羟自由基测定试剂盒使用说明
羟值测定的详细操作说明
引言：羟值测定是一种常用的实验室技术，用于确定物质中羟基的含量。
在过去的几十年里，羟值测定已经被广泛应用于化学、生物、医药等领域的研究和实践中。
本文将详细介绍羟值测定的操作步骤和实验注意事项，以帮助读者正确进行该实验，并获得准确的结果。
概述：羟值测定是一种基于比色法的分析技术，通过与还原剂溶液反应，羟基会将还原剂氧化，产生可观测的颜色变化。
通过测定反应前后的吸光度差，可以计算出样品中羟基的含量。
本文将按照实验操作的顺序，分为样品的制备，反应条件的确定，测量吸光度，计算羟值以及实验注意事项等五个大点进行阐述。
正文内容：1. 样品的制备a. 样品的选择：根据实验目的选取包含羟基化合物的样品。
b. 样品的预处理：根据样品的性质和实验要求，进行适当的预处理，如提取、稀释等。
c. 样品的保存：尽可能在使用前将样品保持干燥和无杂质状态，以确保最佳的实验结果。
2. 反应条件的确定a. 还原剂的选择：根据样品的特性选择合适的还原剂，如磺醇、酚类或亚磺酸等。
b. 反应pH的调节：根据样品的酸碱性质，调节反应体系的pH值，以实现最佳反应效果。
c. 反应温度的选择：根据实验要求确定反应温度，控制反应的速率和准确度。
3. 测量吸光度a. 光谱仪的选择：选择合适的光谱仪，确保其具备足够的灵敏度和波长范围。
b. 样品的制备：将反应后的样品转移到透明的试管或比色皿中，以便测量吸光度。
c. 光程的选择：根据样品的浓度和光谱仪的灵敏度，选择适当的光程进行吸光度测量。
d. 波长的选择：选择合适的波长进行吸光度测量，以保证测量的准确性和可重复性。
4. 计算羟值a. 标准曲线的绘制：根据已知羟值的标准样品，制作标准曲线，用于后续羟值的计算。
b. 吸光度的测量：记录取样品吸光度的值，并根据标准曲线，计算出样品中羟基的含量。
c. 数据处理：根据实验要求和数据分析方法，对数据进行统计学处理和结果分析。
5. 实验注意事项a. 实验操作要规范，遵循安全操作规程，避免可能的危险和事故。
总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒(FRAP 微板法)说明书
植物样品的吸光度值和 0.5mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则该血浆(血清)样品的总抗氧化 能力为 0.5mM/(0.5g/5ml)=0.5mmol/100g；
血浆(血清)样品的吸光度值和 0.7mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则该血浆(血清)样品的总抗 氧化能力为 0.7mM；
细胞(组织)匀浆样品的吸光度值和 0.3mM 的 Fe2+的吸光度值相同，该匀浆液蛋白浓度为 0.2mg/ml，则该细胞(组织)样品的总抗氧化能力为 0.3mM/0.2mg/ml=0.15mmol/g； 0.3mM 的抗氧化物质，其吸光度值和 0.6mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则其相对总抗氧化能力为 0.6mM/0.3mM=2。
注意事项： 1、 实验材料应尽量新鲜，样品提取的整个过程最好在 4℃条件下进行；如取材后不能立即 检测，也可以-80℃冻存后再进行测定(应在 1 个月内测定完毕)。 2、 亚铁标准溶液如变为黄色或棕黄色应弃用。 3、 测定 593nm 如有困难，亦可在 585~605nm 范围内进行测定。 4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒(FRAP 微板法)即 Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，简称 T-AOC Assay Kit，是一种采用铁离子还原能力(Ferric Reducing Ability of Plasma,FRAP)来测定样品抗氧化活性的方法，其原理是在酸性条件下样品中的抗 氧化物质还原 Fe3+-TPTZ 产生 Fe2+-TPTZ，呈现出明显的蓝色(紫色)，于 593nm 处有最大 的光吸收，在 Fe3+-TPTZ 过量的情况下测定蓝色物质的生成量即可获得待测样品的还原能 力即总抗氧化能力，由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素，并且由 于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于 10μM，因此血浆等样品中的铁离 子或亚铁离子不会显著干扰 FRAP 法的检测反应，本方法可以对血浆、血清、尿液等各种体 液，细胞或组织裂解液、植物或中草药抽提液或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力进行检测。 该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
羟值测定操作规程
本规程适用于半成品羟值的检验，采用乙酸酐-对甲苯磺酸酰化法。
1 仪器与试剂恒温水浴（50±2）℃；250ml精密磨口塞碘量瓶；50ml碱式滴定管；10ml移液管；分析天平，分度值0.1㎎；乙酸酐（AR）；乙酸乙酯（AR）；甲苯磺酸（AR）；吡啶（AR）；氢氧化钾（AR）；乙酰化试剂：将9.5 g对甲苯磺酸溶解于800ml乙酸乙酯中（若有不纯物，应除去），边搅拌慢慢加入80ml乙酸酐，混合均匀即成无色透明溶液；正丁醇/甲苯溶液：按2/1体积比配制；混合指示剂：3体积0.1%溴百里香酚蓝乙醇溶液与1体积0.1%甲酚红乙醇溶液混合。
2 试验步骤2.1取1-2g待测样（根据待测样羟值范围确定称量质量，如下表所示）放入250ml碘量瓶中，加入约3ml乙酯（称量质量在1.5g以上则加入10 ml乙酯），在电炉上加热使待测样溶解。
等待测样溶解完全后，将碘量瓶用自来水冲洗碘量瓶外壁使试样冷却至室温；2.2 取约2ml乙酯冲洗碘量瓶内壁，使待测样溶液尽量留在瓶底；2.3用移液管准确移取10.0ml乙酰化剂于碘量瓶中，立即装上冷凝管，用乙酯湿润瓶口；2.4将碘量瓶置于（50±5）℃水浴上加热，温度不可超过55℃，深入深度至少约1cm，保持20min。
期间摇晃一次，使其混合均匀；2.5 用3-5ml乙酯冲洗冷凝管管壁，再用洗瓶冲洗冷凝管管口（耗用约1-2ml水），然后立即用自来水冲洗碘量瓶外壁冷却碘量瓶至室温（温度必须降低到室温后才能进行下一步操作）；2.6用移液管移取6ml吡啶加入到碘量瓶中，再取3-4ml水加入到碘量瓶中，摇匀后放置5min-10min（至少需要5min）；2.7 用10ml-15ml正丁醇/甲苯混合液冲洗瓶口及瓶内壁，加入5滴混合指示剂，在终点前可再加入1-2滴混合指示剂；2.8 用0.5mol/l的KOH-乙醇标准溶液滴定，溶液由黄色变为蓝色即为终点（溶液变得澄清时可以再加1-2滴混合指示剂，需降低滴定速度，找到变为蓝色的突变点）；相同条件下同时作空白试验；2.9 当试样消耗的体积与空白所消耗的体积之比小于0.75时，则乙酰化剂不足量，需增大乙酰化剂的用量或者降低试样的质量。
羟值测定的详细操作说明(二)2024
羟值测定的详细操作说明（二）引言概述：本文旨在详细介绍羟值测定的操作步骤，帮助读者全面了解该实验的具体操作要点和注意事项。
羟值测定是一种常用的实验方法，用于测定某种物质中羟基的含量，具有重要的应用价值。
本文将从实验准备、实验步骤、实验数据处理、实验注意事项和实验总结五个大点进行详细阐述。
实验准备：1. 准备所需器材和试剂：酚酞指示剂、稀盐酸、标准氢氧化钠溶液、待测物样品。
2. 检查器材完好性：检查试剂的保存状态、检查仪器和玻璃仪器是否完好。
3. 检查试剂质量：检查试剂是否过期，如过期应重新购买新的试剂。
实验步骤：1. 准备标准曲线：制备一系列含有不同浓度的氢氧化钠溶液，采用酚酞指示剂，用盐酸滴定至颜色突变。
2. 处理待测物样品：将待测物样品溶解并稀释至适当浓度，加入酚酞指示剂。
3. 滴定待测物样品：用标准盐酸溶液滴定待测物样品溶液，记录所需盐酸的用量。
4. 计算羟值：根据滴定所需盐酸的用量计算待测物样品中羟基的含量。
5. 重复实验：重复以上步骤，取平均值作为最后的结果。
实验数据处理：1. 绘制标准曲线：将所测得的氢氧化钠溶液浓度与所需盐酸的用量绘制曲线。
2. 计算待测物样品中羟基的含量：用标准曲线计算待测物样品中羟基的含量。
3. 计算实验误差：计算实验重复性和精密度误差。
实验注意事项：1. 实验室安全：操作时应佩戴防护眼镜和实验服，注意化学品的安全使用。
2. 精确测量：使用准确的量具进行溶液制备和滴定。
3. 混合均匀：在制备待测物样品时，应充分混合以确保样品的均匀性。
4. 试剂保存：将试剂保存在干燥、避光和密封的容器中，避免受到外界环境影响。
5. 数据记录：确保准确记录实验数据，尽量避免数据丢失或错误。
实验总结：羟值测定是一种常用的实验方法，可以准确测定某种物质中羟基的含量。
在实验过程中，正确操作仪器和试剂，严格按照实验步骤进行，注意实验安全并准确记录数据，都是保证实验结果准确可靠的关键。
通过本文所述的详细操作说明，读者能够更好地掌握羟值测定的实验技巧，提高实验效率和结果的准确性。
羟值测定的详细操作说明
羟值测定的详细操作说明2羟值定义与测定原理2.1 羟值定义羟值是与每克重的试样中羟基摩尔量相当的氢氧化钾的毫克重量，单位以mg KOH/g表示。
2.2羟值测定原理在115℃回流条件下，羟基与溶解在吡啶中的邻苯二甲酸酐进行酯化反应，过量的邻苯二甲酸酐用氢氧化钠标准溶液滴定。
2.3干扰水分会使吡啶变黄，影响终点判定，且在反应体系中抢夺邻苯二甲酸酐破坏反应平衡，要求不能有水参与测定过程。
3试剂3.1吡啶：分析纯，含水量小于0.1%，注意密封保存，若呈黄色则弃用。
3.2邻苯二甲酸酐：即苯酐，为分析纯，密封保存，游离酸大于0.2%或吸潮时弃用。
3.3邻苯二甲酸酐吡啶溶液3.3.1 以苯酐/吡啶=20g/120g的比例称取试剂于经干燥的棕色玻璃瓶中，摇至溶解，放置过夜后使用。
若溶液因颜色变棕褐色则弃用。
3.3.2 本溶液以酚酞为滴定指示剂，每25ml消耗0.5mol/L NaOH 标准溶液在100±5ml为宜。
3.3.3 为防止本溶液因吸收水分而失效，要求启用的第二天内使用完毕。
同时配制前应先根据测定次数估计所需的试剂量来量取吡啶试剂，减少浪费。
环境湿度大于65%或潮湿时不宜配制本溶液。
3.4氢氧化钠标准溶液：要求浓度C=0.5mol/L，用邻苯二甲酸氢钾基准试剂标NaOH定。
3.5其它试剂：酚酞指示剂、丙酮、凡士林。
4仪器与安装4.1仪器4.1.1 24/29标准磨口锥形瓶，250ml。
4.1.2 球形冷凝管，冷凝管长度大于40cm，接软水管，通自来水。
4.1.3 油浴，115±2℃。
4.1.4 移液管，25ml。
4.1.5 电子分析天平，0.1mg。
4.1.6 加热温控仪。
4.2 安装事项按图1所示，安装加热回流装置。
安装时注意铁架台要用重物稳定，支架要充分固定。
玻璃磨口间要用凡士林润湿密封。
升降台高度不宜过高，以防油浴定不平稳。
锥形瓶底部与油浴锅底部相距10~15mm为宜，导热油液面需浸没锥形瓶一半。
羟自由基清除率测定方法
羟自由基清除率测定方法
1. 哎呀呀，你知道吗？有一种羟自由基清除率测定方法叫比色法呢！就好像我们通过眼睛看颜色的变化来判断一样，是不是很神奇？比如在做实验的时候，加入特定的试剂后，颜色一下子就变了，那就能知道羟自由基清除的情况啦！
2. 嘿，还有一种电子自旋共振法呢！这就好像是给羟自由基装上一个追踪器，能清楚地看到它们的动向和变化。
想象一下，在实验室里，我们能这么精准地捕捉到羟自由基的信号，是不是超厉害呀！就像警察抓小偷一样把它们都“逮住”呢！
3. 哇塞，化学发光法也是羟自由基清除率测定的好方法呀！这不就像夜晚的萤火虫一闪一闪地告诉我们它在哪里嘛！比如说当有物质能清除羟自由基时，那光芒就会减弱，多直观呀！
4. 哟呵！荧光分析法也很不错呢！它就像是一道光，照亮羟自由基的“踪迹”。
我们通过观察荧光的变化来了解羟自由基的清除效率，感觉自己就像个侦探一样在寻找线索呢！比如说在某个样品中加入特定试剂后，荧光发生了改变，那就是关键信息呀！
5. 哈哈，脉冲辐解法也能用来测羟自由基清除率哦！这就如同闪电划过，清楚地显示出羟自由基的状态呢。
就像闪电带来的瞬间光明一样，让我们能看清整个过程。
在实验中看到那些数据的变化，可有意思啦！
6. 哇哦！分光光度法也能担此大任呀！这就像用一个神奇的“眼睛”去观测羟自由基的世界。
我们按照步骤一步步操作，就能得到想要的结果啦。
比如说在特定波长下测量吸光度的变化，就知道羟自由基的清除情况如何啦！
我觉得这些羟自由基清除率测定方法都各有千秋，都为我们研究和了解羟自由基提供了有力的手段呀！。
羟自由基清除能力检测试剂盒说明书 微量法
北京索莱宝科技有限公司羟自由基清除能力检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1325规格：100T/96S 产品内容：提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体0.16mL×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入9.84mL 蒸馏水混匀，也可按比例现用现配，配好的试剂4℃保存一周。
产品说明：羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。
它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。
羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
H 2O 2/Fe 2+通过Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe 2+水溶液中Fe 2+氧化为Fe 3+，导致536nm 的吸光度下降，样品536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。
自备实验用品：恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：一、样品的制备：（1）组织样品的制备：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
（2）血清、果汁等液体样品可直接测定。
（3）提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。
二、测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至536nm，蒸馏水调零。
2、操作表：在1.5或0.5mLEP管中分别加入下列试剂空白管对照管测定管试剂一（µL）505050试剂二（µL）100100100试剂三（µL）100100100充分混匀，防止颜色不均一。
羟自由基清除能力检测试剂盒说明书 可见分光光度法
羟自由基清除能力检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1320规格：50T/48S 产品内容：提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体0.16mL×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入9.84mL 蒸馏水混匀，也可按比例现用现配，配好的试剂4℃保存一周。
产品说明：羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。
它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。
羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
H 2O 2/Fe 2+通过Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe 2+水溶液中Fe 2+氧化为Fe 3+，导致536nm 的吸光度下降，样品536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。
自备实验用品：可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：一、样品的制备（1）组织样品的制备：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
（2）血清、果汁等液体样品可直接测定。
（3）提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至536nm，蒸馏水调零。
2、操作表：在1.5mLEP管中分别加入下列试剂空白管对照管测定管试剂一（mL）0.150.150.15试剂二（mL）0.30.30.3试剂三（mL）0.30.30.3充分混匀，防止颜色不均一。
样品（mL）--0.15试剂四（mL）-0.150.15HO（mL）0.750.600.452混匀后37℃孵育60min。
羟自由基清除能力测定试剂盒使用说明
羟自由基清除能力测定试剂盒使用说明 微量法
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 货号：BC1325 规格：100T/96S 产品内容：
标准液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。 试剂三：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。 试剂四：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
立即混匀，防止局部颜色过浓
样品（μL）
50
试剂四（μL）
20
20
H2O（μL）
70
50
混匀 37℃，60min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 536nm 处吸光值，空白管、对
照管和测定管的吸光值分别记为 A 空、A 对和 A 测。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
计算公式： 羟自由基清除率 D% =（A 测-A 对）÷（A 空-A 对）×100%
2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。
3. 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如 5 mg/mL。
二、 操作步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 536nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管
对照管
测定管
试剂一（μL）
30
30
30
试剂二（μL）
80
80
80
试剂三（mL）
20
20
20
A 空、A 对、A 测：空白管、对照管和测定管的吸光值。
注意事项： 为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组
织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。
羟自由基清除率测定
抗氧化活性的测定(参考)——测定活性物质对羟自由基的清除率（羟自由基清除试验）采用Fenton 试剂：过氧化氢/亚铁盐。
原理：H 2O 2与亚铁离子反应生成·OH,·OH 自由基一般存活时间比较短，具有较高的反应活性。
当在反应体系中添加水杨酸，便能快速的捕捉·OH 而产生紫色化合物（2,3-二羟基苯甲酸），该有色化合物在510nm 处有较大吸收峰，测其吸光度可表示羟自由基（•OH ）的多少，吸光度与羟自由基（•OH ）的量成正比。
反应体系中若加入羟自由基（•OH ）清除剂后，被氧化的水杨酸减少，则体系颜色变浅甚至消失，吸光度变小。
操作：样品处理：蔬菜水果切分，榨汁（切分后可放在2%的盐酸或草酸溶液中护色）。
将蔬菜汁或果汁放入50ml 离心管中（如有颜色加适量活性炭或白陶土），在3000~ 4000rpm 下离心10min~ 20min 后（若样品蛋白含量较高，需加适量乙酸锌，亚铁氰化钾）快速过滤，滤液备用。
取25ml 比色管2支（样品管、空白管），分别加入5ml 1mmol/L 硫酸亚铁溶液、5ml 3mmol/L H2O2溶液，样品管中加入1ml 样品溶液，空白管中加入1ml 蒸馏水，混合均匀后用3mmol/L 水杨酸溶液定容至刻度，在37℃(0.1±℃)的恒温水中反应15min 后，用分光光度计在510nm 的波长下测定各管的吸光度。
以3mmol/L 水杨酸溶液调零。
其对•OH 自由基的清除率SA （%），可根据下式进行计算：式中：A0—不加样品的吸光度； A1—加入样品的吸光度100A0A1-A0= SA(%)⨯清除率###【以往经验，不一定全适用】：若样品不进行脱色处理，则操作如下：在3支25ml 的比色管中（样品管、空白管、样品本底管）依次加入5ml1mmol/L 硫酸亚铁溶液，空白管和样品管中各加入5ml3mmol/L H 2O 2溶液，本底管中H 2O 2溶液用蒸馏水代替。
羟基自由基清除能力测定法的简易操作图解-脱氧核糖降解法-脱氧核糖分析法
羟基自由基(·OH)清除能力测定法的简易操作图解（适用于各种抗氧化剂）文献来源[1] Xican Li. Solvent effects and improvements in the deoxyribose degradation assay for hydroxylradical-scavenging. Food Chemistry, 2013, 141(3):2082-2088.操作图解图1 羟基自由基(·OH)清除能力测定法（脱氧核糖降解法）的实验操作图具体方法1 溶液配制0.2 MKH2PO4溶液: 100mL蒸馏水+2.7218g KH2PO4。
0.2 M Na2HPO4溶液: 500mL蒸馏水+35.814g Na2HPO4·12H2O。
磷酸盐KH2PO4－Na2HPO4缓冲液phosphate buffer（0.2M, pH7.4, 100mL）：19mL0.2 MKH2PO4+ 81mL 0.2 MNa2HPO4. （注意：19：81是大概的体积比，具体的比例以pH=7.4为准）。
Na2EDTA溶液：（1mM, 25mL）：8.4 mg+25mL蒸馏水。
FeCl3溶液：（3.2mM, 5mL）：4.2 mg+5mL蒸馏水。
抗坏血酸溶液：（1.8mM, 50mL）：15 mg+50mL蒸馏水。
H2O2溶液：（50 mM,5mL）：30 mg 30% H2O2+5mL蒸馏水。
脱氧核糖溶液：（50 mM, 2 mL）：15 mg脱氧核糖+2 mL蒸馏水(该用量约可做40个数据) 。
三氯乙酸溶液TCA（10%, 10 mL）：1 g + 10 mL蒸馏水。
硫代巴比妥酸溶液TBA：（5%, W/V, 20mL）:取1gTBA+20mL蒸馏水+20mgNaOH (临用时配，超声溶解. 该用量可做40个数据) 。
样品溶液：选合适的溶剂（如甲醇、无水乙醇等），先配成1mg/mL的溶液试试。
tmb检测羟基自由基实验报告
tmb检测羟基自由基实验报告本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠羟基自由基（HO·）水平。
用纯化的大鼠羟基自由基（HO·）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入羟基自由基（HO·），再与HRP标记的羟基自由基（HO·）抗体结合，形成抗体－抗原－酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的羟基自由基（HO·）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠羟基自由基（HO·）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton比色法)
羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton 比色法)简介：在生命活动的代谢过程中不断产生各种自由基，其中羟自由基·OH 是体内最活跃的活性氧，可介导许多生理变化。
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损Leagene 羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton 比色法)又称羟自由基清除能力检测试剂盒或羟自由基检测试剂盒，其检测原理H 2O 2/Fe 2+ 通过Fenton 反应产生羟自由基，将Fe 2+氧化为Fe 3+，求得标准曲线，通过分析捕获产生的羟自由基可计算出自由基清除率或清除能力。
该试剂盒主要用于测定植物组织、血清、血浆等样本中的羟自由基清除率或羟自由基清除能力。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 实验材料：植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等3、 研钵或匀浆器4、 离心管或试管5、 离心机6、 比色杯7、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按 OH编号 名称TO1133 50T Storage试剂(A): OH Lysis buffer 250ml RT 试剂(B): OH Assay buffer 25ml RT 避光 试剂(C): H 2O 2基液 1ml RT 试剂(D): OH 显色液 50ml 4℃ 避光 试剂(E): Fenton 基液 25ml RT 避光 试剂(F): OH 萃取液 100mlRT 使用说明书1份Lysis buffer的比例，加入OH Lysis buffer后匀浆或研磨，室温静置4h，3000g离心，上清液即为羟自由基粗提液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃保存，用于羟自由基(·OH)的检测。
DPPH自由基清除能力检测试剂盒说明书
DPPH 自由基清除能力检测试剂盒说明书微量法货号：BC4755规格：100T/48S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体30mL×1瓶（自备）常温保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：无水乙醇自备；2、试剂二：粉剂置于瓶内EP 管中。
临用前加入4.05mL 试剂一振荡溶解，用不完的试剂可于-20℃保存1个月，建议分装保存，避免反复冻融；临用前根据试验所需量按照试剂二：试剂一（V:V ）=4：21的比例配制成工作液，现配现用，用不完的工作液可于2-8℃保存一周；3、试剂三：10mg 维生素C 。
临用前加入1mL 提取液，充分振荡溶解，配成10mg/mL 的维生素C 溶液，2-8℃保存两周；用于阳性对照。
产品说明：DPPH 自由基一种很稳定的氮中心的自由基，是样本抗氧化能力的重要指标之一，广泛应用于抗氧化类食品、保健品及药品的研究中。
DPPH 自由基有单电子，其醇溶液呈紫色，在515nm 处有强吸收。
当有抗氧化剂存在时，DPPH 自由基被清除，其溶液颜色变浅，515nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。
本试剂盒中，通过吸光度下降的程度来反映样本清除DPPH自由基的能力。
DPPH ·DPPH ·H注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、台式离心机、无水乙醇、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50目筛和蒸馏水。
操作步骤：一、样本的制备（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）AntioxidantsBeijing Solarbio Science &Technology Co.,LtdTel:400-968-6088Fax:************（1）植物样本的制备：将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过30~50目筛；称取约0.05g样本，加入1mL提取液后置于40℃水浴锅中浸提30min；10000rpm室温离心10min，取上清，置于冰上待测。
索莱宝 羟自由基清除能力检测试剂盒 说明书 可见分光光度法
羟自由基清除能力检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1320规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体55 mL×1瓶4℃保存试剂一液体10 mL×1瓶4℃保存试剂二液体20 mL×1瓶4℃保存试剂三液体20 mL×1瓶4℃保存试剂四液体0.1 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂四：液体置于试剂瓶内EP 管中。
临用前加入9.9 mL 蒸馏水混匀，也可按试剂四体积（mL ）：蒸馏水（mL ）=1∶99的比例，现用现配，配好的试剂4℃保存一周。
产品说明：羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。
它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。
羟自由基清除能力是样本抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
H 2O 2/Fe 2+通过Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe 2+水溶液中Fe 2+氧化为Fe 3+，导致536 nm 的吸光度下降，样本536 nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了样本清除羟自由基的能力。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL 玻璃比色皿、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织样本的制备：称取约0.1 g 组织，加入1 mL 提取液进行冰浴匀浆，10000 g 4℃离心10 min ，取上清，置冰上待测。
2、血清、果汁等液体样本可直接测定。
3、提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5 mg/mL 。
植物细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒产品说
植物细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂羟苯基荧光素，与细胞内羟自由基的反应，产生绿色荧光，来测定细胞内羟自由基活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢等的研究。
其适用于各种新鲜植物组织（例如根尖、叶片等）和培养细胞等细胞内氧化应激活性氧羟自由基的分析。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，荧光清晰。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。
其中羟自由基或氢氧基具有极度反应性和毒性，同时半衰期短（10－9至10－10秒）。
其产生主要是水分子受到高能量放射后裂解、过氧化物和次氯酸反应、过氧化氢的还原、超氧化物的歧化等形成。
在植物组织中，羟自由基将启动放射性诱导损伤、攻击植物蛋白和膜脂而引起氧化损伤。
羟苯基荧光素（Hydroxyphenyl fluorescein；2-[6-(4’-Hydroxy)phenoxy-3H-xanthen-3-on-9-yl]benzoic acid；HPF）是一种完全自由通过细胞膜的染色剂，一旦与羟自由基反应，产生脱苄基（o-dearylation）作用，生成强烈荧光的荧光素（fluorescein）。
植物细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒产品说
植物细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂羟苯基荧光素，与细胞内羟自由基的反应，产生绿色荧光，来测定细胞内羟自由基活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢等的研究。
其适用于各种新鲜植物组织（例如根尖、叶片等）和培养细胞等细胞内氧化应激活性氧羟自由基的分析。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，荧光清晰。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。
其中羟自由基或氢氧基具有极度反应性和毒性，同时半衰期短（10－9至10－10秒）。
其产生主要是水分子受到高能量放射后裂解、过氧化物和次氯酸反应、过氧化氢的还原、超氧化物的歧化等形成。
在植物组织中，羟自由基将启动放射性诱导损伤、攻击植物蛋白和膜脂而引起氧化损伤。
羟苯基荧光素（Hydroxyphenyl fluorescein；2-[6-(4’-Hydroxy)phenoxy-3H-xanthen-3-on-9-yl]benzoic acid；HPF）是一种完全自由通过细胞膜的染色剂，一旦与羟自由基反应，产生脱苄基（o-dearylation）作用，生成强烈荧光的荧光素（fluorescein）。
羟基自由基测定试剂盒[实用新型专利]
![羟基自由基测定试剂盒[实用新型专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/e6e52c1af90f76c660371a1c.png)
专利名称：羟基自由基测定试剂盒
专利类型：实用新型专利
发明人：刘静,李湘利,常彦红,赵强,魏海香申请号：CN201922100108.9
申请日：20191129
公开号：CN211385118U
公开日：
20200901
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本实用新型涉及一种羟基自由基测定试剂盒，包括硬纸盒和试剂管，硬纸盒的顶部设有盖板，盖板的顶部外侧设有与硬纸盒外壁过盈配合的翻边，硬纸盒内设有上保护软块和下保护软块，下保护软块上设有多个支撑盲孔，上保护软块上设有支撑凹槽，盖板的中部固定有插杆，上保护软块与下保护软块中部均设有插孔，插杆的底端设有水平的限位槽，限位槽内插有限位挡板。
本实用新型通过硬纸盒和盖板可以防止盒体被压扁，上保护软块和下保护软块可以保护试剂管受撞击和压扁，并且试剂管过盈配合安装在下保护软块的支撑盲孔内，进一步防止试剂管脱出，另外通过插杆和限位板配合，可以把上保护软块与下保护软块连接在一起，方便取出，防止脱落。
申请人：济宁学院
地址：272001 山东省济宁市高新区海川路16号济宁高新区大学园
国籍：CN
代理机构：青岛发思特专利商标代理有限公司
代理人：丁鹏鹏
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羟自由基测定试剂盒使用说明
货号：LA1950
规格：50管/48样
产品内容：
试剂一：3%H2O2标准品贮备液0.5mL×1支，4℃保存3个月。
0.03%标准品应用液的配置：3%H2O2标准品贮备液：双蒸水=1：99稀释，现用现配。
试剂二：底物贮备液1mL×1支，4℃保存3个月。
底物应用液的配制：
如果您的样本为抑制羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度低，则底物反应液的配制：底物贮备液：双蒸水=1：99稀释，现用现配。
如果您的样本为产生羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度高，则底物反应液的配制：底物贮备液：双蒸水=1：299稀释，现用现配。
试剂三：甲液贮备液2mL×1支，4℃保存3个月。
用时用双蒸水稀释至1：9稀释成应用液。
乙液7mL×2支，4℃保存3个月。
试剂三应用液的配制：甲液应用液与乙液等比列混合，按需配置，剩余的4℃保存。
试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存3个月。
用时加双蒸水稀释至100mL制备应用液，4℃保存。
若有结晶，则放置37℃水浴至全部溶解后再稀释。
试剂五：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。
试剂六：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。
试剂七：分析纯的冰乙酸自备。
显色剂的配制：试剂四应用液：试剂五：试剂六：冰乙酸=8:3:3:2，现用现配。
抑制羟自由基的物质如：血清（浆）、各种组织匀浆液、口服液等
产生羟自由基的物质如：中性白细胞、某些药物、部分植物等。
产品简介：
Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和Fenton反应产生的OH·量成正比，当给予电子受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与OH·的多少成正比列关系。
操作步骤：
以上配制好的应用液，先在37℃水浴中温育3min，一下操作在37℃水浴中进行。
空白管标准管对照管测定管
双蒸水（mL）0.40.20.2
0.03%H2O2标准应用液（mL）0.2
底物应用液（mL）0.20.2
样本（mL）0.2
试剂三应用液（mL）0.40.40.40.4
混匀，37℃反应1min（准确以秒表计时），从加完试剂三开始到1min结束，立即加入显色剂终止反应，一次只能做一个管子。
显色剂2222
混匀，室温放置20min，波长550nm，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
参考取样量：血清（浆）样本用生理盐水20倍稀释后取0.2mL做检测；如果您有精确微量移液器，可直接取0.010mL血清（浆），再加0.190mL生理盐水。
组织匀浆上清，取0.2mL 检测。
具体取样量根据您自己做的预实验确定。
计算：
1、血清计算公式：
定义：规定每毫升血清（浆）在37℃下反应1分钟，使反应体系中H2O2浓度降低1mmol/L 为一个抑制羟自由基能力单位。
抑制羟自由基能力（U/mL）=(对照OD值-测定OD值）/（标准OD值-空白OD值）×标准品浓度（8.824mmol/L）×(1mL/取样量)×样本测试前稀释倍数
2、组织计算公式
定义：规定每毫克组织蛋白在37℃下反应1分钟，使反应体系中H2O2浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基能力单位。
抑制羟自由基能力（U/mgprot）=(对照OD值-测定OD值）/（标准OD值-空白OD值）×标准品浓度（8.824mmol/L）÷[待测样本蛋白浓度（mgprot/mL）×取样量（0.2mL）]
3、溶血液计算公式：
定义：规定每毫克血红蛋白在37℃下反应1分钟，使反应体系中H2O2浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基能力单位。
抑制羟自由基能力（U/mgHb）=(对照OD值-测定OD值）/（标准OD值-空白OD值）×标准品浓度（8.824mmol/L）×(1mL/取样量)×样本测试前稀释倍数÷血红蛋白浓度（mgHb/mL）4、产生羟自由基能力的计算公式：
定义：规定每毫升或每毫克物质或每立方厘米内106个细胞在本反应体系中使反应液中H2O2浓度增加1mmol/L为一个抑制羟自由基能力单位。
抑制羟自由基能力（U/mL）=(测定OD值-对照OD值）/（标准OD值-空白OD值）×标准品浓度（8.824mmol/L）×(1mL/取样量)×样本测试前稀释倍数
注意事项：
1、必须每一只管子单独做，并且反应时间一分钟一定要准确。
2、必须严格按照操作表顺序加试剂，不可配制混合试剂。
3、检测样本溶剂或介质可为生理盐水、双蒸水，但不能为磷酸缓冲液、无水乙醇等。
4、此法灵敏度较高，检测血清（浆）和组织以外样本时，最好先取原液及不同浓度稀释后的样本做预实验。
如果测定管颜色太浅可将样本用其他溶剂继续稀释至颜色较深为止。
我们曾经检测花粉的水提取液的羟自由基，将原液稀释成150倍显色较好。