精子核蛋白染色液(苯胺蓝染色法)
精子活体染色操作卡（3种方法）
精子活体染色操作卡（3种方法）
精子活体染色操作卡
伊红染色法：
1. 滴新鲜精液 + 1滴伊红Y 溶液 30秒后高倍光学显微镜下立即观察、计数。
伊红-苯胺黑染色法：
1．10μl 新鲜精液+ 50μl 伊红-苯胺黑试剂室温放置30秒
2．取约5μl 染液-精子混合物涂片空气中干燥。
3．显微镜至少观察200个精子，计数并计算活精子百分率。
低渗膨胀法：
1．1ml 低渗膨胀液37℃预热约5min 。
2．加入0.1m1液化的精液在37℃下至少保持30min （不要超过2h ）。
3．显微镜至少观察200个精子，计数并计算活精子百分率。
注意事项
1．低渗膨胀液开瓶后，需分装放-20℃环境冷冻保存。
2．试剂盒放2－8℃环境保存，使用有效期为1年，开封后2－8℃保存可用45天
载玻片上混匀
盖上盖玻片轻轻混匀 Eppendorf 管
加盖混匀。
精子形态学染色液(巴氏法)
精子形态学染色液(巴氏法)简介：细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法，Papanicolaou Stain 最初仅用于检测阴道上皮雌激素水平以及生殖道念珠菌、滴虫等病原体。
橘黄G6与EA36或EA50联合使用，可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色。
目前大多数实验室采用成品染液，所以每种染液应注意其改良后的最佳条件。
最终胞浆染色应透明可见，核染色质应很容易辨别出来。
目前改良的巴氏染色液含有多种离子，具有多色性染色效能。
染色后胞质鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。
Leagene 精子形态学染色液(巴氏法) 因精子及细胞内不同等电点的蛋白质在相同的酸度下带不同的电荷，能选择性地结合相应的染料而着色。
胞核由酸性物质组成，它与碱性染料的亲和力较强；而胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力较大细胞质染色特别采用针对于精子染色的改良EA50染色液，细胞核染色采用Leagene 自主研发的无毒改良型苏木素染色液，特别适用于精子的染色，亦可用于胸水、腹水、痰液等细胞样本的染色。
组成：自备材料：1、 固定液(如95%乙醇-乙醚固定液)2、 系列乙醇3、 0.5%盐酸乙醇分化液操作步骤(仅供参考)：1、 细胞涂片用等量95%乙醇-冰乙酸固定液固。
2、 80%的乙醇浸泡1min 。
3、 70%的乙醇浸泡1min 。
4、 50%的乙醇浸泡1min 。
编号 名称DA0191 4×20ml DA0191 4×100ml Storage 试剂(A): Lea 苏木素染色液 20ml 100ml RT 避光 试剂(B): 蓝化液20ml 100ml RT 试剂(C): 橘黄G6染色液 20ml100ml RT 避光使用说明书1份5、 蒸馏水或自来水浸泡或冲洗。
6、Lea 苏木素染色液染色。
7、自来水冲洗。
8、盐酸乙醇分化液分化或盐酸水溶液分化。
9、自来水冲洗。
10、蓝化液中蓝化4min 。
精子形态与核蛋白组型转换及DNA完整性的相关性_李俊
doi：10．3969 ／ j．issn．1006-5725．2015．07．033 基金项目： 河北省人口和计划生育委员会基金项目 （编号： 2013－A08 ） 作 者 单 位 ：050031 石 家 庄 市 ，河 北 医 科 大 学 第 一 医 院 生 殖 医 学科 通 信 作 者 ：刘 芳 E-mail：liufydyy＠163．com
（收 稿 ：2014－11－30 编 辑 ：吴 淑 金 ）
精子形态与核蛋白组型转换及 DNA 完整性的相关性
李俊 杨雪梅 赵婷婷 宋亚曼 刘芳
摘 要 目 的 ：探 讨 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 的 相 关 性 。 方 法 ：选 取 248 例 精 液 标 本 ，依 据 正 常 形 态 四 分 位 数 将 标 本 分 为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四 组 ，采 用 苯 胺 蓝 法 检 测 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 比 例 ，染 色 质 扩 散 法 检 测 精 子 DNA 完 整 性 ，分 析 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 的 相 关 性 。 结 果 ：检 测 标 本 中 精 子 形 态 异 常 发 生 率 为 27．82％，Ⅰ组 （正 常 形 态 ＜4％）精 子 总 数 、前 向 运 动 精 子 比 例 、核 蛋 白 组 型 转 换 比 例 均 显 著 低 于 其 他 组 （P ＜ 0．05），且 其 DNA 完 整 性 比 例 显 著 低 于Ⅲ组 （正 常 精 子 形 态 6％ ～ 8％）、Ⅳ 组 （正 常 精 子 形 态 ＞ 8％）。 正 常 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 （r ＝ 0．235， P ＝ 0．000）、精 子 DNA 完 整 性 （r ＝ 0．189，P ＝ 0．003）之 间 均 存 在 显 著 正 相 关 ，精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 与 DNA 完 整 性 间 存 在 显 著 正 相 关 （r ＝ 0．219，P ＝ 0．001）。 结 论 ：精 子 形 态 异 常 可 降 低 精 子 总 数 、前 向 运 动 能 力 、精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 比 例 ， 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 之 间 存 在 显 著 正 相 关 ， 且 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 与 DNA 完 整 性 之 间 存 在 显 著 正 相 关 。
精子DNA检测系列简介
包装规格：10人份/盒、20人份/盒 、 40人份/盒
存储条件及有效期： 试剂盒于2-8℃避光保存，有效期为12个月。
（三）
精子活体染色试剂盒 （拒染法）
检测原理：
利用荧光络黄染料（吖啶橙）具有高度的异 染性的特性，以插入的方式与双螺旋的DNA分子
结合，染色后断裂的单DNA精子呈绿色荧光。
医生可通过计算红色和黄色荧光精子即单链DNA
精子的百分率评估精子受精几率。
3、检测操作过程
检测样本：液化后的新鲜精液标本 精子洗涤 涂片 固定
三明市和众生物技术有限公司内部培训资料
生殖医学检测试剂盒系列
精子五联检
1、精子DNA检测试剂盒 2、精子DNA碎片检测试剂盒 3、精子活性检测试剂盒 4、精子形态学检测试剂盒 5、精子核蛋白检测试剂盒
影响精子受精或男性不育的因素
精子死亡率过高 精子畸形率过高 精子成熟率过低 精子染色体异常 精子数量过少 精子活动力过低 精子液化能力过低
完
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
结果： 核蛋白不成熟的精子（IM）染紫蓝色或紫色 核蛋白成熟的精子（M）染红色。
操作方法
精子液化 精子洗涤 精子洗涤
涂片
复染 洗脱 染色 固定
镜检
染色效果
不成熟精子
成熟精子
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
产品基本信息
产品注册证号：闽明食药监械（准）字2013第1400022号 执行标准号：YZB/闽明0033-2013 生产许可证号：闽食药管械生产许第20110297号
精子膜完整性检测方法的比较
精子膜完整性检测方法的比较
施文艳;薛士慧
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】1995(0)S1
【摘要】精子膜完整性检测方法的比较施文艳，薛士慧（江苏省职工医科大学，南京２１００２９）精子膜完整性与受精能力有关。
检测精子膜是否完整，已成为诊断男性不育的手段之一。
目前常用的方法是低渗肿胀试验。
但已有研究发现，渗透压相同的溶液可能对膜有不同的影响。
对此Ｌｏ...
【总页数】1页(P79-79)
【关键词】精子膜完整性;检测方法;低渗肿胀试验;试验法;实验诊断;相关性;水试验;男性病;男性不育;不育症
【作者】施文艳;薛士慧
【作者单位】江苏省职工医科大学
【正文语种】中文
【中图分类】R446
【相关文献】
1.低渗肿胀实验、苯胺蓝染色及染色质扩散实验检测精子核蛋白及膜完整性对比研究 [J], 李安娜;张美华;房振亚;邱毅
2.精子染色质扩散法检测精子DNA完整性方法探讨及临床意义 [J], 王玮玮;王厚照;张玲;刘芳
3.三种精子质膜完整性检测方法的比较 [J], 舒如明;卢文红;李鸿;周芳;许剑锋;王小强;谷翊群
4.精子膜功能完整性检测方法的改进 [J], 赵晶石;蒋瑞英;赵晶平
5.线粒体膜电势完整性和磷脂酰丝氨酸的浆膜转位作为早期凋亡标记:两种不同精子亚群的比较 [J], Barroso G.;Taylor S.;Morshedi M.;张旸
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精子核蛋白组型严重异常的临床病例治疗分析
精子核蛋白组型严重异常的临床病例治疗分析作者：董树林曲文玉王立名王蔓来源：《中国实用医药》2011年第32期【摘要】目的探讨孕早期自发流产或胚胎停育的精液实验指标。
方法 38例精子核蛋白组型严重异常的实验与治疗统计。
结果 38例精子核蛋白组型严重患有经过治疗后，连续监测病例发现核蛋白恢复正常后，其配偶自发性流产或胚胎停育发生机率明显下降，正常分娩率显著提高。
结论精子核蛋白组型异常是导致自发性流产和胚胎停止发育的非遗传危险因素，但通过药物等治疗途径可以得到改善。
【关键词】自发性流产；胚胎停育；精子核蛋白组型临床自发性流产或胚胎停止发育发病率约占妊娠率的3.6%~5.5%，因其发病机制尚未完全阐明，有学者认为可能与解剖异常、免疫失调、内分泌紊乱、感染、染色体异常及基因多态性有关，临床对此病的总体疗效不太理想。
近些年通过对自发性流产或胚胎停止发育病例分析发现男性因素逐渐增多，特别是对男性精子的研究逐渐成为热点。
本文通过精子核蛋白组型严重异常病例及治疗，总结对自发性流产及妊娠结局的研究对照仅供同行参考。
1 资料与方法1.1 一般资料统计2006~2009年我院男科门诊就诊38例精子核蛋白组型严重异常(组型转换超过50%)。
临床上其配偶有2次以上孕早期自发性流产或胚胎停止发育。
双方检查未发现其他异常阳性体征，包括双方染色体检查、免疫及感染项目检查，男女生殖内分泌检查、血糖、甲功及妇科检查。
但这38例患者精液检查发现精子核蛋白组型存在严重异常。
其中9例精子核蛋白组型超过60%，29例介于50%~60%之间。
1.2 研究指标按照WHO技术规范采集和处理检测精液标本，检测精子核蛋白成熟度。
1.3 检测方法将洗涤后精子固定于载玻片，以0.5 g/L苯胺蓝,4%醋酸溶液染色5 min后洗涤、脱色、干燥后显微镜下至少观察400个精子，计算头部染成蓝色精子数量，染成蓝色精子为不成熟精子，计算不成熟精子的百分比(%)。
1.4 检测原理精子成熟过程中，与精子核DNA结合的碱性蛋白发生组型转换，富含赖氨酸残基的组蛋白逐渐被富含赖氨酸和胱氨酸的鱼精蛋白所取代，酸性条件下苯胺蓝与赖氨酸残基结合生成蓝色化合物。
第一类医疗器械生产备案凭证
第一类医疗器械生产备案凭证备案编号：闽明食药监械生产备20140003号企业名称三明市和众生物技术有限公司住所三明市梅列区碧湖列西街道工业大楼四、五楼生产地址三明市梅列区碧湖列西街道工业大楼一、四、五楼法定代表人陈隆玉企业负责人陈隆玉生产范围一类6840体外诊断试剂、6841医用化验基础设备器具。
生产产品列表产品名称产品备案号登载日期备注缓冲液闽明械备20140013号2014-9-26样本密度分离液闽明械备20140014号2014-9-26糖原染色液(PAS) 闽明械备20140018号2014-12-16过氧化物酶（POX）染色液闽明械备20140019号2014-12-16吉姆萨染色液闽明械备20140020号2014-12-16α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）染色液闽明械备20140021号2014-12-16网织红细胞染色液闽明械备20140022号2014-12-16巴氏染色液闽明械备20150004号2015-5-7苏木素-伊红染色液（H-E）闽明械备20150005号2015-5-7液基薄层细胞制片机闽明械备20150006号2015-5-7液基细胞制片染色一体机闽明械备20150025号2015-7-28液基细胞分离制片染色一体机闽明械备20150026号2015-7-28宫颈细胞染色液闽明械备20150027号2015-8-20医用离心机闽明械备20160001号2016-6-19抗酸染色液闽明械备20160002号2016-6-19生产产品列表刘氏染色液闽明械备20160003号2016-6-19革兰染色液闽明械备20170004号2017-6-5组织固定液闽明械备20170007号2017-6-5精子染色液（改良Diff-Quik法）闽明械备20170008号2017-6-5精子染色液（shorr法）闽明械备20170009号2017-6-5精子顶体染色液闽明械备20170010号2017-6-5液基细胞处理保存试剂闽明械备20170011号2017-6-5精子染色液（活体拒染法）闽明械备20170021号2017-10-23精子染色液（巴氏染色法）闽明械备20170022号2017-10-23精子DNA染色液（荧光染色法）闽明械备20170023号2017-10-23精子DNA碎片染色液（SCD染色法）闽明械备20170024号2017-10-23精子核蛋白染色液（苯胺蓝染色法）闽明械备20170025号2017-10-23宫颈上皮组织脱落细胞染色液闽明械备20170026号2017-10-23真菌荧光染色液（一步法）闽明械备20180001号2018-2-2样本稀释液闽明械备20180002号2019-3-4阴道给药器闽明械备20180003号2019-3-4妇科白带涂片染色液（快速法）闽明食药监械(准)字2014第1400001号2015-7-28注册证有效期至2018-5-14。
精子核蛋白染色操作卡
精子核蛋白染色操作卡
标本准备：
1．0.2-0.5ml 液化新鲜精液 + 1ml 生理盐水于Eppendorf 管中 弃去上清液。
2．Eppendorf 管中加入1.5ml 生理盐水 弃去上清液。
3．重复上一步操作 离心结束后，弃去上清液。
4. 在Eppendorf 管中加入A 液约0.1-0.2ml ，混匀并计数精子密度。
5. 用洗液A 调整密度至20-40×106/ml 的精子悬液。
操作步骤：
1．精子悬液5μl 干燥。
2．滴加B 液2-3滴/涂片窗 流水冲洗。
3．滴加C 液2-4滴/涂片窗 流水冲洗。
4．载片插入D 液反应池中 流水冲洗。
5．滴加E 液2-4滴/涂片窗 流水冲洗，吹干观察。
注意事项:
1. 不同标本，成熟精子的染色本底可能会存在差异。
观察结果时，以该标本具代表性的最浅红染 的精子作为对照，较之对照更深染的紫色或紫蓝色精子便可判定为不成熟精子。
2. 试剂盒配备的组织载片高度洁净，请小心保存。
混匀
1000g 离心5min 混匀 1000g 离心5min 组织载片
涂布 室温2min
室温5min 室温5min
室温5min。
不明原因复发性流产与男性精子质量的相关性
Mod Diagn Treat现代诊断与治疗2019Sep30(18)•3195-不明原因复发性流产与男性精子质量的相关性戚青林(萍乡市妇幼保健院生殖健康科，江西萍乡337000)摘要：目的探讨不明原因复发性流产与男性精子质量的相关性。
方法选取我科就诊的配偶具有不明原因复发性流产史的男性80例为URSA组，正常生育的男性80例为对照组。
比较两组精液常规、精子DNA完整性、精子正常形态率和精子核蛋白组型转换率的差异。
结果两组精液量、精子浓度、精子活率、精子前向运动比较，无显著差异(Q 0.05)；URSA组精子正常形态、精子DNA碎片率及精子核蛋白组型转换率与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论不明原因复发性流产和男性精子正常形态率、DNA完整性和精子核成熟度等方面有着一定的相关性，增强男性精子质量对减少不明原因复发性流产有一定的帮助,临床需重视男性因素对不明原因复发流产发生的影响。
关键词:不明原因复发性流产;男性;精子;质量中图分类号:R714.21文献标识码:B文章编号：1011-8174(2019)18-3195-02不明原因复发性流产(URSA)是指出现2次或者2次以上妊娠周期小于28周的自然流产，到目前为止对于自然流产产生的原因还不明确山。
对URSA 的发病机制等方面的相关研究结还不全面，且病因学研究通常以女性因素为主导，多集中在胚胎和母体因素的探讨，亦有研究认为胚胎是由女性卵子细胞和男性精子细胞通过受精作用而成，男性精子细胞必然会对胚胎发育过程产生影响，甚至可能会导致其流产的发生闵。
因此，本研究选取我院生殖健康科就诊的配偶具有URSA流产史的男性患者作为此次研究对象,对其精液进行常规及精子正常形态率、精子DNA完整性及精子核蛋白组型等检测来进一步研究不明原因复发性流产与男性精子质量的相关性。
报道如下。
1资料与方法1.1一般资料选取2017年1月-2018年12月在我院生殖健康科就诊的的配偶具有不明原因复发性流产史的男性80例为URSA组，同时选择80例在我院其配偶已正常生育的男性为对照组。
禁欲时间对男性不育症患者精子核蛋白组型转换半定量检测值的影响
龙源期刊网
禁欲时间对男性不育症患者精子核蛋白组型转换半定量检测值的影响
作者：杨光卞廷松徐福松史兵伟毛伟孙甜
来源：《中国实用医药》2008年第06期
[摘要]目的：观察禁欲时间对男性不育症患者精子核蛋白组型转换半定量检测值的影响。
方法：对2005年11月至2007年11月期间来常州市中医医院男科门诊就诊的452例不育症患者，采用苯胺蓝染色法进行精子核蛋白组型转换半定量的检测。
结果：完成的452例患者中，核蛋白组型转换半定量检测值正常者362例(80.09％)，异常者90例(19.91％)。
按照禁欲时间
分为小于3d组、3～7d组与大于7d组进行比较，核蛋白组型转换半定量检测值差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：精子核蛋白组型半定量的检测对男性不育症有临床价值，禁欲时间对核蛋白组型转换半定量检测值有一定影响。
苯胺蓝染色液
北京吉美生物技术有限公司
苯胺蓝染色液
产品简介：
结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维，而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。
Massom三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
然而，淡绿或苯胺蓝的分子量都很大，因此Massom染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色（淡绿）或蓝色（苯胺蓝），主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
Jimei苯胺蓝染色液主要有苯胺蓝、弱酸等组成，呈酸性，常与丽春红品红染色液等配合使用对胶原纤维进行染色。
产品组成：
操作步骤（仅供参考）
1、根据实验具体要求操作。
2、一般浸染1~2min.
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并载一次性手套操作。
有效期：24个月有效。
相关产品：。
精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)染色步骤及结果
精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)染色步骤及结果
货号:G2581
产品组成：
规格10ml20ml Storage
试剂A：伊红染色液4ml8ml RT避光
试剂B：苯胺黑染色液6ml12ml RT避光
有效期：12个月
产品简介：
精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)可以常规检测所有精子标本的存活率，通过染料拒染法来鉴别细胞膜完整的精子，从而得出活精子的百分率。
精子活体染色液由伊红染色液、苯胺黑染色液组成，利用了染料拒染原理，即相关基于损伤的细胞膜，如在非活的(死)细胞上的膜，允许非透过膜性染料可进入膜内染色；而活细胞的细胞膜能够抗拒染料进入，产生拒染现象，不着色。
该染色液仅适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤（仅供参考）：
1、取洁净小试管，滴加新鲜精液1滴和伊红染色液1-2滴，混匀，放置30min。
2、滴加苯胺黑染色液3滴，混匀，即为精液-伊红-苯胺黑染色液，放置30-60秒。
3、滴加上述精液-伊红-苯胺黑染色液1滴于载玻片上，制成涂片。
4、晾干、镜检。
油镜下观察，未着色的精子为白色，死精子呈红色，背景呈黑色。
5、计数200个精子，计算未着色（活精子）占200个精子的百分率。
染色结果
活精子不着色
死精子红色
背景黑色
注意事项：
1.精液标本一旦液化应立即检测精子存活率，最好在30min内，在任何情况下都不能
超过1h，以免因脱水或温度变化导致精子失活而使染色检测结果不准。
苯胺蓝染色液使用说明
苯胺蓝染色液使用说明
货号：G1350
规格：100ml
保存：室温避光保存，有效期24个月。
产品说明：
苯胺蓝染色液是Masson三色染色试剂盒的组成之一。
主要有苯胺蓝、弱酸等组成，呈酸性，常与丽春红品红染色液等配合使用对胶原纤维进行染色，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
操作步骤(仅供参考)：
以Masson三色染色为例：
1、切片常规脱蜡至水。
2、用配制好的Weigert铁苏木素染色液染色5min-10min。
3、酸性乙醇分化液分化、水洗。
4、Masson蓝化液返蓝、水洗。
5、蒸馏水洗1min。
6、丽春红品红染色液染色5-10min。
7、磷钼酸溶液分化1-2min
8、倒掉分化液，直接放入苯胺蓝染色液中染色1-2min。
9、用弱酸工作液洗1min。
10、95%乙醇快速脱水。
11、无水乙醇脱水3次，每次5-10s。
12、二甲苯透明3次，每次1-2min。
13、中性树胶封固。
注意事项：
1.切片脱蜡应尽量干净。
2.切片入苯胺蓝染色液染色前不要水洗，否则可能出现不着色。
3.不同染色参照具体的实验要求。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
精子-宫颈粘液相互作用的检查方法与意义
人类精子功能状况检查第一节精子-宫颈粘液相互作用检查一、体内试验（性交后试验postcoital testing PCT）1.时间的选择：性交后试验应尽可能紧靠排卵期进行。
排卵期可根据通常得临床指标，即通常得周期长度，基础体温、宫颈粘液变化和阴道细胞学检查，如有可能，也应测定血浆或尿中得雌孕激素水平及进行卵巢超声检查来确定。
嘱每对夫妇于试验前避免性生活。
重要的是要使性交后试验评价宫颈粘液得时间标准化，这一时间应是9-24小时内。
2.试验技术：选择不加润滑剂得窥阴器放入阴道，再用结核菌素注射器（不带针头），吸管或聚乙烯管在阴道后穹窿部吸取混合标本。
然后再用另一注射器或导管吸取宫颈腔中的粘液标本，并迅速地将这些标本置于载玻片上，盖上盖玻片，在相差显微镜下检查。
压制标本的标准厚度可用硅胶浸渍过直径为100μm 的玻璃微球支撑控制，这样做可以使测定粘液中的精子浓度标准化。
3.阴道混合标本：通常精子在阴道内2小时即死亡，检查阴道混合标本得目的在于证实精液确系曾存在于阴道内。
4.宫颈粘液标本：宫颈管下部的精子数目随性交后时间的推移而改变。
在性交后2-3小时内，在宫颈管下部积聚大量精子。
宫颈粘液中的精子活力分级问题，仍要依据世界卫生组织规定的标准，即：a级，快速直线前向的前向运动；b级，缓慢或呆滞得前向运动；c级，非前向性运动；d级，不活动精子。
5.结果的评价：正常妇女在周期中期与精液指标正常得男子性交后9-24小时内，宫颈内粘液在每高倍视野（HPF，400×）通常有50个以上得活动精子，其活力属于a,b两级，即相当于2500条以上精子/mm3。
每高倍视野中有20条或更多的“a”级前向运动的精子即可认为结果良好。
如每高倍视野中精子不足10条（＜500mm3），特别是只有缓慢或转圈得“b”级精子，则表现精子穿透能力减轻或宫颈粘液异常。
性交后试验的目的不仅是为了测定宫颈粘液中得活精子的数量，而更重要得是确定性交后一定时间内精子存活和运动情况。
精子活力伊红苯胺黑(eosin-nigrosin)一步法染色试剂盒产
精子活力伊红苯胺黑（eosin-nigrosin）一步法染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途精子活力伊红苯胺黑（eosin-nigrosin）染色试剂是一种旨在使用伊红染料致死亡精子着色从而确定细胞活力的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
适用于各种动物或人体精子细胞。
产品严格无菌，即到即用，操作简便，性能稳定，着色清晰，建立自动化和标准化体系。
技术背景在男科学（Andrology）中，精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子寿命、以及生育能力的基础信息。
其中精子的活力（vitality）、运动能力（motility）、授精潜力（fertilizing potential）、膜结构完整性（integrity）、顶体反应（acrosomal reaction）功能的评价是精子分析的重要指标，也是决定人工受孕或体外授精（in vitro fertilization；IVF）的重要参数。
使用伊红苯胺黑（eosin-nigrosin）染色技术，是精子活力分析的最常用的方法。
基于活体精子细胞的膜完整性，作为细胞染色剂之一的伊红受到活体精子细胞（包括游动性和非游动性精子）的排斥，而死亡精子细胞摄入染料显示红色，同时苯胺黑作为复染，使背景呈现深色，增强对比度。
通过常用的一般光学显微镜（无需相差显微镜；phase-contrast microscope）便可清晰观察到细胞染色情况，同时可以定量计数。
产品内容染色液（Reagent A）毫升产品说明书 1份保存方式保存在4℃冰箱里，避光，有效保证3月用户自备1.5毫升离心管或96孔板细胞培养板：用于样品操作的容器恒温水槽：用于孵育精子细胞液化血细胞计数器：用于细胞计数盖玻片：用于精子细胞爬片一般光学显微镜：用于观察染色的精子细胞实验步骤1．移取新鲜获得的精液（30分钟至1小时内）到1.5毫升离心管2．放进37℃恒温水槽孵育30分钟3．轻柔涡旋震荡5秒4．移取50微升上述精液到96孔板的1个孔里或新的1.5毫升离心管5．加入xx微升染色液（Reagent A）6．用200微升枪头上下抽吸混匀7．室温下孵育30秒8．即刻移取12微升到洁净的载玻片一端9．用盖玻片或另一个载玻片推片10．置于空气中凉干11．即刻在一般光学显微镜下（1000倍；即油镜下）观察并计数（注意：每个视野计数200个精子）12．分析结果：粉红或红色染色的精子细胞为死亡细胞，而不染色的精子细胞为活体精子细胞注意事项1．本产品为50次操作2．操作时须戴手套3．如果染色液（Reagent A）出现分层或沉淀，37℃水浴温育混匀后即可使用4．本产品可用于区别非游动性精子细胞的活力与否5．样品检测前，建议在血细胞计数器上进行精子细胞计数，同时观察精子游动6．精子细胞计数时乘上稀释倍数104。
精子核蛋白成熟度与精液常规参数的相关性分析
精子核蛋白成熟度与精液常规参数的相关性分析杨雪梅;李俊;谭宇哲;王新雪;宋亚曼【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2018(028)015【摘要】目的探讨精子核蛋白成熟度与常规精液参数之间的相关性.方法随机选择371例精液标本,利用伟力彩色精子质量检测系统进行精液常规分析,采用Diff-Quick快速染色法和苯胺蓝染色法分别检测精子形态及精子核蛋白成熟度.依据核蛋白成熟度分组,比较精液常规参数的差异并分析核蛋白成熟度与精液常规参数间是否存在相关性.结果核蛋白成熟度<70％时,精子浓度、精子总数、前向运动精子比例及正常形态精子比例均低于核蛋白成熟度≥70％组,差异有统计学意义(P<0.05);核蛋白成熟度与精子浓度、精子总数、前向运动精子比例及正常形态比例精子呈正相关(P<0.05);受试者工作特征曲线(ROC)分析表明,精子浓度、精子总数、前向运动精子比例及正常精子形态可预测核蛋白成熟度,且精子总数预测的准确性最高.结论精子核蛋白成熟度与精子浓度、精子总数、前向运动精子比例及正常形态精子比例等常规精液参数具有相关性,常规精液参数可预测核蛋白成熟度.%Objective To investigate whether sperm nucleoprotein maturity was correlated with routine semen parameters. Methods A total of 371 semen samples were randomly selected and routine semen parameters were performed by computer assisted sperm analysis. Sperm was stained with Diff-Quick method and normal morphology was evaluated. The sperm nucleoprotein maturity value was detected by aniline blue assay. Independent T-test was used to determine the effect of nucleoproteinmaturity on conventional semen parameters, and correlation analysis of nucleoprotein maturity with each semen parameter was performed. Results After classification of the quality of spermatogenesis based on nucleoprotein maturity ( ≥ 70％ vs < 70％), sperm concentration, count, progressive motility and normal morphology were decreased in the group with nucleoprotein maturity < 70％ when compared with the normal group with nucleoprotein maturity ≥ 70％ (P < 0.05). There was significant positive relation between nucleoprotein maturity with sperm concentration, count, progressive motility, as well as normal morphology. Sperm concentration, count, progressive motility as well as normal morphology could be used as prognostic predictor for nucleoprotein maturity and among them, sperm count exhibited the highest accuracy. Conclusion There is positive correlation between nucleoprotein maturity and conventional semen parameters, such as sperm concentration, count, progressive motility and normal morphology, which in turn can be served as prognostic predictor for nucleoprotein maturity.【总页数】5页(P75-79)【作者】杨雪梅;李俊;谭宇哲;王新雪;宋亚曼【作者单位】河北医科大学第一医院生殖医学科,河北石家庄 050031;河北医科大学第一医院生殖医学科,河北石家庄 050031;河北医科大学第一医院生殖医学科,河北石家庄 050031;河北医科大学第一医院生殖医学科,河北石家庄 050031;河北医科大学第一医院生殖医学科,河北石家庄 050031【正文语种】中文【中图分类】R321.1【相关文献】1.334例男性不育症患者精子DNA完整性与精液常规参数间的相关性分析 [J], 季兴哲;杨杰;宋娟;周寒鹰;张洲;师娟子2.精子DNA碎片与年龄、精液常规参数和疾病因素的相关性分析 [J], 袁人培;姜辉;陆影;杜娇;岳倩;魏楠;杨思伟3.精液不液化患者精液常规参数与精子DNA碎片相关性分析 [J], 周明连;潘林清;张帅4.孕前保健男性年龄与精子DNA碎片、精液常规参数的相关性分析 [J], 庾伟坚;路瑞静;江凡;陈献;梁淑馨;胡蝶;周喜友5.不育男性精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精液常规参数及精子功能指标的相关性分析 [J], 周欢群;蒋满波;周文;谢妍;吴爱华;王爱爱;倪运萍;陆杉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
甲苯胺蓝染色对1例增殖性疣状白斑的预警价值浅析
甲苯胺蓝染色对1例增殖性疣状白斑的预警价值浅析
梅颖颖;王翔剑;周红梅
【期刊名称】《口腔医学研究》
【年(卷),期】2015(31)10
【摘要】增殖性疣状白斑（proliferative verrucous leukoplakia,PVL）是一种较罕见的特殊口腔白斑病,以慢性进展性、多发性、对治疗抵抗的疣状白斑损害为其特点[1-3]。
由于该病进展较缓慢,而癌变率又相当高（40%-100%）[4],癌变时间4.7-11.6年[5],
【总页数】2页(P1043-1044)
【关键词】口腔白斑病;甲苯胺蓝染色;增殖性;预警价值;疣状;治疗抵抗;癌变时间;进展性
【作者】梅颖颖;王翔剑;周红梅
【作者单位】四川大学华西口腔医院口腔黏膜病科
【正文语种】中文
【中图分类】R781.5
【相关文献】
1.低渗肿胀实验、苯胺蓝染色及染色质扩散实验检测精子核蛋白及膜完整性对比研究 [J], 李安娜;张美华;房振亚;邱毅
2.增殖性疣状白斑癌变1例 [J], 葛林;周红梅;曾昕;吴兰雁;林梅
3.鼻咽部渗液苯胺蓝染色技术对鼻咽癌筛查和诊断r价值的临床评价 [J], 董凯峰;
朱福
4.甲苯胺蓝染色在口腔潜在恶性疾患及口腔鳞状细胞癌早期诊断中的临床应用价值研究 [J], 王倩;郭骧;王兴;鲁明星;刘宏伟;徐偲;韩莹;金建秋;程喆;刘晓丹;赵忠芳;崔红梅;李文文
5.采用光动力法治疗增殖性疣状白斑的机制假说 [J], 王彩霞;葛林;周红梅
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精子核蛋白染色液(苯胺蓝法)
产品简介：
正常情况下，与精核DNA 结合的碱性蛋白（核蛋白）将经历从组蛋白到鱼精蛋白的自然成熟过程，这种成熟后的鱼精蛋白对精子基因（DNA ）具有特殊保护作用。
组蛋白被鱼精蛋白逐渐取代的过程，称之为精子核蛋白组型转换，这种组型转换具有重要的生理意义。
精子核携带着全部来自父方的遗传信息，这些基因必须在受精后才能开始表达。
受精前精子基因在鱼精蛋白的特殊保护下，紧密浓集，无任何DNA 转录作用。
但当核蛋白组型转换异常可引起男性不育或胚胎早期夭折流产，其机理为：①精子DNA 不稳定且易受损伤而难以受孕；②一旦受精，由于核蛋白组型异常，精子核不能正常解聚，从而影响了雌雄原核的融合；③胚胎不能正常发育，造成胚胎夭折而流产。
因此，组蛋白的多少是精子成熟度的一个重要指标，酸性条件下苯胺蓝能特异地与精子核组蛋白富含的赖氨酸残基结合生成紫蓝色化合物，根据着色的深浅来判断精子的成熟程度。
产品组成：
自备材料：
1、 蒸馏水
2、 新鲜精液样本
3、 恒温箱
4、 防脱载玻片
操作步骤(仅供参考)：
1、配制洗涤工作液: 取适量的10×浓缩洗涤液，以蒸馏水10稀释后即为洗涤工作液。
2、取新鲜精液标本置于恒温箱37℃或常温放置，至完全液化。
3、取上述液化精液0.2~0.5ml 置于EP 管，再加入1-1.5ml 洗涤工作液，用吸管或移液器反复吹打数次，室温2000rpm 离心5min ，弃去上清液，保留管底精子沉淀团；重复操作
编号 名称
DA1201 20T DA1201 40T Storage 试剂(A): 10×浓缩洗涤液 10ml 20ml RT 试剂(B): 固定液 10ml 20ml 4℃ 避光 试剂(C): 苯胺蓝染色液 5ml
10ml RT 避光
使用说明书
1份
3次。
4、向第3步的EP管中加入洗涤工作液约0.1-0.2ml，制成混合精子悬液。
5、取上述已制备好的精子悬液15μl，均匀涂布于防脱载玻片上，自然干燥。
6、在涂有待测精子的涂片区内滴加固定液2-3滴，室温固定5-15min，蒸馏水冲洗5-10min，并甩去多余水分。
7、在涂片区内滴加苯胺蓝染色液2-4滴，室温染色5min，蒸馏水冲洗5min，并甩去多余水份。
8、迅速吹干玻片，镜检。
如果需要长久保存样本，可将玻片依次置于70%、80%、95%
和100%乙醇中各2min，二甲苯透明，中性树胶封片。
结果：
含不成熟核蛋白的精子紫蓝色或深蓝色
含成熟核蛋白的精子浅蓝色或无色(用复染液染色后为红色)
注意事项：
1、蒸馏水冲洗载玻片时要注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子。
2、甩去多余水分应防止涂片干燥。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关产品：
产品编号产品名称
DA0184 精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)
DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PS0013 RIPA裂解液(强)
TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。