胶体金试纸条的制备.

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胶体金试纸条的制备

引言概述：胶体金试纸条是一种常用的分析试剂，广泛应用于生化分析、环境监测等领域。

它以胶体金作为指示剂的主要成分，结合纸条的吸附性能，通过改变颜色来检测目标物质的存在。

本文将详细介绍胶体金试纸条的制备方法和其在分析应用中的优势。

正文内容：一、胶体金试纸条的制备方法1.胶体金的制备1.1还原法制备胶体金1.2化学合成法制备胶体金1.3生物法制备胶体金2.纸条的处理2.1选用合适的纸质材料2.2纸条的预处理2.3纸条的涂覆二、胶体金试纸条的特点和优势1.高灵敏度1.1胶体金的特殊光学性质1.2微米级纳米颗粒的高表面积1.3足够的反应时间2.简单易用2.1操作步骤简单2.2结果直观可见2.3不需要专业设备3.高选择性3.1可调控的颗粒大小和形状3.2可调控的胶体金表面性质3.3可选择性修饰纸条反应区域4.低成本4.1胶体金制备成本低4.2纸条材料成本低4.3适用于大规模生产5.广泛应用5.1生化分析5.2环境监测5.3食品安全检测5.4临床诊断三、胶体金试纸条在生化分析中的应用案例1.蛋白质分析1.1检测蛋白质的存在及浓度1.2快速筛选蛋白质结构1.3监测酶活性变化2.DNA分析2.1单核苷酸多态性检测2.2基因突变检测2.3DNA序列鉴定3.药物检测3.1药物快速筛选3.2药物代谢产物检测3.3药物治疗监测四、胶体金试纸条在环境监测中的应用案例1.水质监测1.1水中重金属离子检测1.2水中有机物污染物检测1.3水中微生物检测2.大气监测2.1空气中有害气体检测2.2空气中颗粒物检测2.3气候变化指示剂监测3.土壤监测3.1土壤中有害物质检测3.2土壤中养分成分检测3.3土壤微生物检测五、结合与总结胶体金试纸条作为一种快速、简便、低成本的分析工具，在生化分析和环境监测等领域具有广泛的应用前景。

它不仅可以满足快速检测的需要，还能提供定量和定性的分析结果。

未来随着技术的不断创新和进步，胶体金试纸条将在更多领域展现其优势和应用价值。

PCT胶体金试纸制备及其原理

先将水加热至60 ℃左右，加入Na2HPO4和PVA，冷却至室温，最后加入BSA和Triton-x100，搅拌溶解。
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5、PCT胶体金试纸样品垫和金标垫处理
样品垫和金标垫的处理方式一样，都是将切割好的样品垫（玻纤膜-有些脆，需小心）和金标垫（聚酯膜）浸泡在处理液中1小时，使其彻底湿润。（半小时需用镊子翻一次面）
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3、常用的免疫胶体金检测技术
（1）免疫胶体金光镜染色法（2）斑点免疫金渗滤法（3）胶体金免疫层析法
将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。
PCT胶体金试纸制备及其原理
2016年6月3号
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胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（gold solution）：是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层双层正离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。
胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由

胶体金检测试纸生产工艺

胶体金检测试纸生产工艺本项目主要从事犬、猫传染病抗体胶体金检测试纸的生产，以微孔滤膜为固相载体，膜上包被已知抗体，待加入检测样本后，经毛细管虹吸作用或微孔滤膜的渗滤作用，使标本中的抗体与膜上包被的抗体或抗原结合，再通过胶体金标记物与复合物反应，可形成肉眼可见的红色产物。

目前应用最为广泛的胶体金免疫技术有侧向横流模式，又称金标免疫层析法（ImmUnOgoIdChrOmatograPhyASsay,GICA ）O金标免疫层析法试纸条主要是通过毛细管虹吸作用反应,它由以下几部分组成:样品垫、胶体金垫、NC 膜（硝酸纤维素膜）、吸水滤纸、以及PVC 底板，NC 膜（硝酸纤维素膜）上包括一条检测线（T 线）和一条质控线（C 线）一次层叠起来，如下图所示：图3 金标免疫层析法示意图在吸水材料的牵引下，待测抗原在试条上向上走，首先与金标抗体结合成抗原抗体复合物，抗原抗体复合物上行到检测线时，被测抗原的另一结合位点与包被在此处的单抗结合，形成两个抗体结合一个抗原（双抗体夹心）的金标复合物，因有金颗粒在此沉积，故T 线显红色。

未结合抗原的金标抗体上行到C 线时，与“抗金标抗体”结合，所以C 线也显红色。

检测结果判定：T 线与C 线均显线，表明检测结果为阳性；C 线显线，T 线不显，表明结果为阴性。

若C 线不显线，则检测结果无效。

工艺流程如下所示：NC«（跚咬纤假素膜）PVC 底板测试线（TtK 1）M 析方向样品稀释液噪声：N ；一般固体废物：不合格品(S1)；废防粘纸(S2)；边角料(S3)；废包装物(S4)；危险废物：废一次性滴管(S5)玻璃器具清洗废水(S6)；玻璃器具淋洗废水(S7)；超声波清洗废水(S8)、超声波冲洗废水(S9)o图4胶体金检测试纸生产过程示意图工艺流程简述： (1)检测：外购硝酸纤维素膜、金结合垫、吸水垫、样品垫均人工目视进行检验。

①硝酸纤维素膜：人工目视干燥后的包被膜表面应洁净、无污染、破损等，如有，需用笔标出。

链霉素胶体金免疫层析试纸条的技术报告

链霉素胶体金免疫层析试纸条的技术报告1 胶体金的制备1.1玻璃器皿的准备玻璃器皿表面的少量污染会干扰金颗粒的生成，一切玻璃容器应绝对清洁，用前经过酸洗，硅化。

硅化过程一般是将玻璃容器浸泡于含5％二氯二甲硅烷的氯仿溶液中1min，室温干燥后蒸馏水冲洗，再干燥备用。

专用的玻璃器皿以第一次生成的胶体金稳定其表面，弃去后以双蒸馏水淋洗，可代替硅化处理。

将玻璃器皿用酸液浸泡72小时后，取出，用洗洁精洗涤和大量自来水冲洗，蒸馏水浸泡24h后用去离子水冲洗三次，37℃温箱烘干后备用。

1.2 柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液在胶体金免疫层析试验中，检测信号是由于金颗粒在检测线或质控线上聚集而成，所以如果金颗粒太小就不能产生足够的颜色信号，如果太大又会遇到空间位阻问题。

空间位阻可以阻止小分子蛋白质接近金颗粒的zeta电位，例如IgG 分子(160 000 DaLtons)大约8nm，约有4nm可以与金颗粒的表面结合，其最适的标记金颗粒为40nm，而对小分子抗原来说，可以使用20nm的胶体金颗粒进行标记。

取0.01％氯金酸水溶液100mL用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，持续搅拌的情况下加入1％柠檬酸三钠水溶液3.5mL，继续搅拌加热10min，溶液呈透亮的红色。

室温冷却，用去离子水恢复到原体积，4℃保存。

1.3 胶体金的质量鉴定1.3.1 肉眼观察用肉眼观察制备的胶体金，其颜色为酒红色、均匀度较好无杂质、透明度较高。

1.3.2 紫外扫描鉴定取冷却后的胶体金溶液进行400～600nm紫外扫描，确定最大吸收峰波长，观察最大吸收峰的峰形、峰宽。

紫外扫描的最大吸收峰波长为520nm，根据回归方程Y= 0. 4271X + 514. 56计算得到胶体金颗粒粒径为12.74nm。

由图谱可以看出最大吸收峰的峰宽较小,说明胶体金颗粒分布比较均匀1.3.3 透射电镜鉴定透射电镜下观察胶体金颗粒的大小是否均匀一致，有无椭圆形及多角形。

拍片放大后测量胶体金颗粒直径大小，取多个点计算胶体金颗粒的平均直径。

胶体金试纸条的制备

抗体与胶体金的偶联机制
抗体活性的保持
在抗体与胶体金结合过程中，应确保抗体的活性不受影响，以保证检测的灵敏度和特异性。
抗体与胶体金的结合是通过共价键或非共价键实现的。共价键结合力较强，但不易解离；非共价键结合力较弱，但易于解离。
试纸条的制备工艺
基材选择与处理
选择合适的支持膜作为试纸条的基材，如硝酸纤维素膜、聚酯膜等，并进行预处理，以提高其亲水性和结合力。
流感检测
在流感高发季节，胶体金试纸条可以快速检测流感病毒抗原，为防控流感提供有力支持。
食品安全检测
农药残留检测
胶体金试纸条可用于检测果蔬等农产品中的农药残留，保障食品安全。
兽药残留检测
通过胶体金试纸条检测肉类、禽蛋等食品中的兽药残留，有助于监控食品安全，防止药物滥用。
重金属离子检测
用于检测食品中重金属离子的胶体金试纸条，能够快速、准确地检测出食品中的重金属含量。
新材料的应用
高分子材料
研究新型高分子材料，提高试纸条的灵敏度、稳定性和耐用性。
纳米材料
利用纳米材料的特点，增强试纸条的信号放大效果和特异性。
生物材料
探索生物相容性更好的生物材料，降低试纸条对人体的潜在风险。
新技术的开发
免疫分析技术
研究更高效、特异的免疫分析技术，提高试纸条的检测准确性。
微流控技术
环境监测
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水质监测
胶体金试纸条可用于快速检测水体中的有害物质，如铅、汞、砷等，确保水质安全。
大气污染监测
通过胶体金试纸条检测大气中的有害气体和颗粒物，有助于及时发现和防控空气污染。
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土壤污染监测
胶体金试纸条可用于检测土壤中的重金属和有机污染物，为土壤污染治理提供依据。

绒毛膜促性腺激素(HCG)胶体金试纸条诊断实验

绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试纸条诊断实验摘要：目的：掌握胶体金试纸条诊断技术的原理，使用方法及结果的判定；掌握绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试剂盒的制作技术。

胶体金是氯金酸(HAuC14)的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂(柠檬酸钠)的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。

本实验所用到的双抗夹心法是胶体金检测平台最常用的检测方法，主要用于检测比较大的生物分子及颗粒性抗原。

关键词：胶体金绒毛膜促性腺激素（HCG）免疫金胶体金试剂盒双抗夹心法绒毛膜促性腺激素（HCG）是胎盘合体滋养层细胞所分泌的一种糖蛋白激素，胎盘绒毛膜的合体滋养层产生。

其主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌，以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。

HCG结构中包括α、β两个亚基，α-亚单位为垂体前叶激素所共有，β链为其独有，β亚基被用来制备特异性抗体测定血中的HCG，专用名为β-HCG。

胶体金快速诊断技术具有简捷快速，结果易于判定，特异性好等特点。

该技术操作简单，一般只要5-10min 就会出结果，阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。

该技术大多用单克隆抗体标记，具有很好的特异性。

胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等检测。

双抗夹心法需要准备待测抗原的配对抗体，一个抗体用胶体金标记并固定在结合垫上，另一个抗体固定在NC膜的检测线(T线)上。

另外，还需要准备能与金标抗体(即胶体金标记抗体)特异结合的二抗并固定于NC膜的控制线(C线）上。

1.仪器和材料1.1可编程切条机切条机是将试纸板快速切割成一定宽度的单份试纸，适合各类不同规格试纸的研发与生产。

其最大的特点是一根一根切下来，可以随时终止并更改宽度。

黄曲霉毒素Ｂ１胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究

第３４卷第６期化㊀学㊀研㊀究Ｖｏｌ．３４㊀Ｎｏ．６２０２３年１１月ＣＨＥＭＩＣＡＬ㊀ＲＥＳＥＡＲＣＨＮｏｖ．２０２３黄曲霉毒素Ｂ１胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究董高丽１，江迎春２，郭㊀宁１，杨爽爽１，樊海亮１，刘闯军１∗，徐启杰１∗，李瑞玲１，丁亚龙１（１．黄淮学院化学与制药工程学院，河南驻马店４６３０００；２．黄淮学院医学院，河南驻马店４６３０００）收稿日期：２０２３⁃０３⁃１０基金项目：国家自然科学基金项目（５１５０６０２３，５１６７６１９０，５１６７６１９６）；河南省高等学校重点科研项目（２３Ａ１５００４７）；河南省科技发展计划项目（１１２１０２３１０６４９）作者简介：董高丽（１９７９－），女，讲师，研究方向为分析化学㊂∗通信作者，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｌｉｕｃｈｕａｎｇｊｕｎ＠ｈｕａｎｇｈｕａｉ．ｅｄｕ．ｃｎ；ｑｉｊｉｅ００１＠１６３．ｃｏｍ摘㊀要：以黄曲霉毒素Ｂ１为研究对象，制作出一种可实现对黄曲霉毒素Ｂ１含量快速检测的胶体金试纸条㊂实验采用竞争抑制法，基于试纸条的层析作用，以胶体金为标记物与黄曲霉毒素Ｂ１单抗偶联，将黄曲霉毒素Ｂ１抗原和羊抗鼠二抗固定到硝酸纤维膜上作为检测线和质控线，制备出可以快速检测黄曲霉毒素Ｂ１的免疫层析试纸条㊂通过优化，试纸条在３７ħ条件下，分别在５㊁１０㊁１５㊁２０ｄ后测试，效果没有明显降低，检测灵敏度为２０ｎｇ／ｍＬ；与磺胺类药物㊁瘦肉精类药物均无交叉反应㊂该试纸条具有良好的稳定性和特异性，可实现生物样本中黄曲霉毒素Ｂ１的快速大量检测㊂关键词：黄曲霉毒素Ｂ１；胶体金；试纸条；抗体；快速检测中图分类号：Ｏ６５６．４文献标志码：Ａ文章编号：１００８－１０１１（２０２３）０６－０５１１－０５ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｓｔｒｉｐＤＯＮＧＧａｏｌｉ１ＪＩＡＮＧＹｉｎｇｃｈｕｎ２ＧＵＯＮｉｎｇ１ＹＡＮＧＳｈｕａｎｇｓｈｕａｎｇ１ＦＡＮＨａｉｌｉａｎｇ１ＬＩＵＣｈｕａｎｇｊｕｎ１∗ ＸＵＱｉｊｉｅ１∗ ＬＩＲｕｉｌｉｎｇ１ＤＩＮＧＹａｌｏｎｇ１１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＨｕａｎｇｈｕａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＺｈｕｍａｄｉａｎ４６３０００ＨｅｎａｎＣｈｉｎａ２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＨｕａｎｇｈｕａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＺｈｕｍａｄｉａｎ４６３０００ＨｅｎａｎＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔＡｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｔｅｓｔｓｔｒｉｐｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｔｈｅｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｗａｓｕｓｅｄａｓａｍａｒｋｅｒｔｏｃｏｕｐｌｅｗｉｔｈａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ，ａｎｄａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ａｎｔｉｇｅｎａｎｄｇｏａｔａｎｔｉ⁃ｍｏｕｓｅｓｅｃｏｎｄａｒｙａｎｔｉｂｏｄｙｗｅｒｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｏｎｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅｍｅｍｂｒａｎｅａｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｔｅｓｔｓｔｒｉｐｓｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄａｎｄｔｅｓｔｅｄａｔ３７ħｆｏｒ５，１０，１５ａｎｄ２０ｄａｙｓ，ｗｉｔｈｏｕｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｅｆｆｉｃａｃｙａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ（２０ｎｇ／ｍＬ）．ＴｈｅｔｅｓｔｓｔｒｉｐｓｈａｖｅｇｏｏｄｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｒａｐｉｄａｎｄｂｕｌｋｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ｉｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１；ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄ；ｔｅｓｔｓｔｒｉｐ；ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎ㊀㊀黄曲霉毒素（Ａｆｌａｔｏｘｉｎｓ，ＡＦｓ）主要是由黄曲霉和寄生曲霉代谢产生的衍生化合物，化学结构类似于二呋喃香豆素［１］，是一类毒性很强的生物毒素㊂ＡＦｓ最早发现于英国伦敦郊区的大规模火鸡死亡事件，后研究发现因火鸡饲料中含有霉变的花生饼，这种霉菌产生的次级代谢产物是主要致病因，研究人员将其命名为黄曲霉毒素［２－３］㊂黄曲霉毒素种类多达２０种，紫外光照射下发出荧光，根据荧光颜色不同分为Ｂ族㊁Ｇ族和Ｍ族［４］，常见的有ＡＦＢ１㊁ＡＦＢ２㊁ＡＦＧ１㊁ＡＦＧ２㊁ＡＦＭ１㊁ＡＦＭ２㊂其中，ＡＦＢ１的毒性最大且污染广㊁理化性质稳定㊁致癌力强，是黄曲霉毒素中最主要的毒素成分㊂ＡＦＢ１进入人体后在肝脏中存留最多，对肝脏的损害最大，除肝脏外，其他脏器也会发生退行性病变［５］㊂在生命体内部ＡＦＢ１会直５１２㊀化㊀学㊀研㊀究２０２３年接导致超氧化物歧化酶㊁过氧化氢酶㊁谷胱甘肽硫转移酶等酶浓度的下降，因此ＡＦＢ１能够引起机体内细胞凋亡［６］㊂人若误食了黄曲霉毒素污染的食品，轻则可能出现发热㊁腹痛㊁呕吐㊁食欲减退等症状，重则可能出现肝区疼痛㊁下肢浮肿及肝功能异常等中毒性肝病症状，甚至导致肝癌发生［７］㊂因此建立一种高效快速的检测方法对ＡＦＢ１进行监测和控制，对保障食品安全以及人类健康具有重要意义［８－１２］㊂胶体金免疫层析技术是将多种方法有机结合到一起的固相免疫标记检测技术［１３］㊂胶体金粒子作为有色标记物对蛋白质具有较强的吸附能力，可以与霉菌毒素㊁酶㊁抗生素㊁农药残留㊁激素㊁牛血清蛋白多肽络合物等结合，通过直接观察显色情况短时间内获得检测结果㊂该方法最大特点是检测迅速㊁安全简便且不需要专业人员和仪器设备，适用于基层推广㊁现场快速监测等［１４－１６］㊂本实验采用胶体金免疫层析技术，以有色的胶体金粒子作为标记物与特异性黄曲霉毒素Ｂ１抗体结合制备出相应的金标抗体，利用竞争抑制原理制备黄曲霉毒素Ｂ１免疫层析试纸条，实现对生物样本中黄曲霉毒素Ｂ１的快速检测㊂１㊀实验材料与方法１．１㊀实验材料与仪器㊀㊀胶体金（４０ｎｍ长沙美牛生物科技有限公司），黄曲霉毒素Ｂ１单抗抗原等（广州优抗多生物技术有限公司），黄曲霉毒素Ｂ１标准品，羊抗鼠二抗ＩｇＧ，牛血清蛋白（ＢＳＡ），ＰＥＧ⁃２０００，硝酸纤维膜，玻璃纤维膜㊁吸水纸㊁ＰＶＣ衬板，ＸＹＺ三维划膜喷金仪㊁微电脑自动斩切机，数控裁条机，冷冻离心机㊂１．２㊀胶体金⁃黄曲霉毒素Ｂ１抗体偶联物制备㊀㊀移取１ｍＬ胶体金溶液于１．５ｍＬ离心管中，用０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＨＣｌ或０．１ｍｏｌ／Ｌ的Ｋ２ＣＯ３调节胶体金的ｐＨ到最佳，使用小型涡旋混合器摇匀㊂加入稀释为０．５ｍｇ／ｍＬ的黄曲霉毒素Ｂ１抗体，在小型涡旋混合器摇３５ｍｉｎ，４ħ环境下静置孵育３０ｍｉｎ㊂孵育后加入终浓度为０．５％的１０％ＢＳＡ溶液并混匀，在４ħ环境中封闭３０ｍｉｎ㊂然后将溶液放置在冷冻离心机中㊂调节温度为４ħ，转速１２０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ㊂离心后用注射器移除上清液，用配制的重悬液进行３次洗涤，最后一次离心后用重悬液复溶至原溶液体积的１／１０，制得胶体金溶液㊂本实验选择０．０１％硼酸＋１％ＢＳＡ＋１０％海藻糖＋０．２％ＰＥＧ２０００＋０．２５％吐温－２０作为重悬液配方，为提高试纸条保存时间，在重悬液中加入０．０２％生物防腐剂㊂１．３㊀胶体金免疫层析试纸条的制备１．３．１㊀硝酸纤维素膜的包被㊀㊀分别以黄曲霉毒素抗原和羊抗鼠ＩｇＧ抗体为硝酸纤维素膜（ＮＣ膜）上的检测线（Ｔ线）和质控线（Ｃ线）的包被物㊂使用ＸＹＺ三维划膜喷金仪在ＮＣ膜上划出两条平行且均匀的线㊂于恒温干燥箱中３７ħ烘干２ｈ，待用㊂１．３．２㊀样品垫、结合垫预处理用数控感应斩切机将玻璃纤维膜（型号：Ｚ７０）裁剪到尺寸为１００ｍｍˑ９ｍｍ的长条，将长条浸泡到结合垫处理液中２ｈ，阴凉处晾１ｈ，放入３７ħ恒温干燥箱烘干３ｈ，装入密封袋备用㊂将型号为ＳＢ０６的玻璃纤维膜裁成尺寸为１００ｍｍˑ１８ｍｍ长条，按照同样操作用样品垫处理液浸泡烘干㊂１．３．３㊀试纸条的组装使用ＸＹＺ三维划膜喷金仪将制备好的胶体金溶液均匀喷到结合垫上，在烘箱中烘干２ｈ㊂然后，在ＰＶＣ底板上按照ＮＣ膜㊁吸水纸㊁喷金后结合垫㊁样品垫的顺序依次粘贴，并且在接连处需要重叠１ｍｍ，如图１所示㊂将粘贴好的板子用数控裁条机裁切成３ｍｍ宽的试纸条，装壳后密封干燥保存㊂图１㊀试纸条粘板示意图Ｆｉｇ．１㊀Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｄｉａｇｒａｍｏｆｔｅｓｔｓｔｒｉｐｓｔｉｃｋｉｎｇｂｏａｒｄ１．４㊀试纸条性能测试制备的试纸条需要在阴性样本和不同浓度的阳性样本中测试，检测所制备的试纸条的灵敏度㊁稳定性以及长时间储存后其稳定性情况㊂滴加８０μＬ样本到试纸条加样口，在１０ｍｉｎ内观察其Ｔ㊁Ｃ线显色情况㊂如果Ｔ线显色㊁Ｃ线显色为阴性；如果Ｃ线显色㊁Ｔ线不显色为阳性；如果Ｃ线显色，Ｔ线显色相对较弱，则为弱阳性；如果Ｃ线不显色，则产品无效，如图２所示㊂第６期董高丽等：黄曲霉毒素Ｂ１胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究５１３㊀图２㊀胶体金免疫层析试纸条结果说明示意图Ｆｉｇ．２㊀Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｓｔｒｉｐ２㊀实验结果与讨论２．１㊀胶体金免疫层析试纸条的优化２．１．１㊀最佳ｐＨ确定及优化㊀㊀移取１ｍＬ胶体金溶液于２．０ｍＬ离心管中，用０．１ｍｏｌ／Ｌ的Ｋ２ＣＯ３调节胶体金的ｐＨ为５．０㊁６．０㊁７．０㊁８．０㊁９．０㊁１０．０，其中调节ｐＨ为５．０时加入４μＬ０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＨＣｌ，其他ｐＨ加入０．１ｍｏｌ／Ｌ的Ｋ２ＣＯ３量分别为２㊁６㊁１０㊁１６㊁２２和３２μＬ㊂然后均加入稀释为０．５ｍｇ／ｍＬ的黄曲霉毒素Ｂ１抗体８μＬ，使用小型涡旋混合器充分摇匀后，低温孵育３０ｍｉｎ，加入１０μＬ１０％ＮａＣｌ溶液，混合均匀后，低温静置２ｈ㊂观察到各管中胶体金颜色发生明显变化，当ｐＨȡ６时溶液颜色为酒红色且无聚沉现象，因此ｐＨ＝６为最佳ｐＨ，如图３所示㊂但由于ｐＨ试纸的准确度有限，对Ｋ２ＣＯ３在ｐＨ＝６时的加入量进行了优化，加入０．１ｍｏｌ／Ｌ的Ｋ２ＣＯ３量分别为１㊁２㊁３㊁４㊁５μＬ，用制备好的试纸条进行空白测试，反应１０ｍｉｎ后对Ｃ㊁Ｔ线的颜色进行比较，加入１μＬ的Ｋ２ＣＯ３表达效果最好㊂图３㊀不同ｐＨ值时胶体金颜色对比示意图Ｆｉｇ．３㊀ＣｏｌｌｏｉｄｇｏｌｄｃｏｌｏｒｃｏｎｔｒａｓｔｄｉａｇｒａｍｗｈｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐＨｖａｌｕｅｓ２．１．２㊀最佳抗体标记量的确定取５支１．５ｍＬ离心管各加入１ｍＬ胶体金，调节ｐＨ为６，分别加入稀释为０．５ｇ／Ｌ的黄曲霉毒素Ｂ１抗体２㊁４㊁８㊁１２和１６μＬ，其他条件不变，按步骤制备金标液，做成试纸条进行测试，找到显色明显的最低抗体使用量㊂如图４所示，从左至右分别为加了２㊁４㊁８㊁１２和１６μＬ的黄曲霉毒素Ｂ１抗体（０．５ｍｇ／ｍＬ）的测试结果㊂通过观察可以看出随着抗体量增加Ｔ㊁Ｃ线颜色逐渐加深，抗体量达到８μＬ时颜色几乎不变且两条线颜色亮度均匀，因此选择加入８μＬ抗体即抗体含量为４μｇ时为最佳抗体量，如图４所示㊂图４㊀不同ｐＨ时胶体金颜色对比示意图Ｆｉｇ．４㊀Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｄｉａｇｒａｍｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙｌａｂｅｌｉｎｇａｍｏｕｎｔｓ２．１．３㊀ＮＣ膜材料的筛择在免疫层析检测中，包被在硝酸纤维素膜上的蛋白质作为待测样本的捕获试剂，ＮＣ膜需要具备良好的吸附效果，ＮＣ膜的性能对于试纸条的性能好坏有很大的影响，因此选择合适型号的ＮＣ膜至关重要㊂本文对比了国内外三种型号的ＮＣ膜（ＪＪ－１２０㊁ＪＪ－１４０㊁ＣＮ１４０），通过对Ｔ线和Ｃ线的显色情况进行观察，最终选择ＪＪ１４０型号的ＮＣ膜，如图５所示㊂图５㊀不同型号ＮＣ膜筛选示意图Ｆｉｇ．５㊀ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｍｏｄｅｌｓｏｆＮＣｆｉｌｍｓｃｒｅｅｎｉｎｇｄｉａｇｒａｍ２．１．４㊀抗原、二抗固定量的选择通过筛选，选择使用上海士锋生物科技有限公司生产的黄曲霉毒素Ｂ１抗原和杭州隆基生物技术５１４㊀化㊀学㊀研㊀究２０２３年有限公司生产的羊抗鼠ＩｇＧ抗体，用含１５％蔗糖的ＰＢＳ缓冲溶液将黄曲霉毒素Ｂ１抗原稀释至浓度为０．２㊁０．３㊁０．４ｇ／Ｌ，用含有３％的甲醇和０．０３％的Ｔｒｉ⁃ｔｏｎＸ－１００的ＰＢＳ溶液将羊抗鼠ＩｇＧ抗体稀释至浓度为０．２㊁０．３㊁０．４㊁０．５ｇ／Ｌ㊂其中，加入终浓度为３％的甲醇溶液是为了使Ｃ线变宽㊂按照表１交叉组合方式使用ＸＹＺ三维喷金划线仪进行划线并制备成相应试纸条，使用阴性提取液跑板，观察显色情况㊂在保证试纸条灵敏度的前提下，阴性样品的检测线（Ｔ线）和质控线（Ｃ线）的颜色均匀且深浅一致㊂最终选择Ｔ线浓度为０．２ｇ／Ｌ，Ｃ线浓度为０．４ｇ／Ｌ的固定量，如图６所示㊂表１㊀抗原㊁二抗不同包被量的选择Ｔａｂｌｅ１Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏａｔｉｎｇａｍｏｕｎｔｓｏｆａｎｔｉｇｅｎｉｃｓｅｃｏｎｄａｒｙａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ浓度１２３４５Ｔ线（ｇ／Ｌ）０．２０．２０．２０．３０．４Ｃ线（ｇ／Ｌ）０．２０．３０．４０．５０．４图６㊀抗原㊁二抗不同包被浓度示意图Ｆｉｇ．６㊀Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｄｉａｇｒａｍｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏａｔｉｎｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆａｎｔｉｇｅｎｔｉｃｓｅｃｏｎｄａｒｙａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ２．２㊀性能测试２．２．１㊀灵敏度㊀㊀将黄曲霉毒素Ｂ１标椎品稀释为５㊁１０㊁２０㊁３０㊁４０μｇ／Ｌ，分别对应图７中的５㊁４㊁３㊁２㊁１，各滴加８０μＬ于试纸条上，５１０ｍｉｎ内观察显色情况，用三重蒸馏水作为阴性样本（对应图７中的６）㊂相对阴性样本Ｔ线颜色明显变淡则为弱阳性，Ｔ线颜色消失则为阳性，Ｔ线消失时对应的浓度为检出限㊂如图７所示，研制的试纸条在１０μｇ／Ｌ时Ｔ线颜色明显变淡，在２０μｇ／Ｌ时Ｔ线消失，因此本试纸条的检出限为２０μｇ／Ｌ㊂图７㊀试纸条灵敏度测试Ｆｉｇ．７㊀Ｔｅｓｔｓｔｒｉｐｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ２．２．２㊀特异性测试特异性时，由于条件限制，采用了同组成员的标准品进行了测试，即磺胺以及瘦肉精类的莱克多巴胺和盐酸克伦特罗㊂测试结果如图８所示：在制备的试纸条上分别滴加２０μｇ／Ｌ黄曲霉毒素Ｂ１标准品㊁８０μｇ／Ｌ磺胺标准品㊁８０μｇ／Ｌ瘦肉精类标准品㊂如图８所示，２０μｇ／Ｌ黄曲霉毒素Ｂ１标准品Ｔ线消失，而其他几种８０μｇ／Ｌ浓度标准品结果与阴性样本测试结果无异㊂制作的黄曲霉毒素Ｂ１胶体金试纸条特异性符合检测要求㊂图８㊀试纸条特异性测试Ｆｉｇ．８㊀Ｔｅｓｔｓｔｒｉｐｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ２．２．３㊀稳定性在２５ħ条件下，对储藏５㊁１０㊁２０㊁３０ｄ时使用阴性和２０μｇ／Ｌ的阳性标品进行测试，结果如图９所示㊂从左至右依次为第５㊁１０㊁２０㊁３０ｄ时的测试结果，可以看出，阴性和阳性测试结果均比较理想，说明所制备的试纸条的稳定性符合使用要求㊂图９㊀试纸条稳定性测试Ｆｉｇ．９㊀Ｔｅｓｔｓｔｒｉｐｓｔａｂｉｌｉｔｙ３㊀结论基于胶体金竞争抑制法原理，通过标记方案的改变，不同材料的选择，改进了黄曲霉毒素Ｂ１免疫层析产品的稳定性能和灵敏度，并对所制备的黄曲霉毒素Ｂ１胶体金免疫层析试纸条进行了特异性㊁稳定性㊁精密性测试，结果达到了试纸条的使用要求㊂另外，所设计制备的黄曲霉毒素Ｂ１胶体金免疫层析试纸条，具有成本第６期董高丽等：黄曲霉毒素Ｂ１胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究５１５㊀低廉㊁携带方便㊁适合现场检测等优点，可实现对大量样本中的黄曲霉毒素Ｂ１进行快速检测，有望在未来黄曲霉素的检测领域发挥作用㊂参考文献：［１］ＤＡＳＩＬＶＡＪＢ，ＰＯＺＺＩＣＲ，ＭＡＬＬＯＺＺＩＭＡＢ，ｅｔａｌ．ＭｙｃｏｆｌｏｒａａｎｄｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ａｎｄｆｕｍｏｎｉｓｉｎＢ１ｄｕｒｉｎｇｓｔｏｒａｇｅｏｆＢｒａｚｉｌｉａｎｓｏｒｇｈｕｍ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，４８（９）：４３５２⁃４３５６．［２］高秀洁，邓中平，焦红，等．黄曲霉毒素Ｂ１快速检测方法的研究进展［Ｊ］．热带医学杂志，２００８，８（１２）：１２９７⁃１３００．ＧＡＯＸＪ，ＤＥＮＧＺＰ，ＪＩＡＯＨ，ｅｔａｌ．ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｔｈｅｒａｐｉｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，２００８，８（１２）：１２９７⁃１３００．［３］ＲＡＳＴＯＧＩＲ，ＳＲＩＶＡＳＴＡＶＡＡＫ，ＲＡＳＴＯＧＩＡＫ．ＬｏｎｇｔｅｒｍｅｆｆｅｃｔｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ｏｎｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎｉｎｒａｔｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙ：ｅｆｆｅｃｔｏｆｐｉｃｒｏｌｉｖａｎｄｓｉｌｙｍａｒｉｎ［Ｊ］．ＰｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙＲｅｓｅａｒｃｈ，２００１，１５（４）：３０７⁃３１０．［４］林雅宁，徐忠玉．黄曲霉毒素Ｂ１诱发昆明鼠高血氨的实验研究［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１４，３５（２）：１３２⁃１３３．ＬＩＮＹＮ，ＸＵＺＹ．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｓｔｕｄｙｏｎｈｙｐｅｒａｍｍｏｎｅｍｉａｏｆＫＭｍｏｕｓｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１４，３５（２）：１３２⁃１３３．［５］居乃琥．黄曲霉毒素［Ｍ］．北京：北京轻工业出版社，１９８０．ＪＵＮＨ．Ａｆｌａｔｏｘｉｎ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＢｅｉｊｉｎｇＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙＰｒｅｓｓ，１９８０．［６］王海彬．花生中黄曲霉毒素免疫层析快速定量技术研究［Ｄ］．北京：中国农业科学院，２０１２．ＷＡＮＧＨＢ．Ｓｔｕｄｙｏｎａｎｅｎｈａｎｃｅｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃａｓｓａｙｆｏｒａｆｌａｔｏｘｉｎｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎｐｅａｎｕｔｓ［Ｄ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２．［７］刘美辰，李培真，郭健，等．胶体金测试条法对粮食中赭曲霉毒素快速定量测定的研究［Ｊ］．粮食与食品工业，２０１３，２０（３）：６２⁃６４．ＬＩＵＭＣ，ＬＩＰＺ，ＧＵＯＪ，ｅｔａｌ．Ｓｔｕｄｙｏｎｒａｐｉｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒｏｃｈｒａｔｏｘｉｎｉｎｇｒａｉｎｗｉｔｈｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｓｔｒｉｐｓｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｃｅｒｅａｌ＆ＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｒｙ，２０１３，２０（３）：６２⁃６４．［８］杨红秀．抗黄曲霉毒素Ｂ１抗独特型抗体的制备及其性质分析［Ｄ］．武汉：华中农业大学，２０１３．ＹＡＮＧＨＸ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｎｔｉ⁃ＡＦＢ１ａｎｔｉ⁃ｉｄｉｏｔｙｐｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ［Ｄ］．Ｗｕｈａｎ：ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１３．［９］ＸＵＬ，ＺＨＡＮＧＨＱ，ＹＡＮＸＷ，ｅｔａｌ．Ｂｉｎｄｉｎｇ⁃ｉｎｄｕｃｅｄＤＮＡｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎａｓｓａｙｆｏｒｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ｓｅｎｓｉｎｇａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１［Ｊ］．ＡＣＳＳｅｎｓｏｒｓ，２０１８，３（１２）：２５９０⁃２５９６．［１０］ＥＲＧÜＤＥＲÖ，ＫＥＳＫＩＮＳＳ，ＮＡＲＩ，ｅｔａｌ．ＡｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ａｃｔｓａｓａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｅｎｅｒｇｙｄｏｎｏｒｔｏｅｎｈａｎｃｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｏｆｙｅｌｌｏｗｅｍｉｓｓｉｖｅｃａｒｂｏｎｄｏｔｓ［Ｊ］．ＡＣＳＯｍｅｇａ，２０２２，７（３３）：２９２９７⁃２９３０５．［１１］ＲＥＮＷＪ，ＬＩＺＦ，ＸＵＹ，ｅｔａｌ．Ｏｎｅ⁃ｓｔｅｐｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｂａｓｅｄｏｎｎａｎｏｂｏｄｙ／ｎａｎｏｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｆｕｓｉｏｎｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ｉｎｃｅｒｅａｌ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１９，６７（１８）：５２２１⁃５２２９．［１２］ＭＷＡＫＩＮＹＡＬＩＳＥ，ＭＩＮＧＺ，ＸＩＥＨＬ，ｅｔａｌ．ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＭｙｒｏｉｄｅｓｏｄｏｒａｔｉｍｉｍｕｓｓｔｒａｉｎ３Ｊ２ＭＯａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１９，６７（１６）：４５９５⁃４６０２．［１３］林一民，王云龙，胡永芳，等．胶体金免疫层析技术在临床疾病诊断中的研究进展［Ｊ］．重庆医学，２０１３，４２（１）：９１⁃９３．ＬＩＮＹＭ，ＷＡＮＧＹＬ，ＨＵＹＦ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｉｎｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１３，４２（１）：９１⁃９３．［１４］ＶＯＩＳＩＮＦ，ＬＥＬＯＮＧＧ，ＧＵＩＧＮＥＲＪＭ，ｅｔａｌ．Ｆｌａｓｈｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅａｓｓｅｍｂｌｙｉｎａｍｉｌｌｉｆｌｏｗｓｙｓｔｅｍ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍｏｎｉｃａｎｄｆｏｒｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｏｐｔｉｃａｌｓｉｇｎａｌｓ［Ｊ］．ＡＣＳＡｐｐｌｉｅｄＮａｎｏＭａｔｅｒｉａｌｓ，２０２２，５（５）：６９６４⁃６９７１．［１５］ＹＵＨＳ，ＬＩＵＨ，ＹＡＮＧＹＪ，ｅｔａｌ．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｒａｐｉｄｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙａｓｓａｙｆｏｒＣＯＶＩＤ⁃１９ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡＣＳＯｍｅｇａ，２０２２，７（４１）：３６２５４⁃３６２６２．［１６］ＬＩＡＮＧＰＨ，ＧＵＯＱ，ＺＨＡＯＴＹ，ｅｔａｌ．ＡｇｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｗｉｔｈｕｌｔｒａｔｈｉｎＡｕｓｈｅｌｌ⁃ｂａｓｅｄｌａｔｅｒａｌｆｌｏｗｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｆｏｒｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃａｎｄＳＥＲＳｄｕａｌ⁃ｍｏｄｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳＡＲＳ⁃ＣｏＶ⁃２ＩｇＧ［Ｊ］．ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０２２，９４（２３）：８４６６⁃８４７３．［责任编辑：吴文鹏］。

同时检测两种真菌毒素的胶体金试纸条的研制

速检测卡。结果：该检测卡能同时检测ＡＢ和ＯＦ。Ａ两种真茵毒素，且两者之间互不干扰，灵敏度均可达到２ｇ，，重复性、稳定性均良好。结论：成功制作出了能同时检测两种真菌毒素的快速检测卡，一次操．ｇＬ５作能检测两种毒素，节省了检测时间和检测成本。关键词黄曲霉毒素Ｂ；赭曲霉毒素Ａ；单克隆抗体；胶体金
ｏｐｒｔｎｃｕｄｅｅｔｂｏｈｔｘｎｏａｅｅｔｔｍｅｎｄｏｔｎｅｏｅａｉｏｌｄｔｃｔｏｓｔｓｖｔｓｉａｃｓ．ｏｉ
ＫｅｗｏｄａｌｔｘｎｌｏｈａｏｉＡ；ｍｏｏｌｎｎｉｏｙｃｌｉａｏｄ；ｔｓｓｒｙｒｓｆｏＢ；ｃｒｔｘｎａｉｎｃｏａａｔｄ；ｏｏｄｌｌｌｂｇｅｔｔｐｉ
ｗｉｈＣｉｌｅｕｌｅｅｔｔｏｋｎｓｏｕｇｏｉｓＷ８ｓｃｅｓｌｒｄｃｄｈｃａｓｍｕｔｏｓｙｄｔｃｗｉｄｆｆｎｉｔｘｎ８ｕｃｓｆｌｐｏｕｅ，ｗｈｃａｅｔｒｄｎｎａｕｙｉｈＷｓｆａｕｅｔＩｌ
０１ｏ，ｐ７４的ＣＳ稀释）．ｌＬＨ．０ｔｏＢ，此为检测ＯＡ的
１材料与方法
１１材料与试剂．
检测线Ｔ；（）Ｖ — Ｆｌ全抗原（１３ＯＡＡＢ完１ｍｇ／ｍ，Ｌ
０１ｏ／Ｈ．ＣＳ．ｌＬｐ７Ｏｍ４的Ｂ稀释），此为检测ＡＢ的Ｆｌ

猪瘟胶体金快速诊断试纸条的研制

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症病毒进行检测，无交叉反应．关键词：猪瘟；抗体；体金；胶试纸条；硝酸纤维素膜

胶体金试纸条原理

胶体金试纸条原理胶体金试纸条（Colloidal Gold Test Strip）是一种简单、快速、准确的免疫学检测方法，广泛应用于生物医学研究、医学诊断、环境监测、食品安全等领域。

本文主要介绍胶体金试纸条的原理、制备及应用。

一、原理胶体金试纸条原理是基于金纳米颗粒与抗原或抗体的特异性结合作用。

金纳米颗粒在特定条件下呈现紫红色，具有很强的表面等离子体共振吸收波长。

当金纳米颗粒与特异抗原或抗体结合时，其颜色由紫红色变为红色或蓝色，颜色的变化与特异性结合反应形成的复合物的形态、数量有关，可以通过肉眼直接观察到。

二、制备制备胶体金试纸条需要先制备金纳米颗粒溶液，然后将其涂在滤纸或其他纸张上，并固定相应的抗原或抗体作为检测指针。

具体步骤如下：1. 制备金纳米颗粒溶液制备金纳米颗粒溶液的方法有多种，其中较为简单的方法是还原法。

将1 mL的氯金酸钠（10 mM）加入50 mL的去离子水中，搅拌均匀。

将10 mL的氢氟酸（1 mM）加入到氯金酸钠溶液中，并在室温下搅拌1分钟。

加入150 µL的氢氨水（10 mM），搅拌后黄色溶液转变为红紫色，表示金纳米颗粒合成成功。

2. 准备检测纸条将金纳米颗粒溶液用滴管或其他方法均匀地涂在滤纸或其他纸张上，并干燥20分钟。

随后，用荧光素偶联抗体或其他特异性指示剂涂抹到纸条上作为检测指针。

三、应用胶体金试纸条可以用于检测各种生物分子，例如细菌、病毒、抗体、癌细胞、DNA、RNA等，以及药物和毒性物质。

其应用领域包括：1. 生物医学研究胶体金试纸条可以用于研究基因检测、蛋白质检测、药物筛选等领域。

2. 医学诊断胶体金试纸条可以用于一些快速筛查、诊断疾病的场合，比如检测患者的生物样本中是否有某种病原菌，或者病人是否感染某种病毒等。

3. 环境监测胶体金试纸条可以用于监测环境中的各种有害物质，如重金属、农药、酸雨等。

4. 食品安全胶体金试纸条可以检测食品中添加的国家规定禁止使用的物质，如兽药、农药等。

PEDV胶体金试纸条制备

PEDV胶体金试纸条制备胶体金(colloidal gold)是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂等作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，利用它在碱性环境下带负电荷的性质，与蛋白质分子的正电荷基团相互吸引而形成牢固结合，可以将胶体金与抗体蛋白以及其他一些蛋白相结合，进行示踪研究。

目前已成为继荧光素、放射性同位素和酶之后，在免疫标记技术中较为常用的一种非放射性示踪剂。

1971年，Faulk和Taylor首先报道了将胶体金与抗体结合，应用于电镜水平的免疫细胞化学研究。

1974年，Romano等用胶体金标记抗球蛋白抗体，建立间接免疫金染色法。

之后，胶体金作为以后总新型免疫标记技术发展很快。

1978年，Geohegan等将胶体金标记抗体用于普通光镜下检测B淋巴细胞表面膜免疫球蛋白，建立了光镜水平的免疫金染色(immunogold staining，IGS)，但是所需的胶体金颗粒必须大于20nm，并且标记物浓度要高，才能获得阳性结果。

1981年Danscher等用银显影方法增强了金颗粒的可见度，并提高了灵敏度。

1983年Holgate等将免疫金染色与银显影技术相结合，称之为免疫金银染色法(immunogold silver staining，IGSS)。

由于IGS和IGSS两种方法具有试剂制备简便，特异性强、灵敏度高、应用范围广，并可以用于双重和多重标记等特点，被广泛应用于医学和细胞生物学研究领域，是目前免疫组织化学技术中常用的敏感方法之一。

近年来胶体金标记技术进一步发展应用于免疫转印、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金／银染色(dot IGS／IGSS)以及斑点金免疫渗滤测定法(dot immunogold filtration assay，DIGFA)等多种标记免疫检测方法。

本实验中应用柠檬酸钠还原法制备颗粒大小为20nm．30nm大小的胶体金，用于与制备纯化的抗体相结合，为制备检测·猪流行性下痢(PEDv)病毒试纸条做准备。