胶体金试纸条的制备共38页
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合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。
➢ 1974------实现间接免疫金染色法 Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了
间接免疫金染色法
胶体金技术的种类及优点
快速免疫金渗滤法(immuogold filtration assay ,IGFA) 即穿流式(flow through)的固相膜免疫测定。 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前
胶体金的合成
• ①白磷还原法(1905年)可合成3nm左右大小的金颗粒； • ②白磷还原法(1925年)经改良后，可合成5～12nm大小的
金颗粒； • ③抗坏血酸还原法(1958年)可合成6～13nm大小的金颗粒； • ④柠檬酸三钠还原法(1973年)可合成5nm、15nm、30nm、
60nm大小的金颗粒； • ⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6～10nm大小的金
胶体金的质量鉴定
透射电镜下观察其颗粒大小及均匀度
理想的金颗粒大小基本相等， 均匀一致，无椭圆形及多角 形的金颗粒存在。
优质金颗粒和劣质金颗粒
劣质金外形不均一，且
非球形，有凝集现象， 颗粒间变异系数较大 。
胶体金的蛋白标记
双电层结构保证了胶体金的稳定 性，使金颗粒始终以悬浮状态存 在。
胶体金溶液通常由呈单一分散状 态的金颗粒组成，金颗粒直径在 1-100nm 之间，而稳定的金溶液 则要求金颗粒维持在某一固定直 径不变。
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一 般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢 固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标记蛋白质的等电点略偏碱。
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 1％柠檬酸 粒径 三钠加入量 （nm） （ml）*
16
2.00
24.5 1.50
41
1.00
71.5 0.70
呈色
橙色 橙红 红色 紫色
λmax
518nm 522nm 525nm 535nm
注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。
（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。
（4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
➢不足：
金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控 制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂 的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。 其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料 的开发与应用。
最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能 制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生 产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的 GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其 精密度和准确性均符合定量测定要求。
蛋白通常带有多种电荷，当蛋白 带正电时，能与胶体金所带的负 电荷相互作用；而蛋白中的疏水 氨基酸能通过疏水作用将蛋白结 合至金颗粒表面；有些蛋白则可 通过半胱氨酸的巯基与金颗粒共 轭连接。
金标样本程序
将胶体金调整至正确的pH值 确定最小蛋白含量 最终结合（标记） 纯化
胶体金调整正确的pH值
目录
1
胶体金技术的发展
பைடு நூலகம்
2
胶体金技术的种类
3
胶体金的合成
4
胶体金的标记与纯化
5 胶体金免疫层析法试剂的组成
6 胶体金免疫层析试纸的检测模式
7 胶体金免疫层析试纸的应用
胶体金免疫层析（Gold Immune – Chromatographic Assay, GICA）技术是结合了胶体金技术和免疫层析技术 发展而来的，其本质为一种固相反应的 ELISA,并用胶体 金来代替底物显色。
者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一 片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜， 标记结合物为免疫金。
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
免疫层析法( immunochromatogra-phy，
ICA)
是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定， 与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同，免疫层析法 中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层 析作用的横流 （lateral flow） )向另一端移动。移动过 程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者 抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分 离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金 为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。
颗粒； • ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒； • ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大
小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型
的免疫标记技术。
胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包
被过程。
胶体金技术的发展
➢ 1939-----雏形 Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电
子显微镜下观察金离子呈高电子密度。
➢ 1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究 Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结
免疫胶体金技术的特点
➢ 优点：
• 检测方法简单而快速，数分钟即可得出结果； • 不需仪器设备，操作人员不需特殊训练； • 试剂稳定，适用于单份测定； • 无污染； • GICA的特点是单一试剂，一步操作。小型实验室
即有条件开发生产。 • 干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。
成为目前“病人身边检验”（point-of-care testing，POCT） 中广为应用的方法。
➢ 1974------实现间接免疫金染色法 Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了
间接免疫金染色法
胶体金技术的种类及优点
快速免疫金渗滤法(immuogold filtration assay ,IGFA) 即穿流式(flow through)的固相膜免疫测定。 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前
胶体金的合成
• ①白磷还原法(1905年)可合成3nm左右大小的金颗粒； • ②白磷还原法(1925年)经改良后，可合成5～12nm大小的
金颗粒； • ③抗坏血酸还原法(1958年)可合成6～13nm大小的金颗粒； • ④柠檬酸三钠还原法(1973年)可合成5nm、15nm、30nm、
60nm大小的金颗粒； • ⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6～10nm大小的金
胶体金的质量鉴定
透射电镜下观察其颗粒大小及均匀度
理想的金颗粒大小基本相等， 均匀一致，无椭圆形及多角 形的金颗粒存在。
优质金颗粒和劣质金颗粒
劣质金外形不均一，且
非球形，有凝集现象， 颗粒间变异系数较大 。
胶体金的蛋白标记
双电层结构保证了胶体金的稳定 性，使金颗粒始终以悬浮状态存 在。
胶体金溶液通常由呈单一分散状 态的金颗粒组成，金颗粒直径在 1-100nm 之间，而稳定的金溶液 则要求金颗粒维持在某一固定直 径不变。
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一 般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢 固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标记蛋白质的等电点略偏碱。
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 1％柠檬酸 粒径 三钠加入量 （nm） （ml）*
16
2.00
24.5 1.50
41
1.00
71.5 0.70
呈色
橙色 橙红 红色 紫色
λmax
518nm 522nm 525nm 535nm
注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。
（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。
（4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
➢不足：
金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控 制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂 的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。 其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料 的开发与应用。
最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能 制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生 产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的 GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其 精密度和准确性均符合定量测定要求。
蛋白通常带有多种电荷，当蛋白 带正电时，能与胶体金所带的负 电荷相互作用；而蛋白中的疏水 氨基酸能通过疏水作用将蛋白结 合至金颗粒表面；有些蛋白则可 通过半胱氨酸的巯基与金颗粒共 轭连接。
金标样本程序
将胶体金调整至正确的pH值 确定最小蛋白含量 最终结合（标记） 纯化
胶体金调整正确的pH值
目录
1
胶体金技术的发展
பைடு நூலகம்
2
胶体金技术的种类
3
胶体金的合成
4
胶体金的标记与纯化
5 胶体金免疫层析法试剂的组成
6 胶体金免疫层析试纸的检测模式
7 胶体金免疫层析试纸的应用
胶体金免疫层析（Gold Immune – Chromatographic Assay, GICA）技术是结合了胶体金技术和免疫层析技术 发展而来的，其本质为一种固相反应的 ELISA,并用胶体 金来代替底物显色。
者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一 片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜， 标记结合物为免疫金。
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
免疫层析法( immunochromatogra-phy，
ICA)
是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定， 与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同，免疫层析法 中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层 析作用的横流 （lateral flow） )向另一端移动。移动过 程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者 抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分 离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金 为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。
颗粒； • ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒； • ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大
小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型
的免疫标记技术。
胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包
被过程。
胶体金技术的发展
➢ 1939-----雏形 Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电
子显微镜下观察金离子呈高电子密度。
➢ 1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究 Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结
免疫胶体金技术的特点
➢ 优点：
• 检测方法简单而快速，数分钟即可得出结果； • 不需仪器设备，操作人员不需特殊训练； • 试剂稳定，适用于单份测定； • 无污染； • GICA的特点是单一试剂，一步操作。小型实验室
即有条件开发生产。 • 干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。
成为目前“病人身边检验”（point-of-care testing，POCT） 中广为应用的方法。