，前后段较少，一般用容器接中段精液用于研究。