血管性痴呆动物模型探讨

#8HH"!8AH 38A9"68!A !"K%9"HKH3L !%87""#877JM
%6899"7!86# %!8#7"#!839 !!H8H4"3#83AL !3%8H""!H8!3JM
A98#9"38H# 38#9"68AH !!8#4"38#IL 668A""38IIJM
注 (J 与假手术组术后同期相比 !?@"8"A & 模型组 6" + 与 A" + 组相比 (M ?@"8"# !MM ?@"8"A $
表#
组别 假手术组 A9 + 假手术组 69 + 模型组 A9 + 模型组 64 +
水迷宫实验小鼠的学习和记忆成绩
学习成绩
!A!1 "
记忆成绩
%
游全程时间 "& ’ 错误次数 " 次 ’ 游全程时间 "& ’ 错误次数 " 次 ’
A9 A9 A9 A4
%68!9"7!8H9 %98A!"6783% AHI879"I38H9J !I48I4"6H8I%LMM
=CSTC 腹腔注射造成低血压 $ 立即关闭双侧颈总 动脉 (O =6>! 再通 (O =6> ! 如此反复 + 次 ! 撤线 !
缝合切口 !放回笼中饲养 $
JVG 行为学测试
##
中日友好医院学报 !""# 年第 $% 卷第 ! 期
!"#$%&’ "( )*+%&,!&-&% .$+/%01*+- 2"1-+3&’ !4556 7-$ !8"’9:;!<"=>
25 的绝缘橡皮垫 ! 作为小鼠回避电击的安全台 $
由调压器调节电压 %提供交流电 $ 实验时 ! 将小鼠放入此装置中适应 6 51. ! 然 后立刻通以 79 : 交流电 ! 动物受电击后 ! 其正常 反应是跳到安全台躲避电击 ! 记录通电后其跳至 安全台上的时间 !作为反应期 & 观察 # 51. 内受电 击的次数为错误次数及 # 51. 内的受电击时间 $ 以反应期 % 错误次数和受电击时间作为其学习成 绩 $ !7 ; 后重复试验 ! 将小鼠置于安全台上 ! 即刻 通电 $ # 51. 内小鼠从台上跳至铜栅上的时间为 潜伏期 ! 受电击次数为错误次数 ! 以潜伏期 % 错误 次数和受电击时间为记忆成绩 $
程时间 !其进入盲端次数为错误次数 ! 以此作为学 习成绩 $ !7 ; 后复测 ! 作为记忆成绩 $ 若动物 #
69 + 时游全程时间和错 误 次 数 在 学 习 期 和 记 忆 期均显著增加 "?@989A ’$ 模型组术后 69 + 与 A9 + 比较 ( 学习期错误次数和记忆期的游全程时间 % 错误次数均显著增加 "?@989# ’! 学 习 期 游 全 程 时
!"#$%&’()&’*" *" &+, -.,)&’*" */ (0*1)0 -,.,1.)0 ’%-+,2’) 3.,4,./5%’*" ’"65.7 2*8,0 ’" 2’-,99:;<= >?*"@;< A’)*34’"("BC< D’3,.99B*5."?0 */ E+’"?3B?4?" F.’,"8%+’4 >*%4’&?0 "GHHI ;4. "JK #G $!LM3LK ;N%&.?O& PN6,O&’#, !./ 012345617 3 8319:53; <0=0>263 =/<05 6> =690?Q,&+*8%!.70 6=6232680 8319:53; <0=0>! 263 =/<05 @31 0123456170< 4A ;0B0320<5A 956BB6>C 270 9/==/> 93;/26< 3;20;A 3>< ;0<:96>C 45//< B;011:;0 @627 3> 34</=6>35 6>D0926/> /E 1/<6:= >62;/B;:116<0FR,%50&% !GA :16>C 120B*</@> 38/6<3>90 2012 3>< @320; =3H0 2012!270 =690 6> 0IB0;6=0>235 C;/:B 17/@0< 3 16C>6E693>2 <61E:>926/> 6> 503;>6>C 3>< =0=/;A 3>< /486/:1 9055 <05026/> 6> 2706; 76BB/93=B35 &’( ;0C6/>FE*"-05%’*"!.70 34/80 <019;640< =027/< 2/ 6><:90 8319:53; <0=0>263 =/<05 61 0EE092680 3>< 03165A B0;E/;=0<F S,7 T*.8% 8319:53; <0=0>263 &=/<05 !3>6=35 &=690 ;5&+*.U% ?88.,%% (O""!% !&76>3 J0B3;2=0>2 /E .;3<626/>35 &76>010 K0<696>0 !&76>3 *L3B3> M;60><176B N/1B6235 !G06D6>C !
!"#$%&’ "( )*+%&,!&-&% .$+/%01*+- 2"1-+3&’ !4556 7-$ !8"’9:; !<"=>
中日友好医院学报 !""# 年第 $% 卷第 ! 期
!"
度愈加严重 "
栓子模型:<;% 颅外放置小磁铁吸附经舌下静脉注入 的铁粉:=;等 " 这些模型存在着造成的学习记忆功能 减退是短暂 % 可逆的 ( 或需开颅手术 ! 创伤大 % 动物 死亡率高 %不易操作等缺点:>;" 为克服上述大鼠 -. 动物模型制作方法上存 在的技术复杂 % 手术创伤较大 % 死亡率高 % 成本高 等不足 !我们选择了小鼠作为 -. 实验对象 " 尤其 是小鼠脑缺血模型多用于行为学观察和评价药物 疗效及筛选实验的研究:%;! 为探索拟 -. 动物模型 奠定了一定的基础 " 用小鼠造模 !价格低廉 % 动物 来源充足 %易于饲养 % 存活率高 !制作简便 % 成功率 高 % 死亡率低 %重复性好 % 病理改变充分 ! 因此值得 推广应用 "
血管性痴呆 ’8319:53; <0=0>263 !PJ ( 是由 一 系列脑血管因素导致脑组织损害引起的痴呆综合 征 ! 患者表现为记忆 % 认知等功能障碍 $ PJ 是中 老年人群的多发病 %常见病 $ 它是老年期痴呆的主 要类型之一 ! 并且随着人类社会的老龄化 !PJ 已 是国内外医学界研究的重要课题 $ 由于对本病的 发病机制尚不十分明确 ! 亦缺少治疗本病的特效 药物 ! 因此建立 PJ 动物模型对研究本病的病理 生理机制 % 评价药物疗效等方面有重要的作用 $ 目 前 PJ 动物模型的制作多在大鼠上进行 ! 由于成 本高 %操作难度大 ! 为研究带来困难 $ 本实验采用 小鼠双侧颈总动脉反复缺血再灌注加降血压法制 作 PJ 模型 ! 为 PJ 研究提供了另一种可行的实 验室方法 ! 现介绍如下 $
各组动物术后 A9 + %69 + 的学习和记忆成绩 见表 ! $ 模型组与假手术组相比 ( 前者术后 A9 + %
!6"$#!分为四个区 (> 区 %? 区 %@ 区和终点区 !终
点区有台阶供小鼠爬出水面 $ 各区至终ห้องสมุดไป่ตู้区为一 阶段训练 ! 每一阶段训练 6 次 $ 其后记录小鼠 #
51. 内从起点 > 区游至终点台阶处的时间为游全
间显著延长 "?@989A ’$ 可见模型组小鼠发生了严 重的空间分辨障碍 !随术后时间的延长 ! 其障碍程
51. 内未游到终点则以 # 51. 计算 $ !"$ 形态学观察
表!
组别
假手术组 A" + 假手术组 6" +
跳台实验小鼠的学习和记忆成绩
!A!1 "
记忆成绩
学习成绩
%
反应期时间 "& ’ 错误次数 " 次 ’ 受电击时间 "& ’ 潜伏期时间 "& ’ 错误次数 " 次 ’ 受电击时间 "& ’
"86H""8!6 "87"""8#! !8%"""8HHJ 68!"""8I%J
"86#""87I "8!%""866 38!""68IIJ %83""!8%%J
模型组 A" + 模型组 6" +
注 (J 与假手术组术后同期相比 !?@"8"A &MM 模型组 6" + 与 A" + 组相比 !?@"8"A $
制作了血管性痴呆动物模型 $ 结果 ! 跳台试验 % 水迷宫试验和光镜检查证实 ! 术后模型小鼠出现了明显的学习 % 记忆功能障碍 ! 形态学可见明显的小鼠海马 &’( 区神经细胞减少 $ 结论 ! 本试验成功建立了血管性痴呆动物模 型 ! 方法简便 ! 效果可靠 ! 利于推广 $ 关 键 词 ! 血管性痴呆 & 动物模型 & 小鼠 文献标识码 !’ 文章编号 !(""(*""!# ’!""# ("!*"",-*"+ 中图分类号 !)*++!
J 材料和方法 JVJ 模型的制作 JVJVJ 实验动物
昆明种二级小白鼠 Q" 只 ! 体重 !""!! C! 雌 雄各半 !由中国医学科学院实验动物所提供 $
JVJVG 主要仪器设备
小鼠跳台实验装置 % 水迷宫实验装置 ! 由中国 医学科学院药物研究所制造 $
JVJVW 实验分组与模型制作 小鼠随机分为 ! 组 )! 假手术组 ’(" < 组 %+" < 组各 (" 只 () 只剥离双侧颈总动脉 ! 既不关闭血 管 ! 也不降血压 &" 模型组 ’(" < 组 %+" < 组各 (" 只 ($ 对实验小鼠以 ("R水合氯醛按 Q,O =CSTC 腹
!"#$%&’ "( )*+%&,!&-&% .$+/%01*+- 2"1-+3&’ !4556 7-$ !8"’9:; !<"=>
中日友好医院学报 !""# 年第 $% 卷第 ! 期
’(
实验研究
血管性痴呆动物模型探讨 !
王 昊 阎小萍 金笛儿
! 中日友好医院 中医内科 " 北京 "#$$%&# 摘要 目的 ! 探讨建立小鼠 " 血管性痴呆 # 动物模型 $ 方法 ! 采用小鼠双侧颈总动脉反复缺血再灌注加降血压法
!"#"! 跳台实验 "&’()*+,-. /0,1+/.2( ’(&’# 跳台装置为 34 25 !$! 25 !66 25 的被动回
避反应箱 $ 四周用黑色塑料板分隔 !箱底为可通电 的铜栅 !反应箱的右后角放置一直径和高均为 78#
各组动物分别于术后 A9 +%69 + 取材 $ 将小 鼠断头处死 ! 迅速取脑组织做冠状切开 ! 取海马部 位 在 !9B 福 尔 马 林 液 中 固 定 !#9BC$99B 乙 醇 逐 次 脱 水 % 石 蜡 包 埋 后 ! 做 成 # !5 切 片 ! 常 规 DE 染色 ! 在光学显微镜下观察海马 @>$ 区 $
!"# 形态学观察
光镜观察结果 #! 假手术组 # 小鼠海马 &’( 区 神经细胞数目多 ! 排列紧密而整齐 ! 胞核呈圆形 ! 核仁明显 ! 染色质均匀 !第 (" ) 与 *+ ) 比较神经 细胞数目及 形 态 无 差 异 $ 图 ( %!! 封 三 &’ " 模 型 组 # 在造模后 (" ) 时神经细胞数目减少 % 排列紊 乱 ! 神经细胞核深染 % 固缩 ! 并可见大量不规则形 胶质细胞 ( 造模后 *" ) 时可见神经细胞较 (" ) 时又明显减少 % 排列疏松 % 不规整 ! 见大量胶质细 胞 %色 深 %不 规 则 形 !仅 见 少 量 正 常 神 经 细 胞 $图
!" !" !" !"
#8!""786% 78I""686" A%8"""#83!J #"83""77866JMM
"8I3""87! "8H"""8I% !83"""8I"J 68"""A8"#J
"8%"""837 "83#""86A A78"""78!IJ 7%8"""778#%JMM
!6"86A"%H8!" !!I8A""A"#8!" 7A8I"668!IJ A#8A""A38I7JMM
受 电 击 时 间 在 术 后 A9 +%69 + 均 显 著 增 加 "?@
989A’$ 模型组小鼠的学习 % 记忆功能随着术后时
间的延长 !损害亦显著加重 "?@989A’$
!"#"# 水迷宫实验 "-/’(< 5/=( ’(&’’
水迷宫由黑色塑料板制成 $ 水深 $9 25 ! 水温
#"# 水迷宫实验
!"% 统计学处理 采用 EF2(G 软件对两组资料做 3 检验 $ # 结果 #"! 行为学实验
各组动物术后 A9 + %69 + 的跳台实验学习和 记忆成绩见表 A$ 模型组的反应期在术后 A9 + %
69 + 时较假手术组显著延长 )?@989A’& 潜伏期显 著缩短 "?@989A ’& 学习期和记 忆 期 的 错 误 次 数 及
腔注射麻醉 !-#R 酒精消毒颈前皮肤 ! 颈 正 中 切 口 ! 分离双侧颈总动脉 ! 穿线备用 $ 硝普钠按 +F#
U 中日友好医院院级课题 ! 课题号 )VW%-(!
作者简介 ) 王 昊 ’(%X%Y (! 女 ! 副主任医师 ! 医学硕士 $ 修回日期 )!""#Y"!Y!+ 收稿日期 )!""QY(!Y(Q