第十一章脂质体

2．逆相蒸发法 Reverse-phase evaporation ． 由Szoka提出 • 膜材溶于有机溶剂，加入待包封药物的水溶液，进 行短时超声，直至形成稳定的W/O型乳剂，减压蒸 发有机溶剂，形成脂质体。 • 一般为大单层脂质体 • 包封的药物量大它适合于包封水溶性药物及大分子 生物活性物质
3．主动包封法 Remote loading method ． • 从根本上改变了难以制备高包封率脂质体的局面。 • 主动包封技术的应用与药物的结构密切相关，不能 推广到任意结构的药物，因而受到了限制。 • 弱碱性的药物 采用pH梯度法、硫酸铵梯度法 • 弱酸性的药物 采用醋酸钙梯度法等。
遥控装载—硫酸铵梯度法 遥控装载 硫酸铵梯度法 包封阿霉素隐形脂质体
四、脂质体的表征
Characterization of liposomes
1．形态、粒径及其分布 2．包封率和载药量的测定 3．释放度与渗漏率的测定 4．药物体内分布的测定
思考题
1. 脂质体的研究与应用进展 2. 简述脂质体的概念、特点与用途。 3. 简述制备脂质体的常用的材料。 4. 简述pH梯度法制备载药脂质体的原理和方法。
2．负电荷磷脂 ． 负电荷磷脂又称为酸性磷脂 • 磷脂酸 phosphatidic acid, PA • 磷脂酰甘油 phosphatidyl glycerol, PG • 磷脂酰肌醇 phosphatidylinositol, PI • 磷脂酰丝氨酸 phosphatidyl serine,PS
载药脂质体的结构示意图
药物被脂质体包封后有以下特点： 1．靶向性和淋巴定向性 2．长效性 3．细胞亲和性与组织相容性 4．降低药物毒性 5．提高药物稳定性
脂质体在体内与细胞的作用过程 • • • • 吸附 adsorption 脂交换 lipid exchange 内吞作用 endocytosis 融合 fusion
脂质体膜制备
挤压制备小粒径脂质体 • 通过挤压使脂质体通过固定孔径的滤膜，脂质体粒 径变小。该方法需要很低的压力，689kPa即可。 • 聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane），该膜的通 道是直的并且大小相同，脂质体容易通过，即使脂 质体直径略大于孔径也能通过。一般将脂质体原液 稀释至12µmol/ml后再过膜，脂质体易通过孔径。 • 脂质体加压通过孔时，其结构发生变化，根据所需 脂质体的大小选择膜的孔径。
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脂质体 Liposomes
一、概述 Introductions
• 脂质体 liposomes 1965年被英国Bangham提出 • 磷脂分散在水中可形成多层囊泡，每一层均为脂质 双分子层，各层之间被水相隔开
脂质体的示意图
脂质体主要由磷脂和胆固醇组成 磷脂由一个亲水的头部和两个疏水的尾部组成
磷脂的结构示意图
三、制备脂质体的方法
Preparation of liposomes 1．薄膜法 ． 最早由Bangham报道
• 磷脂等膜材溶于适量的有机溶剂 • 脂溶性药物可加在有机溶剂中，然后在减压旋 转下除去溶剂，使脂质在器壁形成薄膜，加入 含有水溶性药物的缓冲液，进行振摇，则可形 成大多室脂质体，其粒径范围约1-5µm。
二、制备脂质体的材料
Materials for preparation of liposomes 1．中性磷脂磷 电中性、化学惰性 ． 天然磷脂 磷脂酰胆碱phosphatidylcholine 合成的磷脂 二棕榈酰胆碱dipalmitoyl phosphatidyl choline DPPC 二硬脂酰胆碱distearoyl phosphatidyl choline DSPC 鞘磷脂sphingomyelin 磷脂酰乙醇胺phosphatidylethanolamine
3．正电荷脂质 ． 均为人工合成产品 • 硬脂酰胺 stearylamine,SA • 胆固醇衍生物
4．胆固醇 cholesterol ． • 自然界生物膜中的另一类重要的组分 • 中性脂质，两亲性分子，亲油性大于亲水性
胆固醇的结构
5．长循环膜材料 ． 神经节苷脂 ganglioside GM1 • GM1引入了唾液酸残基增强了膜的稳定性、减少 了网状内皮系统细胞对脂质体的摄取，延长了脂 质体的体内循环时间 聚乙二醇衍生物 polyethylene glycol derivatives • 聚乙二醇基则增强了脂质体膜的亲水性，阻止网 状内皮系统细胞对脂质体的摄取，延长了脂质体 的体内循环时间
根据化学平衡移动原理而设计的，空白脂质体包 封阿霉素的前提是： 1. 脂质体膜可透过分子型药物； 2. 离子型化合物较少或几乎不透过脂膜； 3. 硫酸阿霉素的溶度积 << 盐酸阿霉素的溶度积。
硫酸铵梯度法包封阿霉素的步骤
1. 制备脂质材料薄膜——旋转蒸发； 2. 用硫酸铵溶液使脂膜水化，形成粗空白脂质体； 3. 挤压使通过聚碳酸酯微孔滤膜，较大粒径的脂质 体被“粉碎”成小粒径的脂质体，得空白脂质体； 4. 通过透析法或凝胶柱过滤，除去空白脂质体囊泡 外部的硫酸铵，从而使脂质体囊泡内、外部的硫 酸铵浓度形成了浓度梯度差(1000倍）； 5. 盐酸阿霉素水溶液与上述空白脂质体混合、60℃ 孵育30min、不断振摇，即得。
2DOX-NH3.CI 2DOX-NH2 (NH4)2SO4
2NH3 + 2H+ = 2NH4+ + SO42-
2DOX-NH3++2CI-
(DOX-NH2)2SO4
gel-like precipitate
DOX-NH2
2DOX-NH2+2HCI
硫酸铵梯度法包封盐酸阿霉素
隐形脂质体的隐形机理
4．免疫脂质体制备法 ． 抗体与脂质体结合方法有： （1）吸附法 （2）脂质蛋白融合法 （3）交联法