药物分析方法综述

固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点 样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对 照物质）比较进行定性定量。
（一）定性参数

比移值(Rf值)
溶质移动距离与流动相移动距离之比。 （速度之比？）
Rf =L/L0 （定时展开）
L为原点（origin）至斑点中心的距离， L0为原点至溶剂前沿（solvent front） 的距离

2. 氧化铝
碱性氧化铝(wenku.baidu.comH9.0)——分离中性或碱性化合物， 如生物碱、脂溶性维生素等；
中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳定的化合物；
酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离。
活度也与含水量有关。

展开剂(流动相)
极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序： 水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇 ＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷 ＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳>环己烷> 石油醚。
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（ <10μm），液
体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
(2) 进样装置
流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置，
其结构如图所示：
(3) 高效分离柱


吸附剂
1.硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键（吸附 性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同而分离。 应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等


活度与含水量的关系：含水量高，活性级高，活度低。 活化：加热至100℃左右，除去吸附水提高活度。 （注意温度不可过高） 分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关。

与组分及色谱条件有关
相对比移值(relative Rf；Rr)
Rr = Rf (i)/Rf (s)=L(i)/L(s)

与组分、色谱条件、参考物质有关。 Rr值可以大于1，也可以小于1。 重现性和可比性均比Rf值好，能消除系 统误差（参考物质与组分在完全相同 的条件下展开）
（二）吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂
三、化学键合色谱法（BPC）
1.反相键合色谱法（RBPC）
固定相：十八烷基（ODS或C18）键合相 流动相：甲醇-水；乙腈-水 分离原理：疏溶剂理论、双保留机制、顶 替吸附—液相相互作用模型等。
化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
一、高效液相色谱法的特点
feature of HPLC
特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
二、流程及主要部件
process and main assembly of HPLC
1.流程
2.主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。
第二章 药物分析方法
——分析化学部分
学生:06级药事管理
长春中医药大学
5.3 经典液相色谱法
一、柱色谱的实验操作
(一)、装柱 (二)、加样 (三)、洗脱与馏分的收集 (四)、化合物的检出
内径 : 柱长=1 : 10~20 湿装法和干装法 体积小
等份收集
二、薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC)
流动相极性与容量因子的关系： 底剂：水 极性增大，洗脱能力降低，k? 应用：用于分离非极性至中等极性的各种分子型化合物。 2.正相键合色谱法 固定相：氰基与氨基键合相 流动相：正己烷+极性溶剂 分离原理：固定相与溶质分子间的取向力、诱导力、氢键 力。 流动相极性与容量因子的关系： 极性增大，洗脱能力增加，k? 氨基键合相色谱柱主要要用于糖类的分离。

展开剂
选择原则：根据被分 离物质的极性 Stahl简图：极性物 质—活度低（活性 级大）的吸附剂-极性展开剂
混合溶剂
先用单一溶剂展开，
若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂，如 乙醇、丙酮等， 如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如 环己烷、石油醚等)，以降低极性。
可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
(4) 液相色谱检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
（三）薄层色谱操作方法
制板 均匀 点样 集中 展开 (多种方式) 预饱和 显色

（四）定性和定量分析



定性分析
比较Rf值或Rr值 、斑点颜色或荧光 常采用已知标准物质对照（同一板上展开） 多种展开系统的Rf值与对照品一致。


定量分析
洗脱法 直接定量法 1.目视比较法（如杂质限度检查方法） 2.薄层扫描法
3. 离子抑制色谱法
1.适用范围：3.0 ≤ PH ≤ 7.0的弱酸及 7.0 ≤ PH ≤ 8.0的弱碱。 2.抑制剂：向流动相中加少量弱酸、弱碱或缓 冲盐为抑制剂，调节pH，抑制样品的解离。 3.容量因子及影响因素： 弱酸：PH小于pka时，组分以分子形式存在为 主，k大。 弱碱：情况相反。
4. 离子对色谱
ion pair chromatography
原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离 子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结 合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行 分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵 或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作 为对离子；
5.4 高效液相色谱法
high performance liquid chromatograpphy, HPLC
高效液相色谱法是采用高压输液泵将具 有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶 剂、缓冲液等流动相泵入装有填充剂（固定 相）的色谱柱进行分离测定的色谱方法。
经由进样阀注入的供试品，有流动相 带入柱内，各成分在柱内被分离后，依次 进入检测器，有记录仪、积分仪或数据处 理系统记录色谱信号。