动物生理学实验设计

交叉配血法验证鱼类血型

Cross matching blood method validates fish blood type

黄勇 2009308200605 水族0903

摘要本试验中通过抗体来区分红细胞膜上的抗原的方法来证明鱼类血型存在。先做一个浓度梯度实验找出最适合该实验的红细胞悬液浓度，然后按照该浓度配制红细胞悬液，冷冻，再分别制作血清，静置后再离心，最后用红细胞悬液与血清进行交叉配血，观察是否发生凝集现象，从而来判断鱼类是否存在血型。

关键字红细胞悬液血清交叉配血

血型指红细胞膜上存在的特异性抗原的类型。正常情况下，红细胞是均匀分布在血液中的，如果将血型不相融的两个个体的血滴在玻片上混合，红细胞即出现凝聚成团的免疫反应，在补体作用下，红细胞的凝集伴有溶血，其凝集本质是抗原—抗体反应。红细胞表面的抗原即特异性糖蛋白或糖脂为凝集原，血清中的能将红细胞膜上凝集原引起凝集反应的特异抗体为凝集素。同种血型的抗原抗体不发生凝集反应，而相异血型则发生。本试验中通过抗体来区分红细胞膜上的抗原的方法来证明鱼类血型存在。先做一个浓度梯度实验找出最适合该实验的红细胞悬液浓度，然后按照该浓度配制红细胞悬液，冷冻，再分别制作血清，静置后再离心，最后用红细胞悬液与血清进行交叉配血，观察是否发生凝集现象，从而来判断鱼类是否存在血型。证明鱼类血型存在有着重要的实际意义：进行鱼类血统登记，为鱼类建立准确可靠的系谱资料，能够防止血统混乱，保证育种工作的可靠性，减少繁殖配种工作的误差。选择鱼类经济性状，可以利用血型与生产力，抗病力之间的关系，作为优良个体选育和品种改良的依据。在鱼类分类上的应用，用血清蛋白中的不同抗原作为种类鉴别的辅助特征。判别鱼类亲缘的远近。

一研究内容

将异体鲫鱼的血清与红细胞混合，观察是否发生凝集反应。

二研究对象

鲫鱼4条

三实验设备及药品：

2ml注射器5支，尖头滴管8支，试管20只，玻璃滴定板4片，解剖盘1个，显微镜1台，试管架2个，纱布，50ml烧杯1个，500ml烧杯1个，镊子1把，记号笔1只，鱼用生理盐水，离心机，冷冻箱，1000ul移液枪一支，棉花四实验方法与步骤：

（一）按下列药品制备1000ml鱼用生理盐水

NaCl：5.9g 、 KCl： 0.25g 、 CaCl2： 0.28g 、 MgSO4. 7H2O：0.29g NaHCO3：2.1g 、 KH2PO4：1.6g 加蒸馏水溶解定容至1000 ml

（二）取血

将鱼体用纱布包住，侧卧于解剖盘中，在鱼尾部（腹鳍和尾鳍之间）侧线下1cm处用镊子去除少许鳞片，将注射器垂直插入肌肉，穿到脊椎骨后，稍往下方移动，插入尾静脉内，轻轻抽取注射器，让血在负压作用下自然流入注射器内。

（三）制备适宜浓度的红细胞悬液。

选择一条鱼的血液，分别滴一滴血液到加有0.4ml,0.8ml,1.0ml,2.0ml鱼用生理盐水的小试管中制备红细胞悬液，分别编号为a、b、c、d,静置五分钟，观察溶液凝聚情况。结果显示c管中凝聚现象最不明显，编号血细胞1。重复上述步骤，按照c管的浓度配制其他三条鱼的红细胞悬液，并分别编号2、3、4。将1,2,3,4号管放入4℃的冰箱里冷冻3到4小时，备用。

（四）制备血清

剩余血液注入另一只试管中，不加抗凝剂，放到1500r/min的离心机中离心30分钟，然后取出，吸取上清液，分装备用，分别编号血清1，2,3,4。

（五）、交叉配血

1、取玻璃滴定板4块，编号1，2，3,4，在1号板上四个孔里分别滴一滴1号鱼的红细胞悬液，2，3,4号板重复上述操作分别滴加2,3,4号红细胞悬液，

2、将1号鱼的血清依次滴一滴到4块玻片的第1孔鱼红细胞悬液中，将2,3,4号鱼的血清重复上述步骤滴一滴到3块玻片的2-4孔鱼红细胞悬液中。

3、放置10-30min后观察，如肉眼不易观察则使用显微镜观察。

五实验结果与分析

“＋”——表示出现凝聚现象，“—”——表示没出现凝聚现象, “*”——表示无实验结果。

注：第三组血清实验由于第三条鱼所取血清过少，吸取的血清中含有红细胞，所以未看到实验结果。

结果分析：第一，二，四组实验都没出现凝聚现象，所以鱼类不具有血型。

误差分析：由于所取鱼的种类和数量有限，导致本实验结果科学依据不足，误差较大，不是很具有说服力。

六、清洗并整理实验器具及材料

参考文献：

杨秀平，《动物生理学实验》，第1版，北京，高等教育出版社，2004