总磺胺类快速检测试剂盒说明书(2011-5修改版)
磺胺二甲嘧啶检测卡说明书(完整版)
磺胺二甲嘧啶（SM2）快速检测卡使用说明书【简介】磺胺二甲嘧啶(Sm2)曾被广泛应用于兽医临床以治疗细菌性传染病，其亚治疗浓度又可作为畜禽的饲料药物添加剂，以控制某些动物性疾病、提高饲料的转化率和促进动物的生长发育。
但因长期使用，其在动物性食品中残留现象十分严重，可导致人的过敏反应、诱导耐药菌株的产生、影响机体免疫系统、破坏人体造血机能等，且可诱发人的甲状腺癌。
美国FDA、欧盟、中国农业部等规定在肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中磺胺类药物的含量不能超过100 ng/g (ppb),，在牛奶中磺胺类药物的含量不能超过100 ng/g (ppb)。
本品检测尿样灵敏度20 ppb。
【原理】磺胺二甲嘧啶快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的磺胺二甲嘧啶在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线(T)上磺胺二甲嘧啶－蛋白偶联物的结合。
如果样本渗出液中磺胺二甲嘧啶含量大于检测限时，检测线不显颜色，结果为阳性。
反之，检测线(T)显红色，结果为阴性。
【奶样收集】奶粉1、用天平称取2g奶粉到锥形瓶中，再加入50℃左右去离子水到10ml（还原牛奶）。
2、用力震荡3min，使充分溶解。
3、取牛奶2ml样品，用冷冻离心机（4000RPM ，10℃）离心10min去除脂肪（如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）。
4、离心后用移液器彻底去除上层奶油。
5、取下层脱脂牛奶与纯净水1:5稀释用于检测。
牛奶（1）取1 mL新鲜的牛奶（含脂牛奶）样本置于2ml离心管中，降温至10℃以下4000 r/min离心10分钟后，弃去上层脂肪（约四分之三），剩余四分之一奶样与纯净水1:6（1份奶样+5份纯净水）互溶，互溶后刻度刚好为总体积1.5ml。
用力震荡1min，使充分溶解后为备用待检液；（2）脱脂牛奶待检液配法，脱脂牛奶与纯净水1:5（1份脱脂牛奶+4份纯净水）互溶，用力震荡1min，使充分溶解后为脱脂牛奶备用待检液；【尿液收集】尿液标本必须收集在洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。
磺胺类药物免疫胶体金速测卡 说明书
上海佑隆生物科技有限公司Shanghai Youlong Biotechnology Co., Ltd磺胺类药物免疫胶体金速测卡使用说明书【产品简介】本免疫胶体金速测卡产品用于快速检测水产品等食品中的磺胺类药物残留，整个检测过程仅需20～25分钟，可适用于各类水产品加工销售企业、政府行政检测机构以及商业检测服务单位。
其检测灵敏度如下：药物名称 检出限µg/kg 药物名称 检出限µg/kg磺胺二甲基嘧啶20 磺胺甲基异恶唑 20 磺胺嘧啶20 上海佑隆生物科技有限公司 E-mail: ********************.cn【产品组成】磺胺类药物免疫胶体金速测卡（40份/盒）说明书（1份/盒）专用PBST 缓冲液（1瓶/盒）【需要使用的仪器、试剂】分析纯乙酸乙酯、分析纯正己烷50 mL 离心管、试管均质机、天平、离心机、氮（空）气吹干仪或电吹风（鼓风温度不宜过高）、微量移液器【样品处理】样品组织需要避光冷藏保存，样品处理方法如下：1. 称取5 g 捣碎的去脂肪组织于50 mL 离心管中；2. 加入8 mL 乙酸乙酯，振摇或涡旋5分钟；3. 加入5 mL 正己烷，振荡10分钟；4. 4000转/分钟离心5分钟，取中间水层7 mL 于另一50 mL 试管中，65℃氮（空）气吹干；5. 向吹干的试管中依次加入0.5 mL 正己烷和0.3 mL 专用PBST液，用滴管冲洗溶解试管内壁上残留物；静置2分钟，分层后吸取至少100 μL 下层溶液，待检。
【使用步骤】在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和待检样本溶液恢复至室温（20℃～25℃）。
♦ 从原包装袋中取出试剂板，水平放置于观察者正面，如下图右侧所示（打开后请立即使用）；♦ 吸取待检样品溶液100 µL 或垂直滴加3滴于加样孔中，加样后开始计时；结果应在3～5分钟读取，其他时间判读无效。
【结果判断】♦ 阴性（－）：T 线显色（检测线，靠近加样孔一端）比C 线（对照线）深或一样深，表示样品中磺胺类药物浓度低于检测限或不含磺胺类药物残留。
磺胺类药物检测(放射受体分析法)
保存。
2．1mol/L盐酸：8.32mL浓盐酸加水定容至1000mL.
试剂和材料
3. 闪烁液。
4. pH试条。
5. 离心管：50mL。 6．硅硼酸盐玻璃试管及试管赛。 7．药片压杆。
仪器和设备
1．Charm II液体闪烁计数仪。
2．离心机：4000r/min。
3．高速组织捣碎机。 4．涡旋混合器。 5．加热器：90℃。 6．移液器：1mL-5mL,100μ-1000μL。
分析步骤
1．对照液的配制 （1）阴性对照液的配制：取2mL阴性组织液，加入6Ml MSU萃取缓冲液 中混匀，制成阴性对照液，该对照液可在室温下保存6h。 （2）阳性对照液的配制：取0.3mL MSU多种抗生素标准溶液，加入6mL 阴性组织液中混匀，然后从中取2mL混合溶液加入到6mL MSU萃取缓冲 溶液中混匀，制成阳性对照液，该对照液可在室温下保存6h。
试剂和材料
1.3 M2 缓冲液浓缩干粉：使用时用 50mL 水溶解，配制成 M2 缓冲液，可
在2℃-6℃保存2个月。
1.4 受体试剂片剂：白色药片，于-15℃以下冷冻保存。 1.5 [3H] 标记的磺胺二甲嘧啶药物片剂：粉红色药片，于-15℃以下冷冻 保存。 1.6 [3H] 标记的磺胺二甲嘧啶药物片剂：粉红色药片，于-15℃以下冷冻
（3）吸出上清液，注意不要将漂浮的脂肪颗粒混入上清液内。恢复室
温后，用 pH 试条检查好 pH 是否为 7.5 。如不准确，用 M2 缓冲液或 1mol/L盐酸调整至pH7.5，即为样品测试液。
分析步骤
3．测定
（1）用药片压杆的平端将受体试剂片剂压入一洁净的玻璃试管内，加 300μL水到试管内用涡旋混合器振荡10s，使药片震碎均匀。 （2）用移液器加4mL样品测试液，或阴性对照液或阳性对照液到试管 内。
磺胺甲恶唑(SMZ)快速检测试剂盒使用说明书
氟喹诺酮快速检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12036f检测范围：156-10000 ng/ml最低检测限：动物组织、肌肉、饲料：100 ng/ml；尿液、牛奶：50 ng/ml特异性：本试剂盒可用于快速检测样本中残留的氟喹诺酮。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定动物组织、肌肉、饲料、尿液和牛奶等样品中的氟喹诺酮残留。
回收率：牛奶95.3%饲料94.8%动物组织99.2%尿液101.6%交叉反应率：恩诺沙星100%环丙沙星100%达氟沙星90%氟哌酸45%氟啶酸36%吡哌酸31%氧氟沙星21%氟甲喹8%噁喹酸7%说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中待测物质水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中同时加入酶标的抗原和待测抗原，被测抗原与酶标记抗原对特异性抗体进行竞争结合。
经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
待测标本浓度越高，标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。
显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品中待测物质含量呈负相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.已包被兔抗氟喹诺酮抗体的酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2×250ul/瓶。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：2×20ml/瓶。
4.辣根过氧化物酶标记氟喹诺酮结合物（HRP-Sulfamethoxazole）：1×100ul/瓶（1：100）。
磺胺类药物胶体金检测卡说明书
磺胺类药物胶体金检测卡说明书
产品目录号：C32006
产品简介：
本产品是基于竞争法建立的磺胺类药物胶体金快速检测卡，适用于牛奶中磺胺类药物的快速检测，可用于个人、乳品企业、监测机构等对牛奶的快速现场检测。
可检测的磺胺类药物包括磺胺嘧啶、磺胺吡啶、酞磺噻唑、磺胺甲恶唑、磺胺间甲氧嘧啶和磺胺噻唑等。
灵敏度：
20 ppb
交叉反应：
用200ppb 氯霉素、100ppb 四环素、金霉素、土霉素等药物检测，结果均呈阴性。
使用方法：
原奶或生鲜奶可直接用于检测，无需样品浓缩或提取。
1、首先，将检测卡和待检样品恢复到室温。
2、从包装袋中取出检测卡和滴管；
3、将检测卡水平放置于检测台，用滴管吸取足量牛奶，垂直逐滴加7-8滴样品到检测卡的加样孔中。
4、等待层析完成，于加样后10分钟判读结果。
结果判定：
阴性：C 线和T 线一样深，或者T 线比C 线深。
阳性：T 线出现但比C 线浅，或者无T 线。
失效：C 线不出现，则检测卡无效。
阴性 阴性 阳性 无效 无效
注意事项：
1、若牛奶温度低或浓稠，可能出现层析无法完成的情况，此时，可将牛奶在40-50℃的水浴中加热10分钟后再测；
2、应使用产品包装袋中自带的滴管加样，避免滴管混用；
3、避免用手直接接触检测卡的白色膜面；
4、本产品应在保质期内使用；
C
T
存储及有效期：
本产品应存储在4-30℃的阴凉、避光、干燥的环境中，避免阳光直射，避免冷冻。
保质期12个月。
磺胺多残留检测试剂盒使用说明书
磺胺多残留检测试剂盒使用说明书磺胺多残留检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）1 原理及用途本试剂盒采纳间接竞争ELISA方法检测组织、血清、蜂蜜、牛奶、尿液、鸡蛋等样本中的磺胺类药物（Sulfonamides，SAs），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂构成。
检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的磺胺类药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗磺胺类药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含磺胺类药物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中磺胺类药物的残留量。
2 技术指标2.1 试剂盒灵敏度：0.5ppb（ng/ml）2.2 反应模式：25℃，45min～15min2.3 检测下限：组织（高检测限方法）0.5ppb组织（低检测限方法）2.5ppb血清、尿液、鸡蛋2ppb蜂蜜0.5ppb牛奶10ppb水样1ppb2.4 交叉反应率：药物名称交叉率灵敏度ppb磺胺二甲基嘧啶（SM2） 100% 0.5 磺胺间甲氧嘧啶（SMM） 670% 0.07 磺胺对甲氧嘧啶（SMD） 582% 0.09 磺胺邻二甲氧嘧啶（SDM） 451% 0.1 磺胺甲基嘧啶（SM1） 313% 0.15磺胺嘧啶（SD或SDZ） 308% 0.15 磺胺二甲异嘧啶（SM2） 241% 0.2 磺胺间二甲氧嘧啶（SDM） 175% 0.3 磺胺甲噻二唑（SMT） 165% 0.3磺胺氯吡嗪（Esb3） 67% 0.8磺胺噻唑（ST） 58% 0.9磺胺氯哒嗪（SCPA） 58% 0.9磺胺甲氧哒嗪（SMP） 57% 0.9磺胺喹噁啉（SQX） 42% 1磺胺异噁唑（SIZ） 18% 3磺胺甲噁唑（SMZ） 18% 32.5 样本回收率：组织、蜂蜜、水样9525%尿样、牛奶、血清8525%鸡蛋9025%3 试剂盒构成酶标板96孔标准液：各1ml0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb高标准液（红盖）：1ppm 1ml酶标记物（红盖）5.5ml抗体工作液（蓝盖）5.5ml底物液A（白盖）6ml底物液B（黑盖）6ml停止液（黄盖）6ml20×浓缩洗涤液（白盖）40ml2×复溶液（黄盖） 50ml说明书1份盖板膜1张自封袋1个4 需要的器材和试剂4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）4.2 微量移液器：单道20？l200？l，100？l1000？l、多道300？l4.3 试剂：乙酸乙酯、正己烷、乙腈、Na2HPO4·12H2O、NaOH 、浓HCL 、NaH2PO4·2H2O5 样本前处理5.1 样本处理前须知：试验器具必需干净并使用一次性吸头，以避开污染干扰试验结果。
磺胺类药物胶体金快速检测试剂条的研制及在水产品中的应用
磺胺类药物胶体金快速检测试剂条的研制及在水产品中的应用张敏;李翘;盛慧萍【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2013(29)8【摘要】为建立一种快速检测水产品中磺胺类药物残留含量的检测方法,应用胶体金免疫层析技术,研制了一种水产品中磺胺类药物免疫胶体金快速检测试剂条。
将羊抗鼠IgG、免疫抗原(SDL-HSA)和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和胶体金结合垫上,包被后的硝酸纤维素(NC)膜、样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试剂条。
结果表明:该试剂条对水产品中8种磺胺类药物:磺胺嘧啶(SD)、磺胺噻唑(ST)、磺胺甲基异恶唑(SMZ)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺喹恶啉(SQX)、磺胺甲氧哒嗪(SMP)、磺胺对甲氧嘧啶(SMD)的检出限分别为5、5、10、40、45、50、100、100μg/kg,与链霉素、四环素、氯霉素、盐酸克伦特罗、环丙沙星等其他兽药无交叉反应。
试验证明检测试剂具有较高的灵敏度及特异性、操作便捷、稳定可靠,可作为磺胺类药物残留检测的一种快速简便方法。
【总页数】5页(P75-79)【关键词】磺胺类药物;胶体金;快速检测;水产品【作者】张敏;李翘;盛慧萍【作者单位】郑州市农产品质量检测流通中心;海南大学;杭州南开日新生物技术有限公司【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.氯霉素胶体金快速检测试剂条的研制及在水产品中的应用 [J], 桑丽雅;吴茂生;黄奕雯;盛慧萍;柳爱春2.胶体金免疫层析技术在水产品磺胺类药物残留检测中的应用研究进展 [J], 谢瑜杰;呼秀智;孙晓铮;薛占永3.水产品中孔雀石绿和结晶紫残留免疫胶体金快速检测试剂盒产品的比较和应用选择 [J], 何洁怡4.水产品中孔雀石绿和结晶紫残留免疫胶体金快速检测试剂盒产品的比较和应用选择 [J], 何洁怡5.组胺胶体金免疫快速检测试纸条研制及其在水产品检测中的应用 [J], 王炳志;骆和东;叶雅真;严义勇;袁克湖;杨星星;许稳健;颜文豪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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总磺胺类药物（Total Sulfonamides）快速检测试剂盒
1.简介
本试剂盒是利用竞争酶联免疫分析的方法对牛奶、肉类和蜂蜜、血液、尿液中的总磺胺类药物进行定量分析。
试剂盒中包括所有酶联免疫分析试剂。
本试剂盒有96个实验孔（包括标准孔）。
如果进行定量分析，必须有酶标仪。
检测下限：牛奶：2ppb
肉类：1ppb
蜂蜜：1ppb
检测时间：约1.5小时
样品前处理时间：肉类：约2小时
蜂蜜：约1.5小时
本试剂盒与各种磺胺类药物的交叉反应率：
磺胺氯哒嗪＞300%
磺胺多辛＞300%
磺胺甲氧哒嗪＞300%
磺胺甲基硫代二嗪＞300%
磺胺噻唑＞300%
磺胺氯吡嗪钠200%
磺胺甲恶唑120%
磺胺间甲氧嘧啶100%
磺胺喹恶啉100%
磺胺吡啶90%
磺胺对甲氧嘧啶85%
磺胺甲基嘧啶80%
磺胺间二甲氧基嘧啶40%
磺胺嘧啶20%
磺胺二甲嘧啶20%
磺胺林10%
磺胺-4‘5’-二甲基异噁唑9%
磺胺-3‘4’-二甲基异噁唑7%
磺胺苯吡唑4%
磺胺醋酰3%
磺胺胍2%
氨苯磺胺0.1%
磺胺苯甲酰胺0.05%
2.原理
本试剂盒的测定基础是抗原抗体的免疫反应。
微孔板包被有抗磺胺类药物的抗体。
加入磺胺类药物的标准品或样品溶液，酶标记磺胺类药物抗原。
加入的磺胺类药物标准品与酶标记磺胺类药物抗原同时竞争包被板上的抗体结合位点。
温育一段时间后，洗涤、拍干。
加入显色液温育，最后加入终止液后颜色由蓝色转变为黄色，测定O.D.450nm值。
O.D.450nm值与样品中的磺胺类药物的浓度成反比。
3.试剂盒组成：
1．）96孔酶标板（包被有抗体）96孔1块2．）磺胺类药物标准品(1ml/瓶) 溶液
7瓶（A:0、B: 1、C: 3、D: 10、E: 30、F: 100 ng/ml）3．）酶标记抗原 6 ml 溶液1瓶4．）显色底物A液7 ml 溶液1瓶5．）显色底物B 液7 ml 溶液1瓶6．）3×浓缩提取液50 ml 溶液1瓶7．）10×浓缩洗涤液30 ml 溶液1瓶8．）终止液：2M硫酸7 ml 溶液1瓶4．需要的仪器、试剂
4.1仪器
——酶标仪450nm
——离心机
——均质器
——氮气吹干仪
——微量移液器20μl～200μl，100μl～1000μl
——刻度移液管
——天平：感量0.01g
4.2试剂
——正己烷
——乙腈
——乙酸乙酯
——甲醇
——Carrez I：0.36M氰亚铁酸钾
——Carrez II：1.04M ZnSO4·7H2O 5．样品处理
样品应冷藏保存且避光
5.1牛奶样品的预处理方法
1）取5mL牛奶样品到离心管中，每管加入250μL CarrezⅠ及250μL CarrezⅡ彻底混合（旋涡振荡2分钟），4—12℃ 2500g离心10分钟。
2）转移出2.2mL上层液（相当于2mL奶样）至一个新离心管中。
用稀释好的提取液以1：4稀释（1份上层液＋3份稀释的提取液）。
3）取50μL进行分析。
稀释倍数：4
5.2肉类及水产品（鱼、虾）样品处理方法
1) 用均质器均质一定量的样品（100g）。
2) 称1g均质过的样品，加入3mL乙腈-水溶液（84:16）中，涡旋振荡5分钟。
3)室温（20—25℃）2500g离心10分钟。
4) 移取1.5mL上清液（相当于0.5g样品）至另一个新试管中，60℃下氮气吹干。
残留物用1mL稀释好的提取液复溶，涡旋振荡1分钟。
再加入1ml正己烷，涡旋振荡1分钟。
5) 室温（20—25℃）2500g离心10分钟。
取50μL下层水相进行分析。
稀释倍数：2
5.3蜂蜜样品处理方法
1）称取蜂蜜样品1±0.05g，置于离心管中，加入0.5mL 1M HCl，37℃温育半小时。
2）加入0.5mL 1M NaOH，混合均匀。
再加入0.5mL 0.2M 磷酸盐缓冲液振荡均匀。
3）加入1mL 乙腈，再加入3mL乙酸乙酯，振荡均匀。
4）2500g离心15分钟，取上层2mL有机相，60℃氮气吹干。
5）加入1mL提取液复溶。
取50μL用于分析。
稀释倍数：2
5.4鸡蛋的预处理过程如下：
1）称1g均质过的样品，加入2mL甲醇中，涡旋振荡2分钟。
2）室温（20—25℃）2500g离心10分钟。
3）移取1mL上层的甲醇（相当于0.5g样品）至另一个新试管中，60℃下氮气吹干。
用1mL提取液溶解干燥的残留物。
涡旋振荡1分钟。
加入1mL正己烷，涡旋振荡1分钟。
4）室温（20—25℃）2500g离心10分钟。
取50μL下层水相进行分析。
稀释倍数：2
6.酶联免疫分析程序
6.1测定之前注意事项
1. 使用前将所有试剂平衡至室温(20-25℃)。
2. 使用之后迅速将试剂放入2-8℃冷藏。
3. 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4. 所有孵育过程应避免阳光直射，并按要求用盖板覆盖住酶标板。
6.2洗涤液配制
将浓缩洗涤液用去离子水稀释10倍后使用(1份浓缩洗涤液加9份去离子水)。
6.3测定程序
1. 将足够标准和样品所用数量的孔条插入酶标板架，记录下标准和样品的位置。
没有使用的酶标板
用铝箔袋封好置2-8℃冷藏保存。
2. 将50μl标准品、样品加入相应的微孔中。
每孔
中加入50μl酶标记抗原。
轻摇、振荡充分混匀，37℃条件下温育1小时。
3. 倾去微孔中反应液，用洗涤液洗涤五次（每次150μl /孔），每次洗涤都须甩尽微孔中的水珠，并将
洗净的微孔板在吸水纸上拍干。
4. 将显色底物液A和B按1:1（体积比）混匀（临
用前新配）。
分别向每个微孔中加入100μl显色底物
溶液，37℃避光温育15分钟。
室温如果过低，可
适当延长显色时间2-5分钟。
5. 向每个微孔中加入50μl 2M H2SO4终止反应，轻
摇混匀确保蓝色完全转变为黄色。
6. 在酶标仪上（波长450nm）测定光密度OD值。
7.结果计算：
所获得标准品或样品的吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）吸光度值的平均值（B0）再乘以100。
因此0标准等于100%，并且以百分比给出吸光度值。
根据每一个标准品B/B0的值做出一条拟合曲线，相对应每一个样品的浓度就可从拟合直线上读出。
8.标准曲线
9.试剂盒的质量指标
1.本试剂盒的灵敏度为0.2μg/kg(0.2ppb)。
2. 精密度：批内变异系数<15%（n=10），批间变异
系数<20%(n=10)。
3.准确性：样品回收率在60%~120%之间。