高效液相色谱法测定异烟肼片中异烟肼及其杂质的含量
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!""# 年第 $% 卷第 !& 期
药物鉴定
高效液相色谱法测定异烟肼片中异烟肼及其杂质的含量
金英兰
（吉林省吉林市食品药品检验所， 吉林 吉林 %!#)%!）
（5?.@） （%/) ++ N 摘要： 目的 建立测定异烟肼片剂中异烟肼及其杂质含量的高效液相色谱 法。 方法 色谱柱为 AIJ+ & ?KLM D? & EFA 柱 ， 流动相为甲醇 & )* #6 多库酯钠水溶液 < ’) 7 8) = ， 流速为 )* : +. - +J2， 紫外检测波长为 #%8 2+。 结果 异烟肼质量浓度在 ’* 8 ++， / "+） 平均回收率为 33* %36 ， 异烟酸质量浓度在 ’ 1 %) 1 % ))) +, - . 范围内与峰面积线性关系良好 < ! O )* 333 : ， " O 8=， #$% O %* 336 < " O 8 = ； < = 范围内与峰面积呈良好线性关系 ， 。 结论 该法快速、 简便、 准确、 重现性好。 #’ +, - . ! O )* 333 ’ " O 8 关键词： 异烟肼片； 含量测定； 高效液相色谱法 中图分类号： ,’#-. # ； ,’-%. ! 文献标识码： / 文章编号： *$$( & )’!* " #$$’ + #) & $$!- & $#
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（ % + , 0 !） 。 4$ 4# ,2 + 3 （ 批号 加样回收试验： 精密称取已知含量的同一批样品 * 份 ） 约相当于异烟肼 #44 ,2 ， 分别精密加入对照品适量， 按 %44"4%4# ， 供试品溶液的制备方法制备， 照样品含量测定方法测定异烟肼的 含量， 计算平均回收率， 结果见表 % 。
（二部 ） $ % ( 国家药典委员会 * 中华人民共和国药典 $ 9 ( * 北京： 化学工业出 版社， #))/ ： /:)* $ # ( 魏世超， 汪秋兰， 张 南， 等 * 高效液相色谱法同时测定盐酸普鲁卡因 注 射液中 盐酸普 鲁卡因含 量及对 氨基苯 甲酸限量 $;( * 药 物分析 ， （: ） ： #))" ， #" % #’3 & % #/%* $ ! ( 吕雪芳， 余根素， 黄玲霄 * 高效液相色谱法测定胃炎干糖浆中盐酸普鲁 卡因的含量 $ ; ( * 中国药业， #))! ， %# < 3 = ： ’#* $ ’ ( 刘晓玲， 单 敏， 呼延玲 * 复方益康宁胶囊中盐酸普鲁卡因和维生素 >8 的含量测定 $ ; ( * 中国药业， #))’ ， %! < 8 = ： ’’ & ’/*
到注射液是灭菌水溶液， 故选水作为溶剂。 综合以上结果， 对于原料的含量测定来说， 两种方法基本一 致。 注射液中一般都有降解产生的杂质对氨基苯甲酸， 而对氨基苯 甲酸会对样品测定产生干扰， 同时会消耗亚硝酸钠滴定液， 故注射 液的测定结果两种方法略有差异。 杂质的产生与样品的贮存条件 有很大的关系 $ # ( 。
!"#$%&’$： HBI1J25K1 PQ RSTKUVJSI K 5?.@ +RTIQW XQY WRTRY+J2J2, TIR LQ2TR2TS QX JSQ2JKZJW K2W JTS J+4[YJT\ J2 BSQ2JKZJW PKUVRTS* L12M8=; PIR K2KV\TJLKV LQV[+2 ]KS A5B9 & ?0@C D? & EFA K2W TIR +QUJVR 4IKSR ]KS +RTIK2QV & ]KTRY < )* #6 WQL[SKTR SQWJ[+， ’) 7 8) = KT TIR XVQ] YKTR QX )* : +. - +J2* PIR ^D WRTRLTJQ2 ]K_RVR2,TI ]KS #%8 2+* ,1;?C2; B2 TIR YK2,R QX %) & % ))) +, - .， TIR LQ2TR2TS QX JSQ2JKZJW IKW ,QQW VJ2RKY YRVKTJQ2SIJ4 ]JTI TIRJY 4RKM KYRK < ! O )* 333 :‘ " O 8 = * PIR K_RYK,R YRLQ_RY\ YKTR ]KS 33* %36 ‘ #$% O %* 336 < " O 8 = * 02W J2 TIR YK2,R QX ’ & #’ +, - .， TIR LQ2TR2TS QX JSQ2JLQTJ2JL KLJW IKW ,QQW VJ2RKY YRVKTJQ2SIJ4 ]JTI TIRJY 4RKM KYRK < ! O )* 333 ’‘ " O 8 = * G86JC?;586 PIR +RTIQW JS YK4JW‘ SJ+4VR K2W KLL[YKTR ]JTI ,QQW YR4YQW[LJUJVJT\* ()* +,%-#： BSQ2JKZJW PKUVRTSa LQ2TR2T WRTRY+J2KTJQ2a 5?.@ （’ & 吡啶甲酸 ） 异烟肼片为抗结核药， 其中杂质异烟酸 既是异 烟肼合成过程中的中间体， 也是分解产物， 易被引入成品中。 用高 （5?.@） 法分析异烟肼片时， 异烟酸与异烟肼保留时间 效液相色谱 相近， 很难完全分离， 会使片剂中异烟肼含量测定值偏高。 笔者参 照文献 $ % & ! ( 的方法， 在流动相中加入表面活性剂多库酯钠， 建立 了同时测定异烟肼片剂中异烟肼和杂质异烟酸的 5?.@ 法并与溴 酸钾滴定法 比较， 报道如下。
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结果见表 # 。
样品 原料 厂家 0 > @ F b c 注射液 % # ! ’ / 8
盐酸普鲁卡因在水中易溶， 且溶剂峰不干扰样品的测定， 考虑
表# 规格 & & & & & & %)) +. 7 % , %) +. 7 )* % , #) +. 7 )* % , #) +. 7 /) +, # +. 7 ’) +, # +. 7 ’) +, 样品含量测定结果 批号 )8)3)# )"%))! #))/%%%% )")#%’ )")/)# )8%#)/ )")3)% )8)!)8% )")")% )")3)% )")8)# )8)3)#)/ 相对含量 < 6 = 药典法 %))* % %))* # %))* # %))* # %))* % %))* % 33* ’ 3"* % %))* 3 3:* 3 %))* % 3:* 8 5?.@ 法 %))* % %))* # 33* / %))* ) 33* " 33* ’ 3:* 8 3!* 8 33* ! 3:* : 33* # 3/* 8
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0121345672586 89 :;8657<5= 76= :2; :4>?352@ 56 :;8657<5= A7BC12 B@ DEFG
Βιβλιοθήκη Baidu&’" (’")*+"
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讨论
（)* )% +, - +.） 参照文献 $ % & ’ ( ， 配制盐酸普鲁卡因水溶液 ， 照 《中国药典 （二部 ） 》 分光光度法 $ #))/ 年版 附录 ! 0 ( 测定， 于 #)) 1 结果盐酸普鲁卡因在 #3) 2+ 和 ##% 2+ ’)) 2+ 波长范围内扫描。 波长处有最大吸收， 本试验主要是对盐酸普鲁卡因进行含量测定， 故选择 #3) 2+ 为检测波长。
新配置 %) ; 样品 表# 异烟肼 平均质量浓度 百分含量 / ,2 + 3 1 /8 1 )6*$ %6 )75$ *7 66$ 47 67$ "% $%& /8 1 4$ %* 4$ )# 稳定性试验
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异烟酸 平均质量浓度 百分含量 $%& / ,2 + 3 1 /8 1 /8 1 )$ !6 #%$ !5 4$ 5*# #$ *4" 4$ 6* #$ %6
量瓶中， 加流动相溶解并稀释至刻度， 摇匀， 作为异烟肼对照品溶液 （# 444 ,2 + 3） 。 精密称取 #45 F 干燥至恒重的异烟酸对照品 % ,2 置 加流动相溶解并稀释至刻度， 摇匀， 作为异烟酸对照 %5 ,3 量瓶中， （"4 ,2 + 3） 品溶液 。 取异烟肼片 %4 片， 精密称定， 研细， 精密称取适量 / 约相当于异烟肼 #44 ,2 1 ， 置 #44 ,3 量瓶中， 加流动相溶解并稀释 置 #44 ,3 量瓶中， 加流 至刻度， 摇匀， 滤过， 精密量取续滤液 #4 ,3， 动相稀释至刻度， 摇匀， 作为供试品溶液。 取处方中除异烟肼外其他 成分， 用制备供试品溶液的方法制备阴性对照品溶液。 !" $ 方法学考察 线性关系考察： 取异烟肼对照品溶液用流动相稀释成 #4 ， %54 ， 以峰面积 ’ 对异烟肼质量浓度 544 ， 754 ， # 444 ,2 + 3 的系列溶液， 得回归方程为 ’ 0 #4 554 ( = 5" #6% ， ( 进行线性回归， ) 0 4$ 666 " （ " 0 *） 取异烟酸对照品溶液用流动 ， 线性范围为 #4 G # 444 ,2 + 3。 相稀释成 ) ， 以峰面积 # 对异烟肼 "， #% ， #* ， %) ,2 + 3 的系列溶液， 质量浓度 * 进行线性回归， 得 回 归 方 程 为 * 0 * *%7$ 5 # H "6#$ "# ， ) 0 4$ 666 ) / " 0 * 1 。 重现性试验： 取 %$ % 项下供试品溶液， 加流动相稀释成 %54 ,2 + 3 的溶液， 连续进样 * 次， 按色谱条件测定峰面积。 结果异烟肼峰面积 的 $%& 为 4$ %*8 ， 异烟酸峰面积的 $%& 为 4$ 6*8 。 加流动相稀释成 中间精 密度试验： 取 %$ % 项下供试品溶液， （ 对照品溶液为每天新 连续 ! I， 每天测定 ! 次 %54 ,2 + 3 的溶液， 配置 ） ， 按色谱条件测定。 结果异烟肼峰面积的 $%& 为 4$ %68 ， 异 烟酸峰面积的 $%& 为 #$ 758 。 稳定性试验： 取 %$ % 项下供试品溶液， 加流动相稀释成 544 ,2 + 3 的溶液， 连续进样 * 次， 按色谱条件测定峰面积； 溶液放置 %) ; 后， 再连续进样 * 次， 按色谱条件测定峰面积， 结果见表 # 。 可见， 溶液 放置 %) ; 后， 异烟肼百分含量明显降低， 异烟酸百分含量明显增 （ 特别是异烟 加， 说明溶液不稳定， 室温下暴露在空气中容易分解 肼容易被氧化生成异烟酸 ） ， 应该配置后尽快测定。 （批号为 %44"4%4#） 重现性试验： 取同一批样品 ， 重复取样 * 次， 依法测定。 结果的百分标示含量为 #44$ 558 ， $%& 为 4$ )"8 / " 0 表明方法重现性较好。 *1， 检出限 与定量限测定： 取 %$ % 项下供试品溶液 ， 用流动相逐 步稀释成系列标准溶液， 测 得 定 量 限 为 4$ 45 ,2 + 3 ， 检出限为
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表% #44$ "5 66$ 5! 66$ %7 #44$ *5 #4#$ 7% #4%$ "*
异烟肼加样回收试验结果 / " 0 * 1 #4$ *6 #4$ %% )6$ "" 5#$ *5 6"$ 4# ###$ #* #46$ )" #54$ 4! #5#$ 6" #66$ )5 %4"$ !6 6*$ )5 67$ !* #4#$ 7* 66$ !" 66$ 7# #44$ )7 66$ #6 #$ 66
& #$ 异烟肼 &$ 对照品溶液 图#
’ %$ 异烟酸 ’$ 供试品溶液
( ($ 阴性对照品溶液
样品含量 / ,2 + 3 1 加入量 / ,2 + 3 1 测得量 / ,2 + 3 1 回收率 / 8 1 # / 8 1 $%& / 8 ）
高效液相色谱图
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溶液制备 精密称取 #45 F 干燥至恒重的异烟肼对照品 #44 ,2 ， 置 #44 ,3
" 收稿日期： 修回日期： #$$% & $’ & #( ； #$$’ & $) & *( +
中国药业 !"#$% &"%’(%)*+,#)%-.
・!"・
药物鉴定
甲醇 / 色谱纯 ， 德国默克公司 1 ， 多 %44"4%4# ， %44"4%4% ， %44"4%4! 1 ， 水为去离子水。 库酯钠 / 分析纯 1 ， ! !" # 方法与结果 色谱条件与系统适用性试验
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仪器与试药
.@ & #)%)0 型 液 相 色 谱 仪 < 岛 津 公 司 = ； A5B9 & ?0@C D? & < =； 色谱柱， 型紫外分光光度计 上海光谱仪器有限公司 EFA "8/?@ 0.#)’ 型电子天平 < 梅特勒 & 托利多公司 = ； F5G & 3#’/0 型电热 （ 上海一恒科技有限公司 ） 恒温鼓风干燥箱 ； CH & /)> 型超声波清 （ 昆山市超声仪器有限公司 ） 洗器 。 异烟肼对照品、 异烟酸对照品 < 均由中国药品生物制品检定所提供 = ； 异烟肼片 < 市售品， 批号为
$! ( （’) 7 8)） 本试验还以调 45 为 ’* " 的甲醇 & %6 醋酸 和甲醇 & $’ ( （!) 7 ") ） 为流动相进行试验， 但对氨基苯甲酸和 )* %6 醋酸溶液
盐酸普鲁卡因的分离度均不太理想， 而用本试验所选流动相能使 二者的分离度达到 /* ) 以上， 杂质不干扰样品测定。 参考文献：
药物鉴定
高效液相色谱法测定异烟肼片中异烟肼及其杂质的含量
金英兰
（吉林省吉林市食品药品检验所， 吉林 吉林 %!#)%!）
（5?.@） （%/) ++ N 摘要： 目的 建立测定异烟肼片剂中异烟肼及其杂质含量的高效液相色谱 法。 方法 色谱柱为 AIJ+ & ?KLM D? & EFA 柱 ， 流动相为甲醇 & )* #6 多库酯钠水溶液 < ’) 7 8) = ， 流速为 )* : +. - +J2， 紫外检测波长为 #%8 2+。 结果 异烟肼质量浓度在 ’* 8 ++， / "+） 平均回收率为 33* %36 ， 异烟酸质量浓度在 ’ 1 %) 1 % ))) +, - . 范围内与峰面积线性关系良好 < ! O )* 333 : ， " O 8=， #$% O %* 336 < " O 8 = ； < = 范围内与峰面积呈良好线性关系 ， 。 结论 该法快速、 简便、 准确、 重现性好。 #’ +, - . ! O )* 333 ’ " O 8 关键词： 异烟肼片； 含量测定； 高效液相色谱法 中图分类号： ,’#-. # ； ,’-%. ! 文献标识码： / 文章编号： *$$( & )’!* " #$$’ + #) & $$!- & $#
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（ % + , 0 !） 。 4$ 4# ,2 + 3 （ 批号 加样回收试验： 精密称取已知含量的同一批样品 * 份 ） 约相当于异烟肼 #44 ,2 ， 分别精密加入对照品适量， 按 %44"4%4# ， 供试品溶液的制备方法制备， 照样品含量测定方法测定异烟肼的 含量， 计算平均回收率， 结果见表 % 。
（二部 ） $ % ( 国家药典委员会 * 中华人民共和国药典 $ 9 ( * 北京： 化学工业出 版社， #))/ ： /:)* $ # ( 魏世超， 汪秋兰， 张 南， 等 * 高效液相色谱法同时测定盐酸普鲁卡因 注 射液中 盐酸普 鲁卡因含 量及对 氨基苯 甲酸限量 $;( * 药 物分析 ， （: ） ： #))" ， #" % #’3 & % #/%* $ ! ( 吕雪芳， 余根素， 黄玲霄 * 高效液相色谱法测定胃炎干糖浆中盐酸普鲁 卡因的含量 $ ; ( * 中国药业， #))! ， %# < 3 = ： ’#* $ ’ ( 刘晓玲， 单 敏， 呼延玲 * 复方益康宁胶囊中盐酸普鲁卡因和维生素 >8 的含量测定 $ ; ( * 中国药业， #))’ ， %! < 8 = ： ’’ & ’/*
到注射液是灭菌水溶液， 故选水作为溶剂。 综合以上结果， 对于原料的含量测定来说， 两种方法基本一 致。 注射液中一般都有降解产生的杂质对氨基苯甲酸， 而对氨基苯 甲酸会对样品测定产生干扰， 同时会消耗亚硝酸钠滴定液， 故注射 液的测定结果两种方法略有差异。 杂质的产生与样品的贮存条件 有很大的关系 $ # ( 。
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结果见表 # 。
样品 原料 厂家 0 > @ F b c 注射液 % # ! ’ / 8
盐酸普鲁卡因在水中易溶， 且溶剂峰不干扰样品的测定， 考虑
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讨论
（)* )% +, - +.） 参照文献 $ % & ’ ( ， 配制盐酸普鲁卡因水溶液 ， 照 《中国药典 （二部 ） 》 分光光度法 $ #))/ 年版 附录 ! 0 ( 测定， 于 #)) 1 结果盐酸普鲁卡因在 #3) 2+ 和 ##% 2+ ’)) 2+ 波长范围内扫描。 波长处有最大吸收， 本试验主要是对盐酸普鲁卡因进行含量测定， 故选择 #3) 2+ 为检测波长。
新配置 %) ; 样品 表# 异烟肼 平均质量浓度 百分含量 / ,2 + 3 1 /8 1 )6*$ %6 )75$ *7 66$ 47 67$ "% $%& /8 1 4$ %* 4$ )# 稳定性试验
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异烟酸 平均质量浓度 百分含量 $%& / ,2 + 3 1 /8 1 /8 1 )$ !6 #%$ !5 4$ 5*# #$ *4" 4$ 6* #$ %6
量瓶中， 加流动相溶解并稀释至刻度， 摇匀， 作为异烟肼对照品溶液 （# 444 ,2 + 3） 。 精密称取 #45 F 干燥至恒重的异烟酸对照品 % ,2 置 加流动相溶解并稀释至刻度， 摇匀， 作为异烟酸对照 %5 ,3 量瓶中， （"4 ,2 + 3） 品溶液 。 取异烟肼片 %4 片， 精密称定， 研细， 精密称取适量 / 约相当于异烟肼 #44 ,2 1 ， 置 #44 ,3 量瓶中， 加流动相溶解并稀释 置 #44 ,3 量瓶中， 加流 至刻度， 摇匀， 滤过， 精密量取续滤液 #4 ,3， 动相稀释至刻度， 摇匀， 作为供试品溶液。 取处方中除异烟肼外其他 成分， 用制备供试品溶液的方法制备阴性对照品溶液。 !" $ 方法学考察 线性关系考察： 取异烟肼对照品溶液用流动相稀释成 #4 ， %54 ， 以峰面积 ’ 对异烟肼质量浓度 544 ， 754 ， # 444 ,2 + 3 的系列溶液， 得回归方程为 ’ 0 #4 554 ( = 5" #6% ， ( 进行线性回归， ) 0 4$ 666 " （ " 0 *） 取异烟酸对照品溶液用流动 ， 线性范围为 #4 G # 444 ,2 + 3。 相稀释成 ) ， 以峰面积 # 对异烟肼 "， #% ， #* ， %) ,2 + 3 的系列溶液， 质量浓度 * 进行线性回归， 得 回 归 方 程 为 * 0 * *%7$ 5 # H "6#$ "# ， ) 0 4$ 666 ) / " 0 * 1 。 重现性试验： 取 %$ % 项下供试品溶液， 加流动相稀释成 %54 ,2 + 3 的溶液， 连续进样 * 次， 按色谱条件测定峰面积。 结果异烟肼峰面积 的 $%& 为 4$ %*8 ， 异烟酸峰面积的 $%& 为 4$ 6*8 。 加流动相稀释成 中间精 密度试验： 取 %$ % 项下供试品溶液， （ 对照品溶液为每天新 连续 ! I， 每天测定 ! 次 %54 ,2 + 3 的溶液， 配置 ） ， 按色谱条件测定。 结果异烟肼峰面积的 $%& 为 4$ %68 ， 异 烟酸峰面积的 $%& 为 #$ 758 。 稳定性试验： 取 %$ % 项下供试品溶液， 加流动相稀释成 544 ,2 + 3 的溶液， 连续进样 * 次， 按色谱条件测定峰面积； 溶液放置 %) ; 后， 再连续进样 * 次， 按色谱条件测定峰面积， 结果见表 # 。 可见， 溶液 放置 %) ; 后， 异烟肼百分含量明显降低， 异烟酸百分含量明显增 （ 特别是异烟 加， 说明溶液不稳定， 室温下暴露在空气中容易分解 肼容易被氧化生成异烟酸 ） ， 应该配置后尽快测定。 （批号为 %44"4%4#） 重现性试验： 取同一批样品 ， 重复取样 * 次， 依法测定。 结果的百分标示含量为 #44$ 558 ， $%& 为 4$ )"8 / " 0 表明方法重现性较好。 *1， 检出限 与定量限测定： 取 %$ % 项下供试品溶液 ， 用流动相逐 步稀释成系列标准溶液， 测 得 定 量 限 为 4$ 45 ,2 + 3 ， 检出限为
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& #$ 异烟肼 &$ 对照品溶液 图#
’ %$ 异烟酸 ’$ 供试品溶液
( ($ 阴性对照品溶液
样品含量 / ,2 + 3 1 加入量 / ,2 + 3 1 测得量 / ,2 + 3 1 回收率 / 8 1 # / 8 1 $%& / 8 ）
高效液相色谱图
!" !
溶液制备 精密称取 #45 F 干燥至恒重的异烟肼对照品 #44 ,2 ， 置 #44 ,3
" 收稿日期： 修回日期： #$$% & $’ & #( ； #$$’ & $) & *( +
中国药业 !"#$% &"%’(%)*+,#)%-.
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药物鉴定
甲醇 / 色谱纯 ， 德国默克公司 1 ， 多 %44"4%4# ， %44"4%4% ， %44"4%4! 1 ， 水为去离子水。 库酯钠 / 分析纯 1 ， ! !" # 方法与结果 色谱条件与系统适用性试验
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仪器与试药
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$! ( （’) 7 8)） 本试验还以调 45 为 ’* " 的甲醇 & %6 醋酸 和甲醇 & $’ ( （!) 7 ") ） 为流动相进行试验， 但对氨基苯甲酸和 )* %6 醋酸溶液
盐酸普鲁卡因的分离度均不太理想， 而用本试验所选流动相能使 二者的分离度达到 /* ) 以上， 杂质不干扰样品测定。 参考文献：