香菇菌种生产的方法与步骤

香菇菌种生产得方法与步骤

（一)母种生产培养基得配方选择

一就是马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA):去皮马铃薯20０克,葡萄糖2０克，琼脂16～2３克，水1 0０0毫升。氢离子浓度１０00~10000纳摩/升(pH５~6),用于分离、培养菌种。

二就是PＤA改良培养基（甲):马铃薯（去皮)20０克,葡萄糖20克,磷酸二氢钾(KH2PＯ4)2克,硫酸镁(ＭｇSＯ4）0.5克,维生素Ｂ11０毫克,琼脂20克，水10００毫升，灭菌后氢离子浓度31６３～10000纳摩／升（pH5。0~５。5),用于培养、分离菌种。

三就是PDA改良培养基(乙)：马铃薯（去皮）2００克,麸皮或米糠50克，硫酸镁０。５克,维生素B１10毫克,琼脂20克,灭菌后氢离子浓度31６3～39８1纳摩／升（pH５.４～5．５）.

四就是PＤA改良培养基(丙)：心材木２0０克,细米糠（或麸皮)10０克,硫酸铵1克,麦芽糖（或葡萄糖）20克,琼脂2０克，水1 0０0毫升,灭菌后氢离子浓度３1６3~1０００0纳摩／升

(ｐH5、0~５、5),用于分离菌种.

五就是麦芽浸膏、酵母浸膏、琼脂培养基(MYD):麦芽浸膏3克,葡萄糖10克，酵母浸膏3克,琼脂２0克,蛋白胨5克,水1 0０0毫升（用于菌种培养)。

六就是麦芽浸膏、蛋白胨培养基(MPA）:麦芽浸膏2０~25克,蛋白胨1０克,琼脂20克,水１000毫升(用于分离、培养、保存菌种)。

上述6个培养基配方中,马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)配方应用最普遍。在此着重介绍PＤA培养基得配制方法与步骤:

１。制备培养基得操作程序

选择优质马铃薯,去皮或挖去发芽眼，削去发青皮,切成薄片，称取200克，置于钢精锅，加水１ 0０0毫升，煮沸后小火保持30分钟,趁热用8层纱布过滤后放人有1 000毫升刻度得量杯（或量筒)中,补充水到１００0毫升,倒回钢精锅,加琼脂继续加热,待琼脂溶化后,再加葡萄糖,再补水至1000毫升,用玻璃棒搅均匀,趁热分装试管,或装入三角瓶备用.

2．分装试管

将配制好得PＤA培养基，趁热（6０℃)倒人事先准备好得量杯或玻璃漏斗,分装试管。每支试管装培养基为管长得１/4，培养液不可贴附管口内壁,如有沾附物必须揩拭干净。

3。做棉塞

取适量棉花做成较紧实得棉塞，塞入试管约2厘米左右，外留1厘米,紧贴试管内壁,松紧度以

用手指提起棉塞而不脱掉为宜,光圆不起皱(如图3-1),尔后将试管放入铁丝筐内。

４.灭菌

将装有培养基得试管放人灭菌锅得铁丝筐内,上面盖上牛皮纸或聚丙烯塑料薄膜,包扎好,以防棉塞受潮。加热灭菌时,排尽锅内得冷气，当温度升到121℃时，维持3０分钟后停止加热。待指针回到零点,先打开锅盖得1/10开度,等到无直冲蒸气时,再打开全部锅盖,取出试管。

５.在斜面上摆放试管

将取出得试管冷却到50～6０℃后，放到用木架或木条摆成一定角度得斜面上,小试管斜面长2厘米，大试管(１8×２00）斜面长6厘米左右.待完全凝固后,收取备用。

６.灭菌效果检查

随机取3管斜面,放在２８℃下进行空白培养5～７天后，检查斜面上有无细菌与霉菌菌落。如果发现有杂菌,说明灭菌不彻底，要重新灭菌。

（二）接种与培养

1。接种

在无菌室(接种室)或接种箱内,酒精灯火焰旁进行无菌操作。具体程序如下:左手拿菌种管与待接种得斜面试管,右手拿接种耙,在火焰上来回烧红,拔去菌种管得棉塞，将管口在火焰上烧一下,再把接种耙烧一下，迅速插入种管,稍加冷却,切取米粒大小菌丝块(一定要带培养基）,迅速放入待接种管斜面中心位置(为争取时间，在斜面接两点以上为宜）,拿出接种耙后,再把管口烘烤一下,烧一下棉塞，迅速塞好棉塞,灼烧一下接种耙。到此即完成了一个接种程序,以下依此类推。

2．培养

将接种后得试管,放入培养箱或培养室进行恒温培养（25℃±1℃)，或利用适宜得自然气温培养.要保证培养室空气新鲜，环境干净,无光或弱光。为此，必须保持空气相对湿度

70％左右，在试管上盖上纱布,或盖上薄棉毯，拉上窗帘,形成无光培养。因试管斜面长短不同，一般需经8~１4天培养,才能长满试管斜面.

(三）母种质量检查及提高纯度对策

１.斜面优质菌丝形态

在马铃薯、葡萄糖、琼脂（PＤＡ)培养基斜面上，菌丝生长洁白,呈棉绒状,密度一致,前沿菌丝(先端）整齐，粗壮.有得棉绒状菌丝发达,如苏香1号,Cr-02;有得棉绒状菌丝不发达，如27１A,2７1B，早生一号。后者比前者菌丝生长快，但菌龄较长。

2.斜面菌丝不纯现象

在斜面上菌丝灰白,棉毛菌丝不平坦不整齐,前沿菌丝不齐、有缺口,这说明有杂菌污染。如斜面上有异色,可能就是镰刀菌污染。如斜面上特别就是菌丝边缘出现粘稠状物即蜡状、油状，可能就是细菌污染。如斜面上呈黄、绿、黑等颜色，则可肯定就是霉菌污染。若斜面产生色素，也表明有杂菌污染.将斜面对着光瞧背面,如有小黑点遮光,说明杂菌菌落被香菇菌丝覆盖了。

３．提高香菇母种纯度得措施

必须使培养基彻底灭菌,严格无菌操作,保持培养环境干燥、清洁、恒温、无光、空气流畅,从而保证菌丝健壮生长。如发现母种有异常现象,应予剔除。

二、原种生产与质量标准及保证对策

原种与栽培种得培养料配方制作技术基本相同,只就是装料容器大小不同。因此,本节只介绍原种生产技术,栽培种生产技术在相关章节中介绍.

（一）培养料配方选择

共有7个配方可供选择,前3个为常用配方，后4个为参考配方。①木屑78%,麸皮(或米糠)20%,蔗糖1%,石膏1%。②木屑63％,棉籽壳20%,麸皮１5%,蔗糖１%，石膏

1％。⑧木屑６0%，蔗渣18 ％,麸皮２0%,蔗糖１％，石膏1%。④稻草(麦草)5８ %，砻糠３0%,木屑１0％,糖1%，石膏１%。⑤发酵松树、杉树木屑50％，木屑2８%,麸皮20%，糖1％,石膏１%．⑥棉籽壳４０％，木屑40%,麸皮1８ %，糖1％,石膏1%。⑦花生壳８0％，杂木屑1９％,石膏1%。

上述７个配方都要求含水量在60%左右，氢离子浓度(pH值)随自然情况。配方中各原料一般在3个月前备好。

（二）培养料配制得方法与步骤

1.时间安排

春、秋、冬季节皆可，晴天或阴天配料装瓶最为理想。夏天宜在每天早、晚配料装瓶,应在4

小时内装好瓶。

２。生产组织

使用一台机器,由6人操作.其中1人向斗内铲料，1人装瓶，1人洗瓶,2人做棉塞,1人运输。

3。配料前得木屑处理

首先过筛(2~3目）,用竹筛或铁筛皆可,筛除掉有棱角得木块、木条、木片等硬物。然后,按照生产计划与配方成分（百分率)，称好主料、辅料与添加剂。接着,将各种原料混合拌匀,有机器用机器拌，无机