微生物快速检测方法及应用进展
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展【摘要】本文主要介绍了饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术的研究进展。
引言部分解释了研究背景、研究目的和研究意义。
接着,正文部分包括了致病性微生物在饮用水中的危害、传统检测方法的局限性、PCR技术在饮用水中的应用、PCR快速检测技术的优势以及相关研究进展。
结论部分讨论了PCR快速检测技术在饮用水中的应用前景、技术发展趋势以及未来研究方向。
本研究对于提高饮用水卫生安全水平具有重要意义,为相关领域的研究与发展提供了有益参考。
PCR快速检测技术的不断进步将为饮用水中致病性微生物的检测和监测提供更为快速、精准的手段,有望在未来得到更广泛的应用。
【关键词】饮用水、致病性微生物、PCR快速检测技术、研究进展、危害、传统检测方法、优势、应用前景、技术发展趋势、未来研究方向1. 引言1.1 研究背景饮用水是人类日常生活中必不可少的资源,其质量直接关系到人们的健康。
由于水源受到各种环境因素的影响,饮用水中可能存在致病性微生物,如大肠杆菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等,这些微生物若进入人体可能引发各种疾病,甚至危及生命。
目前,传统的饮用水微生物检测方法主要包括培养方法和免疫学方法,这些方法存在着操作繁琐、检测周期长、灵敏度低等局限性,难以满足现代社会对水质快速、准确检测的需求。
开发一种快速、灵敏、准确的饮用水致病性微生物检测技术具有重要意义。
PCR技术由于其高度特异性、高效性和迅速性等特点,成为一种广泛应用于微生物检测领域的技术。
特别是PCR快速检测技术的出现,进一步提高了微生物检测的速度和准确性,为饮用水中致病性微生物的快速检测提供了新的解决方案。
本文旨在探讨致病性微生物PCR快速检测技术在饮用水中的研究进展,为饮用水安全保障提供技术支撑。
1.2 研究目的研究目的是通过对饮用水中致病性微生物的PCR快速检测技术进行研究,探讨其在提高饮用水安全性方面的应用潜力。
具体来说,我们的研究目的包括以下几个方面:1. 确定致病性微生物在饮用水中的污染情况:通过PCR技术对饮用水样品中的致病性微生物进行快速、准确的检测,可以及时掌握饮用水的污染情况,为采取相应的水质处理措施提供科学依据。
临床微生物快速检验技术进展
临床微生物快速检验技术研究进展目前感染性疾病是危害人类健康的重大隐患,尤其是对第三世界国家更是一严重的挑战。
随着抗生素的滥用,导致了出现大量严重的耐药菌株,加上新的病原微生物的出现,给临床诊断和治疗带来了极大的困扰。
严峻的现实给病原微生物的检测和诊断提出了更高的要求。
世界卫生组织(who)对临床微生物实验室提出:临床微生物实验室尽可能把目标集中在快速诊断方面。
传统的微生物检验法的最大弱点是慢,难以实现快速诊断与治疗,已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。
实现更准确、更快速地检出与监测病原体成为目前临床微生物检验亟待解决的问题。
随着各种生物学技术的发展和相关学科的不断发展,特别是免疫学、生物化学、分子生物学及计算机技术的不断发展,微生物的检验速度明显加快,同时明显提高了微生物的诊断水平。
本文就对近年来微生物的快速检验技术研究进展作一综述。
1.免疫学方法在快速检测微生物抗原或抗体中的应用免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应,检测病原微生物,简化了病原微生物的鉴定步骤,备受关注。
该方法已成为一种微生物实验室常用的成熟的快速检测技术。
应用单克隆抗体结合各种形式的放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、化学发光免疫分析、生物发光免疫分析等,足以检出临床标本中痕量微生物抗原,免去细菌或病毒培养过程,直接完成微生物感染的快速诊断。
如抗血清凝集技术、荧光抗体检测技术、协同凝集试验、酶联免疫测试技术等。
这些方法操作简单,已经被广泛应用于细菌的分型和鉴定,如沙门菌、霍乱弧菌、流感嗜血杆菌及隐球菌,短时间内就可完成鉴定[1]。
其中,应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪,使该技术进一步简化和准确。
许多疾病的检测都已有商品化的试剂盒出现。
2.分子生物学技术在快速检测微生物中的应用随着分子生物学技术的迅速发展,对病原微生物的鉴定已不再局限于外部形态结构及生理特性等一般检验上,而是立足于分子,特别是核酸水平的检测上,使人们对微生物的认识从外部表型逐渐转向内部基因结构特征,微生物的检测也从生化、免疫方法转向基因水平检测。
食品微生物快速检测技术应用进展
・7 8・
陕
西
农
业
科
学
食 品微生物快速检测技术应用进展
苏凤 贤 , 宝善 , 张 曹 稳 7 06 ) 10 2 ( 西师 范大 学食 品 工程 系, 陕 陕西 西安
提
要 : 品安全与人 类息息相 关, 品微生物检 测技 术也在不 断改进 和发展 , 食 食 以满足人 们对食 品的特
原或抗体的酶标记。根据酶反应底物显色的深浅 放大了免疫反应的结果 , 使测定具有极高 的 灵敏度 。在应用 中—般采用商品化的试剂盒进行 测定 , 其特点是将抗原或抗体制成 固相制剂 , 在与 标本 中抗体或抗原反应后 , 只需经过 固相的洗涤 , 就可以达到抗原抗体复合物与其他物质的分离 , 简化了操作步骤 。 抗体抗原反应所特有的专—性和敏感性使得 食 品在未经分离提取 的情 况下即可进行检 测分 析, 对于被检细菌而言则不需要纯培养 , 只要存在
1 免疫法快速测定食 品中的抗生素
残留
确性和特异性高、 适用范 围宽 以及费用低等优点
自上世纪 5 年代起 , 0 人们就开始在养殖业中 而在 医学以及食品领域 中倍受重视 , 为最为广 成 大量使用抗生素类药物。 抗生素是一种高效兽药 , 泛应用和发展最为成熟的生物检测与分析技术之 然而它在动物体 内大量的残留问题也 日益受到消 特别是随着蛋 白质分离纯化技术和基因工程 费者的重视 。抗生素残 留可能会导致消费者产生 技术的不断发展 , 各种高纯度抗体、 抗原和抗体复 各种不 良反应 , 使人体对抗 生素类药物 的敏感性 合物得以制备 , 单克隆抗体技术的应用 , 使得该诊
一
。
下降 , 增加病原菌对药物的耐药性 , 同时对病毒的 抵抗力降低。 故而在食品生产企业 , 尤其是畜产品 生产企业 , 寻找一种敏感性高的快速检 测方法 已 经成为他们保障无抗生素残留的肉食加工品的最 重要的手段。 国内外应用药物残留免疫分析方法 , 快速测 定食 品抗 生素 残 留技 术 , 主要 有 荧光 免疫分析
流式细胞术在食品微生物检测领域的研究进展
流式细胞术在食品微生物检测领域的研究进展流式细胞术是一种通过流式细胞仪对细胞进行快速、精确、高通量的检测和分析的技术。
它具有高度的自动化和高通量性能,可以实现对微生物的快速、准确的检测,因此在食品微生物检测领域具有巨大的潜力。
本文将对流式细胞术在食品微生物检测领域的研究进展进行详细介绍。
1. 细菌检测食品中的微生物污染是导致食品安全问题的重要原因之一。
传统的微生物检测方法通常需要数天的时间才能得出结果,而流式细胞术可以大大缩短检测时间,同时具有更高的灵敏度和准确性。
利用流式细胞仪可以对食品中的细菌进行快速检测,包括大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌种,为食品安全提供有力支持。
2. 酵母菌和霉菌检测除了细菌,食品中也会存在酵母菌和霉菌的污染,它们可能产生毒素严重影响食品质量和食品安全。
利用流式细胞术可以对酵母菌和霉菌进行快速准确的检测,为食品质量的控制和保障提供了有效手段。
3. 总菌数检测除了对特定的致病菌种进行检测外,流式细胞术还可以用于快速检测食品中的总菌数。
这对于食品的储存和保鲜具有重要意义,可以帮助食品企业及时采取措施,保证食品的安全和卫生。
1. 流式细胞术在快速检测技术中的应用传统的微生物检测方法通常需要进行培养和分离,这些步骤需要较长的时间,无法满足快速检测的需求。
而流式细胞术可以通过对样品中的微生物进行高通量的快速检测,显著缩短了检测时间,提高了检测效率。
2. 流式细胞术在微生物分类鉴定中的应用流式细胞术不仅可以对微生物进行数量上的检测,还可以结合荧光染色技术对微生物进行分类和鉴定。
通过染色标记不同的微生物成分,流式细胞仪可以对微生物进行快速准确的鉴定,大大提高了检测的精准度。
三、流式细胞术在食品微生物检测中的挑战与展望1. 技术标准化流式细胞术虽然在食品微生物检测领域具有巨大的应用潜力,但目前还存在技术标准化不足的问题。
不同的实验室可能使用不同的流式细胞仪,使用的染色荧光物质也各不相同,这将对不同实验室的检测结果产生较大影响。
微生物快速检测方法进展
微生物快速检测方法进展对于人类来说,一些微生物有益的,还有一些微生物对于人类是有害的,这些有害的微生物不但会致使食品腐烂,同时也能够引起人类的疾病,从而对于人类的健康造成不利影响。
大量的微生物分布于空气和水中,因此对于微生物进行提取和检测的过程中,适合的检测仪器和检测方法在其中发挥着非常重要的作用。
标签:微生物;检测方法;进展研究1.微生物快速检测的重要性分析首先,因为在食物当中有着微生物生长过程中所需要的营养,所以很多食物会在一定程度上受到微生物的污染。
受到微生物污染的食品则会对人类的健康造成较大的威胁,所以为了人们的健康安全以及食品安全,对于微生物进行检测是非常重要的。
其次,医院中的病人在受伤之后发生的感染现象,与微生物有着直接的联系。
因此对于医院方面进行微生物的快速检测有利于对医院的感染现象进行控制,并能够对于感染现象起到一定的预防作用。
最后,微生物污染现象大部分是通过空气来进行传播的,所以封闭、温暖、潮湿的室内通常会为微生物的污染创造有利条件。
因此对于室内进行微生物检测是十分重要的,这样才能够具有针对性的采取更加有效的措施,确保生活在室内中的人们健康不会受到微生物的损害。
2.微生物快速检测的方法进展研究2.1生物化学检测生物化学检测分为基因探针检测和PCR检测。
所谓PCR检测其原理就是通过体外酶促反应来进行DNA的合成,通过扩增物的识别过程就能够实现对于菌群的检测。
PCR检测的优点在于灵敏度较高,且能够对于细菌当中存在的拷贝基因进行有效的检测,从而无需增加菌群数量即可完成筛选过程,进而提升进行筛选的成功率。
PCR检测的缺陷在于食物、增菌培养基等其他微生物中的DNA 中所具有的TAP酶抑制性特征,会使得检测结果出现假阴性。
另外,PCR的检测过程是较为严格的,如果外源性细菌的DNA进入到了该检测过程中,那么就会对检测结果造成严重影响。
同时,如果出现装配失误过程,也会对于最终的检测结果造成影响。
快速检测食品中微生物方法的进展
5 、全 自动微生物分析系统 ( A M s )
A M S 是一种 由传 统生化 反应及微生物 检 测技 术与现代 算机技术相 结合,运用概 率 最 大近似值模 型法进行 自动 微生物检测 的技 术 ,可鉴定 由环 境、原料及 产品中分离 的微 生物 。A M S仅需 4 h ~1 8 h即可报告结果, 以 常规法鉴定细菌 ,只能得到是或不是某种菌, 要 想知到是哪种 菌还要做大 量、烦琐 的生化 试验 ,而 A M S 则可 以直接报告是什么菌 [ 7 ] 。 法 国生物梅里埃集 团公司 出品的 V i t e k A M S 自动微 生 物检 测 系 统属 当今 世 界 上最 为 先 进 、 自动化程度 最高的细菌 鉴定仪器之 一。 V i t e k对 细菌 的鉴定是 以每种 细菌 的微量 生 化反应为基础 ,不 同种类的 V i t e k试 卡 ( 检测 卡) 含有 多种 的生化反应孔 ,可达 3 O种,可 鉴定 4 0 5种细菌 [ 8 ] 。用 A M S明显缩短肠道 菌生化鉴定 的时间 , 如鉴定沙 门菌属只需 4 h , 鉴 定志贺 氏菌属只需 6 h ,鉴定霍乱弧菌等致
1 、即用型 纸片法
3 M 公 司的 p e r r i f i I m T M P l a t e 系列微生物 测试 片,可分别 检测菌落 总数、大肠 菌群计 数、霉菌和酵母计数 。由 R C P S c i e n t i f i c I n c 公司开发上市的 R e g d i g e l系列 ,除上述项 目 外还有检 测乳杆 菌、沙 门菌、葡萄球 菌的产 品 ,这两 个系列 的产品与传 统检测方法 之 间 的相关性 非常好 。如用大肠 菌群快检 纸片检 测 餐具 的表面 ,操 作简便 、快速、省料 ,特 异性和敏 感性与 发酵法符合 率高 ,已经 被列 为 国标方 法 。使 用时应 正确 掌握操作 技术和 判 断标准 ,从而达 到理想 的检 测效果 [ 1 ] 。 美国 3 M公司生产 的 P F ( P e t r i f i i m ) 试纸还加 入 了染色 剂、显 色剂 ,增 强了菌落 的 目视效 果,而且 避免 了热琼脂法不 适宜受损细 菌恢 复的缺 陷。在大肠 菌群检测 方面 ,国标 方法 报 告的是 M P N值而不是每克食品 中的大肠菌 群 数,P F法则可以得 出精确数据 。霉菌快速 检 验纸片 ,应用 于食品检验 中的霉菌 具有操 作 简便,仅需 3 6 ℃培养,不需要低温设备; 快速 ,仅 需 2 d就可观察结果, 比现在的 国 家标 准检验方法缩短 3 d ~5 d ,大大提高 了 工 作效率 。纸片法 与国标法在 霉菌检 出率上 差 异无显 著性 ,且菌 落典型 ,易判定 。纸片 荧 光法利 用细菌产 生某些代 谢酶或代谢 产物 的特 点而建 立的一种 酶 底物 反应法 。只需 检测 食 品中大肠菌群 、大肠杆 菌的有关 酶的 活性 ,将荧 光产物在 3 6 5 n m紫外光 下观察即 可 。同时纸 片可 高压灭菌处理,4 " C 保存 ,简 化 了实验准备 、操 作和判 断 [ 3 ] 。
新型微生物检测技术的研究及应用探索
新型微生物检测技术的研究及应用探索近年来,随着生物学、化学、医学等领域技术的不断发展,新型微生物检测技术也随之不断更新和升级。
这些新技术已被广泛应用于食品安全、公共卫生、环境监测等领域,并为人类的健康保驾护航。
本文将深入探讨新型微生物检测技术的研究进展及应用探索。
一、PCR技术PCR技术是近年来最常用的微生物检测技术之一。
该技术通过特异性引物和逆转录酶,将DNA反转录成cDNA,并不断复制使其达到可检测的浓度,并通过标记和杂交基准序列,检测目的物。
该技术拥有操作简单、准确灵敏、检测结果迅速等优点,性价比较高,是目前最为广泛应用的技术之一。
二、NGS技术NGS (Next Generation Sequencing) 技术又称下一代测序技术,是现代微生物学研究中的一项革命性技术,可快速测序目标DNA或RNA,并产生大量序列信息。
NGS技术在微生物检测中广泛应用,尤其是在分子流行病学中具有很大潜力。
通过分析微生物遗传信息的变异,该技术可以快速鉴定、分类和定量目标微生物,甚至是获得新物种的信息。
三、微流控芯片技术微流控芯片技术 (Microfluidic Chip Technology) 是一种高度微型化的综合技术,可以将操作和分析过程集成在一个芯片中进行。
该技术主要通过微管道、阀门、泵等微结构实现微小液滴的移动和合并,从而逐渐完成一系列的检测工作。
微流控芯片技术在微生物检测中应用广泛,可以快速检测微生物数量、鉴别不同的微生物、检测细胞的表型、功能以及微生物群落的结构等。
四、质谱技术质谱技术是一种现代分析技术,可以通过质量测量和分析,将物质分子与碎片分子通过质谱仪进行分离,获得目标物质的分子信息。
该技术在微生物检测领域广泛应用,可以提供微生物分子特征的定性和定量信息、测量生物分子的相对丰度、结构、分子量等。
五、生物芯片技术生物芯片技术又称 microarray 技术,是一种用来检测RNA、DNA、蛋白质及代谢产物等的先进技术。
微生物快速检测技术
细胞生物传感器
利用微生物细胞与传感器表面的特异 性受体结合,引起传感器电信号的变 化,从而实现对微生物的快速检测。
免疫生物传感器
将特异性抗体固定在传感器表面,通 过待测样品中微生物与抗体的结合, 引起传感器电信号的变化,进而实现 微生物的快速检测。
其他方法
流式细胞术
利用流式细胞仪对单个微生物细 胞进行快速检测和分类。该技术 具有高通量、高灵敏度和多参数
应用领域
该技术已广泛应用于食品安全、环境监测、医疗卫生等领 域,为保障公众健康和生态环境安全发挥了重要作用。
挑战与问题
尽管微生物快速检测技术取得了显著进展,但仍面临一些 挑战和问题,如检测方法的标准化、检测设备的便携性、 检测结果的准确性等。
对未来发展的展望与建议
加强技术创新
继续加大研发力度,推 动微生物快速检测技术 的创新和发展,提高检 测方法的灵敏度和特异 性,降低检测成本和时 间。
成本效益
传统检测方法成本较低,但耗时较长;快速检测 技术虽然成本较高,但能够缩短检测周期,提高 检测效率。在实际应用中,需要根据具体需求和 条件选择合适的检测方法。
05
微生物快速检测技术的发展趋势 与挑战
发展趋势分析
多元化检测方法
01
随着科技的进步,微生物快速检测技术正朝着多元化方向发展
,包括免疫学、分子生物学、生物传感器等多种方法。
实时荧光定量PCR
在PCR反应体系中加入荧光基团,实时监测荧光信号的变 化,实现微生物核酸的定量检测。该技术具有操作简便、 快速准确的优点。
基因芯片技术
将大量特异性寡核苷酸固定在芯片上,通过与待测样品中 微生物核酸的杂交反应,实现对多种微生物的同时检测。
生物传感器方法
浅谈微生物快速检验技术及临床应用
浅谈微生物快速检验技术及临床应用引言:微生物是指一类生物体,包括病原微生物和有益微生物。
对微生物进行快速检验,对于临床诊断和治疗具有重要意义。
本文将介绍不同的微生物快速检验技术,并探讨其在临床应用中的作用。
第一部分:传统微生物检验的局限性传统微生物检验技术通常需要培养微生物菌株,这个过程非常漫长而费时。
尽管传统培养方法仍然是微生物学的基础,但它们存在许多局限性。
首先,培养过程要求时间较长,无法及时提供结果。
其次,某些微生物可能无法在常规培养基上生长,导致假阴性结果。
不同的菌株也可能显示出不同的生长特性,增加了检测的困难。
第二部分:PCR技术在微生物快速检验中的应用聚合酶链反应(PCR)是一种广泛应用于微生物检验的技术。
PCR 技术能够快速扩增微生物DNA片段,从而使其检测变得更为敏感和准确。
此外,PCR技术还可以在非常短的时间内提供结果,这对于迅速确定感染病原体十分重要。
PCR技术的应用范围广泛,可以用于诊断各种感染疾病,如呼吸道感染、尿路感染和性传播疾病等。
第三部分:质谱技术在微生物快速检验中的应用质谱技术是一种基于微生物分子组成的快速检验技术。
通过质谱仪的扫描,可以得到微生物的质谱图谱。
这些图谱可以与数据库中的参考图谱进行比对,以确定微生物的种类和亚种。
质谱技术具有高度的特异性和准确性,能够在短时间内完成检测,并提供可靠的结果。
因此,质谱技术被广泛应用于微生物的鉴定和分类,对于临床感染的快速诊断具有重要意义。
第四部分:快速抗生素敏感性测试技术抗生素敏感性测试是临床微生物学中的重要环节。
传统的抗生素敏感性测试通常需要48小时以上才能得出结果。
然而,期间患者可能因感染加重而需要立即治疗。
因此,发展快速抗生素敏感性测试技术至关重要。
近年来,各种快速抗生素敏感性测试方法相继出现,如荧光型PCR、蛋白质芯片和电生理技术等。
这些新技术可以在短时间内测定微生物对抗生素的敏感性,为临床治疗提供及时指导。
结论:微生物快速检验技术在临床中的应用已经取得了显著进展。
微生物快速检验技术应用研究进展
微生物快速检验技术应用研究进展摘要:近年来,传染病的发病率逐年增加,微生物传染病是最常见的临床疾病之一,对患者造成较大损害,甚至威胁患者生命安全。
同时,部分患者长期滥用抗生素药物,患病期间体质相对较低,容易导致微生物耐药性提高,还会引起患者其他并发症,会使临床治疗复杂化。
此外,城市化的不断发展和人口迁移的加速,也迫使传染病呈现出集群传播频率高的特点,增加了传染病感染的数量。
传统微生物检验技术的不足,需要探索一套安全、稳定、快速、准确的检验技术,以提高微生物检验的效率。
关键词:微生物;快速检验;应用研究前言传染病在临床治疗中很常见,如果滥用抗生素治疗传染病,很可能会增加微生物耐药性,导致传染病的治疗越来越困难。
因此,在传染病的治疗中,准确诊断尤为重要。
对于传染病的临床诊断,检验最重要的指标之一是病原微生物的检验,因此找到一种能够快速可靠地检验各种微生物的方法成为诊断传染病的主要目标。
1.微生物快速检验技术概述传染病的传播速度在增加,对人体健康的损害越来越大,医学界需要采用快速准确的微生物检验技术来解决这个问题。
目前,计算机技术发展非常迅速,检验微生物的技术可以与计算机技术相结合,向快速化发展。
多个学科的整合有助于微生物检验技术的不断发展,可以为临床微生物检验提供较高的诊断和治疗价值。
传统的实验室微生物检验技术费时、操作困难,难以满足现代对传染病临床防治的要求。
为了更好地应对这一实际挑战,临床微生物学实验室将目标重点放在快速诊断上,快速检验技术的研究在中国的普及程度还不够大;一些检验工作还缺乏规范,难以进一步与国际标准接轨和沟通。
传统的微生物检验技术需要产生染色体、一系列培养物和生化检验,检验过程非常复杂和耗时,无法满足患者临床治疗的需求。
微生物快速检验技术的精度高,可有效提高检出率,为传染病的临床治疗、防控提供决策建议。
比如血菌快速检验技术,其在血菌培养方法的基础上,加入双面烧瓶富集培养物,样品放入烧瓶后,只需根据仪器提示将烧瓶放入仪器中,在荧光检验器的帮助下快速完成动态检验,有效提高检验灵敏度,并能用于生物学特性,并对检验报告进行数据处理[1]。
微生物快速检测方法及应用进展
微生物快速检测方法及应用进展引言随着人类对生物学研究的不断深入,微生物在生物学和医学领域中的重要性得到了越来越多的认可。
不过,传统的微生物检测方法通常需要耗费数天的时间来进行培养和鉴定,这限制了微生物检测在临床和生产中的应用。
因此,发展快速、准确和可靠的微生物检测方法对于促进微生物学和相关领域的发展至关重要。
本文将介绍目前微生物快速检测的主要方法以及相关应用进展。
常见的微生物检测方法传统的微生物检测方法传统的微生物检测方法主要包括培养方法、镜检法和生化鉴定法。
这些方法耗费时间长、技术难度高,需要经验丰富的操作人员才能够保证检测结果的准确性。
•培养方法:利用不同的培养基和培养条件来培养需要检测的微生物,通过菌落形态、生理和生化特性等进行鉴定。
但这种方法需要耗费时间长、耗能和培养基等精细化配置。
•镜检法:通过直接观察或染色后观察微生物,并对其形态、染色性状等进行判断。
然而,这种方法的准确性往往受到操作人员的影响较大。
•生化鉴定法:基于微生物分解特定化学元素的反应来进行鉴定。
该方法有着较高的准确性和可靠性,但是却需要多次的培养和处理,耗费时间较长。
新型的微生物检测方法为解决传统微生物检测方法中的问题,越来越多的研究者开始开发一些新型的微生物检测方法,包括 PCR、免疫诊断、生物传感器、质谱分析等。
•PCR PCR(聚合酶链式反应)是一种以DNA为目标分子、通过逐步扩增目标序列为特征的技术。
利用反向引物与待扩增DNA链的特异性连接,确定扩增所需的起始热变性。
在扩增过程中,产生的DNA片段可利用凝胶电泳或是其他方法进行检测。
由于PCR技术操作简单、灵敏度高,已成为现代分子生物学研究领域的必备手段。
而且,PCR技术也逐渐应用于微生物检测领域,以检测微生物DNA、RNA等。
•免疫诊断免疫诊断检测法是利用抗原与其相应的特异性抗体之间反应的特性,通过荧光、发光、放射性同位素、酶、生物素等标记对该反应产物进行检测的一种检测技术。
微生物检测技术的进展与应用
微生物检测技术的进展与应用自从人类开始运用微生物检测技术以来,我们就受益匪浅。
常见的应用包括食品安全、药品研究、环境卫生、生物工艺等方面。
而且,随着科学技术的不断进步,现代微生物检测技术越来越精确、快速、灵敏和真实可靠。
一、传统微生物检测技术的不足传统微生物检测方法主要依靠菌落计数、培养、染色等技术,需要较长时间、昂贵、耗时和复杂,而且结果相对不精准。
这些技术对于某些微生物而言,还存在着检测不出来的问题。
例如,曾经有病毒在水中存在达一年之久,因为通过传统方法不易检出。
当然,传统微生物检测技术也有其不可替代之处,如它是基于对微生物完整生长培养的分析,同时也能为更便宜和更广泛的检验提供以及不同科学研究提供支持。
二、现代微生物检测技术的新进展近年来,基于分子生物学的现代微生物检测技术得到了广泛应用,这些技术包括聚合酶链式反应(PCR)、微卫星分析、DNA芯片和基因测序。
这些技术在微生物检测领域发挥着越来越重要的作用。
1. 聚合酶链式反应(PCR)PCR是一种基于DNA扩增的技术,能够在短时间内快速检测多种微生物,如细菌、病毒、真菌和寄生虫等。
它的检测速度快、敏感性高且可靠,已成为微生物学中最为常用的检测技术之一。
2. 微卫星分析(SSR)微卫星是DNA中的短重复序列,可以通过PCR扩增,通过生物信息学技术对其进行检测。
使用微卫星分析可以快速检测多个微生物,包括各种病原菌和食品中常见的细菌。
它具有多重检测可靠性和分析能力的优点。
3. DNA芯片DNA芯片是一种基于DNA分子识别原理的基因检测技术,将DNA样品提取后进行诱导耦合反应形成的DNA单链放置在DNA 芯片上。
该技术可以同时快速检测多个微生物。
例如:2014年在西非爆发的埃博拉疫情中,科学家使用了DNA芯片技术在短时间内成功检测出了病毒。
4. 基因测序基因测序可以将DNA和RNA序列放大和测定,从而获得微生物的完全基因组信息。
这一技术可以增强微生物检测结果,并提供有关基因组功能和进化的信息。
病原微生物筛查及快速检测技术开发
病原微生物筛查及快速检测技术开发随着人类生活水平的提高,对疾病的预防和治疗也越来越重视。
病原微生物是引起人类和动物疾病的主要原因之一。
所以,对病原微生物的筛查和检测技术的研究变得越来越重要。
本文将着重探讨病原微生物筛查及快速检测技术的开发。
一、病原微生物筛查技术的发展病原微生物的筛查是通过一系列的实验室测试来确定微生物是否是疾病的原因。
传统的筛查方法是基于培养和生物化学检测,这种方式非常耗时且对微生物的检测范围也不够广。
为了解决这些问题,现代技术逐渐在病原微生物筛查中得到广泛应用。
比如,利用分子生物学的技术,我们能够快速地确定微生物是否存在以及它们的特征。
这种技术基于逐渐发展起来的PCR实验和其他DNA分析的方法。
例如,PCR可以通过放大微生物DNA的数量,而基因芯片则可以同时分析不同的DNA。
总的来说,这些技术已经帮助实现了更快、更准确的筛查方法。
但它们的流程复杂,需要专业知识和昂贵的流程和设备,所以对于某些实际情况,它们的应用仍然受到限制。
二、病原微生物快速检测技术的发展快速检测技术可以更快地检测到病原微生物,这对于预防和治疗疾病尤其重要。
快速检测技术通常是基于生化、免疫学或其他物理和化学技术。
当然,它们的检测能力不够特异性和灵敏度。
但是随着技术的进步,许多快速检测技术已经变得更强大。
例如,现代流式细胞术利用固臂臂结构和荧光以及其他纳米颗粒技术,使得检测出的病原微生物数量更为准确和精确。
另外,纳米物质的应用使得快速检测技术越来越有效而不容易有误。
三、病原微生物筛查技术和快速检测技术在医学上的应用由于病原微生物筛查技术的快速化和精确度的提高,医生们能够更快地诊断出感染疾病的种类。
这使得他们能够更快地提供准确的治疗方案,提高了治疗效果。
同样地,快速检测技术的发展也使得在临床中更快地诊断出病原微生物,从而减少了误诊和漏诊的问题。
目前,许多快速检测技术已经被广泛应用在检测流感病毒、肝炎病毒和结核杆菌等方面。
病原微生物快速检测技术及其在临床诊断中的应用论文素材
病原微生物快速检测技术及其在临床诊断中的应用论文素材病原微生物快速检测技术及其在临床诊断中的应用引言:近年来,病原微生物感染的发病率逐渐增加,给临床诊断和治疗带来了巨大的挑战。
快速准确地检测和鉴定病原微生物对于疾病防控和治疗具有重要意义。
本论文将探讨病原微生物快速检测技术的发展,以及其在临床诊断中的应用。
一、病原微生物快速检测技术的发展随着生物技术的不断进步,病原微生物的快速检测技术也取得了显著的进展。
以下是几种常见的病原微生物快速检测技术。
1. PCR技术PCR技术(聚合酶链反应)是一种将特定DNA序列扩增的方法。
通过PCR技术,可以在短时间内从少量的病原体DNA片段中扩增出足够数量的目标序列,从而快速鉴定病原微生物的存在与种类。
2. 质谱技术质谱技术是一种通过分析样品中的分子质量,来确定病原体的种类和同位素分布的方法。
质谱技术可以快速鉴定病原微生物的种类,并且可以在同一平台上进行多种病原体的检测。
3. 免疫学方法免疫学方法通过检测血清中的特定抗体或抗原来快速鉴定病原微生物的存在与种类。
这种方法通常用于检测病原微生物感染后产生的特异性免疫应答,具有较高的灵敏度和特异性。
二、病原微生物快速检测技术在临床诊断中的应用病原微生物快速检测技术在临床诊断中发挥着重要的作用。
以下是几个典型的应用案例。
1. 实时监测疫情利用病原微生物快速检测技术,可以实时监测疫情的发展和传播。
通过迅速鉴定病原微生物的种类和数量,可以及时采取相应的防控措施,有效遏制疾病的传播。
2. 快速诊断疾病快速检测病原微生物可以帮助医生迅速明确致病原因,从而指导治疗方案的制定。
例如,在感染性疾病的诊断中,通过快速检测确定病原微生物的种类和药物敏感性,可帮助医生选择合适的抗生素,提高治疗效果。
3. 监测治疗效果通过定期监测患者体内病原微生物的数量和变化,可以评估治疗效果,并及时调整治疗方案。
这对于治疗顽固性感染和控制疫情的传播具有重要意义。
食品中微生物快速检测方法的研究进展
2 0 1 3 , 1 9 ( 6 ) : 1 5 — 1 8
F o o d a n d N u t i r t i o n i n C h i n a
食 品中微 生物快 速检 测方 法 的研 究进展
洪 炳财 ,陈 向标 ,赖 明 河
( 揭 阳市质 量计 量监督 检 测 所 ,广 东揭 阳 5 1 5 3 0 0 )
术对副溶血性弧菌等 8 种 常见致病菌进 行检测 ,结果显
P C R、反转录 P C R等。
李光伟 等建 立 了检测 食 品中沙 门菌 的 R T Q . P C R 方法 ,所设计特异引物和探针 针对沙 门氏菌 f i m Y基因 ,
实验表明 ,该方法检测灵 敏度为 1 8 0 e f u / m L ,检 出的阳
来测定 沙门氏菌。对食品样 品中的 2 1 种 已知沙 门氏菌
1 分 子 生物 学 技术
1 . 1 基 因芯 片 技术
基 因芯片的原理是杂交测序 方法 ,即在一块基 片表 面固定数以万计核酸探针 ,与,并 用计算机迅速分 析得 出所要 的信息 ;与传统的检测方法相 比,它 不仅可
以在一张芯片上同时对多个微生物进行检测 ,而且可 以
球菌、乳酸杆菌 、小肠结肠炎耶尔森氏菌 、肉毒梭菌等
食品中常见的微生物。P C R还经发展而衍 生出许多 P C R 优 良技 术 ,如 荧 光 定 量 P C R 、多 重 P C R、R e a l — t i m e
使检测人员在短时间内掌握大量微生物 的信息。基 因芯 片技术具快速 、高效 、自动化 的特点 ,广泛应用 于食 品 微生物的检测 、环境监测 等领域 。陆长 勇…等采用该技
变化情况可实现对待测微生物 的鉴定 。通过建立 电导率 的时间曲线与微生物生长曲线二者之 间关系 ,就能通过
快速检测食品中微生物方法的进展
S P C ) 法 。F CM 通常 以激光作为发光源 ,经过 聚焦整 形后 的光束 垂直照射 在样 品流上 ,被
2 、选 择、鉴定用培养基法
在 培 养基 中加 入 特 异性 的生 化 反应 底 物 、抗体 、荧光 反应底物 、酶反应底 物等 , 可使 目标 培养物 的选择 、分 离 、鉴定 一次性 完成 。如生物一梅 里埃 公司的 BP + R P F ( 兔血
需 要。本文对 食品 中微 生物 的快 速检测方法 进 展情 况进行 综述 ,以利 于对食 品进行筛选 和检测 ,最终 达到预 防肠 道传染病 和食物 中
毒 的发生 的目的。
1 、即用型纸片法
3 M 公 司的 p e r r i i f l mT MP l a t e系列微 生物 测试 片,可分 别检测菌落 总数 、大肠菌群计 数、 霉菌和酵母计数 。 由 RC P S c i e n t i i f c I n c公 司开发上市 的 Re g d i g e l系列 ,除上述项 目外
平对细 菌进行快速 检测 。滤 过样品后 ,存留 的微 生物在滤膜 上进行荧光 标记 ,采用 激光 扫 描设备 自动 计数 。每个 荧光点可直观 地 由 通 过计算机 驱动 的流动 台连接 到 C h e m S c a n 上 的落 射荧光显微 镜来检测 ,尤其对于 生长 缓慢 的微生物 ,检 测用时短 使该方法 明显优 于传统平板计数法。
物对人类 的威胁越来 越大。传统的检 验方法,
主 要包括形态 检查和 生化方法 ,其准确性 、
式 细胞计数具 有高度 的敏 感性 ,可 同时对 目
微生物快速检测技术应用及其发展前景
微生物快速检测技术应用及其发展前景随着经济的发展,人们的生活水平也逐渐提高。
食品安全问题也随之越来越受到人们的重视。
微生物对食品的污染是食品安全方面的一个重要问题,因而备受关注。
微生物对食品的污染性相当强,在食品的生产,加工,运输,储藏等各个环节都有可能发生。
微生物一旦入侵到食品中,就会迅速生长繁殖,继而导致食品的腐败变质。
为了应对食品污染以及保护人体健康,微生物检测技术应运而生。
传统的检验方法,主要包括形态检查和生化方法,其准确性、灵敏性均较高,但涉及的实验较多、操作烦琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重,而且要有大量人员参与。
近年发展起来的微生物快速检测技术,具有更快,更方便,更灵敏等特点,因而得到了广泛的应用。
微生物快速检测主要利用分子生物学方面有关理论为基础。
现代食品微生物快速检测技术主要有以下几种。
1.显色培养基快速检测显色培养基(Chromogenic/Fluorogenic Culture Media)是一类利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物的新型培养基。
这些相应的显色底物是由产色基因和微生物部分可代谢物质组成,在特异性酶作用下,游离出产色基因显示一定颜色,直接观察菌落颜色即可对菌种作出鉴定。
它是一种新型分离培养基,利用显色培养基进行微生物的筛选分离,其反应的灵敏度和特异性大大优于传统培养基。
1.1沙门氏显色培养基用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中沙门氏菌的快速检测。
除伤寒沙门氏菌(在培养基上显无色)不能直接鉴定外,其它沙门氏菌显亮红色,大肠杆菌和大肠菌群显蓝色,枸橼酸杆菌显紫色,其它细菌显黄色或无色。
在食品污染中,主要的沙门氏菌为非伤寒沙门氏菌外的其它沙门氏菌,本培养基的特异性非常高,可达98%,是一种很理想的快速检测培养基。
1.2弧菌显色培养基副溶血性弧菌显色培养基用于食品、海产品、病人粪便样品和水产品中副溶血性弧菌的快速检测。
副溶血性弧菌显蓝绿色至蓝色,其它弧菌显无色;其它细菌显黄色或无色,且细菌菌落很小。
病原微生物的检测及诊断技术的进展
病原微生物的检测及诊断技术的进展病原微生物是引起人类大量传染病的主要原因,检测及诊断病原微生物是保障人类健康的主要手段之一。
近年来,随着科技的发展和生物学研究的深入,病原微生物的检测及诊断技术得到了快速的发展。
本文将从检测和诊断两个方面来探讨病原微生物的检测及诊断技术的进展。
一、病原微生物的检测技术的进展1.基因检测技术基因检测技术是经过不断改进和发展的一种新型病原检测技术。
这种技术通过在样本中检测特定DNA或RNA序列的存在来识别感染病原微生物的种类。
由于其高敏感度、高特异性、高速度、高准确度等优势,已经成为了现代病原微生物检测的主要手段之一。
目前,常用的基因检测技术包括聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光PCR、逆转录PCR、DNA芯片等。
2.胶体金检测技术胶体金检测技术是一种无标记的免疫检测方法。
该方法利用胶体金团簇的形成来判断样品中是否存在病原微生物。
与传统免疫检测方法相比,其敏感度和特异性都更高,并且不需要特殊的设备和复杂的试剂盒。
该技术适用于诊断多种病原微生物感染,包括病毒、细菌、真菌等。
3.质谱分析技术质谱分析技术是一种新型的病原微生物检测技术。
该技术利用质谱仪来测定样品中的化学物质分子量和相对丰度,从而确定样品中是否存在病原微生物。
质谱分析技术在病原微生物检测中,具有速度快、准确度高等优势,并且可以同时检测多种病原微生物。
二、病原微生物的诊断技术的进展1.体外诊断技术体外诊断技术是一种常规的病原微生物诊断技术。
该技术主要包括血清学诊断、转录组分析、细胞培养技术等。
其中,血清学诊断是一种常见的体外诊断方法,其通过检测病原微生物的抗原或抗体水平,快速、便捷地诊断病原微生物感染。
2.体内诊断技术体内诊断技术是一种新型的病原微生物诊断技术。
该技术利用生物体内的检测方法,如脑脊液检测、血液检测等,对病原微生物感染进行诊断。
这种技术的优势在于其检测结果更加客观和真实,尤其适用于复杂或难以确定病原微生物的感染。
微生物在环境监测中的应用与研究进展与挑战
微生物在环境监测中的应用与研究进展与挑战在当今社会,环境保护成为了全球关注的焦点议题。
而环境监测作为评估环境质量、预防环境污染的重要手段,其重要性不言而喻。
微生物作为生态系统中的重要组成部分,在环境监测领域发挥着独特且关键的作用。
本文将深入探讨微生物在环境监测中的应用、研究进展以及所面临的挑战。
微生物在环境监测中的应用可谓广泛而多样。
首先,它们在水质监测方面发挥着重要作用。
通过检测水中微生物的种类、数量和群落结构,可以了解水体的污染程度和生态状况。
例如,大肠菌群是指示水体受到粪便污染的常用微生物指标。
当水中大肠菌群数量超过一定标准,就表明水体可能存在卫生安全隐患。
在土壤环境监测中,微生物同样具有不可替代的价值。
土壤中的微生物群落结构和功能会随着土壤污染程度的变化而改变。
通过分析土壤微生物的多样性、酶活性等指标,可以评估土壤的肥力、污染状况以及生态功能。
微生物还能用于大气环境监测。
一些微生物对特定的大气污染物具有敏感性,其生长、代谢等生理过程会受到影响。
通过监测这些微生物的变化,可以间接反映大气污染的情况。
近年来,微生物在环境监测中的研究取得了显著进展。
在监测技术方面,基于分子生物学的方法,如聚合酶链式反应(PCR)、基因测序等技术的应用,使得对微生物的检测更加灵敏、准确和快速。
这些技术能够检测到环境中微量的微生物,甚至可以鉴定到微生物的种属水平,为深入了解环境中的微生物群落结构和功能提供了有力手段。
同时,微生物传感器的研发也为环境监测带来了新的突破。
微生物传感器利用微生物的代谢活动或与污染物的特异性反应,将环境中的化学信号转化为电信号或光信号,实现对污染物的实时监测。
这种技术具有响应速度快、操作简便、成本低等优点,在环境监测领域具有广阔的应用前景。
然而,微生物在环境监测中的应用也面临着一些挑战。
首先,微生物的生长和代谢受到多种环境因素的影响,这使得监测结果的准确性和可靠性受到一定程度的限制。
例如,温度、pH 值、营养物质等环境条件的变化可能导致微生物的生理状态发生改变,从而影响对污染物的响应。
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展
饮用水中致病性微生物PCR快速检测技术研究进展一、引言饮用水中的微生物污染是导致许多疾病的主要原因之一。
传统的微生物检测方法往往需要长时间的培养,不能及时获得结果,而PCR技术则可以在短时间内快速准确地检测出致病性微生物。
PCR技术在饮用水中致病性微生物检测方面具有广泛的应用前景。
二、PCR技术的原理三、PCR技术在饮用水中的应用1. PCR技术可以用于快速检测饮用水中的致病性细菌,如大肠杆菌、沙门氏菌等。
传统的细菌检测方法需要数天时间才能获得结果,而PCR技术可以在数小时内快速检测出细菌的存在与数量,提高了饮用水的卫生安全。
3. PCR技术还可以用于检测饮用水中的致病性真菌,如白色念珠菌、黏质白念珠菌等。
传统的真菌检测方法往往需要对真菌进行培养,而真菌的培养时间往往较长,且对环境的要求较高。
而PCR技术可以直接从水样中提取DNA,通过扩增特定的真菌基因来检测真菌的存在。
1. PCR技术具有高度的敏感性和特异性,可以在非常低的目标基因载量下进行检测,且仅对特定的目标基因进行扩增,避免了非特异性的干扰。
2. PCR技术具有快速的检测速度,可以在数小时内获得结果,有利于及时采取措施,防止饮用水中的微生物污染对人体健康造成风险。
3. PCR技术操作简单,不需要进行复杂的培养过程,减少了实验的时间和成本。
1. PCR技术在饮用水中的应用还存在一些挑战,如样品预处理的复杂性、抑制剂的干扰等,对其应用进行进一步的优化和改进是必要的。
2. PCR技术已经取得了重要的突破,例如实时荧光PCR技术可以更加准确地定量目标基因的数量。
未来的研究可以进一步发展新的PCR方法,提高其灵敏性和特异性。
3. PCR技术还可以结合其他技术,如纳米技术、微流控技术等,实现更快速、更准确的饮用水微生物检测。
五、总结PCR技术在饮用水中致病性微生物检测方面具有广泛的应用前景。
通过PCR技术,可以快速准确地检测饮用水中的细菌、病毒和真菌等致病性微生物,提高饮用水的卫生安全。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
微生物快速检测方法及应用进展
随着人们生活水平不断提高,各种安全问题越来越受到人们的重视,微生物的污染问题也相应地备受关注。
在食品和环境等各个方面都有微生物污染的可能,一旦污染,微生物将大量繁殖而导致食源性疾病或环境污染甚至医院内感染。
特别是近年来随着环境污染的加剧和生态平衡的不断破坏,导致感染的致病菌的种类越来越多,病原微生物对人类的威胁越来越大。
传统的检验方法,主要包括形态检查和生化方法,其准确性、灵敏性均较高,但涉及的实验较多、操作烦琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重,而且要有大量人员参与[1,2]。
所以,迫切需要准确、省时、省力和省成本的快速检验方法。
本文对微生物快速检测方法的进展情况及实际应用进行综述,以利于预防食源性疾病及公共卫生突发事件的发生。
1 即用型纸片法
3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物测试片,可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数[3]。
由RCP Scientific Inc 公司开发上市的Regdigel系列,除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的产品[4],这两个系列的产品与传统检测方法之间的相关性非常好。
如用大肠菌群快检纸片检测餐具的表面,操作简便、快速、省料,特异性和敏感性与发酵法符合率高,已经被列为国标方法。
使用时应正确掌握操作技术和判断标准,从而达到理想的检测效果[5]。
美国3M公司生产的PF(Petrifilm)试纸还加入了染色剂、显色剂,增强了菌落的目视效果,而且避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复的缺陷。
霉菌快速检验纸片,应用于食品检验中的霉菌具有操作简便,仅需36℃培养,不需要低温设备;快速,仅需2 d就可观察结果,比现在的国家标准检验方法缩短3~5 d,大大提高了工作效率。
纸片法与国标法在霉菌检出率上差异无统计学意义,且菌落典型,易判定。
纸片荧光法利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物的特点而建立的一种酶—底物反应法。
只需检测食品中大肠菌群、大肠杆菌的有关酶的活性,将荧光产物在365 nm紫外光下观察即可。
同时纸片可高压灭菌处理,4℃保存,简化了实验准备、操作和判断[6]。
但由于它们价格昂贵,限制了在基层单位的实际应用。
2 生物化学技术
2.1 PCR技术PCR技术采用体外酶促反应合成特异性DNA片段,再通过扩增产物来识别细菌。
由于PCR灵敏度高,理论上可以检出一个细菌的拷贝基因,因此在细菌的检测中只需短时间增菌甚至不增菌,即可通过PCR进行筛选,节约了大量时间,但PCR技术也存在一些缺点:食物成分、增菌培养基成分和其他微生物DNA对Taq酶具有抑制作用,可能导致检验结果假阴性;操作过程要求严格,微量的外源性DNA进入PCR后可以引起无限放大产生假阳性结果,扩增过程中有一定的装配误差,会对结果产生影响。
由于以上原因,PCR技术对操作者的自身素质要求很高,对于基层单位而言难以做到。
短时间内也不会有经济效益和社会效益,因此影响了这项技术在基层的应用。
2.2 基因探针技术基因探针技术利用具有同源性序列的核酸单链在适当条件下互补形成稳
定的或链的原理,采用高度特异性基因片段制备基因探针来识别细菌。
基
因探针的优点是减少了基因片段长度多态性所需要分析的条带数。
如法国生物一梅里埃公司的
基因探针检测系统,对于分离到的单个菌落,30 min完成微生物的确证试验[7],
基因探针的缺点是不能鉴定目标菌以外的其他菌。
3 选择、鉴定用培养基法
在培养基中加入特异性的生化反应底物、抗体、荧光反应底物、酶反应底物等,可使目标培养物的选择、分离、鉴定一次性完成。
如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血浆+纤维蛋白原)培养基,可在24 h内鉴定金黄色葡萄球菌[8]。
Merk公司的培养基上,大肠杆菌为墨绿色至紫色菌落,沙门菌为淡绿色至蓝绿色菌落。
柠檬酸杆菌和克雷伯杆菌为橙红色至红色菌落,其他肠道菌为无色菌落[9]。
这个方法对操作者要求不高,短期培训合格后即可上岗,从而取得一定的经济效益和社会效益,应用前景十分广泛。
4 免疫学技术
免疫学技术通过抗原和抗体的特异性结合反应,再辅以免疫放大技术来鉴别细菌。
免疫方法的优点是样品在进行选择性增菌后,不需分离,即可采用免疫技术进行筛选。
由于免疫法有较高灵敏度,样品经增菌后可在较短的时间内达到检出度,抗原和抗体的结合反应可在很短时间内完成[10]。
此技术对操作者要求也不高,是目前为止基层单位应用时间最长最为广泛的一项快速检测技术。
如采用免疫磁珠法可有效地收集、浓缩神奈川现象阳性的副溶血性弧菌,可显著提高环境样品及食品中病原性副溶血性弧菌的检出率[11]。
胶体金免疫层析法能快速、灵敏检测金黄色葡萄球菌[12],应用胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原,可大大提高工作效率[13]。
ATP生物发光法是近年发展较快的一种用于食品生产加工设备洁净度检测的快速检测方法。
利用ATP生物发光分析技术和体细胞清除技术,测量细菌ATP和体细胞ATP,细菌ATP的量与细菌数成正比,用ATP生物发光分析技术检测肉类食品细菌污染状况或食品器具的现场卫生学检测,都能够达到快速适时的目标[14,15]。
微型自动荧光酶标分析法(mini VIDAS)是利用酶联荧光免疫分析技术,通过抗原-抗体特异反应,分离出目标菌,由特殊仪器根据荧光的强弱自动判断样品的阳性或阴性。
VIDAS法检测冻肉中沙门菌具有很高的灵敏度和特异性,用于进出口冻肉的检测,可大大缩短检验时间,加快通关速度[16],检测冻肉中李斯特氏菌亦如此[17]。
5 细菌直接计数法
主要包括流式细胞仪(flow cytometry,FCM)和固相细胞计数(solid phase cytometry,SPC)法。
FCM 通常以激光作为发光源,经过聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上,被荧光染色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。
光散射信号基本上反映了细胞体积的大小;荧光信号的强度则代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度,由此可通过仪器检测散射光信号和荧光信号来估计微生物的大小、形状和数量。
流式细胞计数具有高度的敏感性,可同时对目的菌进行定性和定量鉴定[18]。
目前已经建立了细菌总数[19]、致病性沙门菌、大肠埃希氏菌[20]等的FCM检验方法。
固相细胞计数可以在单个细胞水平对细菌进行快速检测[21]。
滤过样品后,存留的微生物在滤膜上进行荧光标记,采用激光扫描设备自动计数。
每个荧光点可直观地由通过计算机驱动的流动台连接到ChemScan上的落射荧光显微镜来检测,尤其对于生长缓慢的微生物检测用时短,使该方法明显优于传统平板计数法[22]。
此方法要求配备特殊的仪器,财政投入较大,因此基层单位目前暂时无法应用。
6 全自动微生物分析系统(AMS)
AMS是一种由传统生化反应及微生物检测技术与现代计算机技术相结合,运用概率最大近似值模型法进行自动微生物检测的技术,可鉴定由环境、原料及产品中分离的微生物。
AMS仅需4~18 h即可报告结果,以常规法鉴定细菌,只能得到是或不是某种菌,要想知到是哪种菌还要做大量、烦琐的生化试验,而AMS则可以直接报告是什么菌[23]。
法国生物梅里埃集团公司出品的自动微生物
检测系统属当今世界上最为先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一。
Vitek对细菌的鉴定是以每种细菌的微量生化反应为基础,不同种类的Vitek试卡(检测卡)含有多种的生化反应孔,可达30种,可鉴定405种细菌[24]。
用AMS明显缩短肠道菌生化鉴定的时间,如鉴定沙门菌属只需4 h,鉴定志贺氏菌属只需6 h,鉴定霍乱弧菌等致病性弧菌亦只需4~13 h[22]183-186。
这套系统对基层单位而言具有极强的应用价值,但他昂贵的价格让人望而生畏。
总之,随着现代科技的发展,可以预料在不远的将来,传统的微生物检测技术将逐渐被各种新型简便的微生物快速诊断技术所取代。
近年来兴起的基因探针技术及全自动微生物检测系统,将从根本上改变微生物的检测方法,具有非常广阔的应用前景。