土壤中霉菌的分离

4 涂布 稀释度为 10-3,10-4,10-5,10-6 的四管土壤稀释液，没梯度取 0.1ml 置入对应标记的平板中，
涂布。
5 培养 将涂布后的平板倒置培养在恒温培养箱中，28℃
五．实验结果及处理
1.计算Leabharlann Baidu壤中真菌数.
稀释 度
10-3
10-4
10-5
10-6
菌落 1 2 3 平 1 2 3 平 1 2 3 平 1 2 3 平
12014108 B3 组 廖继林 26 蓝伟铭 28 张海峰 30 郭俊来 32 李诏然 34
陈纪廷 36
数
均
均
均
均
每克 样品 总菌 数
每克样真菌数： s

x
0.1 10
*10^
n
稀释度为 10-n 平均菌落数 X
2，通过菌落形态的观察辨别出霉菌，并在平板底做好标记
六.参考书目
[1] 周德庆 . 微生物学教程 . 3 版 . 北京: 高等教育出版社, 2013 [2] 熊元林 , 姚小飞 . 赵为 . 微生物实验 . 2 版 . 华中师范大学出版社, 2014 [3] 周德庆 , 徐德强 . 微生物实验教程 . 3 版 . 北京:高等教育出版社, 2013 [4] 李兴杰 . 微生物学 . 北京:高等教育出版社 , 2013 [5] 车振明 . 微生物学 . 北京:科学出版社 , 2011
6.加压蒸汽灭菌 操作者
温度
时间
备注
（二）．实验操作步骤 稀释涂布平板法. 1.倒平板，加入链霉素后，摇匀，趁热倒平板，凝固后，并做好标记，10-3,10-4,10-5,10-6,每梯 度 3 个平板。
2.制备土壤稀释液 待 90ml 无菌水降至室温，称取土样 10g，置入盛有 90ml 无菌水的三角瓶中，震荡，摇匀，
Martin 培养基的配制
用量
1L
240ml
20g
4.8g
10g
2.4g
5g
1.2g
1g
0.24g
0,.5g
0.12g
100ml
24ml
900ml
216ml
——
——
115℃ 30min
0.03g
0.0072g
备注
待链霉素加入前，需将培养基冷却到 55℃~60℃，最终含量为 30ug/ml 5 移液管包装：6 支
实验用量（g)
2.无菌水的制备 90ml 的无菌水（三角瓶，带玻璃珠），9ml 试管灭菌水（试管）6 支
3 培养皿的包扎：6 个一组，12 个
4.Martin 培养基的配制
组分
琼脂粉 葡萄糖 蛋白胨 K2HPO4 MgSO4.7H2O 1/3000 孟加拉红
溶液 自来水 自然 pH 加压蒸汽灭菌 链霉素
种类
百分含量
数目(个/克)
细菌
70%~90%
2.5 亿
放线菌
5%~30%
70 万
霉菌
3%~20%
40 万
藻类
1%~2%
5万
原生动物
0.5%~1%
3万
真菌主要存在于土壤表面 10cm 处，在 30cm 处以下很难找到真菌，土壤中常见的真菌 主要是：半知菌，如曲霉，地霉，青霉，木霉
Martin 培养基，是一种适合真菌生长并含有抑制细菌和放线菌生长的链霉素和孟加拉亿 的培养基，能有效地选择土壤中少量存在的真菌，生长在马丁氏培养基的真菌，因大多数被 孟加拉红有一定程度上的抑制，故形成的菌落较少，这正好避免了某些气生菌丝生长旺盛的 霉菌迅速蔓延而造成的不利于霉菌的分离和计数的负面影响。
三.实验器材与用品
1.材料 土壤样品，Martin 培养基
2.用品 取样器，三角瓶。托盘天平。分析天平，烧杯，玻璃棒，平皿，试管，量筒，移液
管，洗耳球，报纸，棉线，加压蒸汽灭菌锅，消毒棉，镊子，涂布器，脱脂棉，试管架， 酒精灯，记号笔。
四．实验步骤
（一）.实验前的准备
1.取样
取样人
时间
地点
取样深度
使土样与水充分混匀，将微生物分散，稀释度为 10-1。
3 梯度稀释 用一支 1ml 无菌吸管从三角瓶中吸取 1ml 土壤悬液加入盛有 9ml 无菌水的试管中充分混
匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取 1ml 加入到另一个盛有 9ml 无菌水的试管中并混匀均 匀，从此类推，制成 10-2，10-3,10-4,10-5,10-6 不同稀释度的土壤溶液。
一．实验目的
土壤中霉菌的分离
1.加深理解选择性培养基的原理应用。 2.学习从自然界中分离霉菌的具体操作方法。
二.实验原理
从土壤中取样，采用马丁氏培养基对试样中的真菌进行富集，通过稀释涂布平板法，获 取有单个孢子繁殖而形成的菌落，通过形态观察，辨别出霉菌，从而使霉菌得到分离。
土壤是微生物的“天然”培养基，是丰富的菌种资源库。