实验：脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定

实验5 金黄色葡萄球菌的检验

实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。

此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。

因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。

绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。

3 实验材料3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。

3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。

3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。

4 检样程序5 操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。

若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。

5.1.2 增菌和分离培养5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。

脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告

2016年秋季学期微生物学实验报告1、了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理。

2、熟悉常见病原性球菌及常见肠道致病菌的检查程序，掌握各检查实验操作。

3、了解脓汁和粪便标本中病原菌的检测的临床应用及临床意义。

4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。

5、熟悉抗生素对于不同细菌的作用机理。

6、树立牢固的无菌观念。

二、实验器材：1、培养基：营养琼脂平板、伊红美兰平板、斜面、营养肉汤、半固体琼脂2、标本：脓汁标本、粪便标本、空气细菌培养物、手指皮肤细菌培养物、细菌分离培养物、斜面培养物、营养肉汤培养物、药敏试验培养物3、器材：1）培养基的制备：天平、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、试管、试管架、刻度吸管、洗耳球、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、干粉培养基、酒精灯、火机。

2）细菌的分离培养：碘酒棉球，酒精棉球、眼科镊子、接种环。

3）细菌的纯培养: 接种环。

4）细菌的形态学检查：生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、结晶紫染液、芦戈氏碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红、染色架、接种环。

5）细菌的生化试验:糖发酵管、抗菌素（青霉素、链霉素、庆大霉素）纸片、眼科镊子、接种针、接种环、小砂轮、葡萄糖发酵微量管、乳糖发酵微量管、兔血浆、生理盐水、载玻片。

6）结果分析：尺子。

三、方法与步骤1、营养肉汤培养基的制备取1.1g营养肉汤粉末于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，摇晃锥形瓶使其几乎完全溶解。

将锥形瓶置于电陶炉上加热至沸腾，观察固体是否完全溶解，冷却后分装至试管内。

2、细菌的分离培养（平板划线分离法）甲→脓汁标本→营养琼脂平板乙→脓汁标本→营养琼脂平板丙→粪便标本→伊红美蓝平板丁→粪便标本→伊红美蓝平板1）接种环烧灼灭菌，以免污染标本。

2）取标本3～5ul。

3）转动平板，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。

4）接种环与平板呈30～40度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条5）甲、乙烧掉接种环上多余的标本。

金黄色葡萄球菌实训报告

一、实验目的1. 熟悉金黄色葡萄球菌的基本生物学特性。

2. 掌握金黄色葡萄球菌的分离、纯化及鉴定方法。

3. 了解金黄色葡萄球菌的致病性及防治措施。

二、实验原理金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界和人类及动物体内。

该菌具有高度的致病性，可引起多种化脓性感染，如肺炎、败血症、心内膜炎等。

实验中，通过观察金黄色葡萄球菌的形态特征、生化反应和药物敏感性，实现对金黄色葡萄球菌的鉴定。

三、实验材料1. 金黄色葡萄球菌菌种：购自某生物技术公司。

2. 实验器材：显微镜、无菌操作台、接种环、接种针、无菌培养皿、营养琼脂、血液琼脂、药敏纸片、生理盐水、75%酒精、碘酒、显微镜油镜等。

3. 实验试剂：青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素等药敏纸片。

四、实验方法1. 金黄色葡萄球菌的分离与纯化（1）接种：将金黄色葡萄球菌菌种接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。

（2）挑取单菌落：用接种环挑取生长良好的单菌落，接种于新的营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。

（3）重复挑取：继续挑取单菌落，直至获得纯化后的金黄色葡萄球菌。

2. 金黄色葡萄球菌的形态特征观察（1）革兰氏染色：将纯化后的金黄色葡萄球菌涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察。

（2）菌落观察：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时，观察菌落形态。

3. 金黄色葡萄球菌的生化反应鉴定（1）糖发酵实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于糖发酵培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生气泡。

（2）氧化酶实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于氧化酶培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生颜色变化。

4. 金黄色葡萄球菌的药物敏感性实验（1）药敏纸片法：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，将药敏纸片贴于平板表面，37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈的大小。

（2）最低抑菌浓度（MIC）测定：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于微量肉汤稀释法培养基，分别加入不同浓度的药物，37℃恒温培养24小时，观察生长情况，确定最低抑菌浓度。

金黄色葡萄球菌检验

金黄色葡萄球菌检验1. 概述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，广泛存在于自然环境和人体皮肤表面。

虽然大多数的金黄色葡萄球菌对人体无害，但一些菌株具有致病性，可以引起多种感染，包括皮肤感染、肺炎、血流感染等。

因此，对金黄色葡萄球菌的检验具有重要意义，能及早发现和控制感染的传播。

本文将介绍金黄色葡萄球菌检验的一些常用方法和技术。

2. 菌种的采集和处理2.1 采集样本金黄色葡萄球菌通常从病人的感染部位或者其他潜在的感染源采集样本。

常见的样本类型包括：皮肤切口分泌物、鼻拭子、血液、尿液等。

2.2 样本处理在进行金黄色葡萄球菌的检验之前，需要对采集的样本进行适当的处理。

处理方法取决于样本的类型和检验的目的。

常见的处理步骤包括：•鼻拭子：将鼻拭子放置在含有缓冲液的管中，将管子旋紧，并轻轻摇动一段时间，使细菌尽可能地释放到缓冲液中。

•血液：采集静脉血样本，将血液转移到无菌包装的管中，并立即将管子送到实验室进行处理。

•皮肤分泌物：使用无菌棉签或拭子采集患者分泌物，放入管中并送到实验室。

3. 常用的金黄色葡萄球菌检验方法3.1 培养方法金黄色葡萄球菌通常通过培养方法来进行检验。

常用的培养基包括牛肉肝脏套，Columbia血琼脂和Mannitol盐琼脂。

在封闭器具中加热灭菌后，将菌种均匀涂布于培养基上，并在适宜的温度（通常为37摄氏度）下孵育24-48小时，观察是否有金黄色小圆菌落的形成。

3.2 利用PCR技术检测PCR（聚合酶链式反应）是一种敏感且快速的方法，可以检测金黄色葡萄球菌的DNA。

通过PCR技术，可以快速鉴定金黄色葡萄球菌的存在和菌株的特性。

这种方法特别适用于高致病性金黄色葡萄球菌的检测。

3.3 人类源金黄色葡萄球菌的毒力基因检测金黄色葡萄球菌通常通过其特有的毒力基因来引起感染。

通过PCR技术，可以检测和鉴定菌株中的毒力基因。

常见的毒力基因包括PVL、TSST-1、ETA等。

脓汁和粪便标本中病原菌检测实验报告二

脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业：14临床输血学号： 3140704004姓名：宁立军组别：第七组合作者：牛恺文黄可秀朱晋辉实验室：第六实验室指导老师：罗军实验的得分：一、实验目的通过革兰氏染色并在油镜下观察细菌形态结构、细菌的生化反应和细菌的血清学反应等手段区别和鉴定脓汁标本中和粪便标本中细菌，检测病原微生物，并进行细菌药物敏感性试验。

二、实验器材1器材接种环接种针打火机马克笔酒精灯电热恒温培养箱物显微镜电炉试管（带棉塞）称量纸药勺牛皮纸橡皮筋尺子锥形瓶高压蒸汽灭菌器镊子玻片吸水纸2 试剂药品普通营养琼脂培养基蒸馏水脓汁标本粪便标本石蜡油生理盐水结晶紫卢戈碘液 95%乙醇稀释复红葡萄糖微量发酵管（2支）乳糖微量发酵管（2支）青霉素抗菌素纸片链霉素抗菌素纸片庆大霉素抗菌素纸片兔血浆福氏志贺菌诊断血清三、方法与步骤1培养基制备称取一定量的肉汤培养基，至于三角烧瓶中，加入适量的蒸馏水，煮沸一次，趁热分装；称取一定量的营养琼脂培养基，至于三角烧瓶中，加入适量的蒸馏水，煮沸三次（煮至刚刚冒泡，立刻置于台面，半分钟后再煮），使完全溶解，趁热分装。

（平板培养基：以无菌操作，倾注平皿10ml，琼脂完全凝固后，平板倒放，4℃冰箱保存备用。

斜面培养基：培养基趁热斜放，培基不超过试管长度的2/3，琼脂凝固以后，4℃冰箱保存备用。

）贴上标签后灭菌使用。

2空气与人体体表细菌学检查根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养以后，计数菌落形成单位（CFU），了解空气的污染情况。

平板盖打开，盖朝下放在平板旁，琼脂平板暴露15分钟即可。

在普通平板上接种手指上的细菌。

第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。

3细菌分离培养接种前，接种环烧灼灭菌。

取标本在平板表面上方密集涂布5～10 mm²。

烧掉接种环上多余的标本。

冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）。

微生物学实验设计_案例导入_皮肤化脓性病原菌的分离和鉴定

实验步骤：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
化脓性球菌的防治原则
注意个人卫生，要及时用消毒药物处理皮肤创伤（如碘酊）等预防交叉感染，减少同带菌者或有相似症状的人有皮肤接触，
可疑体现在：（1）菌落周围出现溶血环（2）菌落颜色为金黄色
生物化学反应鉴定：甘露醇分解试验（+）血浆凝固酶试验（+）耐热核酸酶试验（+）
血清学检测SPA：协同凝集试验（+）
引起皮肤化脓性感染的细菌为金黄色葡萄
球菌
致病性葡萄球菌的鉴定—血浆凝固酶实验
实验原理：许多病原性的葡萄球菌菌株在代谢过程中能产生一种血浆凝固酶样物质，可使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的兔或人血清发生凝固，而非致病病株一般不产生此酶，故凝固酶可作为鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。
勤洗手，勤洗澡，对于脸部的化脓，不要将其抓破或挤出，因脸部的化脓位于危险三角区及其附近，极易引起颅内感染引起严重后果由于金黄色葡萄球菌易产生耐药性，治疗因根据药敏实验结果针对性的选用窄谱抗生素，防止耐药性菌株扩散对于反复发作的顽固性疖疮，宜采用自身菌苗进行人工自动免疫，有一定疗效（原理是重建皮肤微生态平衡，粪菌移植也是运用这个原理）少熬夜，养成正常的作息习惯，多吃蔬菜水果，帮助机体恢复
皮肤化脓性病原菌的分离与鉴定
案例导入
机械学院王斌同学皮肤表面有一化脓感染病灶，经久不愈。请设计一个方案：从脓汁中分离、鉴定化脓性病原菌，并提出防治原则。
分析原因
皮肤表面的正常细菌群：皮肤表面常见的细菌有类白喉杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌、丙酸杆菌、假单孢菌、分枝杆菌、变形杆菌、大肠埃希菌、不动杆菌、克雷伯菌等

实验金黄色葡萄球菌的检验

实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。

此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。

因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。

绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。

3 实验材料3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。

3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。

3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。

4 检样程序5 操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。

若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。

5.1.2 增菌和分离培养将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。

金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。

葡萄球菌的鉴定

血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性和非致病性葡萄球菌
血浆凝固酶
甘露醇发酵
金葡
表葡
腐生
（4）新生霉素敏感试验
血平板菌悬液涂布 5ug/L新生霉素纸片 35℃孵育16~18h S:抑菌圈直径>16mm，R:≤16mm
结果 ATCC25923 表葡 S R
腐生
阳性结果（S）
实验七葡萄球菌鉴定
检验系微生物教研室
（一）葡萄球菌检验程序
脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐物
直接涂片染色
初报
分离培养（血平板）
分离培养
增菌培养（高盐甘露醇平板）
涂片染色触媒血浆凝固酶甘露醇发酵耐热核酸酶其他鉴定试验
取可疑菌落
鉴定试验
药敏试验
报告
（二）目的要求
培养基：血琼脂平板，MH琼脂，甘露醇发酵管试剂：生理盐水，3%H2O2,EDTA抗凝兔血浆，革兰染液，
新生霉素纸片、头孢西丁、红霉素、克林霉素纸片其他：酒精灯，接种环，接种针，玻片，显微镜，孵箱等
（四）步骤方法
1.细菌菌落特征观察：
大小形态光泽表面边缘透明度颜色溶血金葡表葡腐生
玻片法
【操作】取兔血浆和生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，用接种环挑取细菌，混合后观察。
【操作】
试管法
（3）甘露醇发酵试验：
【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类，能发酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色。
【操作】细菌分别接种甘露醇单糖发酵管，经35℃ 孵育18-24h观察结果。
【结果】金葡为阳性，表皮、腐生为阴性
H2O2
H2O + O2

金黄色葡萄球菌检验原理

金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。

具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。

金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。

2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。

金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。

- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。

- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。

3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。

通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。

微生物实验报告细菌

微生物实验报告题目脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业2013级临床医学八年制实验者学号小组成员指导老师一、实验目的1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。

2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。

3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。

4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。

5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。

6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。

7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。

二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。

化脓性球菌的分离鉴定

产生红色即为阳性，则该菌为A群链球菌；否则，该菌非A群链球菌。
A群链球菌的防治原则
A群链球菌
主要通过飞沫传播，应对病人和带菌者及时治疗，以减少传染源。另外，还应对空气、器械和敷料等消毒。对急性咽喉炎和扁桃体的病人，尤其是儿童，须彻底治疗。以防止急性肾小球炎、风湿热和亚急性细菌性心内膜炎的发生。首选药物为青霉素G。
葡萄球菌的鉴定
2.生化反应检测
2.1 血浆凝固酶试验
原理：金葡菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，结合型血浆凝固酶附着于细菌表面，在玻片上形成凝块；游离型的血浆凝固酶则可使试管中的血浆发生凝固；
方法步骤（玻片法）：在在玻片两端各滴生理盐水1d，取肉汤培养菌液与生理盐水混匀，在其中一端的菌液中滴加兔血浆 1d混匀，观察结果。因致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可凝固兔血浆，故如血浆中明显小凝块出现，而生理盐水中无此现象者为阳性，若血浆中无凝块时为阴性。
A群链球菌的鉴定
3.2 吡咯烷酮试验（PYR）检验方法
原理：特异检验A群链球菌氨基肽酶方法步骤： • 用PYR缓冲液A液浸润PYR测试条末端滤纸； • 用接种环从适合的琼脂培养基上挑取可疑待测菌落，在末端滤纸上
涂抹开或直接蘸取菌落； • 放置于密闭容器；35℃±2℃，孵育5min~10min； • 滴加一滴PYR缓冲液B液至末端涂抹细菌处，观察是否有红色产生。
化脓性炎症是临床上常见病。但是除了病原性球菌外，其他微生物也可以引起化脓性感染。
常见的标本有脓汁、咽拭子、痰液、血液、脑脊液等。
本次实验以脓汁标本进行病原性球菌的分离鉴定。
脓汁中病原球菌的查程序
涂片：革兰氏染色
血琼脂平板（分离培养）

病原实验报告

病原物的分离培养和纯化病原物的分离和纯化摘要：本实验主要通过用对辣椒炭疽病或柑橘炭疽病病菌的分离和在pda培养基中对炭疽病菌消毒后做无菌培养然后转移到斜面培养的实验过程观察炭疽病菌的生长情况，了解分离与纯化病原物的基本原理与方法，掌握实验室常用的消毒灭菌方法，并掌握培养基的制作和无菌操作技术。

关键词：分离培养、炭疽病、pda培养基、灭菌前言柯赫氏法则(koch’s rule)又称柯赫氏假设(kochs postulates)或柯赫氏证病律，是确定侵染性病害病原物的操作程序。

如发现一种不熟悉的或新的病害时，就应按柯赫氏法则的四个步骤来完成诊断与鉴定。

诊断是从症状等表型特征来判断其病因，确定病害种类。

鉴定则是将病原物的种类和病害种类同已知种类比较异同，确定其科学名称或分类上的地位。

有些病害特征明显，可直接诊断或鉴定，如霜霉病或秆锈病。

但在许多场合难以鉴定病原物的属、种。

如花叶症状易于识别，要判断由何种病原物引起，就必须经详细鉴定比较后才能确定。

柯赫氏法则表述为：“(1)在病植物上常伴随有一种病原微生物存在；(2)该微生物可在离体的或人工培养基上分离纯化而得到纯培养；(3)将纯培养接种到相同品种的健株上，出现症状相同的病害；(4)从接种发病的植物上再分离到其纯培养，性【1】状与接种物相同”。

如果进行了上述四步鉴定工作得到确实的证据，就可以确认该微生物即为其病原物。

但有些专性寄生物如病毒、菌原体、霜霉菌、白粉菌和一些锈菌等，目前还不能在人工培养基上培养，可以采用其他实验方法来加以证明。

侵染性病害的诊断与病原物的鉴定都必须按照柯赫法则来验证，每个医学家和植物病理学家都应能熟练地运用。

柯赫氏法则同样也适用来对非侵染性病害的诊断，只是以某种怀疑因子来代替病原物的作用，例如当判断是否缺乏某种元素而引起病害时，可以补施某种元素来缓解或消除其症状，即可确认是某元素的作用。

1. 材料、仪器与用具1.1实验材料柑橘炭疽病或辣椒炭疽病病害部位、pda培养基（自制）1.2仪器用具超净工作台、培养箱、培养皿、试管、接种铲、接种针、70%酒精、0.1升汞、电炉等 2. 内容与方法2.1培养基的配制“培养基按成分及对成分了解程度分为天然培养基、半组合培养基、组合培养基三类，从物理性分为固体培养基、液体培养基两种，培养基不同，配制方法【2】不同。

实验：脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定ppt课件

培养箱、酒精灯、接种环等
检查原则
在脓汁标本中，以化脓性球菌最为常见，本实验主要检测金黄色葡萄球菌
用药前采集标本无菌操作
标本检测程序
脓汁、脓性分泌物（未知菌液/固体培ຫໍສະໝຸດ 物）直接接种血琼脂平
涂片革兰染色镜检
板菌落观
察
血浆凝固酶试验
甘露醇发酵
诊断报
检查方法和结果报告
直接显微镜检查：取标本直接涂片，均匀涂成菌膜，自然干燥，固定后革兰染色，油镜观察。
血平板培养结果观察
─────────────
菌落特点溶血性菌落颜色
注：第2天观察记录结果；如培养48~72h后仍然无菌生长，则报告“无细菌生长”。
检查方法和结果报告
血浆凝固酶试验（玻片法）：
用灭菌接种环取标本和白葡菌（阴性对照）培养物少许，分别与玻片左右二侧的生理盐水制成均匀菌悬
革兰染色镜检
─────────
形态
排列染色性
金黄色葡萄球菌
注：若染色后未发现细菌，可报告“直接镜检未发现细菌”
检查方法和结果报告
细菌分离培养：取脓液或创伤分泌物接种于血琼脂平板上（接种后4℃保存），划线分离，37℃培养18~24h后，观察菌落特征，取单个菌落进行革兰染色镜检。
金黄色葡萄球菌
医学生物学实验医学微生物教研室 2011年6月
实验八脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定
实验内容脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定
目的
熟悉临床标本中常见化脓性细菌的分离鉴定程序；掌握细菌分离培养的基本技术。
实验器材
标本：脓拭子、感染分泌物或模拟脓汁标本菌种：金黄色葡萄球菌培养物、表皮葡萄球菌培养基：血琼脂平板、甘露醇发酵管其他：血浆、生理盐水、革兰染液、玻片、滴管

[基础科学]金黄色葡萄球菌检验

金黄色葡萄球菌检验
概况
• 葡萄球菌属微球菌科,本菌有19个菌种,从
人体上可检出12个种.
• 葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的
粘膜相关系,有些种是人及动物的条件致病菌.
• 金黄色葡萄球菌对人类有致病性,通常被称
为病原性球菌.金黄色葡萄球菌可引起化脓性炎症,又称为化脓性球菌.
金黄色葡萄球菌的生物学特性
肉汤培养物作为对照.
• 结果如可疑,挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mL
BHI,36℃±1℃培养18h～48h,重复实验.
结果报告
• 如血浆凝固酶试验阳性,可判定为金黄色葡
萄球菌 .
• 报告在25g〔mL〕样品中检出或未检出金黄
色葡萄球菌.
谢谢!
浆凝固酶,使血浆中纤维蛋白原转变为纤蛋白, 附着于细菌表面 ,产生凝固.
• 金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与
细胞壁结合的凝固酶,为结合凝固酶；另一种是菌细胞释放于培养基中,为游离凝固酶.二者的抗原性不同.
血浆凝固酶试验
• 挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1个或
以上,分别接种到5mL BHI和营养琼脂小斜面,36℃±1℃培养18 h～24 h.
报告
增菌培养基
• 7.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基,
因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性,因而能在此增菌液中生长,除某些嗜高盐的海洋菌外,大多数细菌都被增菌液中的高盐所抑制.
• 胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%,以胰酪胨替代
牛肉浸粉,并加入少量磷酸氢二钾和葡萄糖促进葡萄球菌的生长.
样品的稀释
• 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸
盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min～10000 r/min均质1min～2min,或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min～2min,制成1:10的样品匀液.

金黄色葡萄球菌实验报告doc

金黄色葡萄球菌实验报告篇一：微生物实验报告细菌微生物实验报告题目年级专业实验者学号小组成员指导老师一、实验目的脓汁和粪便标本中病原菌的检测 XX 级临床医学八年制1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。

2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。

3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。

4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。

5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。

6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。

7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。

二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。

金黄葡萄球菌鉴定步骤

金黄葡萄球菌鉴定步骤金黄葡萄球菌鉴定步骤导语：金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的致病菌，对人类健康造成威胁。

了解金黄葡萄球菌的鉴定步骤对于预防和控制感染具有重要意义。

本文将从简单到深入，介绍金黄葡萄球菌鉴定的全过程。

一、目的金黄葡萄球菌鉴定的目的是确认样本中是否存在金黄葡萄球菌，并进一步了解其特点和性质，以便进行预防和治疗。

二、前期准备1. 确保实验室安全：佩戴实验室必备的防护用品，如手套、口罩和实验室服。

2. 培养基准备：准备适用于金黄葡萄球菌生长的培养基，如牛肉膏蔗糖培养基（Baird Parker Agar）或含有亚硒酸钠的万氏精液胆盐柳糖培养基（Mannitol Salt Agar）。

3. 无菌操作：使用无菌技术，以避免外来细菌的污染。

三、鉴定步骤1. 样本处理：将待检样本在无菌条件下接种于培养基上，可以是涂布法、点状法或环法。

a. 涂布法：将待检样本取适量涂布在培养基表面。

b. 点状法：用匀浆针将待检样本点状刺入培养基内。

c. 环法：用无菌棉签从待检样本中取样后沿培养基表面画环。

2. 培养条件：将培养基培养于37℃恒温培养箱中，培养时间一般为24小时。

3. 金黄葡萄球菌特征：a. 形态特征：金黄葡萄球菌在培养基上生长为黄色或类似葡萄球菌的菌落，呈珠状集聚。

b. 生理特性：金黄葡萄球菌产生酶溶血性作用，可溶解红细胞，形成溶血环。

c. 生化特性：金黄葡萄球菌可产生凝固酶，将凝血蛋白溶解成凝胶。

4. 疑似金黄葡萄球菌鉴定：a. 形态观察：观察菌落形态，如颜色、形状和大小等。

b. 酶溶血性试验：将待检菌落在凝集红细胞上涂布，观察是否形成溶血环。

溶血环直径大于3毫米时，判定为金黄葡萄球菌的溶血作用阳性。

c. 产凝固酶试验：将待检菌悬液与凝血蛋白混合，观察是否形成凝胶。

若凝胶形成，即判定为金黄葡萄球菌的凝固酶阳性。

5. 进一步确认：a. 分子鉴定：可采用PCR等分子生物学方法，通过特定基因的检测来确认金黄葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌实验报告doc

金黄色葡萄球菌实验报告篇一：微生物实验报告细菌微生物实验报告题目年级专业实验者学号小组成员指导老师一、实验目的脓汁和粪便标本中病原菌的检测 XX 级临床医学八年制1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。

2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。

3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。

4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。

5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。

6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。

7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。

二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。