植物组织培养技术教案23
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3、初代培养
茎尖在MS+BA0.5mg／L+NAA0.1mg／L+2%糖（pH5.8）的培养基、温度21～25℃、光强2000～3000 Lx、光照时间12h/d的条件下，接种后2～3周形成愈伤组织，4～5周出现绿色芽点，3～6月长成2～3cm小芽。
4、无病毒苗的鉴定
●指示植物汁液鉴定在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。
⑤培养鉴定把植株放在15～24℃的防虫温室中，一般5～10d即可发病。接种过的植株必须定期检查，并记录症状和出现日期。
●指示植物嫁接鉴定法通过嫁接传播病毒来进行鉴定。嫁接方法有枝条嫁接和块茎嫁接两种。枝条嫁接与一般使用的方法相似，可把马铃薯的病枝嫁接到鉴别寄主上去。块茎嫁接是马铃薯病毒工作中常用的方法，取病块茎和健康块茎若干，以13.5mm直径的打孔器，由病块茎上打出一不带芽眼的柱状组织；再用13mm直径的打孔器由健康块茎上打下一带芽眼的柱状组织。把病块茎上打的病组织放入健康块茎的孔洞中，病组织的直径稍大，以便组织间能紧密接触，病组织的维管束应与健康块茎的对齐，有利于愈合传病。嫁接好的茎浸入熔化的低熔点石蜡中，以覆盖受伤面，分别播种在花盆中，观察植株的发病情况。
剪取1～2cm长的芽，剥去易除叶片，在自来水下冲洗1h左右，于超净工作台上进行消毒灭菌。先用75%酒精迅速浸润组织，再用2%次氯酸钠溶液浸泡5～10min，然后用无菌水冲洗2～3次。把消毒好的芽放在解剖镜下进行仔细剥离，剥去幼叶和叶原基，露出圆滑的半球形生长点，用解剖刀仔细切取带有1～2个叶原基的茎尖（0.2～0.3mm)，迅速接种到培养基上。
植物组织培养技术教案23
课题
（教学内容）
第六节主要经济植物组织培养技术
五、马铃薯的脱毒与快繁技术
课时
2
授课时间
授课班级
教学目标
能够在生产实践中运用茎尖培养脱毒的方法和技术。
教学重点
茎尖脱毒、快繁方法和技术
教学难点
茎尖脱毒、快繁方法和技术
课型
新授课
教学方法
讲授法
教学过程
新课导入：
植物脱毒的病毒病仅次于真菌类病害，对农业生产造成了巨大的损失，如何通过一些技术手段来达到去除植物体内病毒，恢复种性或进行生产，这就是植物脱毒技术。
（二）脱毒技术
1、获取外植体材料
●直接从田间采下6～8cm的顶芽或腋芽，置实验室的营养液中生长，2～3周后除去顶芽，以促使腋芽生长，当腋芽长至1～2cm时，切取腋生枝作为外植体。
●可选择具有品种典型性状的薯块，在室内播于土箱、沙箱中进行无菌发芽，叶未充分展开时就可剪取粗壮顶芽为外植体。
2、外植体消毒灭菌与接种
③接种液制备叶片洗净后，在消毒研钵中研成糊状，用消毒纱布滤出汁液，再以蒸馏水或0.lmol/L的磷酸缓冲液稀释10倍作为接种物，以防过浓的汁液对鉴定寄主产生伤害。
④接种方法先在要接种的植物叶面上，用喷粉器喷布600目的金钢砂，然后把左手心紧靠在要接种叶片的背面，以右手食指蘸取接种液，均匀的在叶正面擦过，以不造成叶片产生伤痕为度。5min后把叶面上多余接种物用水冲去，放置于温室等待发病。
提出引导性问题：请大家说说马铃薯如何进行脱毒、快繁及微型薯生产？
新课讲述：
五、马铃薯的脱毒与快繁技术
（一）培养意义
马铃薯为茄科茄属，一年生喜冷凉草本块茎植物，是世界第四大作物。
由于长期的块茎繁殖，使马铃薯的病毒危害特别严重，直接影响其产量和品质。目前国内外脱毒种薯产量还远远不能满足种植脱毒马铃薯的要求，在国内脱毒薯的种植面积一般仅有当地马铃薯的10～50%，因此脱毒马铃薯的培育与繁育仍有着广阔的市场空间。
讨论：马铃薯的脱毒培养与其他植物的区别是什么？
思考：马铃薯脱毒苗的扦插繁殖与切段繁殖的区别是什么？
思考：生产微型薯为什么要用GA33mg/L+NAA 5mg/L浸泡茎段？
板书
设计
五、马铃薯的脱毒与快繁技术
（一）培养意义
（二）脱毒技术
1、获取外植体材料
2、外植体消毒灭菌与接种
3、初代培养
4、无病毒苗的鉴定
2、温室生产微型薯
将三角瓶内的脱毒苗以单芽茎段或双芽茎段扦插到蛭石中，扦插时用GA33mg/L+NAA 5mg/L浸泡茎段，在人工调控的温度和光照条件下，经60～90d即可收获。
小结：茎尖脱毒、快繁、微型薯生产
学生活动：
提出问题：请同学们说说马铃薯脱毒培养的意义？
思考：马铃薯外植体消毒灭菌应注意什么？
（三）快速繁殖技术
1、直接移栽利用块茎繁殖
这是常用的方法。把少量无病毒小苗直接移入无虫网室的土壤中，利用产生的块茎继续繁殖，每季进行严格的病毒鉴定，一旦发现受病毒侵染，即行淘汰。将经过5～6次繁殖的无病毒块茎作一级原种供给大田繁育体系进一步扩大繁殖。
2、扦插繁殖
把无病毒植株栽于无虫网室中，1～2月以后切顶芽作插枝。切了顶芽能促侧芽产生，因此在不长时间里，可在一株无病毒植物上同时切取十多个插枝。将插枝的最下面1片叶除去，插入经过消毒的沙壤土中，插入深度为两个节间。维持土壤湿润，1周左右，插枝就能产生新根。
3、组织培养切段繁殖此法繁Байду номын сангаас速度快，并且完全避免了所有病源再侵染的可能。具体的方法是：将无病毒植株切段，每段带一个叶片，将切段放在培养基上，在培养间里继续培养，5d左右就能长出新根，接着从叶腋内长出新芽。
(四)微型薯生产技术
1、试管生产微型薯
植株长到4～5cm时转入MS+香豆素50～100mg/L+BA3～5mg/L+蔗糖8%+活性炭0.5%的固体培养基上。温度22℃，黑暗条件下即可诱导出微型种薯。
（三）快速繁殖技术
1、直接移栽利用块茎繁殖
2、扦插繁殖
3、组织培养切段繁殖
(四)微型薯生产技术
作业
布置
1、脱毒马铃薯如何培育？
教学反思：
鉴别寄主的选择马铃薯常用的鉴别指示植物（鉴别寄主）有苋科的千日红，茄科的洋酸浆、毛叶蔓陀萝等，应根据鉴定病毒的种类选择合适的鉴别指示植物。
②鉴别寄主的准备系统发病的鉴别寄主一般用具有3～5片真叶的幼苗；局部发病的鉴别寄主用充分展开的叶片。鉴别寄主应培养在温度为15～25℃的温室内，每个病毒样品可接种3株，并做好标记。
茎尖在MS+BA0.5mg／L+NAA0.1mg／L+2%糖（pH5.8）的培养基、温度21～25℃、光强2000～3000 Lx、光照时间12h/d的条件下，接种后2～3周形成愈伤组织，4～5周出现绿色芽点，3～6月长成2～3cm小芽。
4、无病毒苗的鉴定
●指示植物汁液鉴定在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。
⑤培养鉴定把植株放在15～24℃的防虫温室中，一般5～10d即可发病。接种过的植株必须定期检查，并记录症状和出现日期。
●指示植物嫁接鉴定法通过嫁接传播病毒来进行鉴定。嫁接方法有枝条嫁接和块茎嫁接两种。枝条嫁接与一般使用的方法相似，可把马铃薯的病枝嫁接到鉴别寄主上去。块茎嫁接是马铃薯病毒工作中常用的方法，取病块茎和健康块茎若干，以13.5mm直径的打孔器，由病块茎上打出一不带芽眼的柱状组织；再用13mm直径的打孔器由健康块茎上打下一带芽眼的柱状组织。把病块茎上打的病组织放入健康块茎的孔洞中，病组织的直径稍大，以便组织间能紧密接触，病组织的维管束应与健康块茎的对齐，有利于愈合传病。嫁接好的茎浸入熔化的低熔点石蜡中，以覆盖受伤面，分别播种在花盆中，观察植株的发病情况。
剪取1～2cm长的芽，剥去易除叶片，在自来水下冲洗1h左右，于超净工作台上进行消毒灭菌。先用75%酒精迅速浸润组织，再用2%次氯酸钠溶液浸泡5～10min，然后用无菌水冲洗2～3次。把消毒好的芽放在解剖镜下进行仔细剥离，剥去幼叶和叶原基，露出圆滑的半球形生长点，用解剖刀仔细切取带有1～2个叶原基的茎尖（0.2～0.3mm)，迅速接种到培养基上。
植物组织培养技术教案23
课题
（教学内容）
第六节主要经济植物组织培养技术
五、马铃薯的脱毒与快繁技术
课时
2
授课时间
授课班级
教学目标
能够在生产实践中运用茎尖培养脱毒的方法和技术。
教学重点
茎尖脱毒、快繁方法和技术
教学难点
茎尖脱毒、快繁方法和技术
课型
新授课
教学方法
讲授法
教学过程
新课导入：
植物脱毒的病毒病仅次于真菌类病害，对农业生产造成了巨大的损失，如何通过一些技术手段来达到去除植物体内病毒，恢复种性或进行生产，这就是植物脱毒技术。
（二）脱毒技术
1、获取外植体材料
●直接从田间采下6～8cm的顶芽或腋芽，置实验室的营养液中生长，2～3周后除去顶芽，以促使腋芽生长，当腋芽长至1～2cm时，切取腋生枝作为外植体。
●可选择具有品种典型性状的薯块，在室内播于土箱、沙箱中进行无菌发芽，叶未充分展开时就可剪取粗壮顶芽为外植体。
2、外植体消毒灭菌与接种
③接种液制备叶片洗净后，在消毒研钵中研成糊状，用消毒纱布滤出汁液，再以蒸馏水或0.lmol/L的磷酸缓冲液稀释10倍作为接种物，以防过浓的汁液对鉴定寄主产生伤害。
④接种方法先在要接种的植物叶面上，用喷粉器喷布600目的金钢砂，然后把左手心紧靠在要接种叶片的背面，以右手食指蘸取接种液，均匀的在叶正面擦过，以不造成叶片产生伤痕为度。5min后把叶面上多余接种物用水冲去，放置于温室等待发病。
提出引导性问题：请大家说说马铃薯如何进行脱毒、快繁及微型薯生产？
新课讲述：
五、马铃薯的脱毒与快繁技术
（一）培养意义
马铃薯为茄科茄属，一年生喜冷凉草本块茎植物，是世界第四大作物。
由于长期的块茎繁殖，使马铃薯的病毒危害特别严重，直接影响其产量和品质。目前国内外脱毒种薯产量还远远不能满足种植脱毒马铃薯的要求，在国内脱毒薯的种植面积一般仅有当地马铃薯的10～50%，因此脱毒马铃薯的培育与繁育仍有着广阔的市场空间。
讨论：马铃薯的脱毒培养与其他植物的区别是什么？
思考：马铃薯脱毒苗的扦插繁殖与切段繁殖的区别是什么？
思考：生产微型薯为什么要用GA33mg/L+NAA 5mg/L浸泡茎段？
板书
设计
五、马铃薯的脱毒与快繁技术
（一）培养意义
（二）脱毒技术
1、获取外植体材料
2、外植体消毒灭菌与接种
3、初代培养
4、无病毒苗的鉴定
2、温室生产微型薯
将三角瓶内的脱毒苗以单芽茎段或双芽茎段扦插到蛭石中，扦插时用GA33mg/L+NAA 5mg/L浸泡茎段，在人工调控的温度和光照条件下，经60～90d即可收获。
小结：茎尖脱毒、快繁、微型薯生产
学生活动：
提出问题：请同学们说说马铃薯脱毒培养的意义？
思考：马铃薯外植体消毒灭菌应注意什么？
（三）快速繁殖技术
1、直接移栽利用块茎繁殖
这是常用的方法。把少量无病毒小苗直接移入无虫网室的土壤中，利用产生的块茎继续繁殖，每季进行严格的病毒鉴定，一旦发现受病毒侵染，即行淘汰。将经过5～6次繁殖的无病毒块茎作一级原种供给大田繁育体系进一步扩大繁殖。
2、扦插繁殖
把无病毒植株栽于无虫网室中，1～2月以后切顶芽作插枝。切了顶芽能促侧芽产生，因此在不长时间里，可在一株无病毒植物上同时切取十多个插枝。将插枝的最下面1片叶除去，插入经过消毒的沙壤土中，插入深度为两个节间。维持土壤湿润，1周左右，插枝就能产生新根。
3、组织培养切段繁殖此法繁Байду номын сангаас速度快，并且完全避免了所有病源再侵染的可能。具体的方法是：将无病毒植株切段，每段带一个叶片，将切段放在培养基上，在培养间里继续培养，5d左右就能长出新根，接着从叶腋内长出新芽。
(四)微型薯生产技术
1、试管生产微型薯
植株长到4～5cm时转入MS+香豆素50～100mg/L+BA3～5mg/L+蔗糖8%+活性炭0.5%的固体培养基上。温度22℃，黑暗条件下即可诱导出微型种薯。
（三）快速繁殖技术
1、直接移栽利用块茎繁殖
2、扦插繁殖
3、组织培养切段繁殖
(四)微型薯生产技术
作业
布置
1、脱毒马铃薯如何培育？
教学反思：
鉴别寄主的选择马铃薯常用的鉴别指示植物（鉴别寄主）有苋科的千日红，茄科的洋酸浆、毛叶蔓陀萝等，应根据鉴定病毒的种类选择合适的鉴别指示植物。
②鉴别寄主的准备系统发病的鉴别寄主一般用具有3～5片真叶的幼苗；局部发病的鉴别寄主用充分展开的叶片。鉴别寄主应培养在温度为15～25℃的温室内，每个病毒样品可接种3株，并做好标记。