紫外-可见分光光度计

四、思考题
流动相在洗脱前为何要进行脱气？
实验七、高效液相色谱定性及定量分 析—中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和 含量测定
一、实验目的
1.掌握利用高效液相色谱法进行定性 及定量分析。 2.巩固高效液相色谱仪的使用方法。
二、实验原理
1.采用与已知化合物对照,对组分进行定 性分析。
2.采用外标一点法进行含量测定。
实验九、气相色谱法定性及定量分析——樟脑、冰 片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定
一、实验目的

掌握采用内标法进行定量分析的方法
熟悉利用气相色谱仪进行定性分析
二、实验原理
◆实际工作中，在已知待测组分的情况下，得到的 气相色谱图可以借助对照品加以对照，利用保留 值进行定性。 ◆利用气相色谱进行定量分析时，主要采用内标法 进行定量，以消除由于进样和仪器稳定等原因造 成的误差。
五味子植株
五味子药材
三、仪器与试剂
定量毛细管 已制备好的薄层板（硅胶GF254 ） 展开缸 所用试剂均为分析纯 五味子粉末
wk.baidu.com
对照品
定量毛细管
双槽展开缸
四、实验内容及操作步骤
1.供试品液的制备：取五味子粉末 1g，加三氯甲烷20ml，加热回 流30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为 供试品液。 2.对照药材溶液的制备：取五味子 对照药材1g，同法制成对照药材 溶液。 3.对照品溶液的制备：取五味子甲 素对照品，加三氯甲烷制成每ml
三、仪器与试剂
L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm） 微量进样器（25μl） 芍药苷对照品；赤芍药材 其余试剂均为分析纯
四、实验内容及操作步骤
色谱条件 C18反相键合色谱柱； 流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液 （40∶65）； 检测波长为230nm。 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷干燥36小时的芍药苷 对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的 溶液，即得。
1、对照品溶液的制备
芦丁对照品 置 50mg 精密吸取 10ml
置
25ml量瓶中
加甲醇，水浴使溶解 放冷，加甲醇至刻度，摇匀
100ml量瓶中
加水至刻度，摇匀
即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）
2、标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 分别置 0、1、2、3、4、5ml
加 5% NaNO2
25ml量瓶中
三、仪器与试剂

岛津GC-2014气相色谱仪（FID）；
10μl 微量进样器；
内标物：萘；
樟脑对照品；


混合样品溶液（由樟脑、冰片和薄荷脑组成）；
其余试剂均为A.R纯；
四、实验内容及操作步骤

仪器条件 聚乙二醇（PEG）-20M毛细管柱（柱长30m、内 径0.25mm、膜厚度0.25 μm），柱温160℃。
10.实验完毕后冲洗色谱柱
11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、 关闭仪器电源






练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和 进样量 色谱条件 流动相为甲醇∶水（80∶20）； 固定相:C18反相键合色谱柱； 检测波长为254nm； 流速：1ml/min。 样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为 1μg/ml的甲醇溶液。 进样量 ：10μl。
各加H2O 至5ml
1ml
摇匀 加 10% Al(NO3)3 摇匀 加 1ml 放置6min 放置6min
NaOH试液 加水至刻度 10ml 摇匀，放置15min
λ=500nm 以相应试剂为空白
测定吸光度（A）
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线
1.2
吸 光 度
0.8
y = 8.8x - 0.0098 r = 0.9996
五、思考题
1．外标一点法的主要误差来源是什么？ 2．紫外检测器的优缺点是什么？
实验八、气相色谱仪的使用
一、实验目的 1. 掌握气相色谱仪的使用方法 2. 了解气相色谱仪的结构
二、实验原理
气相色谱法是采用气体作流动相（载气） 流经色谱柱进行分离分析的方法。主要由 气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、 检测器和数据处理系统组成。
四、思考题
1．薄层板的铺制过程中应 注意哪些问题？
实验五 薄层色谱定性分 析 （五味子的定性鉴别）
一、实验目的
1. 掌握薄层色谱的定性分析方法。 2. 熟悉薄层板的点样方法。
二、实验原理
中药五味子中，五味子甲素为其主要有 效成分之一，为了更好的进行定性鉴别， 选用五味子甲素对照品和五味子对照药 材进行对照，根据相同的组分在相同的 条件下，应该有相同的颜色和比移值来 作为定性鉴别的依据。
0.4
0 0.00
0.05
0.10
0.15
浓度（mg/ml）
3、供试品溶液的制备
槐花粗粉1g 精密称定
置
索氏提取器中
加
加热回流至 乙醚 提取液无色
放冷 加 甲醇90ml 加热回流至 移至 提取液无色 弃乙醚液
100ml量瓶中 精密吸取 10ml
甲醇少量多次洗涤容器 洗液并入量瓶中
置
加甲醇至刻度
加水至刻度，摇匀
1、吸收曲线的测绘
精密吸取母液1ml
置
10ml量瓶
95％乙醇定容
以95％乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。
2、吸收曲线的测绘
利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度并计算 百分吸收系数。
实验三
分光光度法测定槐花中 总黄酮的含量
一、实验目的
1、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2、巩固紫外－可见分光光度计的操作方法
λ＝235nm、257nm 313nm、350nm
分别测定 K2Cr2O7溶液吸光度并计算吸收系数
与下表规定的 吸收系数比较 说明
若相对偏差在1%以内
仪器符合使用要求
波长/nm
235 257 313
吸收系数
123.0～126.0 142.8～146.2 47.0～50.3
350
105.5～108.5
实验一
紫外－可见分光光度计 的性能检验
一、实验目的
1、掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法 2、学会UV1100型紫外－可见分光光度计的使用方法
二、实验原理
对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪
石英比色皿（一对）
擦镜纸
蒸馏水
6mg/100ml K2Cr2O7溶液 0.002mol/mol KMnO4溶液
四、实验内容及操作步骤
1、比色皿的配对性
分别 蒸馏水 注入
两个比色皿
测定
λ＝440nm
以一个比色皿
为空白（T1＝100％）
ΔT<0.5% ΔT=T1-T2 ΔT>0.5%
另一个比色皿的T2
两个比色皿配对 两个比色不配对，应进行校正
2、波长精度的检查
以蒸馏水为空白
测定
KMnO4溶液的吸收曲线
若测得的最大吸收波长在525±1nm以内
说明
仪器波长精度符合使用要求 A
0.4
0.2
0
500 λ (nm)
800
3、重复性的检查
在257nm处 以0.02mol/L的H2SO4为空白 测定 求出极差
同一K2Cr2O7溶液的T，连续测定7次 若极差<0.5%
仪器的重复性符合 使用要求
4.吸收值准确度的检查
以0.02mol/L的H2SO4为空白 (T＝100%）
1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后 放置在干净、平整的台面上，阴干备用。
2．匀浆 将吸附剂1份（3.0g）和 水3份在研钵中向同一方向研磨混合 均匀。
3．铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的 一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震 动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。
4．活化 将阴干的薄层板至于110℃ 烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中 备用。
4. 吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶
GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃） －甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶 液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外 光灯（254nm）下检视。供试品色谱中， 在与对照药材和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
五、思考题
1．如何克服薄层展开过程中的边 缘效应？引起边缘效应的因素有 哪些？
二、实验原理
黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐 类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分 析。
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪
石英比色皿（一对）
5% NaNO2溶液
10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液
芦丁对照品
槐花药材
其余试剂均为分析纯；
四、实验内容及操作步骤
（二）安装色谱柱
按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。
（三）液相色谱仪的使用方法
1.启动液相色谱仪
2.排除管道内空气
3.泵流速的设定 4.检测器波长的设定
5.打开T2000P色谱工作站
6.色谱柱预平衡 7．进样
8.数据采集完毕后，点击停止进样
9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处 理，出报告图
供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g，精密 称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml， 称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 匀，滤过，取续滤液，即得。 测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 各10μ l，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品含芍药苷（C23H28O11）不得少于1.8%。
摇匀
100ml量瓶中
即得
4、样品的测定
精密吸取供试品溶液3ml
照标准曲线制备项下的方法 自“加水至5ml” 起
置
25ml量瓶中
依法测定吸光度
从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得
槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计， 不得少于8.0%。
五、注意事项
1、对照品和样品应同时显色
2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确
五、思考题
1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？ 2、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？
实验二
吸收曲线的测绘及 吸收系数的测定
一、实验目的
1、掌握测绘吸收曲线的方法 2、学会测定吸收系数
二、实验原理
1、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax、 λmin或λ(S)为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提 供了有力的证据。 2、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm 时的吸光度。 A 1% 即 E1 cm
据，察看数据报告，打印报告。
（八）关机




附: 练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品 溶液和进样量 色谱条件：聚乙二醇（PEG）-20M毛细管 柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度 0.25µm）；柱温为160℃。 样品溶液 樟脑对照品溶液。 进样量 ：1μl。

五、 思考题
使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？
实验六、高效液相色谱仪 的使用
一、实验目的
掌握高效液相色谱仪的使用方法
了解高效液相色谱仪的结构
高效液相流程图
1 溶剂贮器,2 泵,3 流量与速度检测装置, 4 进样阀,5 预柱(保护柱),6 分离柱(色谱柱), 7 检测器,8 数据记录及处理系统,9 废液瓶
二、仪器与试剂


L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm） 微量进样器（25μl） 过滤器（0.45μm）及脱气装置 苯、甲苯、萘 甲醇（色谱纯） 重蒸馏水
三、实验内容与步骤
（一）流动相的预处理
1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
C 1
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度计
石英比色皿（一对）
95%乙醇（A.R）
0.005%丹皮酚对照品溶液
四、实验内容及操作步骤
丹皮酚对照品 10mg
置 95％乙醇溶解 定容至10ml 95％乙醇定容 摇匀
精密吸取5ml
100ml量瓶
作为母液备用
母液中丹皮酚的含量为0.005%
六、思考题
1.分光光度法有哪些影响因素？
2.试述标准曲线法的优点。
实验四、薄层板的制备
一、实验目的
掌握薄层板的制板方法。
二、仪器与试剂
天平（0.1g） 研钵 玻璃板 10 cm×20cm CMC-Na水溶液 （3‰） 蒸馏水 薄层层析用硅胶GF254（青岛海 洋化工厂）
三、实验内容及操作步骤
三、仪器与试剂

岛津GC-2014气相色谱仪（FID检测器） 樟脑对照品溶液 试剂均为A.R纯
四、实验内容及操作步骤
（一）启动GC-2014气相色谱仪 （二）参数的设定
（三）打开N2000色谱工作站 （四）运行GC-2014气相色谱仪
（五）进样
（六）待数据采集完毕后，点击停止采集；
（七）待样品分析结束后，在离线处理数