氨基色谱柱
氨基柱的使用和保养
氨基柱的使用和保养氨基柱是同时可以用于正相和反相条件的一种色谱柱。
但正相溶剂和反相溶剂是不互溶的,这一点不能忽略。
对于新购柱子,首先请注意打开分析测试说明书,了解柱子的保存溶剂。
如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶,请先用异丙醇过渡。
过渡过程中注意因异丙醇粘度较大,会导致柱压很高,适当调低流速。
如果流动相中还有缓冲盐类,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,避免缓冲盐的析出。
柱效检测:我用于判断一个用户是否有经验的指标之一,是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。
说到柱效检测,我可以向大家提供一个方法,而且很通用,你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。
流动相:10%乙酸乙酯+90%正己烷流速1.0标准溶液:乙苯(或甲苯)+苯甲酸甲酯检测波长254nm这个方法特别适用于新购柱子(新购柱子往往保存在正相溶剂中)时即进行检测,如有问题,可及时与供应商沟通。
也适合柱子在准备放置相当长一段时间之前,进行充分清洗后进行检测作为记录留档。
在平常的使用过程中,如果分析物是固定重复的,我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断;但如果分析物和分析条件不同时,定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。
特别要注意的是,当氨基柱(或氰基柱)在反相条件中使用时,如用该条件检测,请注意流动相的换相过渡问题。
氨基柱的使用:氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8容易水解,所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备,特别是当你的使用条件是反相条件下时。
反相条件使用时,要特别注意控制PH值范围,PH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。
所以,在使用后以及准备长时间放置时,必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是必需的。
当使用氨基柱进行酸性物质如果汁中糖份的分析时,酸性物质的存在意味着质子的存在,可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,使用一段时间后对于某类的分析物保留性质有所改变或表现为柱效下降。
c18、c8、氨基、苯基、氰基色谱柱的区别
c18、c8、氨基、苯基、氰基色谱柱的区别
c18色谱柱是一种常用的反相色谱柱,它具有较高的碳链长度(18个碳原子),适用于分离疏水性化合物,特别是有机化合物。
它在常见的官能团和它们的聚合物上进行表面修饰,以提供良好的分离性能。
c8色谱柱也是一种反相色谱柱,和c18色谱柱类似,但其碳链长度较短(8个碳原子),因此适用于分离相对疏水性较低的化合物。
氨基色谱柱是一种亲和色谱柱,属于极性色谱柱的一种。
它通过具有氨基官能团的化合物进行表面修饰,能够与一些带有酸性或碱性官能团的化合物进行特异性相互作用,实现对这些化合物的选择性分离。
苯基色谱柱是一种反相色谱柱,具有苯基官能团的表面修饰。
它适用于分离芳香族化合物,因为芳香族化合物和苯基官能团之间有相互作用。
氰基色谱柱是一种亲和色谱柱,通过氰基官能团对化合物进行表面修饰。
它适用于分离带有羧基、酮基、酰胺基等官能团的化合物,能够与这些化合物进行选择性相互作用。
氨基柱分离糖先后顺序
氨基柱分离糖先后顺序氨基柱是一种常用的色谱柱,用于糖类物质的分离。
糖是生物体内最重要的能量供应物质之一,具有广泛的生理功能。
糖类物质的分离对于研究其结构和功能具有重要意义。
本文将以氨基柱分离糖的先后顺序为标题,介绍氨基柱在糖类物质分离中的应用。
一、氨基柱的基本原理氨基柱是一种通过亲水作用分离糖类物质的色谱柱。
其基本原理是利用氨基官能团与糖分子中的羟基之间的氢键作用,实现糖类物质的分离。
由于糖类物质中的羟基数量和位置的不同,使得不同的糖类物质在氨基柱上具有不同的保留时间,从而实现分离。
二、单糖的分离单糖是糖类物质中的基本单位,包括葡萄糖、果糖、半乳糖等。
在氨基柱上,单糖的分离通常通过调节流动相的pH值、离子强度和有机溶剂含量来实现。
例如,在弱酸性条件下,将流动相的pH值调节到适当的范围,可以实现对单糖的有效分离。
此外,还可以通过梯度洗脱的方式,根据不同单糖的亲和力来实现它们的分离。
三、二糖的分离二糖是由两个单糖分子通过糖苷键连接而成的糖类物质,包括蔗糖、乳糖、麦芽糖等。
在氨基柱上,二糖的分离通常需要调节流动相的pH值、离子强度、有机溶剂含量以及洗脱梯度等参数。
通过这些参数的调节,可以实现对不同二糖的有效分离。
同时,根据二糖的结构特点,还可以采用亲水性降低的有机溶剂作为流动相,以增强分离效果。
四、寡糖的分离寡糖是由若干个单糖分子通过糖苷键连接而成的糖类物质,包括麦芽三糖、低聚果糖等。
在氨基柱上,寡糖的分离通常需要更加复杂的条件。
除了调节流动相的pH值、离子强度、有机溶剂含量以及洗脱梯度等参数外,还需要根据寡糖分子的大小和结构特点来选择合适的分离条件。
此外,还可以采用亲水性降低的有机溶剂作为流动相,并采用温度梯度的方法来增强分离效果。
五、多糖的分离多糖是由大量单糖分子通过糖苷键连接而成的糖类物质,包括淀粉、纤维素等。
在氨基柱上,多糖的分离需要更加复杂的条件。
通常需要采用多种分离技术的组合,如尺寸排阻色谱、亲和色谱等。
氨基柱清洗与使用
氨基柱的使用注意事项:
首先氨基柱的使用寿命肯定会比我们最常使用的C18、C8等色谱柱使用寿命短,这是氨基柱本身容易发生柱流失引起的,是色谱柱生产厂家普遍存在的问题,和哪个品牌没有关系。
使用时的注意事项如下:
新柱启用:由于氨基柱是保存在95%正己烷—5%异丙醇中的,做糖分析用乙腈+水流动相,所以首先要:不接色谱柱(即用两通代替色谱柱),用异丙醇冲洗仪器系统,0.5ml/min,冲洗0.5h左右
-----接上新的色谱柱,进口端先接上,流速由0.1ml/min升到0.3ml/min左右,出口端待有液体流出再接到检测器上,过渡4h----换成乙腈+水流动相,特别注意如果水中含有盐,先用乙腈+不含盐的水相过渡,而后再换成流动相。
使用后的冲洗:用完之后用分析时的乙腈+水同样比例冲洗40min左右----换成100%乙腈冲洗30min,并保存。
氨基柱清洗:
建议先用含0.5-1.0%NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱, 30倍柱体积---再用50%水-50乙腈冲洗10倍柱体积----纯乙腈冲洗30倍柱体积---纯异丙醇冲洗30倍柱体积(流速降到0.3ml/min左右)----纯乙腈冲洗5min---72:28乙腈:水平衡------分析
现在做糖的分析我们推荐的是更耐用的氨基柱:InertSustain NH2 ,这款氨基柱相对于传统氨基柱,寿命会更长,具体如下。
氨基键合硅胶色谱柱(3篇)
第1篇一、氨基键合硅胶色谱柱的原理1. 色谱原理色谱法是一种分离混合物中各组分的分析方法。
根据色谱原理,混合物在色谱柱中经过两个相的作用:固定相和流动相。
固定相通常填充在色谱柱中,而流动相则通过色谱柱流动。
当混合物进入色谱柱时,各组分在固定相和流动相之间发生相互作用,从而实现分离。
2. 氨基键合硅胶色谱柱的原理氨基键合硅胶色谱柱是一种以氨基键合硅胶为固定相的色谱柱。
氨基键合硅胶是通过化学键合法将氨基基团键合到硅胶表面得到的。
在色谱过程中,氨基基团与被分析物分子发生相互作用,从而实现分离。
二、氨基键合硅胶色谱柱的结构1. 色谱柱材料氨基键合硅胶色谱柱的柱材料主要有以下几种:(1)硅胶:作为基体材料,具有高比表面积、良好的热稳定性和化学稳定性。
(2)键合相:氨基键合硅胶,具有特定的官能团,如氨基、羧基、氰基等。
(3)填料:如硅藻土、氧化铝等,用于填充色谱柱。
2. 色谱柱结构氨基键合硅胶色谱柱的结构主要包括以下几个部分:(1)柱壳:用于容纳色谱柱填料,通常由不锈钢、玻璃或聚四氟乙烯等材料制成。
(2)柱头:用于连接色谱柱和检测器,通常由不锈钢或玻璃制成。
(3)柱尾:用于连接色谱柱和流动相输送系统,通常由不锈钢或玻璃制成。
(4)填料:填充在色谱柱中,起到分离作用。
三、氨基键合硅胶色谱柱的应用1. 药物分析氨基键合硅胶色谱柱在药物分析中具有广泛的应用,如药物含量测定、药物纯度检测、药物代谢产物分析等。
2. 生物化学分析氨基键合硅胶色谱柱在生物化学分析中具有重要作用,如蛋白质、肽、核酸等生物大分子的分离纯化。
3. 环境监测氨基键合硅胶色谱柱在环境监测领域具有广泛应用,如有机污染物、重金属离子、生物标志物等的检测。
4. 其他领域氨基键合硅胶色谱柱在其他领域也有一定应用,如食品分析、石油化工、医药中间体合成等。
四、总结氨基键合硅胶色谱柱作为一种常见的色谱柱,具有广泛的应用前景。
本文从氨基键合硅胶色谱柱的原理、结构、应用等方面进行了详细介绍,以期为读者提供有益的参考。
kromasil-氨基柱说明书
Kromasil是瑞典AKZO NOBEL公司生产的高性能硅胶基质液相色谱柱填料品牌。
Kromasil是一种高纯度球形硅胶填料,金属杂质含量极低,降低了有些金属螯合物在硅胶基质上的络合效应。
Kromasil硅胶的表面由独特的硅羟基基团组成,硅烷的覆盖率高,在较高或较低的pH条件下不易水解和分解,可在pH=1.5~9.5条件下稳定使用。
瑞典原装进口Kromasil液相色谱柱是目前国际市场上广受欢迎的色谱柱品牌,具有重现行性好,适用性广泛,使用寿命更长的特点,更好的满足制药企业和药物研发对液相色谱柱的严格要求。
Kromasil是一种高纯度、大比表面积、高机械强度、较高的碳链覆盖率的新一代球形硅胶填料。
金属不纯物含量极低,减少了有些螯合物在硅胶基质柱上的络合作用。
Kromasil的表面有独特的硅羟基基团组成,硅烷的覆盖率高,在高或低的pH条件下不易水解和分解。
它允许流动相pH为1.5-9.5。
Kromasil含碳量高,表面极性小,分离效能高。
把几乎所有的羟基钝化,并大大降低了胺性或碱性物质在硅胶基质上的严重拖尾现象。
Kromasil能在6000psi(400bar)的高压下正常运行,具有稳定的柱效及长久的寿命。
Kromasil所有尺寸的柱子,特别是制备柱,都同样具有很高的柱效。
色谱柱品种包括:Kromasil C4液相色谱柱,Kromasil C8液相色谱柱,Kromasil C18液相色谱柱,Kromasil NH2液相色谱柱,Kromasil CN液相色谱柱,Kromasil 300Å大孔填料分析柱,Kromasil AmyCoat手性分析柱, Kromasil CelluCoat手性分析柱,Kromasil DMB 手性分析柱, Kromasil TBB 手性分析柱;Kromasil半制备柱, Kromasil制备柱。
氨基柱的使用和保养
氨基柱的使用和保养氨基柱是一种用于离子交换的色谱柱,常用于生物化学、分子生物学等领域中。
它可以用于样品的富集、分离和纯化,常见的氨基柱有强阳离子交换柱和强阴离子交换柱。
1.样品预处理:氨基柱在使用之前需要进行打膜处理,将柱子封堵活性位点,并参与到离子交换反应中。
常见的打膜方法有傅肯封堵法、交联封堵法等。
2.样品加载:将样品溶液通过柱子,样品中的目标离子与氨基柱上的功能基团发生交换反应,将目标离子吸附在柱子上,而非目标离子会从柱子中洗脱。
3.清洗:清洗是为了去除非目标离子和杂质,保证样品的纯度和分离效果。
主要可以用不同的缓冲溶液进行清洗,也可以使用溶剂进行洗脱。
4.洗脱:洗脱是将吸附在柱子上的目标离子洗脱下来,常用的方法有梯度洗脱、浓度洗脱等。
洗脱时需要控制洗脱缓冲液的pH值和离子浓度,来调节目标离子与功能基团间的亲和力。
5.再生:在使用后,柱子可能会受到杂质的积累或堵塞,需要进行再生。
可以用酸性、碱性溶液或盐溶液进行洗脱,去除污染物和杂质。
氨基柱的保养:1.注意保存:柱子需要保存在干燥、避光的地方,避免受潮和受热。
2.清洗:每次使用后,都要对柱子进行适当的清洗,去除残留的溶液和杂质。
可以用纯水或其他清洗溶液进行清洗,注意不要使用过于强酸或强碱溶液,避免损坏柱子。
3.洗脱剂的pH值:在洗脱时,要注意洗脱缓冲液的pH值,过高或过低的pH值都可能影响柱子的稳定性和分离效果。
推荐使用pH范围在2-10之间的缓冲液。
4.洗脱剂浓度:洗脱剂的浓度也会影响柱子的使用寿命和分离效果,过高的浓度可能会损坏功能基团,过低的浓度则可能无法有效洗脱样品。
根据具体实验需要,选择合适的洗脱浓度。
5.避免堵塞:在使用氨基柱时,样品中的杂质和残留物可能会堵塞柱子,影响分离和洗脱效果。
因此需要注意样品的净化和前处理,以减少污染物对柱子的影响。
总结起来,氨基柱的使用和保养非常重要,它直接影响样品的分离效果和纯度。
正确的使用和保养方法可以延长柱子的使用寿命,提高实验的可靠性和稳定性。
氨基柱 保存 方法
氨基柱保存方法
氨基柱是一种用于色谱分离的柱子,通常用于分离和纯化蛋白
质和肽段。
为了保持其性能和延长使用寿命,正确的保存方法至关
重要。
首先,对于氨基柱的保存,应该避免暴露在极端温度下,最好
存放在常温下,远离阳光直射和高温环境。
此外,氨基柱应该放置
在干燥的环境中,避免受潮或受到水分影响,因为水分可能会影响
柱子的性能。
其次,当氨基柱不在使用时,需要用适当的缓冲液或溶剂进行
储存。
通常情况下,可以使用一些常见的缓冲液比如PBS(磷酸盐
缓冲液)或者甲醇等。
在存放之前,应该用缓冲液进行充分的洗脱,然后用同样的缓冲液进行封存。
这可以防止柱子中的样品残留物变干,影响下一次的使用。
另外,为了保护氨基柱,建议在柱子两端安装保护柱(guard column),这样可以延长氨基柱的使用寿命。
同时,定期对氨基柱
进行保养和清洗也是非常重要的。
在使用完毕后,用适当的缓冲液
进行冲洗,并用推荐的储存溶剂进行封存。
总的来说,正确的保存方法对于延长氨基柱的使用寿命和保持其分离性能非常重要。
避免极端温度、湿度和阳光直射,使用适当的缓冲液进行储存,并定期进行保养和清洗,这些都是保护氨基柱的关键步骤。
希望这些信息能够帮助你更好地保存和保护氨基柱。
氨基色谱柱操作说明书
氨基色谱柱操作说明书感谢您使用广州研创生物技术发展有限公司生产的HPLC色谱柱,为获得最佳的分离效果和更长的使用寿命,请在使用色谱柱前仔细阅读本操作说明,若因使用不当造成色谱柱损坏,本公司概不负责。
1、使用前注意事项1)出厂的色谱柱保存在正己烷/异丙醇(9/1)中,使用正相条件前请先用正己烷冲洗色谱柱30 mL,再用流动相稳定系统至基线平稳;如使用反相条件,请先使用无水乙醇过渡(<0.3 mL/min),过渡体积不小于30 mL,最后用流动相稳定系统至基线平稳。
2)色谱柱可适用于正相模式和反相模式,建议专柱专用。
2、参考操作条件3、流动相3.1正相流动相1)甲醇在烷炷中的溶解性不好,正己烷中甲醇的最大含量是5%。
如果要烷炷中使用甲醇,最好同时加入一定量的乙醇;2)如果待分析样品为酸性(碱性)化合物,往往要在流动相中使用酸性(碱性)添加剂。
对于碱性化合物建议在流动相中加入碱性添加剂,如二乙胺、三乙胺、乙醇胺等;而酸性化合物,一般加入有机酸,如三氟乙酸、乙酸、甲酸等。
有机酸或有机碱的加入量一般为0.1%,不宜超过0.3%。
3.2反相流动相1)反相流动相一般使用甲醇、乙月青和水,流动相允许的最高有机相比例为100%,最高的水相比例为40%;2)当需要使用缓冲溶液时,缓冲液的浓度不宜太高,有机和无机的缓冲溶液浓度不能超过0.3%;3)色谱柱可承受的缓冲溶液pH范围为4.0〜8.0,超过该范围时会降低色谱柱的寿命。
4、色谱柱保养1)必须使用色谱级试剂配制流动相,使用前需经0.45 pm滤膜过滤和超声脱气处理;2)进样前,需过滤样品溶液;3)使用含酸/碱添加剂的正相流动相后,需用正己烷/异丙醇=9/1冲洗色谱柱40 mL,然后封存;4)使用含酸、碱或盐的反相流动相后,应用低比例有机相冲洗色谱柱60 mL去除,用80%甲醇或80%乙月青冲洗色谱柱30 mL,保存色谱柱;5)若反相流动相中不含酸、碱或盐等,可用80%甲醇或80%乙腊冲洗色谱柱30 mL,保存色谱柱。
UniSil-NH2系列HPLC氨基色谱柱使用说明书
UniSil®-NH2系列HPLC氨基色谱柱使用说明书尊敬的用户,非常感谢您购买和使用UniSil®系列HPLC氨基色谱柱。
UniSil®系列色谱柱由苏州纳微科技有限公司(Nano-Micro Tech)研发生产并采用全球领先的单分散超高纯硅胶微球填料。
UniSil®氨基柱可提供5μm(分析型)和10μm(制备型),并提供不同的孔径和尺寸选择。
UniSil®色谱柱制备工艺严格,从单分散微球填料、基团键合、装柱和填装性能测试等环节,均依照本公司严格质控标准,可靠性和重现性得到保障,您可安心使用。
为了更好地使用UniSil®系列NH2氨基柱,请您仔细阅读本产品说明书。
您选择纳微科技UniSil®-NH2氨基柱,可以获得:-全球唯一的单分散微球填料带来的品质保证,柱效更高,结果稳定性更好,柱寿命更长-多重保留机理,同时适用于正相、反相和离子交换分离-反相模式下分离亲水性和极性化合物,如碳水化合物和单糖、寡糖、糖醇等糖类化合物-正相模式下分离酸性物质、烃类化合物、维生素A和D1.使用前的检查和须知-打开包装检查色谱柱的填料名称、尺寸规格、连接形式及出厂检验报告(COA)- 出厂检验报告(COA):填料批号、柱系列号、柱性能、测试流动相等内容,阅后请妥善保管。
- 新色谱柱内有流动相(正己烷/乙酸乙酯=9:1),在存储或运输中可能有少量溶剂挥发,请您在使用前充分平衡色谱柱。
- 如需自行评价色谱柱的柱效或基本性能,可按检验报告中的操作条件来测试并保存。
- 在接入HPLC系统之前,确保系统洁净、无污染或无颗粒残留,建议用新配置的经过0.2μm过滤的流动相充分冲洗系统温馨提示:UniSil®系列氨基色谱柱产品提供柱效、对称因子及保留时间等数据作为色谱性能参考。
不同HPLC设备的柱效测试可能会有差异,柱效和柱压值如有较大异常,请联系苏州纳微科技有限公司售后服务部,以便按规范的流程处理或更换。
氨基柱有机相比例对出峰的影响
氨基柱有机相比例对出峰的影响氨基柱有机相比例对出峰的影响引言:氨基柱是一种常用的反相色谱柱,广泛应用于药物分析、环境监测和食品安全等领域。
氨基柱的有机相比例是一个重要的参数,会直接影响到色谱分离的效果和分析结果的准确性。
本文将从深度和广度两个方面,探讨氨基柱有机相比例对出峰的影响,并提供一些建议来优化色谱分离过程。
一、氨基柱有机相比例的概念和影响因素1. 氨基柱有机相比例的概念和定义氨基柱有机相比例指的是色谱柱中有机溶剂与水的比例,通常用有机溶剂的体积分数来表示。
有机相比例的选择应根据溶剂性质、样品特性和分析目的来确定。
2. 氨基柱有机相比例的影响因素氨基柱有机相比例的选择受到以下因素的影响:- 所分析物的性质:不同的样品可能对有机溶剂和水的比例敏感程度不同,因此需要根据样品的亲水性和亲油性来选择合适的有机相比例。
- 柱填料的特性:柱填料的亲水性也会影响到有机相比例的选择。
亲水性较强的填料对水的亲和力更大,因此可能需要增加有机溶剂的比例来提高分离效果。
- 柱温:柱温的变化也会对有机相比例产生影响。
一般来说,高温会降低溶剂的粘度,改变分子间的相互作用力,从而影响分离效果。
二、氨基柱有机相比例对出峰的影响1. 有机相比例过低的影响当有机相比例过低时,水相的极性较大,样品分子容易被固定相表面的氢键结合,并在柱上发生吸附,导致样品在色谱柱上停留时间过长,出峰形状不理想,分离不彻底。
2. 有机相比例过高的影响当有机相比例过高时,柱上的静电排斥作用增强,溶质分子在柱上穿透速度加快,分离效果差。
有机溶剂的流动速度也可能增加,导致柱床的填充不均匀,进而影响分离的准确性。
3. 适宜的有机相比例的选择为了达到良好的分离效果,一般建议选择适宜的有机相比例。
在保证样品能够被分离的前提下,应尽量选择较高的有机相比例,以提高分离效果和分析速度。
三、优化柱有机相比例的策略为了优化色谱分离过程,以下几个策略值得尝试:1. 利用保留参数的优化方法,比如保留时间、峰形、分离度等指标,通过改变有机相比例来寻找最佳分离条件。
氨基柱的使用和保养
氨基柱的使用和保养氨基柱是同时可以用于正相和反相条件的一种色谱柱。
但正相溶剂和反相溶剂是不互溶的,这一点不能忽略。
对于新购柱子,首先请注意打开分析测试说明书,了解柱子的保存溶剂。
如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶,请先用异丙醇过渡。
过渡过程中注意因异丙醇粘度较大,会导致柱压很高,适当调低流速。
如果流动相中还有缓冲盐类,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,避免缓冲盐的析出。
柱效检测:我用于判断一个用户是否有经验的指标之一,是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。
说到柱效检测,我可以向大家提供一个方法,而且很通用,你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。
流动相:10%乙酸乙酯+90%正己烷流速1.0标准溶液:乙苯(或甲苯)+苯甲酸甲酯检测波长254nm这个方法特别适用于新购柱子(新购柱子往往保存在正相溶剂中)时即进行检测,如有问题,可及时与供应商沟通。
也适合柱子在准备放置相当长一段时间之前,进行充分清洗后进行检测作为记录留档。
在平常的使用过程中,如果分析物是固定重复的,我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断;但如果分析物和分析条件不同时,定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。
特别要注意的是,当氨基柱(或氰基柱)在反相条件中使用时,如用该条件检测,请注意流动相的换相过渡问题。
氨基柱的使用:氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8容易水解,所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备,特别是当你的使用条件是反相条件下时。
反相条件使用时,要特别注意控制PH值范围,PH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。
所以,在使用后以及准备长时间放置时,必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是必需的。
当使用氨基柱进行酸性物质如果汁中糖份的分析时,酸性物质的存在意味着质子的存在,可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,使用一段时间后对于某类的分析物保留性质有所改变或表现为柱效下降。
氨基柱使用注意事项
氨基柱使用注意事项氨基柱是一种常用的色素柱,广泛应用于实验室中的色谱分析。
使用氨基柱时需要注意以下几个方面:1. 柱选取:根据实验需要选择合适的氨基柱。
氨基柱有不同的填充材料和尺寸,如C18、C8等。
不同的柱填充材料适用于不同的分析物质,因此在选择时要根据待测物质的特性来决定。
2. 储存:氨基柱在不使用时要妥善保存。
柱子需要放置在干燥、阴凉的地方,避免阳光直射和高温。
同时,要确保柱子封口良好,以防止填充材料的污染或水分的进入。
3. 进样方式:氨基柱的进样方式多样,可以通过液相自动进样器或手动进样器等方式进行。
不同的进样方式会对分析结果产生一定影响,因此要根据实验要求进行选择,并保证进样的准确性和重复性。
4. 流速选择:在进行氨基柱分析时,流速的选择非常重要。
过高的流速会导致分离不完全,而过低的流速则会延长分离时间。
一般来说,流速应根据样品特性和分离效果进行调整,以获得最佳结果。
5. 柱温控制:柱温也是氨基柱分析中需要注意的因素之一。
柱温过高会导致填充材料的退化或损坏,而柱温过低则会影响分析效果。
因此,在进行氨基柱分析时应根据实验要求控制好柱温。
6. 封堵保养:长时间使用的氨基柱可能会出现封堵的情况,这会影响其分离效果。
因此,在柱使用一段时间后,要及时进行封堵或保养。
可以使用一些特殊的溶剂和方法来清洗柱子,以保持其良好的状态。
7. 数据分析:在氨基柱分析后,要对得到的结果进行准确的数据分析。
可以使用一些专业的色谱分析软件来进行数据处理和解读。
同时,要对分析结果进行准确地记录和文档保存,以备后续的研究和参考。
综上所述,使用氨基柱需要注意柱的选择、储存、进样方式、流速选择、柱温控制、封堵保养以及数据分析等方面。
只有正确使用和保养氨基柱,才能保证色谱分析结果的准确性和可靠性。
这些注意事项对于开展实验室的氨基柱分析非常重要。
氨基柱使用注意事项
1.柱子所使用的PH范围是2~8,且最好不好在极端条件下使用2.柱子能承受最大40mpa(6000psi)的压力,但是过高的压力应该是被避免的,过高的压力会造成柱床的结构的破坏,而且可能会导致分析过程中峰分叉3.柱子能够使用所有有机溶剂(PH范围在2~8),试剂最好是HPLC级别(色谱纯),且使用前用0.45um滤膜过滤。
不纯试剂(非HPLC级别)的使用会造成色谱柱柱头不可逆的吸附,这些杂志会阻碍吸附位点、改变色谱柱的选择性甚至会造成峰分叉。
在梯度洗脱中会造成所谓的“鬼峰”,鬼峰在梯度洗脱中总是会出现在相同的位置,他们的源头不是样品,而是溶剂或者溶剂中添加的物质,因此建议在每个方法开始的时候要不进样品走一针梯度程序以确定鬼峰是否存在。
为了防止柱头不可逆的吸附,建议经常用一个预柱,预柱可以延长色谱柱的使用寿命,此外它可以过滤从泵头还有进样阀中颗粒性的物质。
在线过滤器对于预柱来说是个代替,它安装在进样阀和色谱柱之间,新型的在线过滤器可以直接接在柱子上。
在线过滤器可以极大的吸附溶剂中的颗粒性物质,但是它不能代替像预柱那样阻止溶剂杂志对柱子造成不可逆的吸附。
4.柱子的保存:对于反相柱子(.NH2和苯基)来说最佳的保存体系是乙腈/水,且水的比例绝不能低于50%.注意:哪怕是短时间的保存,也要将缓冲溶液从色谱柱中冲洗干净以防止海藻的生长。
缓冲盐和乙腈是不互溶的,而且它会阻塞管路和柱子。
5.平衡时间:色谱柱的平衡时间取决于色谱柱死体积,一般需要20个柱体积。
而250*4.6mm柱子的死体积是2.91ml,如果用1ml/min 的话大概需要58min6.色谱柱的再生对于反相填料来说(和苯基)过程如下先用20倍柱体积的水(一般要加5%的乙腈),再用20倍柱体积的乙腈,再用5倍柱体积的异丙醇,再用20倍柱体积的正己烷,再用5倍柱体积的异丙醇,再用20倍柱体积的乙腈。
氨基色谱柱怎么活化
氨基色谱柱怎么活化
氨基色谱柱是一种常用的分离柱,通常用于对带有酸性官能团的化合物进行分析和纯化。
活化氨基色谱柱可以提高其对目标化合物的吸附能力和分离效果。
下面是一种常见的氨基色谱柱活化方法:
1. 硅胶活化法:
a. 将氨基色谱柱置于干燥的玻璃管中。
b. 用干燥剂如硅胶填充玻璃管,使柱内外保持干燥。
c. 在玻璃管中加入少量的二氯甲烷或二氯乙烷,并封闭玻璃管。
d. 将玻璃管放入恒温槽中,在室温下静置12-24小时。
e. 取出玻璃管,将其中的溶剂蒸发至干燥,这样就完成了氨基色谱柱的活化。
2. 1,2-二氯乙烷活化法:
a. 将氨基色谱柱置于干燥的容器中。
b. 在容器中加入适量的1,2-二氯乙烷,使得柱子完全浸泡在溶剂中。
c. 盖上容器盖,让柱子在室温下静置12-24小时。
d. 取出柱子,用氮气吹干表面的残余溶剂。
需要注意的是,活化后的氨基色谱柱应尽快进行使用,避免柱子再次暴露在湿气中。
此外,不同型号和厂家的氨基
色谱柱可能有不同的活化方法,请参考柱子的技术说明书或咨询相关厂家获取更准确的活化方法。
氨基柱的正确使用方法
氨基柱的正确使用方法
氨基柱是一种在液相色谱中常用的柱型,通常用于分离和纯化化合物。
下面是使用氨基柱的一般步骤:
准备工作:
确保柱子的连接是正确的,没有漏水。
检查柱温控系统是否正常(如果有的话)。
检查流动相的制备和气泡的排除。
样品预处理:
样品的溶解和净化:确保样品是溶解在适当的流动相中,并且杂质已经得到适当的去除。
柱子平衡:
在使用柱子之前,需要平衡柱子以确保它处于最佳状态。
使用柱子所用的流动相进行平衡,通常会使用一段时间。
加载样品:
样品通过注射器加载到柱子上。
确保加载的样品量在柱子的容纳范围之内,避免过载。
洗脱:
开始梯度洗脱,通常是通过改变流动相组成或浓度。
洗脱的速率和梯度可以根据分离的需要进行调整。
监测和收集:
监测柱子出口的信号,通常使用检测器,如紫外线检测器。
可以在感兴趣的峰出现时进行分数收集。
柱子维护:
定期检查柱子的性能,确保分离效果仍然良好。
根据需要进行柱子的清洗和再生,以保持柱子的使用寿命。
数据分析:
对从柱子上收集的数据进行分析,确定化合物的纯度和相对含量。
存储和保养:
当不使用柱子时,确保将其存储在适当的条件下,避免柱子的干燥或受到其他可能影响性能的因素。
值得注意的是,具体的使用方法可能因柱子的类型、样品性质、分离目标等而有所不同。
在使用柱子之前,请仔细阅读柱子的技术说明书或生产商提供的使用指南,以确保正确使用并最大程度地发挥其性能。
氨基柱色谱柱
氨基柱色谱柱
氨基柱色谱柱(Amino column)是一种常用的柱色谱分离技术。
该柱是由一种含有氨基官能团的固定相填充在柱子中的。
氨基官能团可以与样品中的化合物发生氢键、极性作用力、疏水作用力等相互作用,从而实现对样品的分离。
氨基柱色谱柱常用于生物分析和药物分析等领域。
它可以有效地分离极性化合物、氨基化合物、酚类化合物、氨基酸等。
氨基柱色谱柱通常具有较好的稳定性和重现性,适用于高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱(UHPLC)等色谱系统。
氨基柱色谱柱的选择可以根据待分离样品的性质和需求来进行。
常见的氨基柱色谱柱包括氨基硅胶柱、氨基硅胶凝胶柱和氨基硅胶包被柱等。
选择适合的氨基柱色谱柱,可以实现对复杂样品的高效分离和分析。
氨基液相色谱柱
氨基液相色谱柱氨基液相色谱柱(Amino Acid HPLC Column)是一种非常重要的色谱分离仪器,用于分离氨基酸。
它主要由柱芯、柱体、进样口、出样口和流动相容体系组成。
柱芯是一种支撑元素,可以决定氨基酸的分离精度和速度。
柱体是一种保护柱芯的外壳,有助于减少氨基酸分离过程中的物理损伤。
进样口是把待测样品进入氨基液相色谱柱的地方,而出样口则是把分离后的氨基酸样品从氨基液相色谱柱中放出的地方。
流动相容体系是指在氨基液相色谱柱中运行的溶剂,它可以有效地分离氨基酸,并将其从柱芯中移出。
氨基液相色谱柱的工作原理是通过分离层析法来实现的,即根据不同的化学性质将待测样品分为2类:非溶性组分和溶性组分,然后将这2类物质之间的界限设置在柱芯中,形成色谱层析分离膜,从而使得不同的氨基酸在柱芯中形成新的分离层析线。
由于氨基液相色谱柱利用柱芯上与氨基酸之间的化学反应来分离氨基酸,因此,分离效果取决于柱芯的表面结构。
一般来说,柱芯的表面结构主要有三种:无机酸活性表面、有机酸活性表面和电子受体表面。
无机酸活性表面是指柱芯表面上的无机活性基团,这些基团可以与氨基酸的酸性基团发生反应,从而实现对氨基酸的分离。
有机酸活性表面则是指柱芯表面上的有机活性基团,这些有机活性基团可以与氨基酸的胺基团发生反应,从而实现对氨基酸的分离。
电子受体表面是指柱芯表面上的电子受体基团,这些电子受体基团可以与氨基酸的氨基团发生反应,从而实现对氨基酸的分离。
此外,氨基液相色谱柱还可以应用于氨基酸的检测,其原理是:在氨基液相色谱柱中,每种氨基酸都会形成一条独特的色谱分离线,可以根据这些色谱分离线的强度和长度来判断样品中氨基酸的种类和量。
总之,氨基液相色谱柱可以用于氨基酸的分离和检测,其工作原理是通过分离层析法来实现的,柱芯的表面结构也是其分离效果的关键。
由于氨基液相色谱柱的优势,它已经成为分析氨基酸的重要技术手段。
正相色谱NH2氨基色谱柱
正相色谱NH2氨基色谱柱
正相色谱NH2氨基色谱柱,该产品采用氨基硅烷键合硅胶为填充剂,国达仪器---您身边的色谱专家,NH2氨基色谱柱专业供应!国达供应的GD新系列NH2氨基色谱柱是中国药典特征谱图唯一指定品牌的色谱柱;也是中国最畅销的液相色谱柱品牌之一。
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国达的GD新系列NH2氨基色谱柱主要应用于小分子糖类的分析,该色谱柱具有应用特点为:1、超纯全多孔球形硅胶(纯度>99.999%)提高了色谱柱分离的稳定性并具有良好的对称峰形和高柱效;2、以独特的表面修饰方法确保硅胶表面的惰性, 均一性, 和重现性;正相XB-氨基(-NH2)柱适用正相色谱和离子交换色谱,也可用在反相条件下;优良的批与批和柱与柱间的重现性。
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国达仪器公司供应的GD新系列NH2氨基色谱柱的典型应用:
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氨基色谱柱,全称氨丙基键合硅胶色谱柱,在HPLC中既可以作为反相色谱柱,又可以作为正相色谱柱.使用者在进行正反相转换操作过程中一定要注意以下几项:
对于新购买到的柱子,首先请注意打开分析测试说明书,了解柱子的保存溶剂。
如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶,请先用异丙醇过渡。
过渡过程中注意因异丙醇粘度较大,会导致柱压很高,适当调低流速即可。
如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类,建议在用分析流动相之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
柱效检测:
我用于判断一个用户是否有经验的指标之一,是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。
说到柱效检测,我可以向大家提供一个方法,而且很通用,你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。
流动相:
10%乙酸乙酯+90%正己烷流速1.0
标准溶液:
乙苯(如乙苯找不动就用甲苯代替呗)+苯甲酸甲酯
检测波长254nm
这个方法特别适用于新购柱子(新购柱子往往保存在正相溶剂中)时即进行检测,如有问题,可及时与供应商沟通。
也适合在柱子在准备放置相当长一段时间之前进行充分清洗后进行检测作为记录留档。
在平常的使用过程中,如果分析物是固定重复的,我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断;但如果分析物和分析条件不同时,定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。
不过特别要注意的是,当氨基柱(或氰基柱)在反相条件中使用时,如用该条件检测,请注意流动相的换相过渡问题。
氨基柱的使用:
需要注意的是,氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解,所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备,特别是当你的使用条件是反相条件下时。
反相条件下使用时,要特别注意控制PH值范围,PH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。
所以,在使用后以及准备长时间放置该柱时,必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。
有一种情况是,当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时(分析其中的糖份),酸性物质的存在意味着质子的存在,可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。
这时,Kromasil专家所给的建议是:用5-10倍的柱体积的含0.5- 1.0%NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨),之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。
氨基柱的清洗
简单说起来,正相条件下使用的氨基柱你就参照硅胶柱的清洗方法;反相条件下使用的氨基柱你就参照C18的清洗方法。
平时在正相条件下使用:
首先用50倍柱体积的异丙醇清洗,因异丙醇粘度较大可适当放低流速;之后,用50倍的甲醇清洗;之
后,用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相,即可。
平时在反相条件下使用:
缓冲盐应及时冲洗,以及不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等,属常识就不作特别交待了。
用50倍纯甲醇冲洗;之后,用异丙醇过渡后,用二氯甲烷冲洗色谱柱;之后,再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。
这些清洗方法,主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法,色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等
LUNA氨基柱的使用方法
1.氨基柱既可以正相使用,也可以反相使用,但是要注意到的是:正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的,正常情况新氨基柱保存在正相环境中,例如LUNA
氨基柱保存在正己烷-乙腈(99:1)中。
2. 正相使用
2.1
新柱子可直接用流动相。
推荐先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积,最后换成流动相。
2.2
正相使用时,不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于还原糖的分析;流动相要彻底脱气,并不得含有羰基化合物和过氧化物2.3 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶。
3 反相使用
3.1
先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)冲柱子。
3.2
以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠(LUNA)水溶液冲柱子(注意pH值切不可超过11.0),立即用水(
0.5ml/min的流速,30倍柱体积)冲洗,再换成流动相。
3.3
配制流动相时,应各组分分别量取,比例较小的组分要精密量取,需调pH值时要精密到0.1。
3.4
反相条件下使用时,要特别注意控制pH值范围,pH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。
最理想的pH范围在pH
3.0-7.0
3.5
如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类,建议在用分析流动相之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
3.6
有一种情况是,当使用氨基柱进行酸性物质的分析时,酸性物质的存在意味着质子的存在,可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效
下降。
建议:用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨),之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。
4
色谱柱的冲洗:简单说起来,正相条件下使用的氨基柱就参照硅胶柱的清洗方法;反相条件下使用的氨基柱就参照C18的清洗方法。
5 色谱柱的保存
5.1
正相使用时,将柱子冲洗干净后,用正己烷-乙腈(99:1)保存。
5.2
反相使用时,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿。