紫外-可见分光光度计
紫外-可见分光光度计的原理
紫外-可见分光光度计的原理
紫外-可见分光光度计是一种常见的实验仪器，用于测量样品溶液、气体或固体的吸光度。
它的原理基于光的吸收现象和分光技术。
紫外-可见分光光度计内部有一束宽频谱的光源，通常是可见光和紫外光区域。
这束光经过一个光栅或一些棱镜，被分成不同波长的光，形成连续的光谱。
在分光区域中，如紫外或可见光区域，我们可以选择特定的波长范围用于测量。
被测样品溶液或气体通过一个透明的样品池或光束通道，并放置在光路中。
如果样品存在可吸收的物质，它将吸收特定波长的光。
被吸收的光量与样品中的吸收物质浓度成正比。
在光路的另一端有一个光敏检测器，通常是光电二极管或光电倍增管。
它测量通过样品池或光路的光的强度。
当有样品吸收光时，检测器测量到的光强度将减小。
光度计通过比较样品测量光强度和没有样品的参比光强度，计算出吸收光强度的差值。
然后将差值与已知浓度的标准溶液进行比较和校准，得出待测样品的浓度。
根据被测样品的特性和光度计的设计，紫外-可见分光光度计可以测量不同波长范围内的吸光度。
常见的应用包括分析和测量有机物、无机物、生物分子和其他化学物质的浓度或反应动力学等。
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程一、仪器准备1.打开紫外可见分光光度计，等待它进行自检。
2.检查仪器是否正常，包括光源、检测器、单色器等。
如有故障，请及时修复或更换。
3.将样品室清洁干净，并检查透射池是否干净。
如有污染，请用纯水和无尘纸擦拭。
二、仪器校准1.对紫外可见分光光度计进行校准。
校准包括零点校准和波长校准。
2.零点校准：使用纯溶剂（例如纯水或纯乙醇）进行零点校准。
在选定的波长下，将溶剂放入透射池中，点击“零点校准”按钮进行校准。
3.波长校准：使用已知浓度且吸收峰位清晰的标准品进行波长校准。
在选定的波长下，将标准品放入透射池中，点击“波长校准”按钮进行校准。
三、样品测试1.取出已经准备好的样品，在样品室中放入透射池。
2.选择合适的波长范围和波长值。
根据样品的吸收峰位和浓度范围，选择一个适当的波长范围。
四、测量样品吸光度1.点击“开始”按钮进行测量。
仪器将在选定的波长下自动扫描，显示吸光度曲线。
2.观察吸光度曲线，确定样品的吸收峰位和吸光度值。
五、数据处理和结果记录1.根据吸光度曲线，确定样品的吸光度值。
可以选择峰值吸光度或在特定波长下的吸光度值。
2.如果需要，可以进行数据处理，例如计算吸光度差、构建标准曲线等。
3.记录测量结果，包括样品名称、浓度、波长范围、吸光度值等信息。
六、仪器维护1.测量完毕后，及时清洁透射池和样品室，避免样品残留。
2.关闭紫外可见分光光度计，并将仪器盖上，以防尘埃进入。
3.定期维护仪器，例如清洁光源、调整灯泡亮度等。
七、注意事项1.在操作过程中，避免直接接触光源和检测器，以免引起损坏。
2.使用纯净溶剂进行校准，避免杂质对测量结果的影响。
3.在进行波长校准时，选择已知浓度且吸收峰位清晰的标准品，以确保测量结果的准确性。
4.在清洁透射池时，使用纯净水和无尘纸进行擦拭，避免使用有机溶剂和粗糙材质。
5.操作过程中避免碰撞和震动仪器，以免影响测量结果。
6.长时间不使用时，及时关闭仪器，以延长仪器寿命。
紫外可见分光光度计的作用
紫外可见分光光度计的作用紫外可见分光光度计是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的实验仪器，它的作用十分重要。
本文将从多个角度来探讨紫外可见分光光度计的作用。
一、测定物质的吸光度紫外可见分光光度计主要用于测定物质的吸光度。
通过测量物质在紫外和可见光波段的吸收情况，可以得到物质在不同波长下的吸光度谱。
这对于研究物质的结构、浓度、反应动力学等都具有重要意义。
例如，可以通过测定DNA或蛋白质样品在不同波长下的吸光度，来研究其浓度、纯度以及构象的变化。
二、定量分析物质浓度紫外可见分光光度计可以利用比尔－朗伯定律，根据样品溶液的吸光度与溶液中物质的摩尔浓度之间的线性关系，来定量分析物质的浓度。
这种方法被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。
例如，可以利用紫外可见分光光度计测定水中重金属离子的浓度，从而判断水质的安全性。
三、反应动力学研究紫外可见分光光度计在反应动力学研究中也发挥着重要作用。
通过监测反应体系吸光度的变化，可以研究反应的速率、反应机理等。
例如，可以利用紫外可见分光光度计测定酶催化反应体系中底物浓度的变化，来研究酶的催化机制。
四、质量控制和质量保证紫外可见分光光度计在药物生产、食品加工等领域中，被广泛应用于质量控制和质量保证。
通过测定样品的吸光度，可以判断样品的成分是否符合要求，从而保证产品的质量。
例如，药品生产中可以利用紫外可见分光光度计测定药物样品中的杂质含量，确保药品的安全性和有效性。
五、教学和科研紫外可见分光光度计在教学和科研中也扮演着重要角色。
它是化学、生物等专业学生进行实验的常用仪器，通过实验操作可以帮助学生更好地理解光谱学原理和测量方法。
同时，紫外可见分光光度计也是科研人员进行实验研究的重要工具，为他们提供了可靠的数据支持。
紫外可见分光光度计在化学、生物、医药等领域中具有广泛的应用。
它可以用于测定物质的吸光度、定量分析物质浓度、研究反应动力学、质量控制和质量保证，同时也在教学和科研中发挥着重要作用。
紫外-可见分光光度计
双波长分光光度计是一种新型的分光光度计， 能把同一光源发出的光通过一个特别的单色 器，把光调成两束不同波长的光，经过切光 器，使其交替通过样品池，再至检测器，可 以测出样品与参比的吸光值，从而计算出被 测组分的浓度。这类仪器优点是可以消除人 工配制的空白溶液与样品基体之间的差别而 引起的误差，还能测定混合物溶液。
三、常用的紫外－可见分光光度计的使用 视频录像 四、分光光度计的检验及维护保养（自学）
三、紫外－可见分光光度计
一、基本组成：
1．光源： 作用是提供入射光
（1）可见光光源：钨丝灯 可提供 325～ 2500nm的光
（2）紫外光光源：氢灯、氘灯、氙灯等 可提供 185～375nm的光
可见分光光度计使用可见光光源，而紫外分 光光度计一般又上述两个光源。
2．单色器（分光元件）： 作用是将光源发射的连 续光谱分解为单一波长的单色光。
4．检测器： 作用是将透过溶液的光信号转ห้องสมุดไป่ตู้换为电信号。
（1）光电池：接受光信号后产生电流，但 长时间照射易疲劳
（2）光电管：比光电池灵敏度高、不易疲 劳产生电流需要放大
（3）光电倍增管：具有自身信号放大作用
5．信号显示器 （1）检流计、微安表 （2）数字显示器、自动记录仪
二、紫外－可见分光光度计的类型 1．紫外－可见分光光度计分类： （1）按使用波长分为： 可见分光光度计（400～780nm） 紫外可见分光光度计（200～1000nm） （2）按光路分为：单光束型和双光束型 （3）按提供的波长数分为：单波长型和双
分光元件有：
（1）棱镜：普通玻璃或石英玻璃制成 利用的是光 的折射原理达到分光目的
（2）光栅：在平滑的金属表面 刻上锯齿状平行的 划痕 利用的是光的衍射和干涉原理达到分光目的。
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程
《紫外可见分光光度计操作规程》
一、工作准备
1. 开机前检查：清洁光栅、检查光源和探测器是否正常。
2. 准备标准溶液：根据实验需要准备好待测溶液和标准溶液并进行标定。
3. 准备样品：将待测溶液转移至透明的玻璃试管或石英比色皿中。
二、仪器调节
1. 打开光度计：按照仪器说明书操作，打开光度计，等待仪器预热。
2. 调节参比通道：选择适当的参比波长，并将参比通道调至零点。
3. 调节样品通道：选择待测波长，并将样品通道调至零点。
三、测量操作
1. 测量样品：将待测溶液装入样品比色皿中，放入光度计样品槽内。
2. 执行测量：按照操作说明，进行测量并记录数据。
3. 清洗仪器：测量完成后，及时清洗样品比色皿和样品槽。
四、数据处理
1. 计算浓度：根据测量数据和标定曲线，计算样品的浓度。
2. 记录结果：将浓度及测量数据记录在实验记录表中。
五、仪器关闭
1. 关闭光度计：根据操作说明，正确关闭光度计。
2. 清洁仪器：清洁光度计表面和槽口，保持仪器干净整洁。
通过以上操作规程，能够正确、准确地操作紫外可见分光光度计，为实验数据的获取和分析提供可靠的支持。
同时，也能够保护和延长仪器的使用寿命。
紫外可见分光光度计
临床分析 色彩測定 环境分析
生物化学分析
有机化学分析
无机化学分析 光学测定
有机化学分析 无机化学分析 光学测定 生物化学分析 环境分析 色彩測定 临床分析
紫外/可见分光光度计的基本结构
光源 单色器 样品室 检测器 控制放大电路 显示器
比色皿 单色光
光电管（或光电池） 放大器
显示器
斩光器 单色光
阳光是复合光的事实。
分光光度法
❖ 1859年德国物理学家本生(R．W．Bunsen)和基尔 霍夫(G．R．Kirchhoff)发现由食盐发出的黄色谱线 的波长和“夫琅和费线”中的D线波长完全一致， 才知道一种物质所发射光的波长(或频率)，与它所能 吸收的波长(或频率)是一致的。
分光光度法
❖ 朗伯(J．H．Lambert)早在1760年就发现物质对光 的吸收与物质的厚度成正比，后被人们称之为朗伯 定律；比耳(A.Beer)在1852年又发现物质对光的吸 收与物质的浓度成正比，后被人们称之为比耳定律。 在应用中．人们把朗伯定律和比耳定律结合起来， 称之为朗伯—比耳定律。随后，人们开始重视研究 物质对光的吸收，并试图在物质的定性、定量分析 方面予以使用。因此，许多科学家开始研究以朗 伯—比耳定律为理论基础的仪器装置。
对其分别进行光度测定。
ABS (%T)
ABS (%T)
时间
时间
（二）定性分析
一、利用标准物质定性 在相同条件下，用光谱扫描法测定未知物的吸收光谱，与所推断化合物的标
准物的吸收光谱进行比较，如果两吸收光谱的形状和吸收峰的数目、位置、拐点 等完全一致，就可初步判定未知物与标准物是同一种物质。但要注意，物质不同 但光谱相似的特殊情况。
波长
紫外 -可见分光度计实验
紫外-可见分光光度计
1．实验目的
(1) 了解紫外-可见分光光度计的工作原理及测试范围。
(2) 了解紫外-可见分光光度计的组成部件，掌握测试材料光谱吸收特性的一般步骤。
2. 实验内容
(1) 测试纳米颗粒溶液的光谱吸收特性。
(2) 比较不同浓度的溶液吸收曲线的差异。
3. 实验设备与仪器
紫外-可见光分光光度计
4. 实验步骤
1．开机预热
依次分别开启电源开关，电脑仪器，打开UV probe2.7，点击链接，仪器进行初始化，大约5min，进行一系列机械、光路检查、设置，初始化完成后，预热15min即可往下操作。
2．基线纠正
选择光谱菜单，进入光谱扫描界面，点击菜单“M”进行参数设定，包括波长测定范围，扫描速度，采样间隔，扫描方式（单个/自动），此实验所测波长范围200～800nm，点击菜单中仪器参数，可选测定种类及通带条件。
设置波长范围200～800nm，选择测透过率狭缝2nm
在样品室放入去离子水作空白对照，点击基线检证、确认。
3.投射图谱测定：
基线纠正完毕，取出去离子水，将纳米锌粒子悬浮液转移至10nm厚的石英比色皿中，放入紫外-可见光分光光度计中，软件自动运行测量并绘制图谱。
4.保存数据，并利用软件数据处理。
5. 实验结果
光谱吸收曲线如图所示
6. 问题与思考
(1) 紫外-可见分光光度计的测试光路？
(2) 纳米颗粒溶液浓度对吸收光谱有何影响？
纳米颗粒溶液的浓度影响峰值明显程度，溶液浓度较高，峰值较突出，溶液浓度较低，峰值则不明显。
(3) 材料的吸收光谱有何应用？
可用作物质鉴定及纯度检查。
紫外可见分光光度计范围
紫外可见分光光度计范围紫外可见分光光度计是一种常见的实验仪器，广泛应用于生化分析、环境监测、医学研究等领域。
它能够测量样品在紫外和可见光波段的吸光度，通过测量吸光度的变化，可以得到样品的浓度、反应动力学等重要信息。
紫外可见分光光度计的工作原理是基于光的吸收现象，下面我们来详细了解一下它的工作原理和应用范围。
紫外可见分光光度计的工作原理是基于比尔-朗伯定律，即吸光度与溶液中物质的浓度成正比。
当光通过样品时，样品中的物质会吸收一部分光，剩下的光通过样品溶液。
光度计会测量通过的光的强度，通过计算吸光度与浓度的关系，可以得到样品中物质的浓度。
紫外可见分光光度计的主要组成部分包括光源、样品室、光栅和光电传感器等。
紫外可见分光光度计的应用范围非常广泛。
在生化分析中，紫外可见分光光度计可以用于测量蛋白质、核酸、糖类等生物大分子的浓度。
通过测量吸光度的变化，可以得到样品中生物大分子的浓度，从而实现对生物大分子的定量分析。
在环境监测中，紫外可见分光光度计可以用于测量水中的污染物浓度。
通过测量水样的吸光度，可以判断水中是否含有有害物质，并对水质进行评估。
在医学研究中，紫外可见分光光度计可以用于测量药物的浓度。
通过测量药物的吸光度，可以监控药物在体内的代谢过程，从而指导药物的使用。
除了测量样品的浓度，紫外可见分光光度计还可以用于研究样品的光学性质。
在材料科学中，紫外可见分光光度计可以用于研究材料的光学吸收、反射和透射等性质。
通过测量材料在不同波长下的吸光度，可以得到材料的光学带隙、能带结构等重要参数。
在化学反应动力学研究中，紫外可见分光光度计可以用于测量化学反应的速率。
通过测量反应物或产物的吸光度随时间的变化，可以得到反应的速率常数和反应级数等信息。
总结一下，紫外可见分光光度计是一种常见的实验仪器，广泛应用于生化分析、环境监测、医学研究等领域。
它通过测量样品在紫外和可见光波段的吸光度，可以得到样品的浓度、反应动力学等重要信息。
紫外可见分光光度计的作用
紫外可见分光光度计的作用一、什么是紫外可见分光光度计？分光光度计是一种用于测量物质对光的吸收或透射性能的仪器。
其中，紫外可见分光光度计是应用于紫外光和可见光波段范围内的分光光度计。
它可以测量物质在不同波长下的吸收光强，从而得到吸收光谱和透射光谱，进一步分析样品的特性和成分。
二、紫外可见分光光度计的原理紫外可见分光光度计的原理基于比尔-朗伯定律。
根据这个定律，物质溶液中所吸收的光强与物质浓度成正比，也与光程和物质的摩尔吸光度相关。
通过调节不同波长的入射光，获得样品在不同波长下的吸光度值，可以得到样品吸收光谱。
三、紫外可见分光光度计的工作原理紫外可见分光光度计由光源、光栅、样品室、检测器和计算机组成。
具体工作原理如下：1. 光源光源产生连续的光谱，通常使用氘灯或钨灯作为光源。
紫外光区域使用氘灯，可见光区域使用钨灯。
2. 光栅光栅是紫外可见分光光度计的核心部件，它可以分散光线，使不同波长的光分开。
具体来说，光线经过光栅后，会被分成不同颜色的光，形成连续的光谱。
3. 样品室样品室用于放置待测样品。
样品室透光窗口的材料可以根据不同实验需要选择，例如石英或玻璃。
通过调节样品室中的路径长度，可以改变样品对光的吸收程度。
4. 检测器检测器接收样品室中透射或反射的光，并将光信号转换为电信号。
常用的检测器包括光电二极管（photodiode）和光电倍增管（photomultiplier tube）。
5. 计算机计算机用于控制光源、记录检测器输出和进行数据处理。
通过计算机软件，可以实时显示吸收光谱，并进行数据分析和处理。
四、紫外可见分光光度计的应用紫外可见分光光度计具有广泛的应用范围，以下列举了几个常见的应用领域：1. 生物化学和分子生物学在生物化学和分子生物学中，紫外可见分光光度计可以用于测量DNA和蛋白质的浓度。
通过测量样品在260纳米波长处的吸收光强，可以确定DNA的浓度。
同时，通过测量样品在280纳米波长处的吸收光强，可以确定蛋白质的浓度。
紫外-可见分光光度计
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玻璃可吸收紫外光，玻璃棱镜只能用于350 ~ 3200 nm的 波长范围，即只能用于可见光域内。 石英棱镜可使用的波长范围较宽，可从185 ~ 4000nm， 即可用于紫外、可见和近红外三 个光域。
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光栅是利用光的衍射与干涉作用制成的，可用于紫外、 可见及红外光域 在整个波长区具有良好的、几乎均匀一致的分辨能力。 具有色散波长范围宽、分辨本领高、成本低、便于保存 和易于制备等优点。 缺点： 各级光谱会重叠而产生干扰。
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特点： 可测多组份试样、混浊试样、而且可作成导数光谱、 不需参比液(消除了由于参比池的不同和制备空白溶液 等产生的误差)。 克服了电源不稳而产生的误差，灵敏度高。
缺点：
仪器需要装备两个单色器，价格较高，体积较大。
用微机装备的单波长仪器能实现上述双波长仪器的功能。
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双波长光度计光路示意图
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光电管：紫外-可见分光光度计上应用较为广泛。
光电倍增管：检测微弱光最常用的光电元件
特点：灵敏度比一般的光电管要高200倍，因此可使 用较窄的单色器狭缝，对光谱的精细结构有较好的 分辨能力。
缺点：强光照射会引起不可逆损害，不适用于检测
高能量。
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（五）信号指示系统 作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。 常用的信号指示装置有直读检流计、电位调节指零装置 以及数字显示或自动记录装置等。 很多型号的分光光度计装配有微处理机，一方面可对分 光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理。
①入射狭缝：光源的光由此进入单色器 狭缝在决定单色器性能上起重要作用。狭缝的大小直接 影响单色光纯度，但过小的狭缝又会减弱光强。 ②准直装置：透镜或反射镜，使入射光成为平行光束
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紫外可见分光光度计原理
紫外可见分光光度计原理
紫外可见分光光度计是一种用于测量溶液中物质浓度或化学反应速率的仪器。
它的原理是基于光的吸收和透过性质。
当有一束白光通过溶液时，溶液中的物质会吸收特定波长的光。
这些被吸收的光波长取决于溶液中物质的特性。
光度计测量溶液中吸收的光强度，并与无物质存在的纯溶剂进行比较。
测量过程中，白光首先通过一个分光镜，通过改变其角度，可以选择特定的波长范围。
然后光线进入一个光栅，其中的槽隙会将光分散成不同波长的组分。
光栅的角度可以微调，以选择特定波长的光。
光线通过溶液后，进入一个检测器，可以测量吸收的光强度。
为了准确测量吸光度，通常会使用一个参比池。
参比池通常是一个透明的容器，内部没有溶质。
在测量之前，参比池中的纯溶剂会校正仪器的基线，以保证准确度。
通过对吸光度的测量，可以得到溶液中物质的浓度。
通常使用比尔定律来计算：吸光度与溶液中物质浓度成正比。
具体的关系可以根据不同物质的吸收特性进行校正。
由于不同物质对光的吸收特性不同，因此需要针对不同物质进行校准。
总的来说，紫外可见分光光度计通过测量溶液中特定波长的光的吸光度，来确定溶液中物质的浓度或化学反应速率。
它是一项常用的分析技术，在化学、生物、环境科学等领域有广泛应用。
第一章 紫外-可见分光光度计
第一节紫外-可见分光光度计的基本结构一、紫外-可见分光光度计的分类紫外-可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是量度介质对紫外、可见光区波长的单色光吸收程度的分析仪器，按不同的分类标准所做的分类如表1-1目前，国际上一般按紫外-可见分光光度计的仪器结构将其分为单光束、准双光束、双光束和双波长四类。
本节将对这四者之间的主要区别、各自的特点进行简单介绍。
（一）单光束紫外-可见分光光度计1945年美国Beckman公司推出的世界上第一台成熟的紫外-可见分光光度计商品仪器，就是单光束紫外-可见分光光度计。
顾名思义，单光束紫外-可见分光光度计只有一束单色光，一只比色皿，一只光电转换器（又称光接收器）。
其光电转换器通常采用硅光电池、光敏三极管或光电管，其结构简单、价格便宜，但因其杂散光、光源波动、电子学的噪声等都不能抵消，故单光束紫外-可见分光光度计的光度准确度差。
国外的DU70、PU8700等及我国生产的721、722、723、727、751、752、753、754等紫外-可见分光光度计都是单光束仪器，它们属于低档仪器。
单光束紫外-可见分光光度计的技术指标比较差，特别是杂散光、光度噪声、光谱带宽等主要技术指标比较差，分析误差较大，在使用上收到限制。
一般来讲，要求较高的制药行业、质量检验行业、科研行业等不宜使用单光束紫外-可见分光光度计。
单光束紫外-可见分光光度计的组成如图1-1所示。
（二）准双光束紫外-可见分光光度计所谓准双光束紫外-可见分光光度计，就是有两束光，但只有一只比色皿的紫外-可见分光光度计。
其中，一束光通过比色皿，另一束光不通过比色皿。
不通过比色皿的那束光，主要起抵消光源波动对分析误差影响的作用。
准双光束紫外-可见分光光度计有两种类型：一种是两束单色光，一只比色皿，两只光电转换器；另一种是一束单色光，一束复合光，一只比色皿，两只光电转换器。
1.两束单色光的准双光束紫外-可见分光光度计这种准双光束紫外-可见分光光度计比较多，目前国内外市场上或用户正在使用的准双光束紫外-可见分光光度计，基本上都是这种类型的仪器，它属于普及型的常规仪器。
紫外可见分光光度计主要功能
紫外可见分光光度计主要功能紫外可见分光光度计（UV-Vis Spectrophotometer）是一种常用的实验仪器，主要用于测量物质在紫外和可见光波段的吸光度，具有多种功能和应用。
本文将从几个方面介绍紫外可见分光光度计的主要功能。
一、吸收光谱测量紫外可见分光光度计的主要功能之一是测量物质的吸收光谱。
吸收光谱是指物质对不同波长的光的吸收情况。
通过测量样品在不同波长下的吸光度，可以得到吸收光谱曲线。
吸收光谱曲线可以用于分析物质的结构、浓度和纯度等信息。
这对于化学、生物、药学等领域的研究具有重要意义。
二、定量分析紫外可见分光光度计可以用于定量分析。
通过建立标准曲线，测量未知样品的吸光度，并根据标准曲线确定样品的浓度。
这种定量分析方法被广泛应用于环境监测、食品安全、药物分析等领域。
紫外可见分光光度计的高精度和灵敏度使其成为定量分析的重要工具。
三、动力学研究紫外可见分光光度计可用于动力学研究。
动力学研究是研究化学反应速率和反应机理的重要手段之一。
通过测量反应物或产物在不同时间点的吸光度变化，可以推断出反应速率和反应机理。
紫外可见分光光度计的高时间分辨率和灵敏度使其成为动力学研究的有力工具。
四、荧光测量紫外可见分光光度计还可以进行荧光测量。
荧光是物质受激发后发出的特定波长的光。
通过测量样品在不同波长下的荧光强度，可以研究物质的结构和性质。
荧光测量在生物医学、环境监测等领域具有广泛应用。
五、扫描测量紫外可见分光光度计还具有扫描测量的功能。
扫描测量可以快速获取整个波长范围内的吸光度数据。
这对于快速分析和杂质检测非常有用。
扫描测量还可以用于寻找物质的吸收峰和波长范围，为后续的定量分析和质谱分析提供重要信息。
六、温度控制紫外可见分光光度计还可以进行温度控制。
温度对于某些化学反应和生物学过程具有重要影响。
通过在紫外可见分光光度计中设置温控装置，可以控制样品温度，从而研究温度对反应速率、平衡常数等的影响。
紫外可见分光光度计具有吸收光谱测量、定量分析、动力学研究、荧光测量、扫描测量和温度控制等多种功能。
紫外可见分光光度计原理及操作
紫外可见分光光度法的原理及应用原理：紫外可见分光光度法基于物质对紫外-可见光的吸收特性进行测定。
当光线通过样品时，样品中的分子会吸收特定波长的光，从而产生吸收峰。
通过测量样品吸收的光强，可以得到样品在不同波长下的吸光度。
常用的光谱仪器是分光光度计，它能够实现对不同波长光的选择和测量。
应用：1.定量分析：紫外可见分光光度法可以用于定量分析各种物质。
根据比尔定律，吸光度与物质浓度之间存在一定的线性关系，因此可以根据吸光度测量值推算出物质的浓度。
这在医药、环境监测、食品安全等领域中具有重要意义。
2.药物分析：紫外可见分光光度法广泛应用于药物分析中。
例如，可以利用紫外光谱测定药物的浓度、纯度和含量，评价药物的质量。
同时，通过分析药物在不同波长下的吸收特性，可以了解药物的结构和反应机理，为新药的研发提供重要的信息。
3.生化分析：生物体内的很多生物分子都具有紫外可见吸收特性，这使得紫外可见分光光度法成为生化分析中常用的工具。
例如，可以通过测定蛋白质和核酸在特定波长下的吸光度来研究其构象和浓度。
此外，也可以用于测定血液中的代谢产物、激素和维生素等的浓度。
4.环境监测：在环境监测中，紫外可见分光光度法可用于分析水质、空气中的有害物质和污染物。
例如，可以利用其测定水中化学需氧量（COD）、氨氮（NH3-N）和磷酸盐等的浓度。
这对于环境保护和水质安全具有重要意义。
5.食品检测：紫外可见分光光度法在食品行业中也具有广泛应用。
可以通过测定食品中的营养成分和添加剂的含量来评价食品质量和安全性。
例如，可以测定维生素、氨基酸、酚类和色素等在食品中的含量。
总之，紫外可见分光光度法具有简单、快速、高灵敏度和高选择性等优点，且适用范围广泛。
它在化学、制药、环保、医疗和食品等领域中都有不可替代的地位，对于研究物质性质和反应机理，以及保障人类健康和环境安全都起着重要作用。
简述紫外-可见分光光度计的基本结构
简述紫外-可见分光光度计的基本结构
紫外可见分光光度计是一种用于分析物质的仪器设备，其基本结构包括以下部分：
1. 光源：光源通常采用氘灯和钨灯。
氘灯主要用于紫外区域的分析，钨灯主要用于可见区域和近红外区域的分析。
2. 单色器：单色器用于将光源发出的多色光分解成单色光，以便进一步分析。
单色器通常包括衍射、光栅和全息三种类型。
3. 样品室：样品室通常是由四个透明的玻璃窗组成，样品被放置在中心位置。
样品室内部的设计可以减少对光的散射和吸收。
4. 探测器：探测器主要用于测量样品吸收的光线强度。
常用的探测器有光电二极管、光电倍增管和半导体探测器等。
5. 电子信号处理系统：电子信号处理系统通常由电路和计算机组成，用于将探测器所测得的光强信号转化为数据，便于进一步分析和处理。
6. 显示器：显示器用于展示分析结果，通常采用数字显示器或计算机屏幕。
以上就是紫外可见分光光度计的基本结构。
紫外-可见分光光度计的工作原理和基本结构。
紫外-可见分光光度计的工作原理和基本结构。
紫外可见分光光度计是一种常用的分析仪器，可以测量物质在紫外光和可见光区域的吸收谱线，从而确定物质的成分和浓度。
其工作原理基于光的吸收特性，具体分为以下几步：
1. 采用白光源（如钨丝灯），将光分成不同波长的光束；
2. 将样品溶液置于光路中，光束进入样品中，部分光会被样品吸收；
3. 通过光学元件（如光栅、反射镜），将光分为不同波长，然后在光散射器中形成连续的光谱；
4. 传感器（如光电二极管）测量样品吸收光的强度，得到吸收谱线；
5. 通过计算和处理，得到样品的吸光度及吸收谱线，进而推算出样品的成分和浓度等信息。
紫外可见分光光度计的基本结构主要由光源、样品室、分光器、光学系统、检测器和数据处理系统等组成。
其中，光源提供光束，样品室装置卡式或光路式样品池，分光器用于解析不同波长光束，光学系统包括反射镜、光栅等，检测器是关键元件，用于探测谱线强度，数据处理系统通常采用计算机软件完成信号处理和谱线分析等工作。
紫外可见分光光度计使用指南
紫外可见分光光度计使用指南紫外可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析仪器。
本文将为您详细介绍紫外可见分光光度计的使用指南，旨在帮助您正确操作和掌握这一仪器。
一、仪器简介紫外可见分光光度计主要由光源系统、样品室、光栅系统、检测器以及数据处理等部分组成。
其中光源系统提供所需的可见光和紫外光源，而样品室则是放置待测样品的空间。
此外，光栅系统用于分光，检测器用于检测光的强度变化，而数据处理则是对光谱进行处理和分析。
二、准备工作1. 确保仪器处于水平放置，并连接好电源和通电。
2. 打开仪器软件，并确保与电脑连接正常。
3. 清洁样品室，确保无尘和杂质，并待样品室干燥后再使用。
4. 校准仪器，以确保准确的测量结果。
三、测量操作步骤1. 软件选择：在电脑上的仪器软件上选择适当的测量模式，比如吸光度或者特定波长测量模式。
2. 光程设定：根据测量样品的类型和浓度，设置合适的光程。
3. 参考峰设定：使用纯溶剂或空白试样设定参考峰，以进行准确的吸光度测量。
4. 样品处理：将待测样品制备好，确保样品质量、浓度和体积的准确性。
5. 样品吸收测量：将样品放置于样品室中，点击软件“开始测量”按钮，记录吸光度的数值。
6. 数据处理：对测得的吸光度数据进行处理和分析，如绘制吸光度-波长曲线等。
四、注意事项1. 避免污染：使用洁净的试剂和仪器操作，避免样品和试剂污染，以免影响测量结果。
2. 防护措施：避免将有害物质接触到皮肤、眼睛或吸入，注意个人防护。
3. 清洁仪器：测量结束后，及时清洁仪器，保持仪器的良好状态。
4. 保养维护：定期进行仪器的保养和维护，如更换灯泡、校准光程等。
5. 数据备份：重要的测量数据需及时备份和存档，以防数据丢失。
五、故障排除1. 仪器无法通电或启动：检查电源和插线是否正常连接，确保电源供应稳定。
2. 光谱异常或不稳定：检查光源是否需要更换，清洁样品室和光栅，确保光谱信号正常。
紫外可见分光光度计的介绍
紫外可见分光光度计的介绍
紫外可见分光光度计，是一种用于测定液体、气体、固体在紫外光、可见光区域内吸收或透过率的光学仪器。
它可以精确测量样品的吸光度、透过率、反射率等参数，应用于生化、化学、医药、环境、食品等领域的分析和检测。
紫外可见分光光度计的原理是将一束光线经过分光镜拆分成多个波长的光线，经过样品后，样品会吸收或透过部分光线，被干涉光谱仪接收，并将其转换成电信号。
通过测量样品与参照物（空气或去离子水）之间的比较读数，计算出样品的吸光度值。
紫外可见分光光度计的主要特点是：准确性高、灵敏度高、重复性好、分辨率高、操作简单、数据处理快速等。
根据使用范围和波长范围的不同，紫外可见分光光度计可以分为紫外分光光度计、可见分光光度计和紫外可见分光光度计。
紫外可见分光光度计具有广泛的应用。
在生物学领域，可以用于蛋白质、核酸、酶、细胞器等的测定；在医学领域，可以用于药物、体液等的检测；在环境保护领域，可以用于水质、大气污染等的监测；在食品工业中，可以用于食品添加剂、营养成分、产物残留等的检测。
除此之外，紫外可见分光光度计还可以与色谱仪、电泳仪等联用，提高对样品的准确测定，从而满足更高的实验需求。
总之，紫外可见分光光度计是一种重要的实验仪器，具有广泛的应用和推广前景。
它不仅能够提高实验效率和准确度，还可以为相关领域的研究和探索提供重要的技术支持。
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各加H2O 至5ml
1ml
摇匀 加 10% Al(NO3)3 摇匀 加 1ml 放置6min 放置6min
NaOH试液 加水至刻度 10ml 摇匀，放置15min
λ=500nm 以相应试剂为空白
测定吸光度（A）
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线
1.2
吸 光 度
0.8
y = 8.8x - 0.0098 r = 0.9996
（二）安装色谱柱
按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。
（三）液相色谱仪的使用方法
1.启动液相色谱仪
2.排除管道内空气
3.泵流速的设定 4.检测器波长的设定
5.打开T2000P色谱工作站
6.色谱柱预平衡 7．进样
8.数据采集完毕后，点击停止进样
9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处 理，出报告图
五、思考题
1．外标一点法的主要误差来源是什么？ 2．紫外检测器的优缺点是什么？
实验八、气相色谱仪的使用
一、实验目的 1. 掌握气相色谱仪的使用方法 2. 了解气相色谱仪的结构
二、实验原理
气相色谱法是采用气体作流动相（载气） 流经色谱柱进行分离分析的方法。主要由 气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、 检测器和数据处理系统组成。
10.实验完毕后冲洗色谱柱
11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、 关闭仪器电源
练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和 进样量 色谱条件 流动相为甲醇∶水（80∶20）； 固定相:C18反相键合色谱柱； 检测波长为254nm； 流速：1ml/min。 样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为 1μg/ml的甲醇溶液。 进样量 ：10μl。
实验六、高效液相色谱仪 的使用
一、实验目的
掌握高效液相色谱仪的使用方法
了解高效液相色谱仪的结构
高效液相流程图
1 溶剂贮器,2 泵,3 流量与速度检测装置, 4 进样阀,5 预柱(保护柱),6 分离柱(色谱柱), 7 检测器,8 数据记录及处理系统,9 废液瓶
二、仪器与试剂
1、对照品溶液的制备
芦丁对照品 置 50mg 精密吸取 10ml
置
25ml量瓶中
加甲醇，水浴使溶解 放冷，加甲醇至刻度，摇匀
100ml量瓶中
加水至刻度，摇匀
即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）
2、标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 分别置 0、1、2、3、4、5ml
加 5% NaNO2
25ml量瓶中
0.4
0 0.00
0.05
0.10
0.15
浓度（mg/ml）
3、供试品溶液的制备
槐花粗粉1g 精密称定
置
索氏提取器中
加
加热回流至 乙醚 提取液无色
放冷 加 甲醇90ml 加热回流至 移至 提取液无色 弃乙醚液
100ml量瓶中 精密吸取 10ml
甲醇少量多次洗涤容器 洗液并入量瓶中
置
加甲醇至刻度
加水至刻度，摇匀
二、实验原理
黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐 类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分 析。
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪
石英比色皿（一对）
5% NaNO2溶液
10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液
芦丁对照品
槐花药材
其余试剂均为分析纯；
四、实验内容及操作步骤
四、实验内容及操作步骤
1、比色皿的配对性
分别 蒸馏水 注入
两个比色皿
测定
λ＝440nm
以一个比色皿
为空白（T1＝100％）
ΔT<0.5% ΔT=T1-T2 ΔT>0.5%
另一个比色皿的T2
两个比色皿配对 两个比色不配对，应进行校正
2、波长精吸收曲线
若测得的最大吸收波长在525±1nm以内
据，察看数据报告，打印报告。
（八）关机
附: 练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品 溶液和进样量 色谱条件：聚乙二醇（PEG）-20M毛细管 柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度 0.25µm）；柱温为160℃。 样品溶液 樟脑对照品溶液。 进样量 ：1μl。
五、 思考题
使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？
四、思考题
1．薄层板的铺制过程中应 注意哪些问题？
实验五 薄层色谱定性分 析 （五味子的定性鉴别）
一、实验目的
1. 掌握薄层色谱的定性分析方法。 2. 熟悉薄层板的点样方法。
二、实验原理
中药五味子中，五味子甲素为其主要有 效成分之一，为了更好的进行定性鉴别， 选用五味子甲素对照品和五味子对照药 材进行对照，根据相同的组分在相同的 条件下，应该有相同的颜色和比移值来 作为定性鉴别的依据。
三、仪器与试剂
L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm） 微量进样器（25μl） 芍药苷对照品；赤芍药材 其余试剂均为分析纯
四、实验内容及操作步骤
色谱条件 C18反相键合色谱柱； 流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液 （40∶65）； 检测波长为230nm。 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷干燥36小时的芍药苷 对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的 溶液，即得。
四、思考题
流动相在洗脱前为何要进行脱气？
实验七、高效液相色谱定性及定量分 析—中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和 含量测定
一、实验目的
1.掌握利用高效液相色谱法进行定性 及定量分析。 2.巩固高效液相色谱仪的使用方法。
二、实验原理
1.采用与已知化合物对照,对组分进行定 性分析。
2.采用外标一点法进行含量测定。
摇匀
100ml量瓶中
即得
4、样品的测定
精密吸取供试品溶液3ml
照标准曲线制备项下的方法 自“加水至5ml” 起
置
25ml量瓶中
依法测定吸光度
从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得
槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计， 不得少于8.0%。
五、注意事项
1、对照品和样品应同时显色
2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确
六、思考题
1.分光光度法有哪些影响因素？
2.试述标准曲线法的优点。
实验四、薄层板的制备
一、实验目的
掌握薄层板的制板方法。
二、仪器与试剂
天平（0.1g） 研钵 玻璃板 10 cm×20cm CMC-Na水溶液 （3‰） 蒸馏水 薄层层析用硅胶GF254（青岛海 洋化工厂）
三、实验内容及操作步骤
1、吸收曲线的测绘
精密吸取母液1ml
置
10ml量瓶
95％乙醇定容
以95％乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。
2、吸收曲线的测绘
利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度并计算 百分吸收系数。
实验三
分光光度法测定槐花中 总黄酮的含量
一、实验目的
1、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2、巩固紫外－可见分光光度计的操作方法
三、仪器与试剂
岛津GC-2014气相色谱仪（FID检测器） 樟脑对照品溶液 试剂均为A.R纯
四、实验内容及操作步骤
（一）启动GC-2014气相色谱仪 （二）参数的设定
（三）打开N2000色谱工作站 （四）运行GC-2014气相色谱仪
（五）进样
（六）待数据采集完毕后，点击停止采集；
（七）待样品分析结束后，在离线处理数
供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g，精密 称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml， 称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 匀，滤过，取续滤液，即得。 测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 各10μ l，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品含芍药苷（C23H28O11）不得少于1.8%。
实验一
紫外－可见分光光度计 的性能检验
一、实验目的
1、掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法 2、学会UV1100型紫外－可见分光光度计的使用方法
二、实验原理
对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪
石英比色皿（一对）
擦镜纸
蒸馏水
6mg/100ml K2Cr2O7溶液 0.002mol/mol KMnO4溶液
1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后 放置在干净、平整的台面上，阴干备用。
2．匀浆 将吸附剂1份（3.0g）和 水3份在研钵中向同一方向研磨混合 均匀。
3．铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的 一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震 动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。
4．活化 将阴干的薄层板至于110℃ 烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中 备用。
五、思考题
1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？ 2、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？
实验二
吸收曲线的测绘及 吸收系数的测定
一、实验目的
1、掌握测绘吸收曲线的方法 2、学会测定吸收系数
二、实验原理
1、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax、 λmin或λ(S)为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提 供了有力的证据。 2、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm 时的吸光度。 A 1% 即 E1 cm
C 1
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度计
石英比色皿（一对）