微生物快速检测技术.. 共74页
微生物快速检测技术..
引言：微生物在生物工程、食品安全、环境监测等领域中起着重要作用，因此，开发快速、准确、高效的微生物检测技术至关重要。
微生物快速检测技术是指能够在较短时间内对微生物进行快速检测和鉴定的技术。
本文将详细介绍微生物快速检测技术的原理、方法和应用。
概述：微生物快速检测技术基于先进的分子生物学、生物化学和光学仪器，在短时间内能够对微生物的存在和数量进行快速和准确的检测。
与传统的培养方法相比，微生物快速检测技术具有操作简便、结果快速、准确性高等优势。
在食品安全领域，微生物快速检测技术能够快速鉴定食品中的致病菌，提高食品的质量和安全性。
在环境监测领域，微生物快速检测技术能够迅速监测水质和土壤中的微生物，为环境保护提供有力支持。
正文内容：一、基于PCR技术的微生物快速检测1. PCR技术的原理和方法：介绍PCR技术的工作原理、步骤和所需试剂。
2. 基于PCR的微生物检测方法：详细介绍基于PCR技术的微生物检测方法，如实时荧光PCR、逆转录PCR等，以及其在食品和环境中的应用。
3. PCR技术的优势和局限性：分析PCR技术的优点和局限性，并提出未来的发展方向和改进方法。
二、基于基因芯片技术的微生物快速检测1. 基因芯片技术的原理和方法：介绍基因芯片技术的工作原理、设计和制备方法。
2. 基于基因芯片的微生物检测方法：详细介绍基于基因芯片技术的微生物检测方法，如DNA芯片、RNA芯片等，以及其在食品和环境中的应用。
3. 基因芯片技术的优势和局限性：分析基因芯片技术的优点和局限性，并提出未来的发展方向和改进方法。
三、基于质谱技术的微生物快速检测1. 质谱技术的原理和方法：介绍质谱技术的工作原理、样品制备和仪器设备。
2. 基于质谱的微生物检测方法：详细介绍基于质谱技术的微生物检测方法，如MALDI-TOF质谱、飞行时间质谱等，以及其在食品和环境中的应用。
3. 质谱技术的优势和局限性：分析质谱技术的优点和局限性，并提出未来的发展方向和改进方法。
常见微生物快速检测技术
技术交流^TechfflicalExdiange ^SHANGHAI MEASUREMENTANDTESTING |上涤計受埘試常见微生物快速检测技术张子通张爱亮陈启悦/上海市计量测试技术研究院0引言微生物技术是人类21世纪三大科技革命之一，其对食品、医学、材料等诸多领域都有着深远的影响。
作为微生物技术的基础，微生物检测技术的重要性 不言而喻。
微生物检测的对象有细胞（细菌、单细 胞生物、低等藻类等）及病毒，检测指标包括数量、 类别，较高要求的会涉及细胞的活性状态等方面。
涂布法是传统的微生物检测方法。
现行国家标 准GB 4789-2016《食品微生物检测方法》的主体内 容就是一系列涂布方法：即在达到洁净要求的实验 室里对样品进行溶解稀释，然后将不同比例稀释的 样品液涂于相应培养基表面，必要时取空白基参照， 恒温(一般是35~37培养一段时间(一般是1~3 d )后进行菌落计数，其中计数可行有效的稀释样品用 于计算原始样品的浓度；依所测指标，试剂、器材、 实验条件亦会相应调整。
GB 4789-2016系列标准于 2017年正式生效，代替了 GB 4789-2010。
虽然冠以 “食品”之名，GB 4789-2016总则及其包含的各单 独方法对不同行业的微生物检测都具有较高的指导 性和代表性。
譬如对于更严苛的药品检测，操作流 程类似，但实验室要求更高，同样的指标培养时间 一般会更长（5~7 d )。
随着经济的发展，市场对微生物检测的时效性 和精密分析能力提出了较高要求，如：对食药、生 化流水线产品品质的即时监控；执法部门、海关对 样品执法、通关检测；高端生化行业对特定菌种的 大批量、高精度检测。
在这些诉求面前，经典的涂 布法在对实验室要求高（包括硬件、环境、种类试 剂耗材的采购制备）、对人员专业性和人数要求高、样品培养时间长、无法检测病毒等方面，其局限性 日益显现，故微生物快速检测方法和仪器（以下简 称速测方法、速测仪器）应运而生。
9.6.186.食品微生物快速检测大肠菌群快速检测
食品中大肠菌群的测定依据
检样 无菌称取25g（mL）样品于225mL稀释液中，均质
10倍系列稀释
GB 4789.3-2016 食品微生物学检验
大肠菌群MPN计数法
适用于大肠菌群含量较低的食品中 大肠菌群的计数
选择适宜3个连续稀释度h
演示完毕，感谢您的聆听
不产气
产气
BGLB肉汤
36℃±1℃
48h±2h
不产气
产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
查MPN表 结果报告
结果判读
1 大肠菌群在测试片上生长后产酸。 2 pH指示剂使培养基颜色变深，在红色
菌落周围有气泡者为大肠菌群。 3 记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数。 4 根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。
是微生物检验诸多快速方法中比较成熟的方法之一。
已被广大卫生检验者所接受。目前已广泛应用于食品、 餐饮业、卫生、环保、水质检验等。
总结
思考题
1.大肠菌群快速检测方法与国标检测方法的异同？ 2.大肠菌群快速检测的测试片为什么会使产生使纸片颜 色加深周围并有气泡的菌落？ 3.如何对测试片的生长结果进行计数？ 4.大肠菌群快速检测适合在那些领域使用？
测试片结果解读
测试片可能会出现如下现象
1）没有任何菌落生长，不要计算圆形培养基外的菌落。因为泡棉上 已不含选择性培养基。
测试片结果解读
测试片可能会出现如下现象
2）当菌落数超过220时，可选择其中一个或几个有代表性的小方格，计算 平均菌落数，再乘以20得到整个测试片的菌落数。当有许多气泡，培养基 颜色变深暗，有很多小菌落时，记为多不可计。
测试片结果解读
测试片可能会出现如下现象
快速测试片在食品微生物检测中的运用解析
食品可以在产出、流通加工、存储、运送和销售中的任何环节发生微生物感染。
食品发生感染后微生物会大量繁殖，从而引起食物出现腐烂、长斑等变质现象，进而导致误食变质食物的人或动物发生食源性感染或食物中毒。
尤其是近年来，环境污染加剧，可引起人类感染的细菌数量在不断增加，微生物对人类的威胁也随之增加。
为了防止此类事件，应当使用适当的检查方法来检测食品，从而预防食源性感染和食物中毒。
传统检测方法的准确性和敏感性较高，但是需要更多的实验、更复杂的操作、更长的时间及大量员工。
因此，人们逐渐研究出了一个又一个简单、快速、敏感和准确的方法，其中，快速测试片法就是近年来不断发展的新型方法。
1 快速检测片的概念及特点快速测试片是一种新型的食品微生物检测方法。
其是由名叫F J. Forg 的德国科学家发明的。
这种方法大大缩短了检测周期、降低了材料成本、还对检验流程进行了简化。
快速检测片法将检测周期缩短为原来的五分之一，大大降低了实验的时间成本，为生活提供了便利。
近年来，人们已经开始广泛使用快速测试片检测食品中的微生物。
快速测试片在样品检测中的应用可以提高检测工作效率，同时，因为不用使用试剂辅助，大幅度提升了检验的便利性。
此外，快速测试片有利于保护环境，不会产生大量残留物或液体废物，所以常用于室外的检测工作中。
使用快速测试片进行检测，可以同时进行采样和接种，保证了测试结果的可靠性，并避免重大错误。
2 快速检测片在食品微生物检测中的应用优点2.1 检测速度快快速检测片易于操作，并且无需其他辅助器具即可快速检查样品。
快速测试片需要较少类型和数量的检查设备，对所用设备进行调试和维护的方法相对简单，并且易于携带。
此外，检测后无废渣及废液，能够有效减少环境污染，减轻检测完成后的清洁工作，从而使食品微生物检测工作量整体减少。
2.2 检测结果更真实在食品微生物检测中使用快速检测片可以同时执行接种和采样任务。
不仅可以防止细菌因接种时间长而大量繁殖的状况，还可以降低检查数据误差并获得更准确的测试结果。
微生物快速检测技术ppt课件
采用流式细胞原 理。对微生物进 行核酸染色，用 流式细胞技术进 行计数
BactoScan FC的优缺点
• 优点：速度快(50-150样品/小时)
• 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较 高，仪器比较难保养。灵敏度不够高。
• 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
美国Chemunex公司 微生物快速检测系统
其它即用胶，MPN改良法
主要用于 水样或澄 清样品的 大肠菌群 或大肠杆 菌检测 Simplate
colilert
• SimPlateTMTPC 法：基于食源性细菌的蛋白 质有特异性酶类，TPC培养基内含有多种细菌 酶类所对应的底物。检样被细菌污染时，只要 具有一种酶的活性即能与底物作用生成4-甲基 伞形酮，培养24h后，在紫外线照射下，发出 蓝色荧光。 • 食源性细菌悬浮于TPC培养基表面，在分隔的 小池内能迅速进行生化反应，若有检样颗粒亦 无干扰；它不是由48h形成的菌落来计数，而 是24h后在紫外灯照射下记录培养皿内能发出 蓝色荧光的阳性池数，进而由最大近似值 (MPN) 表查出细菌的MPN。阳性池数与 MPN 呈松泊分布。
基于ATP原理的用于成品检测的 微生物检测系统
• Charm LUM-96 （用于UHT产品-高温 瞬间灭菌） • Biotrace • Celsis（主要用于化妆品） • Millipore公司的MicroScan
Celsis和LUM-96
保温2天，检测30分钟（96个样）
ATP法检测成品的优缺点
• 美国Chemunex公司将流式细胞技术与活细胞荧 光探针标记及激光扫描技术相结合，推出的最 新一代的速度更快的Bactiflow以及更高端的 ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。 • 其最大的特点是只检测活细胞数，速度极快， 处理量大。与FOSS的BactoScan FC检测死活细 胞都检测不同。 • 是目前国际上正在认可的生物荧光定量检测微 生物数量的两种方法之一。另一种是Millipore 的一款叫MicroStar的基于ATP检测的产品。
Promicol ATP微生物快速检测系统在UHT灭菌奶商业无菌检测上的应用研究
Promicol ATP微生物快速检测系统在UHT灭菌奶商业无菌检测上的应用研究林木娣;黄诗韵;杨爱君;何瑛【摘要】介绍一种微生物快速检测系统,利用活体微生物中的三磷酸腺苷(ATP)作为标记分子,通过检测超高温(UHT)灭菌奶中微生物的ATP在反应过程中产生的荧光强度,可以间接测定样品中的微生物含量.该方法具有简便、快速、灵敏度高的优点,经验证能与国标法商业无菌检测达到一样的筛查检验目的,能够对UHT产品进行快速放行,在UHT灭菌乳与乳制品的质量监控中具有重要的意义.【期刊名称】《中国乳业》【年(卷),期】2017(000)006【总页数】6页(P69-74)【关键词】三磷酸腺苷(ATP);商业无菌检测;超高温(UHT)灭菌奶;快速检测【作者】林木娣;黄诗韵;杨爱君;何瑛【作者单位】广东燕塘乳业股份有限公司;广州中实生物科技有限公司;广东燕塘乳业股份有限公司;广东燕塘乳业股份有限公司【正文语种】中文（1 广东燕塘乳业股份有限公司；2 广州中实生物科技有限公司）乳与乳制品是大家公认的营养全面的食品，对改善居民的营养、平衡膳食结构、补钙和增强体质均有重要的作用。
超高温（UHT）灭菌奶是其中的一种，因其保存方便、保质期长的特点，受到广大消费者的喜爱。
按照国家安全标准的要求，所有经过UHT灭菌的食品都需要经过商业无菌检验合格才能出售，因商业无菌的微生物检验[1]需耗时10 天以上，检验周期长给企业的仓储、资金回笼等带来较大的压力，越来越多的企业迫切需要一种可靠的、稳定的、快速的微生物检测方法来替代传统的商业无菌检验方法，从而达到快速筛查放行的目的，为抢占市场及内部经营提供便利。
三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate，ATP）生物发光检测方法具有简便、快速、灵敏度高的优点，已广泛应用在微生物检测[2]、食品卫生监控[3]等领域，而欧洲、澳洲等地近年也致力于ATP微生物快速检测系统在UHT灭菌奶的商业无菌检验的研究及推广。
微生物检测方法
微生物检测方法微生物检测是指对环境、食品、药品、生物制品等中的微生物进行检测和监测的过程。
微生物检测的方法多种多样，根据不同的检测对象和要求，可以选择合适的方法进行检测。
下面将介绍几种常见的微生物检测方法。
首先，传统的培养方法是一种常见的微生物检测方法。
这种方法是将样品在适宜的培养基上培养一段时间，然后观察培养基上是否有微生物生长，根据生长的数量和形态来判断样品中是否存在微生物。
这种方法简单易行，但需要较长的时间，且对于某些难以培养的微生物可能无法检测出来。
其次，PCR方法是一种快速准确的微生物检测方法。
PCR方法是利用聚合酶链式反应技术，通过扩增微生物DNA片段来进行检测。
这种方法具有高度的特异性和敏感性，可以快速准确地检测出微生物的存在和数量。
但是，PCR方法需要设备和技术的支持，成本较高，且对样品的前处理要求较高。
另外，免疫学方法也是一种常用的微生物检测方法。
这种方法是利用抗体与特定的微生物抗原结合的原理进行检测。
免疫学方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测出微生物的存在和数量。
但是，免疫学方法需要较长的培养时间，且受到环境因素的影响较大。
此外，基因测序技术也是一种新兴的微生物检测方法。
这种方法是通过对微生物的基因进行测序分析，来确定微生物的种属和数量。
基因测序技术具有高度的准确性和全面性，可以对微生物进行全面的检测和分析。
但是，基因测序技术需要较长的分析时间和复杂的数据处理，且对设备和技术要求较高。
综上所述，微生物检测方法有传统的培养方法、PCR方法、免疫学方法和基因测序技术等多种选择。
在实际应用中，可以根据检测对象和要求选择合适的方法进行检测。
随着科学技术的不断发展，相信微生物检测方法会更加快速、准确、全面，为微生物监测和控制提供更好的技术支持。
微生物快速检测方法
微生物快速检测方法微生物快速检测方法是指能够在较短时间内迅速鉴定和检测微生物的方法。
这些方法广泛应用于医疗保健、食品加工、环境监测等领域，能够提高检测效率和准确性，有效地控制微生物污染的风险。
本文将介绍几种常见的微生物快速检测方法。
聚合酶链式反应（PCR）是一种常见的基因扩增技术，能够在较短时间内快速扩增微生物的DNA，并通过比对数据库实现快速鉴定和检测。
PCR技术可以用于检测细菌、病毒、真菌等微生物。
PCR技术具有高度敏感性和特异性，能够在几个小时内完成检测，但需要相对复杂的实验操作和专业设备。
质谱技术是一种基于物质的质量-荷电比分析的方法，广泛应用于微生物鉴定和检测。
质谱技术能够通过检测样品中微生物代谢产物的特征质谱图谱来快速鉴定微生物。
质谱技术具有高度准确性和快速性，能够在几分钟内完成鉴定，但需要相对昂贵的设备和专业的操作人员。
三、流式细胞术流式细胞术是一种基于悬浮细胞的快速检测方法，能够用于检测微生物的数量和种类。
流式细胞术将微生物样品分散成小颗粒，通过流式细胞仪进行激光照射和光散射的检测，得到细胞的数量和特征参数。
流式细胞术具有高通量和高灵敏性的特点，能够在几分钟内完成检测，但对于一些微生物的鉴定可能需要进一步的分析。
四、快速培养和生化检测传统的微生物检测方法通常需要较长的培养时间，但快速培养技术能够缩短培养时间并快速检测微生物。
快速培养方法通过优化培养基和培养条件，例如增加培养温度、增加营养物质等，能够在几小时内获得微生物的生长和菌落形成。
与快速培养相结合的生化检测方法，例如利用微生物的代谢产物进行检测，能够进一步提高检测的准确性和效率。
总结来说，微生物快速检测方法包括基于PCR的技术、基于质谱的技术、流式细胞术和快速培养生化检测等。
这些方法在微生物鉴定和检测方面具有高灵敏性和高准确性，并且能够在较短时间内完成检测，有助于减少风险和保护公共安全。
同时，这些方法还需要进一步的研究和发展，为微生物领域的快速检测技术提供更多选择和应用。
PCR的生物安全PPT课件
PCR反应特点
• 特异性强：PCR反应的特异性决定因素为：①引物与模板DNA 特异正确的结合；②碱基配对原则；③Taq DNA聚合酶合成反 应的忠实性；④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的 正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱 基配对原则的。
• 灵敏度高：PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克 (pg=10- 12)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=-6)水平。 能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在细菌学中最小检出率为 3个细菌。
安全性特征
防毒面具
吸入气溶胶 · 在设计上包括一次性使用的、整 个面部或一半面部空气净化 的、整个面部或加罩的动力空 气净化的以及供气的防毒面具
手套
直接接触微生物 · 得到微生物学认可的一次性乳
划破
胶、乙烯树脂或聚腈类材料
· 保护手
· 网孔结构
第25页/共74页
生物安全柜
• 环境空气→进入工作台→过滤→样本→高效过滤→排入室内或 室外
outline
一
总论
二 BSL-2级实验室生物安全
三
PCR实验室生物安全
第1页/共74页
总论
• 凡是为预防、诊断、治疗任何人类疾病或损伤、或者评 价人类健康而对人体的物质进行生物、微生物、血清化 学、血液、生物物理、细胞或者其他类型检验的部门， 统称为临床实验室
第2页/共74页
• 实验室每天要处理来自临床的标本，如血液、穿刺液、分泌物等，对这些 “未知疾病标本”无法得知其危险程度，因此，每个临床实验室每天都面 临生物安全隐患
• 布病 • 结核
第15页/共74页
新加坡的实验室SARS感染事件
2003年9月9日，新加坡一名患者被确诊感染了非典 病毒。 这名27岁的男子是新加坡国立大学专门研究西 尼罗病毒的微生物实验室的一名研究生。由11名专家组 成的国际调查小组认为，不恰当的实验程序、以及西尼 罗病毒样本与非典冠状病毒在实验室里的交叉感染，可 能是这名患者感染非典病毒的原因
微生物快速检测方法共33页文档
谢谢！
微生物快速检测方法
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
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其它即用胶，MPN改良法
Simplate
colilert
主要用于 水样或澄 清样品的 大肠菌群 或大肠杆 菌检测
• SimPlateTMTPC 法：基于食源性细菌的蛋白质 有特异性酶类，TPC培养基内含有多种细菌酶 类所对应的底物。检样被细菌污染时，只要具 有一种酶的活性即能与底物作用生成4-甲基伞 形酮，培养24h后，在紫外线照射下，发出蓝 色荧光。
• 采用大肠菌群细菌能产生D-半乳糖苷酶 分解ONPG（邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷） 使培养液呈黄色，以及大肠埃希氏菌产 生D-葡萄糖醛酸酶分解MUG（4-甲基伞形 酮-D-葡萄糖醛酸苷 ）使培养液在波长 366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断 水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏 菌。只需24小时即可同时定量出水样中 大肠菌群和大肠埃希氏菌的MPN值。
• 美国菠菜大肠杆菌O157:H7污染事件（2019）
企业为什么需要微生物快速检测？
• 市场销售环节要求快速出货。尤其是一些保质 期较短的产品。
• 减少物流的压力，尽可能减少仓存，加快资金 周转。
• 节约人力资源成本（外资企业尤其突出） • 对于运行HACCP质量保证体系的企业来说，快
速检测方法尤其重要。可以快速检测原料及半 成品的污染情况，以采取相应的措施控制最终 产品的微生物超标情况。
表面洁净的检测方法
• 微生物学法：纸片、琼脂板、 棉签拭子、海绵拭子
• 非微生物学法（快速法）： ATP(三磷酸腺苷，蛋白质, 降 解糖、NADP(辅酶II)，其它。
（一）ATP法
ATP---三磷酸腺苷
ATP来源于
细菌 酵母 霉菌 生物膜 组织残留
废弃物污染 人的污染
1. 人接触设备或器具 2. 设备或器具被污染 3. 清洗不正常 4. 非正常的敏感物污染 5. 微生物污染
8、微生物的快速检测
常见微生物检测项目
常规微生物项目：细菌总数、大肠菌群、 大肠杆菌、酵母总数、霉菌总数。
致病微生物项目：沙门氏菌、李斯特菌、 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157：H7、 弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志 贺氏菌、假单胞菌等。
• 国家标准GB/T 4789 1-40：食品卫生微生物学 检验：菌落总数测定、大肠菌群计数、沙门氏 菌检验、志贺氏菌检验、致泄大肠埃希氏菌检 验、副溶血性弧菌检验、小肠结肠炎耶尔森氏 菌检验、空肠弯曲菌检验、金黄色葡萄球菌检 验、溶血性链球菌检验、肉毒梭菌及肉毒毒素 检验、产气荚膜梭菌检验、蜡样芽孢杆菌检验、 霉菌和酵母菌计数、常见产毒霉菌的鉴定、椰 毒假单胞菌酵米面亚种检验、单核细胞增生李 斯特氏菌检验、肠杆菌科噬菌体检验、大肠菌 群快速测定、双歧杆菌检验、乳酸菌检验、大 肠埃希氏菌O157：H7/NM检验、阪崎肠杆菌检 验等。
政府检测机构为什么需要微生物 快速检测？
日益严峻的食品安全局势的需要
•
•
提国生内。高外检食测品安效全率形势严峻，恶性事件不断发
••节欧洲约“人二力噁英资”源、“成疯本牛病”（20世纪90年
代）
••与日本国大际肠接杆菌轨O157:H7中毒（2019）
• 中国SARS（2019） 、东南亚国家禽流感 （2019）
• 传统计数改良法： 1、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 2、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测。 3、纸片法：培养基固定在载体上。省去制做
培养基的时间。主要用于细菌总数检测。 4、其它：如Simplate即用胶,改良MPN产品。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
aColyte自动菌落计数仪
螺旋平板原理
检测原理
荧光素 荧光素酶
ATP+ O 2+ Lu ci f e r i n + Lu ci f e r a se =
氧合荧光素
O x y l u ci f e r i n + A M P+ PPi + CO 2
腺苷一磷酸 荧光
ATP法两大用途
1、用于食品、化妆品和药品企业对生产 线和管道进行快速清洁程度检测。政府 检测机构用ATP方法缺乏法律依据。ATP 法与微生物数量没有必然的联系。
• 食源性细菌悬浮于TPC培养基表面，在分隔的 小池内能迅速进行生化反应，若有检样颗粒亦 无干扰；它不是由48h形成的菌落来计数，而 是24h后在紫外灯照射下记录培养皿内能发出 蓝色荧光的阳性池数，进而由最大近似值(MPN) 表查出细菌的MPN。阳性池数与MPN 呈松泊分 布。
• 固定底物技术酶底物法，需要coliert试 剂
二、常规微生物快速检测技术现状
• 快速检测微生物数量的新方法： 1、ATP法：目前产品较多，如CHARM，
Biotrace, …..等。 2、电化学法：Sy-Lab公司Bactrac 4300，Tempo,… 3、颜色变化：如梅里埃的Bact/Alert和Foss的
MicroFoss。 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法
接种针往外移动 同时自动将样品 稀释1000倍
平皿旋转
螺旋平板法的优缺点
• 优点： 与传统方法相比，无需稀释3个梯度，
每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物 力。 • 缺点：
检测时间并没有缩短，菌落总数仍需 要培养48小时。
需要配合自动菌落计数仪，否则人工 计数更麻烦。
滤膜法
• 滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。 • 优点：灵敏度增大，菌落无扩散情况，
便于计数。
• 缺点：需要额外的支出购买真空泵，多 联支架及一次性滤膜；如果抽滤过程空 气洁净度不够，有可能造成二次污染， 尤其是对菌数要求特别严格的产品，如 啤酒，澄清果汁，桶装饮用水等。
皿膜法—以纸片法为代表
•纸片法是目前被广泛接受的方法。国标 餐具大肠菌群采用的就是纸片法。
• 优点：无需制备培养基，携带方便，非漫延菌落 计数较方便。
快速检测方法势在必行！！
• 国外许多政府检测机构都在大量使用快速检测 方法，尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和显色 培养基法在国外应用相当成功。
• 国内的许多政府检测机构也都已经在使用或正 在考虑使用国外先进的快速检测技术。
• 从长远发展趋势来说，快速方法是微生物检测 的一大方向。
一、常规微生物快速检测技术现状