中药成分测定方法

其中经典微柱色谱，也称固相萃取或液—固萃取（LSE）具有 设备简单，使用方便，快速，净化效率较高而最常用，将在此做 一简介。
LSE通常是指样品溶液加到装有合适固定相（净化剂）的长 5`～15cm，内径0.5～1cm的色谱柱中，将被测成分保留于柱上， 洗去杂质后，再洗脱被测成分进行测定，或者是使杂质强烈保留 于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。用这种选择性好而柱效较 低的方法进行样品的净化分离，尤其适用于一类总成分的含量测 定，也可将色谱柱流出的样品进一步用GC、HPLC、TCL分离后 测定。
LSE的常用净化剂（填料）有氧化铝、氧化镁、硅藻土、硅胶、 活性炭、大孔树脂离子交换树脂、键合相硅胶C8、C18、聚酰胺 等。视其性质可分为亲脂型、亲水型和离子交换型填料。
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第二节 含量测定样品的处理
⒈硅胶、氧化铝等：
它们是传统的吸附剂，多以0.07～0.15mm(200～100 目)的颗粒1～5g用于样品的净化处理，其作用机制为溶质在 吸附剂表面的极性吸附作用。通常是当溶于有机溶剂的样品加 到柱上时非极性或低极性的杂质先被洗出色谱柱，再用适当极 性的溶剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。
2.粉碎时注意事项：
① 不要粉碎得过细。样品粉碎得过细，在样品提取时，会造成过 滤困难，因此可视实际情况进行粉碎过筛。
② 避免污染样品。在粉碎样品时，要尽量避免由于设备的磨损或 不干净等原因而玷污样品，
③ 防止粉尘飞散或挥发性成分的损失。
④ 过筛时，通不过筛孔的部分颗粒决不能丢弃，必须反复粉碎或
碾磨，让其全部通过筛孔。
富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍 生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选 择性。
使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。
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第二节 含量测定样品的处理
一、样品的粉碎
1.目的：
① 是保证含量测定所取样品均匀而有代表性，提高测定结果的精 密度和准确度；
② 是使样品中的被测组分能更快地完全提取出来。
硅藻土柱则用干柱直接上样，柱可再生。常 见牌号为Extretut。纤维素柱的使用与硅藻 土柱相似。
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第二节 含量测定样品的处理
化分离， 如测定黄酮时，用样品的乙醇提取液上
柱，水洗去部分杂质，以95%乙醇洗脱总 黄酮后测定。
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第二节 含量测定样品的处理
⒌硅藻土、纤维素：
它们为常用的亲水型填料，其原理为分配 作用。填料作为支持剂，多以水基质液作为 固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相， 较亲脂的成分从固定相转移到流动相，而被 洗脱，达到萃取的目的。其萃取率较高（一 般大于80%），无浓集作用，萃取液较纯净， 但洗脱剂用量较大（一般大于5ml）
第四章 中药的含量测定
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第一节 含量测定的目的与意义
• 中药的含量测定与化药有很大区别
• 中药组成复杂，产生疗效的不是某单一成分，检测任 何一种活性成分均不能反映中药的整体疗效。
• 但是借鉴化药质量控制模式，测定某一味药味的有效 成分、活性成分、指标性成分的含量的方法，对于控 制中药质量起着不可替代的重要作用。
• 通过测定中药中有效成分、毒性成分或某些指标性成 分的含量来衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的质量 优劣，以保证中药的质量，达到临床用药安全、有效
的目的。
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第二节 含量测定样品的处理
样品处理的主要作用有：
将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分 析测定的稳定试样。
除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准 确度。
1)柱的活化。用2ml甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再用0.5 毫升水洗去柱中的甲醇。
2)上样。
3)清洗。用2～5ml的水清洗以除去弱保留的亲水成分，如无机盐、 氨基酸、亲水的蛋白质、糖以及中等保留成分的极性化合物、 低肽等。
4)洗脱。用2～5ml甲醇或甲醇-水洗脱大分子的肽、甾体、较亲脂 的药物等强保留的待测组分。
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二、样品的提取
第二节 含量测定样品的处理
对于中药材和固体制剂样品，在粉碎后，取粉末适量 精密称定，首先用溶剂进行提取，使被测组分和某些共 存组分从中溶解出来（前者必须完全溶出），与滤渣分 离后，再对被测组分进行含量测定。
常见的提取方法：
冷浸法 回流提取法 连续回流提取法 超声提取法 超临界流体提取法
氧化铝能将黄酮类吸附在柱上，用于生物碱、苷类等的测定。 例如用ＵＶ法（吸收系数法）
硅胶适合于分离中性或酸性化合物，强烈保留碱性化合物。 若把样品提取液加到柱上，依次用极性由小到大的溶剂洗脱， 则可以将杂质和被测成分分离。
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第二节 含量测定样合相硅胶（简称C18或ODS）是常用的固体萃取剂， 其次有烷基、苯基、氰基键合相硅胶，可用来分开脂溶性和水 溶性杂质或成分。也常用于萃取，纯化水基质体液中憎水性药 物。该类LSE的一般操作程序为：
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第二节 含量测定样品的处理
⒊大孔树脂：它可分为极性和非极性型
极性 丙烯酰胺聚合物;
非极性 苯乙烯和二乙烯苯的共聚物.
其吸附性质与烷基键合相硅胶相似，通过疏水作用对 非极性水溶性成份有吸附力。例如在测定复方归芪剂中 的黄芪甲苷时，用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再 用30%乙醇洗脱黄芪甲苷。大孔树脂的主要特点是表面 积极大，传质速率较高和具有不同的极性及适于吸附较 大分子。
树脂在使用前需要前处理：用甲醇、乙醇、丙酮等有 机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗。该填料用量 常为1～2g，有时也用100～150mg来萃取血、尿中药 物，操作程序类似ODS填料。
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第二节 含量测定样品的处理
⒋聚酰胺： 它是常用的有机吸附剂，主要通过与溶
质形成氢键而产生吸附作用。 常用于含酚、酸、醌类药物样品液的净
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第二节 含量测定样品的处理
三、样品的分离净化 （一）沉淀法 （二）蒸馏法 （三）液一液萃取法（LLE） （四）色谱法
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第二节 含量测定样品的处理
（四）色谱法
吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱皆可作为中药 制剂分析中的净化分离方法，其操作方式有柱色谱，薄层色谱和 纸色谱。