多重耐药菌鉴别与分析

多重耐药菌：

1.怎么确诊多重耐药菌？方法？

2.你们多重耐药菌都报哪些？怎么报？

3.对检出率较高的多重耐药菌是否做同源性分析及耐药基因检测？

4.怎样总结多重耐药菌分析？多长时间公布一次？你们医院多重耐药菌联席会能定期召开吗？

根据群里的讨论，总结如下：

所谓多重耐药菌：是指对临床使用的三类或三类以上的抗菌药物同时呈现耐药的细菌。

多重耐药（MDR）：对三类或三类以上抗菌药物（每类中至少一种）的获得性（而非天然的）不敏感（中介或耐药）

泛耐药（XDR）：对除了1-2类抗菌药物之外的所有其他抗菌药物种类（每类中至少有一种）不敏感，也就是只对1-2类抗菌药物敏感。

全耐药（PDR):对所有抗菌药物种类中的所有药物不敏感。

耐药机制检测方法

1、MRSA：对苯唑西林和（或）头孢西丁耐药的金黄色葡萄球菌

2、VRE：琼脂筛选法能检测全部的VRE型，为临床常规筛选VRE的既简便有可靠的方法；纸片扩散法（需验证万古霉素mic）、自动化药敏检测法及分子生物学法

3、CR-ABA、CR-PAE:根据美国临床标准化委员会CLSI规定，抗菌药物敏感试验可采用K-B纸片扩散法或MIC法。

对于XDRAB或PDRAB菌株建议采用MIC法测定药物敏感性，给临床提供更有价值的用药参考。对于XDRAB或PDRAB感染，推荐根据临床需要进行联合药敏试验，如琼脂棋盘稀释法可精确判断两药是否有协同、相加或拮抗作用，但该方法较为繁琐；也可采用K-B法，将待测药敏纸片放置相邻、距离合适的位置，次日观察两个纸片间抑菌圈是否有扩大；或用Etest法，把Etest条在合适的位置交叉叠放，可粗略观察药物间是否有协同作用。

4、CRE:纸片扩散法及MIC法，不论用哪种方法，都要求进行产碳青霉烯酶的验证方法，一般有三种方法：改良HOdge实验、EDTA协同实验、Etest条实验（IMI和IMI+EDTA协同实验）

因为目前常见多重耐药菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耐万古霉素肠球菌（VRE）、产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）细菌、耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌（CRE）（如产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶[NDM-1]或产碳青霉烯酶[KPC]的肠杆菌科细菌）、耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌（CR-AB）、多重耐药/泛耐药铜绿假单胞菌（MDR/PDR-PA)和多重耐药结核分枝杆菌等。

目前国内大多医院在国家卫计委下发医院感染质量控制指标（监测MRSA，VRE，CRE，CR-AB，CR-PA五种）的基础上，结合自己医院的实际情况一般上报MRSA、CRE、VRE、CR-AB、CR-PA、ESBLs以及符合定义的其他阴性杆菌。报告的程序：发现多重耐药菌后，在报告单注：多重耐药，请隔离，再分别填写多重耐药报表（院感科留档）、多重耐药联系表（微生物联系临床用），电话联系院感科及临床护理人员，做好登记转告相关医护人员，做好隔离措施，院感科根据耐药报表（微生物提供）去临床督查。处理流程方面，因各个医院的实际情况不同有所不同。

（*因ESBLs目前确实太多，给临床带来很多负担，不能一一都做到隔离，目前很多医院都只是纳入多耐菌的统计，而未纳入隔离的要求。这方面或许不规范，请专家指正！）

目前大多基层医院都没有投入设备做同源性分析及耐药基因检测。只有较少的大型医院、科研机构和CDC能做到。建议可以多方合作，甚至送第三方检测机构进行医院感染疑似暴发或医院感染暴发时的同源性分析。比如：检测多耐

药的鲍曼的同源性及β内酰胺类和氨基糖甙类耐药基因，MRSA测多位点耐药基因。

医院感染疑似暴发：指在医疗机构或其科室的患者中，短时间内出现3例以上临床症候群相似、怀疑有共同感染源的感染病例；或者3例以上怀疑有共同感染源或感染途径的感染病例现象

医院感染暴发：指在医疗机构或其科室的患者中，短时间内发生3例以上同种同源感染病例的现象。

细菌同源性研究－分子生物学方法

随机引物多态性（RAPD）

ERIC-PCR

脉冲场凝胶电泳（PFGE）

多位点序列分析（MLST ）

多位点重复序列分析（rep-PCR）

专家共识：PFGE是首选方法。RAPD重复性和实验室间可比性差。MLST分辨力不高。

推荐：简单但适用的方法-随机引物多态性（RAPD）

RAPD技术是以8-10bp的随机寡核苷酸片段作为引物，对基因组进行PCR扩增，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳或PAGE电泳检测，研究DNA的多态性。

优点：

(1)不需要了解研究对象基因组的序列。

(2)无需专门设计反应引物，随机设计长度为8-10个碱基的核苷酸序列就可应用。

(3)操作简便，不涉及分子杂交、放射自显影等技术。

(4)需要很少的DNA样本。

(5) 能够客观地提示供试材料之间DNA的差异。

局限性：

易受反应条件的影响，分辨力较低。

（若有不对之处，请专家们指正！谢谢！）

医院根据自己的实际定期召开一次多重耐药菌联席会，可由分管院长主持。医院感染管理科牵头，检验科、药学部、重点科室主任等参加，参会人员需达到全部委员的2/3，方为有效。会后可由医院感染管理科将议题及改进情况记录。分享一下（满思金）山东滕州中心人民医院的模式，若有不足，请专家指正！谢谢！

1.感染管理科负责按时召集有关部门人员召开联席会议；制定会议议程；收集多重耐药菌医院感染有关资料；通报各科室多重耐药菌医院感染情况。

2.药学部负责通报全院抗菌药物使用情况；根据多重耐药菌的耐药情况制定指导临床用药的实施意见。

3.微生物实验室通报多重耐药菌的名称、耐药菌谱，多重耐药菌的科室分布，公布临床常见分离细菌菌株及其药敏情况等。

4.与会人员共同讨论全院多重耐药菌医院感染趋势，制定预防与控制具体措施及合理使用抗菌药物的指导意见。

（补充下：可定期由院感科以此会议为内容发布院感通告，以文件形式下发到各个科室，以备案）

以上总结源于临床微生物论坛1~5群的老师们积极讨论，感谢老师们的参与！希望此文的整理能给老师们带去些许帮助！

参考资料：

胡必杰教授主编《多重耐药菌感染控制最佳实践》

[微生物学]MDR/XDR/PDR多重耐药菌国际标准定义—权威版—铜仁市院感质控中心