胶体金试纸条的制备培训课件
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胶体金培训44页PPT
3.胶体金检测卡的组成
3.1结构：主要由样品垫、金垫、硝酸纤维素膜（NC 膜），吸水垫4个部分组成，从下至上依次首尾互相衔 接，粘贴在PVC底板上。
3.胶体金检测卡的组成
3.2作用： ⑴样品垫：检测样本滴加位置，对检测样本具有一定的
过滤和缓冲作用，降低样本中离子强度或者酸碱度对 检测结果的干扰。
pH调至8.0 标记抗体
BSA或PEG
封闭
12000转/分
离心
复溶
封闭多余的游离胶体金， 稳定胶体金标记物 将胶体金标记物沉淀
将胶体金标记物重新溶解
3.胶体金检测卡的组成
（3）金垫制备 将标记好的金标复合物喷涂在玻璃纤维素膜上，在 干燥间或烘箱中37℃将其烘干。 （4）样品垫制备 将样品垫处理液浸涂在玻璃纤维素膜上，在干燥间 或烘箱中37℃将其烘干。
T:Clen-BSA Y2:羊抗鼠抗体
预先在硝酸纤维素膜上的检测线（T）和质控线（C） 分别包被上盐酸克伦特罗抗原（Clen-BSA）和羊抗 鼠二抗，将胶体金标记克伦特罗免疫鼠抗体并固着在 玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。将检测的尿样 滴加在样品垫上，当尿样中盐酸克伦罗达到一定的浓 度时，即于固着在载体上的胶体金标记抗体结合，从 而阻止其与固着在检测线（T）的抗原结合，无法在 检测区形成紫红色条带。若尿样中不含盐酸克伦特罗 （Clen)或其代谢物时，胶体金标记抗体与检测区的 抗原结合，在检测线（T）形成紫红色条带。样品和 金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包 被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫 红色条带，证明本检测卡有效。无论尿样中是否含有 盐酸克伦特罗（Clen)在质控线（C）均应出现一条 紫红色条带。
⑵金垫：将胶体金标记抗体通过干燥固定在玻璃纤维素 膜上，是追踪抗体与抗原的反应。
胶体金介绍ppt课件-PPT课件
3、PVC板 PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。 PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
评价一个试剂的标准
评价一个试剂好坏的标准有： 1、灵敏度 2、特异性 3、背景 4、吸样和上样 5、和对照试剂比较 6、市场反馈 7、检验机构的评价
结果判读
怀孕
与常规诊断方法相比
优点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟。 简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 业人员，携带方便，可随时随地进行。 廉价：单个测试条成本极低 可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。 稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。 检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液， 因而适合各种检查 缺点 定量问题 灵敏度问题
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔
价格
最经济
3-5元
5-10元
>$5.0
（国外价格）
使用方法
1.试纸：将试纸条标： “MAX”一端浸入尿液，尿液液面请勿 超过标志线，待尿液爬至观察区后取出试纸条平放。3-5分钟 观察结果，10分钟后无效。 2.用吸管吸取尿液，加入4滴到检测卡的加样孔中，3-5分钟观察 结果，10分钟后无效。 3.将尿液滴加到试纸上或直接淋在检测笔的吸尿棒上，尿液爬上 后平放，10分钟观察。
胶体金技术简介 ppt课件
稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存
检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测 尿或唾液,或处理后的组织等固体样品
6
免疫层析法应用领域
类别 人类医学
农牧业 环境 食品安全
应用领域
检测的物质
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭
自检；商检系统；边检 口岸；公安系统.
女性妊娠（hCG,LH等)
传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等）
心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感、兽瘟疫等）
边检口岸,农牧类院系
和研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机 有害物质超标 构
喷点法与浸泡法的比较 (AJQ3000喷头)
1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘
效应 3.生产方便性
20
样品垫
材料选择
各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100
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吸水纸
吸水效率 进口与国产纸的差异
一步法
固相系统,常温保存
开发周期长,使用方便
20-40nm 胶体金 大孔径膜 侧向流动
免疫渗滤法
多步法
液体/固相系统 液体需要冷冻保存 开发周期短,使用不方便
10-15nm 胶体金 小孔径膜 竖向流动
4
免疫层析法技术优势:简单/现场/快速
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）
胶体金试纸条检测技术ppt
-
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合（免疫金复合物中的单克隆 抗 体 为 小 鼠 IgG）， 而 显出红 色质控线条（R）。
-
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
-
胶体金快速诊断技术的特点
简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就会出 结果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR 需要 时间更长。
H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
-
谢谢观看!
-
快乐工作，快乐生活！ 感谢您的聆听！ ！
欢迎批评指导！！
2019
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18
-
➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
-
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功 能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质 等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非 共价结合，形成胶体金标记物。
-
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
-
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易 判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这 决定了它具有很好的特异性。
-
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合（免疫金复合物中的单克隆 抗 体 为 小 鼠 IgG）， 而 显出红 色质控线条（R）。
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测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
-
胶体金快速诊断技术的特点
简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就会出 结果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR 需要 时间更长。
H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
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➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
-
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功 能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质 等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非 共价结合，形成胶体金标记物。
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二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
-
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易 判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这 决定了它具有很好的特异性。
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胶体金试纸条的制备_图文
4、5 号管颜色无变化与对照颜色一致，最低蛋白量即为4 号管的蛋白量。
最终结合（McAb）
• 取100ml金溶液，调整pH值至8.2 • 调整滤过和离心的抗体溶液（0.1μg/μl）至
pH8.2 • 当金溶液在快速搅拌时要逐滴加入定量的
抗体（蛋白最小浓度量加10%即蛋白稳定 量），大约5分钟加完 • 在金标溶液中加入10ml滤过的10％BSA至 终浓度为1%，并轻轻搅拌10分钟。
• 在兽医疫病检测中的应用
Bhakar等应用相应的单抗标金，建立了阿米巴虫抗原检测方法。Kameyama 等以牛病腹泻病毒的 NS3 蛋白制备单克隆抗体，并用胶体金标记单抗制备胶 体金试纸，用于牛病毒性腹泻抗原的检测。Kang等以同样方式建立了猪轮状 病毒胶体金抗原检测方法，并用于腹泻仔猪轮状病毒的鉴别诊断。Li等应用 实验室制备的两种 PRRSV 单抗，以双单抗夹心的模式，组装成 PRRSV 抗 原检测试纸，作为 PRRSV 感染的诊断工具。
135s一般用在双抗体夹心法，180s一般用在竞争法.
吸收垫(Absorbent Pad)：
提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸 收纸；
吸收纸的作用： 主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及 使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。
片材：
不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了 产品的货架期。
• ⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6～10nm大小的金 颗粒；
• ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒 ；
• ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大 小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
最终结合（McAb）
• 取100ml金溶液，调整pH值至8.2 • 调整滤过和离心的抗体溶液（0.1μg/μl）至
pH8.2 • 当金溶液在快速搅拌时要逐滴加入定量的
抗体（蛋白最小浓度量加10%即蛋白稳定 量），大约5分钟加完 • 在金标溶液中加入10ml滤过的10％BSA至 终浓度为1%，并轻轻搅拌10分钟。
• 在兽医疫病检测中的应用
Bhakar等应用相应的单抗标金，建立了阿米巴虫抗原检测方法。Kameyama 等以牛病腹泻病毒的 NS3 蛋白制备单克隆抗体，并用胶体金标记单抗制备胶 体金试纸，用于牛病毒性腹泻抗原的检测。Kang等以同样方式建立了猪轮状 病毒胶体金抗原检测方法，并用于腹泻仔猪轮状病毒的鉴别诊断。Li等应用 实验室制备的两种 PRRSV 单抗，以双单抗夹心的模式，组装成 PRRSV 抗 原检测试纸，作为 PRRSV 感染的诊断工具。
135s一般用在双抗体夹心法，180s一般用在竞争法.
吸收垫(Absorbent Pad)：
提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸 收纸；
吸收纸的作用： 主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及 使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。
片材：
不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了 产品的货架期。
• ⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6～10nm大小的金 颗粒；
• ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒 ；
• ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大 小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
实验四 胶体金试纸条检测技术ppt
-
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合（免疫金复合物中的单克隆 抗 体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色质控线条（R）。
-
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
-
胶体金快速诊断技术的特点
简 捷 快 速 ： 操 作 简 单 ， 一 般 只 要 5 -10min 就会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h， PCR 需要时间更长。
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢 向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用 胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗 体。
➢最常用的是双抗夹心法检测抗原 -
胶体金试纸条示意图
样品垫
连ห้องสมุดไป่ตู้垫 （胶体金垫）
质检线
吸收垫
背衬 （底板）
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼 很容易判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标 记，这决定了它具有很好的特异性。
-
胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、 新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫 病、恙虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
-
实验四 胶体金试纸条诊断技术
一、简 介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗 滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫 学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素 （ HCG） 的 测 定 和 乙 型 肝 炎 病 毒 表 面 抗 原 （HBsAg）等检测。
-
胶 体 金 （ Colloidal gold） 是 氯 金 酸 （HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的 作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合（免疫金复合物中的单克隆 抗 体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色质控线条（R）。
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测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
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胶体金快速诊断技术的特点
简 捷 快 速 ： 操 作 简 单 ， 一 般 只 要 5 -10min 就会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h， PCR 需要时间更长。
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢 向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用 胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗 体。
➢最常用的是双抗夹心法检测抗原 -
胶体金试纸条示意图
样品垫
连ห้องสมุดไป่ตู้垫 （胶体金垫）
质检线
吸收垫
背衬 （底板）
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼 很容易判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标 记，这决定了它具有很好的特异性。
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胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、 新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫 病、恙虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
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实验四 胶体金试纸条诊断技术
一、简 介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗 滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫 学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素 （ HCG） 的 测 定 和 乙 型 肝 炎 病 毒 表 面 抗 原 （HBsAg）等检测。
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胶 体 金 （ Colloidal gold） 是 氯 金 酸 （HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的 作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于
PEDV胶体金试纸条制备
PEDV胶体金试纸条制备胶体金(colloidal gold)是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂等作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，利用它在碱性环境下带负电荷的性质，与蛋白质分子的正电荷基团相互吸引而形成牢固结合，可以将胶体金与抗体蛋白以及其他一些蛋白相结合，进行示踪研究。
目前已成为继荧光素、放射性同位素和酶之后，在免疫标记技术中较为常用的一种非放射性示踪剂。
1971年，Faulk和Taylor首先报道了将胶体金与抗体结合，应用于电镜水平的免疫细胞化学研究。
1974年，Romano等用胶体金标记抗球蛋白抗体，建立间接免疫金染色法。
之后，胶体金作为以后总新型免疫标记技术发展很快。
1978年，Geohegan等将胶体金标记抗体用于普通光镜下检测B淋巴细胞表面膜免疫球蛋白，建立了光镜水平的免疫金染色(immunogold staining，IGS)，但是所需的胶体金颗粒必须大于20nm，并且标记物浓度要高，才能获得阳性结果。
1981年Danscher等用银显影方法增强了金颗粒的可见度，并提高了灵敏度。
1983年Holgate等将免疫金染色与银显影技术相结合，称之为免疫金银染色法(immunogold silver staining，IGSS)。
由于IGS和IGSS两种方法具有试剂制备简便，特异性强、灵敏度高、应用范围广，并可以用于双重和多重标记等特点，被广泛应用于医学和细胞生物学研究领域，是目前免疫组织化学技术中常用的敏感方法之一。
近年来胶体金标记技术进一步发展应用于免疫转印、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金／银染色(dot IGS／IGSS)以及斑点金免疫渗滤测定法(dot immunogold filtration assay，DIGFA)等多种标记免疫检测方法。
本实验中应用柠檬酸钠还原法制备颗粒大小为20nm．30nm大小的胶体金，用于与制备纯化的抗体相结合，为制备检测·猪流行性下痢(PEDv)病毒试纸条做准备。
实验六 胶体金免疫层析技术ppt课件
质检线
吸收垫
背衬 （底板）
检测线
硝酸纤维素膜
实验六 胶体金免疫层析技术
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测定
测定时将试纸条下端浸入液体标 本中，下端吸水材料即吸取液体 向上端移动，流经C处时使干片 上的免疫金复合物复溶，并带动 其向膜条渗移。
实验六 胶体金免疫层析技术
9
测定
若标本中有待测特异抗原，即可 与免疫金复合物中的抗体结合， 此抗原抗体复合物流至测试区即 被固相抗体捕获，在膜上显出红 色反应线条（T）。
实验六 胶体金免疫层析技术
10
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合 （免疫金复合物中的单克隆抗体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色 质 控 线条（R）。
实验六 胶体金免疫层析技术
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测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
实验六 胶体金免疫层析技术
实验六 胶体金免疫层析技术
3
简介
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠） 的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带 负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态，故称胶体金。
实验六 胶体金免疫层析பைடு நூலகம்术
4
简介
胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗
实验六胶体金免疫层析技术2实验目的?掌握胶体金试纸条诊断技术的原理使用方法及结果的判定实验六胶体金免疫层析技术3简介胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成该技术是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术最先用于人绒毛膜促性腺激素hcg的测定和乙型肝炎病毒表面抗原hbsag等检测
胶体金试纸条检测技术(课堂PPT)
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H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
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欢迎批评指导！！
2019
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➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
4
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功 能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质 等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非 共价结合，形成胶体金标记物。
5
➢胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球
形，大小均一，无棱角。 ✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状
各异。
6
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易 判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这 决定了它具有很好的特异性。
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胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、 犬细小病毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙 虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
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二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
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➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
4
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功 能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质 等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非 共价结合，形成胶体金标记物。
5
➢胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球
形，大小均一，无棱角。 ✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状
各异。
6
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易 判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这 决定了它具有很好的特异性。
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胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、 犬细小病毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙 虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
7
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
胶体金试纸条的制备 ppt课件
颗粒； • ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒； • ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大
小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。
（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。
（4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白
质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由 5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入 一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述 各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依表顺序进行。
发现 1、2 号管出现黑色沉淀且红色全部褪去，3 号管虽 然能保持红色，但是管底也出现了一定量的黑色沉淀，而
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 1％柠檬酸 粒径 三钠加入量 （nm） （ml）*
16
2.00
24.5 1.50
41
1.00
71.5 0.70
呈色
橙色 橙红 红色 紫色
λmax
518nm 522nm 525nm 535nm
小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。
（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。
（4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白
质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由 5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入 一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述 各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依表顺序进行。
发现 1、2 号管出现黑色沉淀且红色全部褪去，3 号管虽 然能保持红色，但是管底也出现了一定量的黑色沉淀，而
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 1％柠檬酸 粒径 三钠加入量 （nm） （ml）*
16
2.00
24.5 1.50
41
1.00
71.5 0.70
呈色
橙色 橙红 红色 紫色
λmax
518nm 522nm 525nm 535nm
胶体金检测技术PPT学习教案
规定尿液中盐酸克伦特罗第的1胶0页体/共2金6页免疫层析测定方法。适用 于猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。
培训资料
-------结果判定依据
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出 现红色 条带， 说明检 测卡有 效。 如阴性对照不出现红色条带，或阳 性对照 出现红 色条带 ，出现 任何一 种现象 或两种 同时出 现，说 明检测 卡失效 。 待检尿样检测区出现红色条带为阴 性 待检尿样检测区不出现红色条带为 阳性 阳性结果 样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸 克伦特 罗。
第22页/共26页
培训资料
六、发展方向(Developing)
1.标记技术的探索 顺磁粒子标记、量子点标记 免疫反应信号转化为电子信号模式
第23页/共26页
2.生物传感器
培训资料
第24页/共26页
谢谢！
第25页/共26页
第2页/共26页
培训资料
4.1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴 细胞表面抗原。
5.1981年Danscher建立了银显影液增强光镜下金颗 粒的免疫金银染色方法
（Immunogold-silver staining,IGSS）。
6.1986年Fritz（美，生物）等人在IGSS法基础上成 功地进行了彩色IGSS的染色法,使得检测结果更加鲜 艳夺目—这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！
第4页/共26页
培训资料
在溶液中金颗粒呈 圆形,表面带有负电 荷,由于静电的排斥 力,使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
图1 金颗粒示意图
第5页/共26页
3. 胶体金试纸条的构造 样品垫 PVC底板
培训资料
胶体金垫
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-------结果判定依据
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出 现红色 条带， 说明检 测卡有 效。 如阴性对照不出现红色条带，或阳 性对照 出现红 色条带 ，出现 任何一 种现象 或两种 同时出 现，说 明检测 卡失效 。 待检尿样检测区出现红色条带为阴 性 待检尿样检测区不出现红色条带为 阳性 阳性结果 样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸 克伦特 罗。
第22页/共26页
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六、发展方向(Developing)
1.标记技术的探索 顺磁粒子标记、量子点标记 免疫反应信号转化为电子信号模式
第23页/共26页
2.生物传感器
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第24页/共26页
谢谢！
第25页/共26页
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4.1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴 细胞表面抗原。
5.1981年Danscher建立了银显影液增强光镜下金颗 粒的免疫金银染色方法
（Immunogold-silver staining,IGSS）。
6.1986年Fritz（美，生物）等人在IGSS法基础上成 功地进行了彩色IGSS的染色法,使得检测结果更加鲜 艳夺目—这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！
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培训资料
在溶液中金颗粒呈 圆形,表面带有负电 荷,由于静电的排斥 力,使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
图1 金颗粒示意图
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3. 胶体金试纸条的构造 样品垫 PVC底板
培训资料
胶体金垫
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注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。
（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。
（4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
免疫胶体金技术的特点
优点：
• 检测方法简单而快速，数分钟即可得出结果； • 不需仪器设备，操作人员不需特殊训练； • 试剂稳定，适用于单份测定； • 无污染； • GICA的特点是单一试剂，一步操作。小型实验室
即有条件开发生产。 • 干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。
成为目前“病人身边检验”（point-of-care testing，POCT） 中广为应用的方法。
颗粒； • ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒； • ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大
小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
子显微镜下观察金离子呈高电子密度。
1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究 Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结
合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。
1974------实现间接免疫金染色法 Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了
间接免疫金染色法
免疫胶体金技术简介
Immune colloidal gold technique 2015-1-27
目录
1
胶体金技术的发展
2
胶体金技术的种类
3
胶体金的合成
4
胶体金的标记与纯化
5 胶体金免疫层析法试剂的组成
6 胶体金免疫层析试纸的检测模式
7 胶体金免疫层析试纸的应用
胶体金技术的发展
1939-----雏形 Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电
胶体金技术的种类及优点
快速免疫金渗滤法(immuogold filtration assay ,IGFA) 即穿流式(flow through)的固相膜免疫测定。 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前
者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一 片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜， 标记结合物为免疫金。
不足：
金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控 制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂 的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。 其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料 的开发与应用。
最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能 制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生 产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的 GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其 精密度和准确性均符合定量测定要求。
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一 般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢 固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标记蛋白质的等电点略偏碱。
需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH可 能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 1％柠檬酸 粒径 三钠加入量 （nm） （ml）*
16
2.00
24.5 1.50
41
1.00
71.5 0.70
呈色
橙色 橙红 红色 紫色
λmax
518nm 522nm 525nm 535nm
胶体金的质量鉴定
透射电镜下观察其颗粒大小及均匀度
理想的金颗粒大小基本相等， 均匀一致，无椭圆形及多角 形的金颗粒存在。
优质金颗粒和劣质金颗粒
劣质金外形不均一，且
非球形，有凝集现象， 颗粒间变异系数较大 。
胶体金的蛋白标记
双电层结构保证了胶体金的稳定 性，使金颗粒始终以悬浮状态存 在。
胶体金溶液通常由呈单一分散状 态的金颗粒组成，金颗粒直径在 1-100nm 之间，而稳定的金溶液 则要求金颗粒维持在某一固定直 径不变。
蛋白通常带有多种电荷，当蛋白 带正电时，能与胶体金所带的负 电荷相互作用；而蛋白中的疏水 氨基酸能通过疏水作用将蛋白结 合至金颗粒表面；有些蛋白则可 通过半胱氨酸的巯基与金颗粒共 轭连接。
金标样本程序
将胶体金调整至正确的pH值 确定最小蛋白含量 最终结合（标记） 纯化
胶体金调整正确的pH值
定其pH即可.
常 见 蛋 白 标 记 条 件
最小蛋白用量的确定
（1）光电比色法：制备一系列不
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
免疫层析法( immunochromatogra-phy，
ICA)
是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定， 与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同，免疫层析法 中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层 析作用的横流 （lateral flow） )向另一端移动。移动过 程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者 抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分 离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金 为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。
胶体金的合成
• ①白• ②白磷还原法(1925年)经改良后，可合成5～12nm大小的
金颗粒； • ③抗坏血酸还原法(1958年)可合成6～13nm大小的金颗粒； • ④柠檬酸三钠还原法(1973年)可合成5nm、15nm、30nm、
60nm大小的金颗粒； • ⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6～10nm大小的金