聚乙烯亚胺溶液配制说明书
上海常用转染试剂配方
上海常用转染试剂配方
1.将磷酸钙和HEPES缓冲液混合，pH值调整至7.05。
2. 加入NaCl和葡萄糖并充分混合。
3. 用无菌纯水将体积加至所需体积。
2. 聚乙烯亚胺（PEI）转染试剂配方
材料：
- 聚乙烯亚胺（PEI）25kDa
- 无菌纯水
步骤：
1. 将PEI加入无菌纯水中，充分混合。
2. 调整pH值至7.4。
3. 用无菌纯水将体积加至所需体积。
3. 脂质体转染试剂配方
材料：
- DOPC 100mg/ml
- DOPE 20mg/ml
- Cholesterol 20mg/ml
- 无菌纯水
步骤：
1. 将DOPC、DOPE和胆固醇混合，充分混合。
2. 用无菌纯水将体积加至所需体积，并充分混合。
4. Lipofectamine 2000转染试剂配方
材料：
- Lipofectamine 2000转染试剂
- 无菌纯水
步骤：
1. 将Lipofectamine 2000转染试剂加入无菌纯水中，充分混合。
2. 用无菌纯水将体积加至所需体积。
注意事项：
以上试剂配方仅供参考，具体使用时应根据实验需要进行调整。
在使用前，应确保试剂完全溶解，并进行无菌处理。
在转染实验中应注意操作规范，避免对人体和环境的伤害。
东纳生物-PEI（聚乙烯亚胺）修饰纳米磁珠说明书
PEI （聚乙烯亚胺）修饰纳米磁珠产品系列说明书【产品名称】PEI （聚乙烯亚胺）修饰纳米磁珠产品【英文名称】PEI modified nano-magnetic beads【订货信息】PEI 磁珠/纯水【简介】东纳生物科技有限公司提供纳米PEI （聚乙烯亚胺）修饰纳米磁珠产品，具有高的比表面积，高负载量以及高的表面正电荷。
PEI 富含阳离子结构可以中和DNA 、RNA 负电荷从而形成带有正电荷的转染复合物进入细胞，可用于DNA 或RNA 的细胞转染实验研究。
此外，PEI 修饰纳米磁珠表面具有大量氨基，也可以通过化学偶联试剂（如戊二醛）的作用与多肽、蛋白、寡聚核苷酸、生物酶、药物分子等生物配体共价偶联，可作为良好的基础材料进行功能化修饰。
【产品参数】图1.100nm PEI 磁珠扫描电镜（左图，120±20nm ）、200nm PEI 磁珠扫描电镜（中图，220±30nm ）、300nm PEI 磁珠扫描电镜（右图，320±20nm ）。
图2.100nm PEI 磁珠水动力尺寸（左图，145±4nm ）、200nm PEI 磁珠水动力尺寸（中图，216±18nm ）、300nm PEI 磁珠水动力尺寸（右图，335±14nm ）。
图3.100nm PEI 磁珠Zeta 电位（左图，66.0±1.9mV ）、200nm PEI 磁珠Zeta 电位（中图，58.8±0.5mV ）、300nm PEI 磁珠Zeta 电位（右图，41.4±10.4mV ）。
【注意事项】1.磁珠取用前应充分混匀，防止取用改变磁珠浓度，避免长时间超声对磁珠表面破坏；2.磁珠取用后，使用前请进行磁分离并用纯水或所用缓冲溶液清洗2-3遍；3.磁珠使用和保存过程中应避免冻融。
【生产单位】公司名称南京东纳生物科技有限公司地址南京市江宁区龙眠大道568号南京生命科技小镇5号楼北楼6楼邮政编码210000电话号码025********电子邮箱**************公司网站。
线性 PEI MAX 40K 转染说明书
线性PEI MAX40K转染说明书化学名：线性聚乙烯亚胺，线性PEI，聚乙烯亚胺，线性，MW40000，转染级订货号＃：49553-93-7规格：1g品牌：BIOHUB CAS＃：49553-93-7分子量：40,000（~22,000自由基）溶于：水不溶于：常用有机溶剂（乙醇，丙酮，四氢呋喃）外观：白色至灰白色自由流动的固体处理：手套和通风橱储存：在室温下避光干燥储存PEI MAX40K（在游离碱中也称为PEI22K）是一种功能强大，值得信赖且经济实惠的瞬时转染试剂。
在HEK293和CHO大多数表达系统中，PEI MAX都能提供稳定的高表达（96孔板至100L生物反应器）。
现在每年有更多的研究人员和公司来使用PEI MAX进行细胞转染，因为相对于大多数转染试剂而言PEI MAX既能等到稳定的高表达又能使转染成本降低最少40%。
PEI MAX比更PEI25K易于使用，并且比PEI25K有更高的转染效率，通常PEI25K转染过程通常需要几个小时才能完成准备，而PEI MAX40K可在两小时内完成整个转染过程。
另外，PEI25K含有4-11％的残留丙酰基，这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合，而PEI MAX40K的丙酰基完全脱落，意味着PEI MAX每批产品的性能更加稳定。
PEI25K（KE1075）和PEI MAX40K（KE1098）的比较配置：1：称取100mg PEI MAX，加新鲜的细胞级别的水90ml，搅拌溶解。
2：调整pH值至7.0，定容至100ml，用0.22um的滤器过滤，分装后储存于4℃，保质期可以达到12个月。
转染操作流程：◆瞬时转染方法1.接种细胞：转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。
调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。
2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。
聚乙烯亚胺转染剂的制备
聚乙烯亚胺转染剂的制备一、前言聚乙烯亚胺（PEI）是一种常用的转染剂，被广泛应用于基因转染、蛋白质转染等领域。
其优点包括高效、可逆性强、不毒性等。
本文将详细介绍聚乙烯亚胺转染剂的制备方法。
二、材料与设备1. 聚乙烯亚胺（PEI）2. 无水乙醇3. 磷酸盐缓冲液（PBS）4. 甲酸5. N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS）6. 1-乙氧羰基-3-(3-二甲氨基丙基)卡巴泊烷（EDC）7. 离心管8. 磁力搅拌器9. 紫外可见分光光度计三、制备方法1. PEI的溶解将PEI加入无水乙醇中，使用磁力搅拌器在室温下搅拌至完全溶解。
此时可以根据需要调整浓度。
2. 活化NHS与EDC将NHS和EDC加入PBS中，使用磁力搅拌器在室温下搅拌至完全溶解。
此时可以根据需要调整浓度。
3. 聚合反应将活化的NHS和EDC缓慢加入PEI溶液中，使用磁力搅拌器在室温下搅拌反应2小时。
反应结束后，离心沉淀，用PBS洗涤去除未反应的NHS和EDC。
4. 甲酸处理将沉淀物加入甲酸中，使用磁力搅拌器在室温下搅拌30分钟。
此步骤可以去除PEI中的杂质。
5. 洗涤与干燥将沉淀物用PBS洗涤3次，离心干燥即可得到PEI转染剂。
四、注意事项1. PEI转染剂制备过程中要注意无菌操作。
2. 制备过程中要避免暴露于光线下，以免影响反应结果。
3. 制备过程中要注意安全，避免接触到有毒或刺激性物质。
4. 制备完成后要储存在冰箱内保存。
五、结论本文详细介绍了聚乙烯亚胺转染剂的制备方法。
通过以上步骤，可以得到高纯度、高效的PEI转染剂，为基因转染、蛋白质转染等领域的研究提供了重要的支持。
聚乙烯亚胺化学品安全技术说明书MSDS
4/8
呼吸系统防护 如危险性评测显示需要使用空气净化的防毒面具，请使用全面罩式多功能防毒面具（US）或ABEK型 （EN 14387）防毒面具筒作为工程控制的候补。如果防毒面具是保护的唯一方式，则使用全面罩式 送风防毒面具。 呼吸器使用经过测试并通过政府标准如NIOSH（US）或CEN（EU）的呼吸器和零 件。
12.3 生物积累的潜在可能性 无数据资料
12.4 土壤中的迁移 无数据资料
12.5 PBT 和 vPvB的结果评价 无数据资料
12.6 其它不利的影响 对水生生物有毒并有长期持续的影响。
13 废弃处置
13.1 废物处理方法 产品 将剩余的和不可回收的溶液交给有许可证的公司处理。 污染了的包装物 作为未用过的产品弃置。 进一步的说明 : 无数据资料
化学品安全技术说明书
China 版本 v1.0
1 化学品及企业标识 1.1 产品标识符
化学品俗名或商品名
: 聚乙烯亚胺 Ethylene imine polymer
CAS No. 别名
: 9002-98-6
: 乙烯亚胺聚合物 溶液;PEI Ethyleneimine polymer solution; PEI; Polyethyleneimine; Poly (ethyleneimine) solution
10.2 化学稳定性 无数据资料
10.3 敏感性(危险反应的可能性) 无数据资料
10.4 避免接触的条件
5/8
无数据资料
10.5 不兼容的材料 强氧化剂
10.6 危险的分解产物 无数据资料
11 毒理学资料
pei配制方法
pei配制方法PEI配制方法是一种常用的方法，用于制备聚醚酰亚胺（PEI）溶液。
PEI是一种常用的阳离子聚合物，在生物医学、材料科学等领域广泛应用。
本文将介绍PEI配制方法的详细步骤和注意事项。
一、配制原料PEI的化学式为（C2H4NH）n，可以通过聚合反应制备得到。
在配制PEI溶液时，需要用到PEI粉末和去离子水。
PEI粉末的质量应该足够纯净，以确保制备的溶液质量。
二、配制步骤1. 准备工作在开始配制PEI溶液之前，需要准备好实验设备和必要的化学品。
首先需要准备好PEI粉末和去离子水，并将它们放置在实验室中。
然后需要准备好一个容量瓶，用于配制PEI溶液。
容量瓶应该干净，无水无杂质。
2. 加入去离子水将容量瓶置于天平上，并将天平清零。
然后，将一定量的去离子水加入容量瓶中。
加水的量应该根据需要配制的PEI浓度来确定。
在加水的过程中，应该轻轻摇晃容量瓶，以确保水分布均匀。
3. 加入PEI粉末将一定量的PEI粉末加入容量瓶中。
加入粉末的量应该根据需要配制的PEI浓度来确定。
在加入粉末的过程中，应该轻轻摇晃容量瓶，以确保PEI粉末均匀地分散在水中。
4. 摇匀将容量瓶盖好，并轻轻摇匀，使PEI粉末彻底溶解在水中。
在摇匀的过程中，应该避免产生气泡，以免影响配制的溶液质量。
5. 调整pH值根据实际需要，可以通过加入酸或碱的方法来调节PEI溶液的pH 值。
一般来说，PEI的pH值应该在7左右，以确保其稳定性。
三、注意事项1. PEI粉末应该足够纯净，以确保制备的溶液质量。
2. 在配制PEI溶液的过程中，应该避免产生气泡，以免影响配制的溶液质量。
3. 配制PEI溶液时，应该注意控制PEI粉末和去离子水的比例，以确保配制出所需浓度的PEI溶液。
4. 在调节PEI溶液的pH值时，应该注意控制加入酸或碱的量，以避免过度调节导致PEI溶液失稳。
5. 配制好的PEI溶液应该保存在冰箱中，并且应该避免阳光直射和震动。
PEI配制方法是一种简单易行的方法，可以用于制备高质量的PEI溶液。
分子量1400-1600的聚乙烯亚胺
分子量1400-1600的聚乙烯亚胺一、聚乙烯亚胺的合成聚乙烯亚胺（PEI）是一类具有重复乙烯基单元的胺类聚合物，其分子量通常在数百至数千道尔顿之间。
其中，分子量在1400-1600的聚乙烯亚胺具有特殊的性能和广泛的应用。
合成PEI通常涉及以下步骤：1.单体合成：PEI的单体是二乙烯基单体，可以通过不同的方法合成，如乙烯基化、齐聚、聚合等。
2.聚合反应：单体在适当的催化剂和引发剂作用下进行聚合，生成低分子量PEI。
聚合过程中可以通过控制反应条件（如温度、压力、浓度等）来控制分子量和聚合度。
3.后处理：聚合后需要进行纯化和后处理，以去除未反应的单体、催化剂和副产物，得到高纯度的PEI。
二、聚乙烯亚胺的性质分子量在1400-1600之间的聚乙烯亚胺具有一系列独特的性质：1.高分子量：该范围的PEI具有相对较高的分子量和聚合度，使其具有良好的机械性能和稳定性。
2.水溶性：PEI具有良好的水溶性，可以在水溶液中形成稳定的聚合物溶液。
3.生物相容性：PEI对生物体无毒，具有良好的生物相容性和生物可降解性。
4.化学活性：PEI分子中的氨基和亚氨基使其具有较高的化学反应活性，可以与多种基团发生反应，用于制备功能化的聚合物材料。
5.电性能：PEI具有优良的电绝缘性能和介电常数，可以用于制备电绝缘材料和电极材料。
三、聚乙烯亚胺的应用由于其独特的性质，分子量在1400-1600的聚乙烯亚胺在多个领域有着广泛的应用：1.药物传递和基因治疗：由于其良好的生物相容性和化学活性，PEI可以作为药物载体和基因传递载体，用于药物传递系统和基因治疗。
其能够包裹和保护药物或基因，提高药物的稳定性和靶向性，降低毒副作用。
2.组织工程：PEI可作为支架材料用于组织工程，为细胞提供生长和附着的基质。
其良好的生物相容性和化学活性可促进细胞的粘附、增殖和分化。
3.电化学传感器和电极材料：PEI具有良好的电性能，可作为电化学传感器的敏感材料和电极材料，用于检测生物分子和化学物质。
莱思诺 MI 6721 聚乙烯亚胺 安全技术说明书
安全技术说明书页: 1/11 巴斯夫安全技术说明书按照GB/T 16483编制日期 / 本次修订: 14.06.2023版本: 7.2日期/上次修订: 11.06.2023上次版本: 7.1日期 / 首次编制: 06.05.2006产品: 莱思诺 MI 6721 聚乙烯亚胺Product: Loxanol® MI 6721(30564823/SDS_GEN_CN/ZH)印刷日期 31.10.20231. 化学品及企业标识莱思诺 MI 6721 聚乙烯亚胺Loxanol® MI 6721推荐用途和限制用途: 化学品用于工业产品的合成和/或配制公司:巴斯夫(中国)有限公司中国上海浦东江心沙路300号邮政编码 200137电话: +86 21 20391000传真号: +86 21 20394800E-mail地址: **********************紧急联络信息:巴斯夫紧急热线中心（中国）+86 21 5861-1199巴斯夫紧急热线中心（国际）:电话: +49 180 2273-112Company:BASF (China) Co., Ltd.300 Jiang Xin Sha RoadPu Dong Shanghai 200137, CHINA Telephone: +86 21 20391000Telefax number: +86 21 20394800E-mail address: ********************** Emergency information:Emergency Call Center (China):+86 21 5861-1199International emergency number: Telephone: +49 180 2273-1122. 危险性概述纯物质和混合物的分类:急性毒性: 分类4 (口服)严重损伤/刺激眼睛: 分类1巴斯夫安全技术说明书日期 / 本次修订: 14.06.2023版本: 7.2产品: 莱思诺 MI 6721 聚乙烯亚胺Product: Loxanol® MI 6721(30564823/SDS_GEN_CN/ZH)印刷日期 31.10.2023对水环境的急性危害: 分类2对水环境的慢性危害: 分类2标签要素和警示性说明:警示词:危险危险性说明:H318造成严重眼损伤。
聚乙烯亚胺溶液配制说明书
线性聚乙烯亚胺溶液配制说明书——polysciences #23966,1mg/ml 转染试剂的配制转染试剂线性PEI 溶液的配制聚乙烯亚胺（Polyethylenimine ，PEI ）是聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH 下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。
PEI ，可用作转染试剂，它可以缩聚DNA 分子形成颗粒并转染真核细胞。
有实验证明，分子量为25000的线性PEI 即Polysciences 23966转染效率最高。
下面将主要介绍polysciences 线性PEI(#23966)的产品特性及其溶液的配制过程。
1.产品特性:产品名称：线性聚乙烯亚胺(PEI)CAS 号9002-98-6，26913-06-4分子式(CH 2CH 2NH)n 分子量25000熔点73-75°C 外观白色或黄色固体结构式溶解性溶于热水，低pH 值的冷水，甲醇和乙醇；不溶于：苯，乙醚和丙酮储存室温2.溶液配制此指导说明书是经polysciences 公司研究，测试及其客户反馈的后编写的。
下面推荐一种简单适用而高效的方法，讲述如何配制浓度为1mg/mL 的转染试剂的配制。
材料：1g #23966、1L 纯水（Milli-Q®纯水，注射用水（WFI ），或类似的生物级水）、12M 盐酸、10M 氢氧化钠、一次性0.1-0.2µm PES 真空无菌过滤器、无菌高聚乙烯或聚丙烯试剂瓶。
器材：1L 玻璃烧杯、1L 玻璃量筒、核准pH 计、2支1mL 塑料移液管、托盘、聚四氟乙烯（PTFE ）搅拌棒、真空泵配制过程：1g #23966——900mL 水溶解——搅拌、加热（60-80°C ）——加HCl 调pH 到2.0左右——盖上烧杯，搅拌3h （直至粉末完全溶解）——冷却至室温——加NaOH 调pH 到6.9-7.1——移液到量筒，加水补足至1L ——真空过滤消毒——分装，-20°C 保存。
PEI-聚乙烯亚胺
PEI（聚乙烯亚胺的缩写）性质：又称聚氮杂环丙烷。
一种水溶性高分子聚合物。
无色或淡黄色黏稠状液体，有吸湿性，溶于水、乙醇，不溶于苯。
分子式：(CH2CH2NH)n英文名：poly(ethylene imine)，简称PEI[1]CAS号：9002-98-6（polyethylenimine branched 粘稠状液体）市售品通常为20%～50%浓度的水溶液。
造纸工业中用的聚合度在100左右，其水溶液呈阳性，5%水溶液pH值为8～11，在酸存在下会凝胶化。
聚乙烯亚胺有较高的反应活力，能与纤维素中的羟基反应并交联聚合，使纸张产生湿强度，并具有干增强作用。
任何酸、碱和硫酸铝的存在，均将影响其湿强度和留着率。
主要用作未施胶的吸收性纸(如滤纸、吸墨水纸、卫生纸等)的湿强度剂，但其损纸较难处理。
此外并能加快纸浆滤水，使白水中细小纤维易于絮凝。
对酸性染料有较强结合力，可用作酸性染料染纸时的固色剂。
还可用以处理玻璃纸，使纸减少润湿变形等。
聚乙烯亚胺还可用于纤维改性、印染助剂、离子交换树脂及凝聚与沉降(金属的捕集、废水处理)等。
实例：HG-20 聚乙烯亚胺的详细说明品名：聚乙烯亚胺含量：50%分子量：4300-6500外观：黄色透明液体PH: 8-11用途：碱锌细化剂；镀锌中间体！！添加量：50-100mg/L消耗量：3g/KAHCAS No.：25987-06-8新用途：在一定条件下，聚乙烯亚胺固体材料可以大量吸收潮湿空气中的二氧化碳，分离过程也非常方便。
可以永久的将二氧化碳封存在聚乙烯亚胺固体材料中，也可以将二氧化碳提炼出来用于其他领域。
该材料能够重复使用，且一如既往的保持超高吸收效能。
聚乙烯亚胺均聚物G-35
电镀：化学名称：聚乙烯亚胺均聚物G-35分子式：(CH2CH2NH)nCas:9002-98-6,25987-06-8分子量：300\600\1200\1800\10000\70000外观：无色或淡黄色液体PH 值：11-12用量：0.1-10mg/l应用：作为初级光亮剂、晶粒细化剂，改进分散能力，用于碱性镀锌，镀铜，镀锡及锡合金，镀铝及铝合金.一种水溶性高分子聚合物有吸湿性，溶于水、乙醇，不溶于苯。
市售品通常为20％～50％浓度的水溶液造纸工业中用的聚合度在100左右，其水溶液呈阳性，5％水溶液pH值为8～11，在酸存在下会凝胶化。
聚乙烯亚胺有较高的反应活力，能与纤维素中的基反应并交联聚合，使纸张产生湿强度，并具有干增强作用。
任何酸、碱和硫酸铝的存在，均将影响其湿强度和留着率，主要用作未施胶的吸收性纸(如滤纸、吸墨水纸、卫生纸等)的湿强度剂，但其损纸较难处理。
化学名称:N,N,N'N'-四(2-羟丙基)乙二胺EDTPCas :102-60-3含量：75%，95%，98%分子式:C14H32N2O4外观:无色透明溶液比重@20℃:1.04-1.06折光@20℃:1.4470-1.4570PH 值:7.5-8.5应用:它易溶于水，水溶液呈弱碱性。
主要用于化学镀铜络合剂化学名称：间硝基苯磺酸钠MBSCas :127-68-4分子式：C6H4NNaO5S分子量：225．16纯度：≥95．0％水份：≤3.0 ％钙盐：≤0．52 ％不溶物：≤0．28 ％PH 值：7-9(1%溶液)外观：白色粉末含量：≥95．0％用途：本品可用作电镀退镍剂，染料中间体，制备香料香兰素.可用作温和的氧化剂.作还原染料，硫化染料印染时的防印染助剂，染料成色的保护剂.还可用作合成染料的氧化剂，.主要用作还原染料色地防染印花时的防白剂。
活性染料印花与轧染时的色光保护剂，还可用作修理花布浮雕用剂，还原染料色纱织物煮炼时的白地保护剂。
聚乙烯亚胺的合成
聚乙烯亚胺的合成聚乙烯亚胺是一种重要的高分子化合物，具有广泛的应用领域。
本文将介绍聚乙烯亚胺的合成方法及其应用。
聚乙烯亚胺的合成方法有多种，其中最常用的是氨基乙烯酸乙酯的聚合反应。
该反应的步骤如下：将氨基乙烯酸乙酯溶解在适量的有机溶剂中，如甲醇或乙醇。
然后加入适量的酸催化剂，常用的有硫酸、盐酸或磷酸等。
催化剂的作用是加速反应速度并提高产品的收率。
接下来，在搅拌下将反应体系加热到适当的温度，通常在60℃至80℃之间。
加热的目的是使反应能够快速进行，并且提高产物的纯度。
在反应进行的过程中，逐渐加入引发剂，常用的有过硫酸铵或过硫酸钾等。
引发剂的作用是引发聚合反应，使氨基乙烯酸乙酯分子之间发生聚合反应，形成聚乙烯亚胺。
反应完成后，将反应液冷却并过滤，得到聚乙烯亚胺的固体产物。
最后，用适量的溶剂将产物溶解，经过过滤和浓缩，得到纯净的聚乙烯亚胺。
聚乙烯亚胺具有许多优良的性质，因此在许多领域有着广泛的应用。
首先，聚乙烯亚胺具有良好的水溶性，可以用作水处理剂。
它可以与水中的杂质结合形成沉淀物，从而去除水中的污染物。
聚乙烯亚胺还可以用作纸张和纺织品的加工助剂。
它可以改善纸张的机械性能和印刷性能，使其更适用于各种应用。
对于纺织品，聚乙烯亚胺可以增加其柔软度和抗皱性，提高织物的品质。
聚乙烯亚胺还具有优良的生物相容性，因此在医学领域也有广泛的应用。
它可以用作药物的载体，将药物包裹在聚乙烯亚胺中，以延长药物的释放时间和改善药物的稳定性。
此外，聚乙烯亚胺还可以用于制备生物传感器和组织工程材料等。
聚乙烯亚胺是一种重要的高分子化合物，具有广泛的应用领域。
通过合适的合成方法可以得到高纯度的聚乙烯亚胺，其优良的性质使其在水处理、纸张加工、纺织品改性和医学应用等方面发挥着重要的作用。
未来，随着科技的不断发展，聚乙烯亚胺的应用前景将更加广阔。
一种聚乙烯亚胺金属配位固定化的多酶体系及其制备方法[发明专利]
![一种聚乙烯亚胺金属配位固定化的多酶体系及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3556bdfd0408763231126edb6f1aff00bfd57045.png)
(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510465185.8(22)申请日 2015.07.31201510386673.X 2015.07.03 CNC12N 11/18(2006.01)C12N 11/08(2006.01)C12N 9/04(2006.01)C12N 9/02(2006.01)(71)申请人厦门大学地址361000 福建省厦门市思明南路４２２号(72)发明人王世珍 方柏山 张永辉 林鹏(74)专利代理机构厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204代理人张松亭(54)发明名称一种聚乙烯亚胺金属配位固定化的多酶体系及其制备方法(57)摘要一种聚乙烯亚胺金属配位固定化的多酶体系及其制备方法，属于固定化酶技术领域，利用聚乙烯亚胺与金属离子配位固定甘油脱氢酶、辅酶氧化酶，以及甘油脱氢酶-辅酶氧化酶融合酶，在固定化过程中聚乙烯亚胺分子通过亚胺与金属离子的配位作用，形成网状的聚乙烯亚胺骨架，配位在聚乙烯亚胺上的金属离子与甘油脱氢酶、辅酶氧化酶的C 端组氨酸标签，以及甘油脱氢酶-辅酶氧化酶融合酶的C 端组氨酸标签形成配位键，获得固定化多酶体系。
金属离子在固定化过程中起配位交联作用，并可提高多酶体系的催化效率。
本发明的优点在于多酶耦联效率高、制备条件温和、工艺简单易行。
所得固定化酶具有固定化率高，活性回收率高，能够明显提高温度稳定性、重复使用稳定性好等优点。
(66)本国优先权数据(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书10页序列表5页 附图5页CN 105063010 A 2015.11.18C N 105063010A1.一种聚乙烯亚胺金属配位固定化多酶体系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1)工程菌的构建：构建带有组氨酸标签的甘油脱氢酶基因、带有组氨酸标签的辅酶氧化酶基因，并利用上述两基因构建带有组氨酸标签的甘油脱氢酶-辅酶氧化酶融合酶基因，用BamHⅠ和xholⅠ分别双酶切上述基因及pET32a质粒，用T4DNA连接酶连接转化大肠杆菌(DH5α)，然后提取质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)制备可表达甘油脱氢酶、可表达辅酶氧化酶、可表达甘油脱氢酶-辅酶氧化酶融合酶的工程菌；2)粗酶液制备：将步骤1)得到的工程菌接种到含有氨苄青霉素的LB培养基中，培养一段时间后加入诱导剂IPTG；培养所得发酵液离心获得细胞，配制成细胞液；超声破碎，将破碎液离心，收集上清液即为粗酶液；3)纯酶的制备：采用镍柱对步骤2)得到的粗酶液进行纯化并利用pH6.5～8.0的Tris-HCl缓冲液超滤除盐，得到甘油脱氢酶、辅酶氧化酶、甘油脱氢酶-辅酶氧化酶融合酶；4)聚乙烯亚胺-金属溶液制备：配置浓度为5～200mg/ml的聚乙烯亚胺溶液，向该溶液中加入金属盐溶液并使其终浓度为0.05～50mmol/L，配成混合溶液，4℃保温0.5～4h，离心除去上清，沉淀重悬于1～100mmol/L的pH6.0～8.0的磷酸缓冲液或1～100mmol/ L的pH8.0～10的氨水-氯化铵缓冲液中，得到聚乙烯亚胺-金属溶液；5)固定化多酶体系制备：将含有步骤3)中得到的甘油脱氢酶、辅酶氧化酶、甘油脱氢酶-辅酶氧化酶融合酶的酶浓度为0.05mg/ml～10mg/ml的酶溶液以1～4:1的比例加入至步骤4)中得到的聚乙烯亚胺-金属溶液，形成固定化颗粒，离心分离，冲洗，重悬于0.05M 的pH7.0的Tris-HCl缓冲液或0.05～0.1M的pH8.0～10.0的氨水-氯化铵缓冲液中，即得聚乙烯亚胺金属配位固定化多酶体系。
聚乙烯亚胺产品介绍
EPOMIN简介日本触媒株式会社自从1969年乙烯亚胺产品工业化生产以来，就一直致力于乙烯亚胺衍生物产品的开发、生产和销售。
EPOMIN是我司聚乙烯亚胺的注册商标，它包括一系列的乙烯亚胺衍生物产品，是由乙烯亚胺开环聚合而成。
EPOMIN是一种水溶性聚合物，具有很强的反应性及高阳离子密度，广泛用于水处理剂、螯合剂、粘合剂、纤维处理剂等领域。
我们会依据所积累的经验，在EPOMIN的最终使用和产品开发方面，尽可能的向客户提供更多的信息和技术服务。
此外，生产EPOMIN的川崎工厂，于1997年7月通过了“乙烯亚胺衍生物生产”的ISO9002（JCQA）的认证，这确保我们向客户提供高品质的产品。
同时，在2000年6月，通过了ISO14001的认证，确保环境维持/改善。
EPOMIN的生产方法EPOMIN的原料--乙烯亚胺，以前的生产方法是将一乙醇胺先用硫酸酯化，然后在氢氧化钠中加热环化制得。
日本触媒公司开发了新的气相催化法，由一乙醇胺直接脱水环化生成乙烯亚胺，并于1990年成功的实现了工业化生产。
EPOMIN由乙烯亚胺在酸性催化剂下开环聚合而成。
EPOMIN不是完全的线形聚合物，而是含有部分支链的聚合物，包括伯、仲、叔胺。
EPOMIN的特征EPOMIN是含有胺基的聚合物，具有以下特征：●在现有材料中具有最高的阳离子密度●高反应性●水溶性EPOMIN性状表○：溶解△：部分溶解X：不溶解※1：没有闪点分析方法1、分子量（1）、SP系列：数平均分子量，采用沸点升高测定法（2）、P系列：数平均分子量，采用渗透压测定法2、胺值：酸量滴定法（无水系统）3、分解温度：在氮气中采用差示扫描测热法4、闪点：克里弗兰开杯法5、胺基比例：NMR（13C）包装类型●罐（18Kg）●桶（200Kg）●ISO集装罐（20吨）●IBC集装罐（1吨）如有其他包装要求，请与我们联系。
EPOMIN®的功能和用途1）EPOMIN®功能●高附着性、高吸附性胺基能与羟基反应生成氢键，胺基能与羧基反应生成离子键，胺基也能与碳酰基反应生成共价键。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
器材： 1 L 玻璃烧杯、1（PTFE）搅
拌棒、真空泵
配制过程： 1g #23966——900mL 水溶解——搅拌、加热（60-80°C）——加 HCl 调 pH 到 2.0 左右——盖上烧
试剂储存： 冷冻部分溶液可在-20°C 保存长达一年；部分解冻的溶液可在 4°C 保存 2 周，不可反复冻融。
粉末储存： 未开封的粉末有效期两年。可在室温下保存直至使用。
参考文献： 1. 聚乙烯亚胺（PEI）、线性 (1 mg/mL). Cold Spring Harbor Protocols 2008, pdb.rec11323–pdb.rec11323 (2008). doi:10.1101/pdb.rec11323.
下面将主要介绍 polysciences 线性 PEI(#23966)的产品特性及其溶液的配制过程。
1. 产品特性:
产品名称：线性聚乙烯亚胺(PEI)
CAS 号
9002-98-6，26913-06-4
分子式
(CH2CH2NH)n
分子量 25000
熔点
73-75°C
外观
白色或黄色固体
溶解性
溶于热水，低 pH 值的冷水，甲醇和乙 储存
上海起发实验试剂有限公司
Catalog# 23966 –Polyethylenimine, Linear, MW 25000 (PEI 25K) Transfection Reagent Preparation and Storage Recommendations These guidelines are our recommendations based off research, testing, and customer feedback. There are alternative methods available, but we suggest following these recommendations for easy adoption and consistently high performance. These methods are adapted from Cold Spring Harbor Protocols [1], an excellent secondary resource for transient transfection literature. Reagent Preparation (1 mg/mL) Materials: 1. 1g PEI 25K (Polysciences Catalog# 23966). 2. 1L Milli-Q® water, water for injection (WFI), or comparable biological-grade water 3. 12 M Hydrochloric Acid (HCl) 4. 10 M Sodium Hydrochloride (NaOH) 5. Disposable 0.1-0.2µm PES vacuum sterile-filter. 6. Sterile HDPE or polypropylene storage vials for reagent aliquots. Equipment 1. 1L glass beaker 2. 1L glass graduated cylinder 3. Calibrated pH meter 4. 2 x disposable 1mL plastic pipettes 5. Stir plate 6. PTFE coated stir bar 7. Vacuum pump Method: 1. Dispense 1g of PEI 25K into beaker and suspend in 900 mL of water. 2. Add stir bar and set stirring to produce a small vortex. 3. Add hydrochloric acid dropwise until pH is < 2.0. 4. Cover top of beaker and stir for up to 3 hours until powder fully dissolves. 5. Add sodium hydroxide dropwise until pH is 6.9-7.1. 6. Transfer solution to graduated cylinder and add water until the total volume is 1L. 7. Sterile-filter through vacuum membrane. 8. Aliquot as desired and store at -20°C. Reagent Storage Frozen aliquots can be stored at -20°C for up to one year. Aliquots can be thawed and kept at 4°C for up to two weeks, but should never be re-frozen. Powder Storage Unopened powder has a shelf life of two years from date of receipt. It can be kept at room temperature until use. References 1. Polyethylenimine (PEI), linear (1 mg/mL). Cold Spring Harbor Protocols 2008, pdb.rec11323-pdb.rec11323 (2008). doi:10.1101/pdb.rec11323 Support We’re here to help! Our technical staff can troubleshoot most common and not-so-common issues you may have. Send us an email at info@ and we will get back to you, typically within one business day.
杯，搅拌 3h（直至粉末完全溶解）——冷却至室温——加 NaOH 调 pH 到 6.9-7.1——移液到量筒，加 水补足至 1L——真空过滤消毒——分装，-20°C 保存。
备注：加热或加酸都有助于 PEI 溶解。当然酸可能不用加那么多，详细用量可试加一点搅拌看看， 足够溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。
上海起发实验试剂有限公司
线性聚乙烯亚胺溶液配制说明书
——polysciences #23966,1mg/ml 转染试剂的配制 转染试剂线性 PEI 溶液的配制
聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分 子，每相隔二个碳个原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何 pH 下 都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。PEI，可用作转染试剂，它可以缩聚 DNA 分子形成颗 粒并转染真核细胞。有实验证明，分子量为 25000 的线性 PEI 即 Polysciences 23966 转染效率最高。
醇；不溶于：苯，乙醚和丙酮
室温
结构式
2. 溶液配制 此指导说明书是经 polysciences 公司研究，测试及其客户反馈的后编写的。下面推荐一种简单适用
而高效的方法，讲述如何配制浓度为 1mg/mL 的转染试剂的配制。
材料： 1g #23966、1L 纯水（Milli-Q®纯水，注射用水（WFI），或类似的生物级水）、12 M 盐酸、10 M