植物组织培养的基本步骤

植物组织培养的基本步骤

成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。

培养基的主要成分

【水分】

【无机盐】1.大量元素：N, P, K, Ca, Mg S （由相关的无机盐提供）

2. 微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1. 糖类2. 维生素

3. 氨基酸

4. 肌醇

5. 天然有机物【植物生长调节剂】1. 生长素2. 细胞分裂素3. 其他生长调节剂【凝固剂】琼脂

【其他物质】1. 活性炭2. 抗生素3. 抗氧化物质4. 硝酸银

培养基和组织培养用具的灭菌方式

【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟

【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h

【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30mi n,或气雾消毒剂

【超净工作台】紫外线灯30mi n,之后打开风机过滤除菌

【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒

【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭,之后用火焰灼烧灭菌

【培养室】3%来苏尔喷雾,或甲醛,气雾消毒熏蒸

【皮肤】先用肥皂洗手,接种前用70%乙醇擦拭

【瓶口,管口】70%乙醇擦拭,用火焰封口

培养瓶表面】70%乙醇擦拭

【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒

植物外植体的灭菌方式

【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30 秒，再用无菌水冲洗1 次。2. 用2%次氯酸钠浸泡15min 或0.1%升汞浸泡5~10min。3. 若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。

4. 消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。

5. 最后用无菌水冲洗3~5 次。

【果实】1. 用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2. 用2%次氯酸

钠浸泡10min,用无菌水冲洗2~3次。

【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min,或0.1%升汞消毒5~10min, 然后再用无菌水冲洗3~5次。

【花蕾】1. 用70%乙醇浸泡10~15 秒,无菌水冲洗一次。2. 在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。

【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡

10~15min,再用无菌水冲洗3~5次。

消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】