黄酮提取工艺设计思路
黄酮类化合物的提取工艺与分析方法(郭彭靖)
黄酮类化合物的提取工艺与分析方法作者，单位中英文摘要，关键词黄酮类化合物（flavonoids），又称生物类黄酮（bioflavonoids），是指具有色酮环与苯环为基本结构的一类化合物的总称，是多酚类化合物中最大的一个亚类。
其基本骨架具有C6-C3-C6的特点，即由2个芳香环A和B，通过中央三碳链相互连结而成的一系列化合物。
根据间三碳链的氧化程度、B环（苯基）连接位置（2-或3-位）以及三碳链是否呈环状等特点，黄酮类化合物分为许多不同类型，如黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、二氢异黄酮、查尔酮等（叶文峰，2000）。
自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，在银杏叶、山楂、杜仲、山香圆叶、水芹、竹叶、黄芪、丹参等植物中均有检出。
到目前为止，已经发现有5000多种植物中含有黄酮类和异黄酮类化合物（蔡健等，2003）。
天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，通过血脑屏障，进入脂肪组织，具有调节血脂、消除氧自由基、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、抗过敏、抗菌、抗病毒等生理功能（李楠等，2005）。
许多应用研究表明，黄酮类化合物具有预防心血管疾病、防癌抗癌、防止骨质疏松和改善动物生长及降血脂、止血、抑制血小板聚集等多种药理作用。
例如芦丁、槲皮素等能够增强心脏收缩；杜鹃素具有止咳祛痰作用；黄芩苷具有抗菌消炎、抑制肿瘤细胞作用；水飞蓟素具有保肝作用等（肖常厚，1997）。
此外，黄酮类化合物也是重要的功能食品添加剂、天然抗氧化剂、天然色素、天然甜味剂（王晶等，2006）。
黄酮类化合物在人体不能直接合成，只能从食品中获得。
主要是作为食品添加剂或直接应用于食品中增加其保健作用。
例如茶多酚在功能食品中的应用主要是以茶叶及其提取物的形式添加到食品中。
茶多酚具有抗疲劳、抗辐射、抗衰老等功能特性，茶叶具有独特的色、香、味、形，能使食品增香、调味、着色，因此茶多酚以茶叶的形式在食品中的应用十分广泛。
近年来科学家都积极关注从植物体中提取纯度高、活性强的天然黄酮成分，并进一步将其加工成有特异功能的保健食品和药品等产品。
银杏叶黄酮提取工艺
银杏叶黄酮提取工艺银杏叶黄酮是一种重要的天然药物成分，具有多种药理作用，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
因此，银杏叶黄酮的提取工艺备受关注。
下面将介绍银杏叶黄酮的提取工艺。
一、银杏叶黄酮的提取方法1. 溶剂提取法溶剂提取法是目前应用最广泛的提取方法。
其基本原理是利用溶剂对银杏叶中的黄酮类化合物进行提取。
常用的溶剂有乙醇、丙酮、甲醇等。
其中，乙醇提取法是最常用的方法之一。
2. 超声波提取法超声波提取法是一种新型的提取方法，其基本原理是利用超声波的机械作用和热效应，促进银杏叶中黄酮类化合物的溶解和扩散。
相比传统的溶剂提取法，超声波提取法具有提取效率高、提取时间短、操作简便等优点。
3. 超临界流体提取法超临界流体提取法是一种新型的绿色提取技术，其基本原理是利用超临界流体对银杏叶中的黄酮类化合物进行提取。
相比传统的溶剂提取法，超临界流体提取法具有提取效率高、提取时间短、操作简便、无毒无害等优点。
二、银杏叶黄酮的提取工艺1. 溶剂提取法工艺（1）原料准备：将新鲜银杏叶洗净，晾干或烘干至水分含量低于10%。
（2）粉碎：将干燥的银杏叶粉碎成粉末。
（3）提取：将银杏叶粉末与乙醇按一定比例混合，浸泡数小时至数十小时，然后进行过滤、浓缩、干燥等步骤，得到银杏叶黄酮提取物。
2. 超声波提取法工艺（1）原料准备：将新鲜银杏叶洗净，晾干或烘干至水分含量低于10%。
（2）粉碎：将干燥的银杏叶粉碎成粉末。
（3）提取：将银杏叶粉末与适量的溶剂（如乙醇）混合，置于超声波提取仪中进行提取，提取时间和温度根据实际情况确定。
3. 超临界流体提取法工艺（1）原料准备：将新鲜银杏叶洗净，晾干或烘干至水分含量低于10%。
（2）粉碎：将干燥的银杏叶粉碎成粉末。
（3）提取：将银杏叶粉末与超临界流体（如二氧化碳）混合，置于超临界流体提取仪中进行提取，提取时间和温度根据实际情况确定。
三、总结银杏叶黄酮是一种重要的天然药物成分，其提取工艺备受关注。
目前，溶剂提取法、超声波提取法和超临界流体提取法是常用的提取方法。
银杏叶提取黄酮及分离纯化
银杏叶提取黄酮及分离纯化组员：李佳辉、黄埔、赵超武一、实验目的1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置3.学会自主设计实验，培养团队合作精神二、实验原理⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用；⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm;⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。
其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。
先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。
显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。
（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。
因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。
其工艺流程如下：银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。
三．实验材料及器材1.材料酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸2.相关溶液的配制和树脂预处理0.20mg／mL芦丁标准溶液（500mL）、5％NaNO2（500mL）、10％AI(NO3)3（500mL）、1mol／LNaOH 、0.4mol／LNaOH（500mL）、0.4mol ／L HCl(500mL)、30%乙醇（500mL）30%乙醇（1）D101树脂预处理(500g)：商品树脂均残留惰性溶剂，故使用前根据应用需要，必须进行不同深度的预处理，在提取器内，加入高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3—4小时，然后放净洗涤液，为一次提取过程。
黄酮提取工艺设计思路
黄酮提取工艺设计思路黄酮提取工艺设计思路1、黄酮类化合物含量测定的原理在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成螯合物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色。
黄酮类化合物能与金属离子络合产生有色反应，于波长510nm附近有吸收，可用分光光度法进行测定。
实验采用在碱性条件下，亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮形成红色络合物，在波长510nm附近有吸收可进行比色分析。
在中性或弱碱性及硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成鳌合物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色，硝酸钠还原黄酮，加硝酸铝络合，加氢氧化钠使黄酮类化合物开环，生成2'-OH查耳酮而显色。
利用黄酮类化合物中的3－羟基、4－羟基、5－羟基、4－羰基或邻二位酚羟基，与Al3＋进行络合反应，在碱性条件下生成红色络合物的原理测定其含量、测定波长的确定2取样品溶液和标准溶液2mL，加70 %的乙醇至5 mL, 然后加入5 %的NaNO2 溶液1 mL,室温放置6min, 再加入10 %的Al(NO3)3 1mL, 混匀, 室温放置6 min, 加入4%的NaOH10mL, 用水稀释至25 mL,混匀, 放置15 min, 在分光光度计上扫描波长从400 nm～600 nm之间的吸收度, 结果在510nm 波长处有最大吸收值。
配合物在Kmax= 354nm 及Kmax= 510nm有两个吸收峰, 经实验后得出Kmax= 112354nm波长处得到的工作曲线线性关系及精密度数据均不佳, 故本实验选取Kmax= 510 2nm为测定波长。
3、标准溶液的配制精确称取105℃干燥恒重芦丁对照品50mg, 加乙醇适量, 使之充分溶解, 用乙醇定容到100mL, 摇匀, 制得芦丁溶液。
精确量取芦丁溶液20mL, 置于50mL容量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀, 即得对照品溶液。
每1mL溶液含芦丁对照品0.2mg。
或精密称取干燥至恒重的芦丁标准品10mg, 置50mL容量瓶中, 加无水乙醇20mL, 轻摇使充分溶解,定容, 摇匀, 得0. 2mg /mL芦丁标准液。
山楂中黄酮的提取研究技术PPT文档18页
4 讨论 在用浸渍法提取山楂中黄酮的研究里面，采用单因素
实验的方法，对比了提取时间、提取溶剂浓度、提取温度 这3个因素对黄酮提取的影响。得出最佳的浸渍提取条件 为4h、70％乙醇和40℃提取温度，黄酮含量为33．5mg／g。 在使用浸渍法时，随着提取乙醇的浓度的加大，提取的黄 酮含量下降，它的影响在于不同含量的乙醇极性的不同， 极性过大或过小会导致提取出的杂物较多，从而会影响黄 酮的溶出，70％的乙醇浓度对山楂中黄酮的溶解度最好。 随着提取时间的增加山楂中黄酮的提取量也随着增加，一 定时间后渐渐趋于稳定，这个时间出现在4h的时候，温度 升高，分子运动加快，黄酮提取率也随着增大。浸渍法需 要的时间较长。黄酮提取效率较低，而且加温会增加成本， 乙醇的回收也是一个大问题，因此并不适宜与工业生产。
山楂中黄酮的提取研究技 术
山楂中黄酮的提取研究技术
专业班级：生工08级2班 指导教师：张名爱
2.索氏提取法
根据浸渍法得出最佳乙醇提取浓度的水平， 对样品在提取温度(70℃、80℃、90℃)，提取时间 (1．5h、3．Oh、6．Oh)，乙醇浓度（60%、70%、 80%）进行提取比较。
3.超声波提取法
(3)时间极差 水平2比水平1的增加十分明显，然而水平3 只比水平2有一点的增加。提取时间一增长，黄酮提取量就慢 慢开始恒定。
这说明了各个实验因素与因素水平对山楂中黄酮提取量的 影响有一定的差异，由分析结果可以得出：因素B>A>C(注：A 、提取温度 B、提取时间 C、乙醇浓度)。
3.3 超声波提取法对山楂中黄酮提取的影响
根据浸渍法和索氏提取法的结果选择最佳浓度， 在超声时间(15min、30min、45min)、提取温度 (70℃、80℃、90℃)、乙醇浓度（60%、70%、 80%）,条件下进行寻求最佳超声波提取的方法。
34532黄酮类化合物的分离
O
OCH3
＞
OH O
OH O
橙皮查耳酮
橙皮素
OH OCH3
黄酮类化合物的提取分离
4）不同类型的黄酮类化合物，先后出柱顺序： 异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇
5）各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强的顺序： 水＜甲醇或乙醇＜丙酮＜稀氢氧化钠水溶液＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺
聚酰胺色谱法总结
吸附规律：与酚羟基的数目、位置及溶剂介质有关。 与溶剂介质的关系： 吸附力：水﹥甲醇乙醇（浓度由低到高）﹥碱性溶剂 洗脱规律： 与吸附规律正好相反，即吸附力越强，越难洗脱
例：
HO
O
OH
HO
OH O
OH
OH OH O
OH OH O
山柰酚
桑色素
黄酮类化合物的提取分离
2）当分子中羟基数目相同时，吸附力与形成氢键的位置有关。 例：
HO
O
HO
O
OH O
A
OHOΒιβλιοθήκη OHBO H
O CH3
黄酮类化合物的提取分离
3）分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附越强。
例：
OH
HO
OH
HO
1 pH梯度萃取法
总游离黄酮的乙醚液
依次以5%NaHCO3 、5%NaCO3、 0.2%NaOH、4%NaOH
5%NaHCO3 酸化
7，4`-二OH
5%NaCO3 酸化
7-或4`-OH
0.2%NaOH 酸化
一般酚OH
4%NaOH 酸化
5-OH
2 聚酰胺柱色谱（分离黄酮最理想的吸附剂）
分离原理：氢键吸附
黄酮类化合物的提取分离
二、 黄酮类化合物的分离
木蝴蝶总黄酮的提取纯化方法及其应用与设计方案
一种木蝴蝶总黄酮的提取纯化方法，采用乙醇回流、大孔树脂吸附对木蝴蝶总黄酮进行分离提取纯化，尽可能的去除非黄酮类杂质，最终富集得到高纯度的总黄酮。
所述木蝴蝶总黄酮包括5种化学成分，分别为：木蝴蝶苷B、木蝴蝶苷A、白杨素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、白杨素。
本技术还提供木蝴蝶总黄酮在制备治疗肝癌药物中的应用，体外药效试验显示该总黄酮对肝癌细胞的增殖有显著抑制作用，呈明显的量效关系，同时随着总黄酮纯度的增加，药效显著增强；另外，本技术还进行了木蝴蝶总黄酮物质解析研究，明确木蝴蝶发挥抗肿瘤药效的物质基础，为开发以木蝴蝶总黄酮富集物的临床应用、抗肝癌新药研发及工业生产奠定物质基础和实验依据。
权利要求书1.一种木蝴蝶总黄酮的提取纯化方法，包括以下步骤：步骤1、取木蝴蝶药材粉碎，加10-30倍量50-95%的乙醇，回流提取1-3次，每次1-5 h，过滤，合并滤液，作为提取液，备用；步骤2、将步骤1中的提取液，加热浓缩至浓度为0.02-0.12 g/mL，再用HCl和NaOH溶液调节pH值为2-7，作为上样液；步骤3、上样液纯化：将步骤2中的上样液，上HPD-100大孔树脂，用2-10 BV水除杂后，再用5-15 BV的20-95%乙醇洗脱，得富集物，将富集物减压干燥至粉末或浸膏，即得。
2.如权利要求1所述的木蝴蝶总黄酮的提取纯化方法，其特征在于，所述木蝴蝶药材与树脂用量比为0.1-1.0g/mL。
3.如权利要求1所述的木蝴蝶总黄酮的提取纯化方法，其特征在于，所述木蝴蝶总黄酮的提取纯化方法适用于不同产地的木蝴蝶药材，经提取纯化后，总黄酮平均纯度大约可达90%以上。
4.如权利要求1所述的木蝴蝶总黄酮的提取纯化方法，其特征在于，采用质谱表征的手段对木蝴蝶抗肝肿瘤有效组分总黄酮类进行物质解析，包括以下步骤：采用HPLC-EIS-MS等现代质谱研究技术与分析手段，对步骤3中提取纯化得到的木蝴蝶总黄酮进行表征，通过木蝴蝶总黄酮的保留时间、质谱分子量棒状图和紫外吸收光谱图与相应的对照品进行比较，确定木蝴蝶总黄酮的化学成分。
黄酮提取工艺.总结
黄酮提取⼯艺.总结黄酮提取⼯艺2-1 微波辅助提取⾦银花总黄酮⼯艺流程图3.实验⽅法3.1 标准曲线的制备3.1.1最⼤吸收波长的选择⽅法以亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠为显⾊剂，分别作各样品提取液以及芦丁标准品的吸收曲线，在510nm处均有1个强吸收峰，因此选择510nm为测定波长。
3.1.2对照品溶液的制备⽅法精密称取芦丁对照品10.2mg置50mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，并稀释⾄刻度，摇匀备⽤。
3.1.3 标准曲线的制备精密量取对照品溶液0，1，2，3，4，5mL，分别置10mL容量瓶中，加⼊5%亚硝酸钠溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min；再加⼊10%硝酸铝0.3mL，振荡摇匀，放置6min；最后加⼊4%氢氧化钠试液4mL，加甲醇定容⾄刻度，摇匀，放置15min。
采⽤分光光度法，在510nm处测定吸光度，以对照品量（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3.2 微波提取单因素实验⽅法分别考察不同的微波辐射功率,辐射时间,⼄醇浓度,固液⽐对提取效果的影响3.3 提取⼯艺正交试验设计⽅法系统考察微波提取法的⼯艺参数，根据已有的资料及实际情况，选⽤微波辐射功率（A），辐射时间（B），⼄醇浓度（C），固液⽐（D）作为考察因素，以测得的浸提取样品中总黄酮含量为考察指标，选⽤L9（34）正交表设计，得到供试液。
3.4微波辅助提取法与⼄醇回流法⽐较⽐较两种提取⽅法的处理时间和液固⽐对总黄酮提取量的影响。
传统⼄醇回流法提取总黄酮的所需时间⽐微波辅助提取法提取长得多，且⾦银花总黄酮提取量⽐较低;⽽微波辅助提取的总黄酮较⼄醇回流法⾼。
⽐较此两种⽅法在最佳条件下的总黄酮含量。
3.5总黄酮含量测定⽅法取0.5mL液，加⼊5%亚硝酸溶液0.3mL荡摇匀，放置6min加⼊10%硝酸铝0.3mL荡摇匀，放置6min⼊4%氢氧化钠试液4mL，30%（V/V）⼄醇定容⾄刻度，摇匀，放置15min分光光度法，在510nm定吸光度值由标准曲线计算得总黄酮含量。
黄酮的提取工艺流程
黄酮的提取工艺流程
《黄酮的提取工艺流程》
黄酮是一类具有多种生物活性的化合物，广泛存在于植物中，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种保健作用。
为了充分利用黄酮的药用价值，科研人员开始研究黄酮的提取工艺流程。
黄酮的提取主要分为常规提取和新型提取两种方法。
常规提取方法包括溶剂提取和水提取。
溶剂提取主要是利用有机溶剂如乙酸乙酯、甲醇等与植物材料接触，将其中的黄酮提取出来，然后用蒸发法或减压浓缩法将溶剂除去，得到黄酮提取物。
水提取则是利用水作为提取剂，通过浸提、循环浸提等方法得到黄酮提取物。
新型提取方法则包括超声波提取、微波提取和离子液体提取等。
超声波提取是利用超声波的物理效应对植物材料进行破碎和渗透，加速提取过程。
微波提取则是利用微波的电磁波能量对植物材料进行加热，促进溶剂与植物材料的接触和反应。
离子液体提取则是利用离子液体的特殊性质对植物材料进行溶解和分离。
在提取过程中，还需注意对黄酮提取物的精制和纯化。
这包括采用地平式分离工艺、柱层析分离工艺和凝集层析分离工艺等手段，将提取物中的杂质除去，得到纯净的黄酮。
总的来说，黄酮的提取工艺流程主要包括植物材料的预处理、提取方法的选择、提取物的精制和纯化等步骤。
不同的提取方
法和工艺参数都会对提取效果和提取物的纯度产生影响，因此需要根据具体情况进行选择和优化。
希望随着科学技术的不断进步，黄酮的提取工艺能够得到更好的发展和应用。
设计实验总黄酮的提取和测定
设计实验总黄酮的提取和测定设计性实验：银杏叶中总黄酮的提取和测定小组人员：袁国明郎启国赵永仓王蓉一、目的要求1、探究不同浓度的乙醇和在不同时间下对黄酮类化合物提取率的影响。
2、掌握从银杏叶中提取总黄酮的操作步骤和测定方法。
3、了解提取银杏叶中黄酮类化合物制备的基本原理和方法。
二、实验原理根据超声波具有空化、粉碎、搅拌等特殊作用，对银杏叶的细胞有破坏现象，使乙醇溶液能渗透到银杏叶中，以便让总黄酮溶解在乙醇中，在通过分离提纯的方法，来获得总黄酮的含量。
黄酮类是含酚羟基的化合物，能够和铝离子产生黄色络合物，在碱性条件下溶液呈红色。
因此，本实验所采用的方法是在碱性溶液中加铝盐显色的分光光度法。
其具体操作是在所测定的溶液中加入5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH溶液，在500nm波长下，用紫外分光光度法测定所提溶液中总黄酮的含量。
三、试剂和器材1、试剂芦丁标准品；5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；30%、40%、50%、60%、70%、80％的乙醇（用95%的酒精31.91ml、42.55ml、53.19ml、68.83ml、74.47ml、85.11ml ）；及蒸馏水等。
2、材料新鲜的银杏叶3、器材容量瓶25ml（×1）100ml（×6）；吸管0.5ml（×2）1ml （×2），2ml（×1），5ml （×1）粉碎机；超声波清洗机；高速离心机；三角锥形瓶50ml（×6）；滤纸；分光光度计；烧杯；具塞刻度试管；分析天平；20ml量筒等四、操作方法1、银杏叶的处理把新鲜的银杏叶低温烘干，使水分小于8％，制成干粉，待用。
2、制作标准曲线准确称取芦丁标准品5mg，用80％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，摇匀，得0.2mg ／mL的标准溶液。
移液管精确吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分别置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO2 0.4mL，摇匀，放置5min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5%NaOH 4.0mL，再加蒸馏水至刻度，摇匀，在80℃水浴中保温10min。
黄酮的提取与分离
（一）溶剂萃取法
1、原理：黄酮类化合物与混入杂质极性不同
2、举例：
石油醚 —除叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素；
乙醇 —— 除蛋白质、多糖类等水溶性杂质。
（二）碱提取酸沉淀法
1、原理：黄酮类化合物易溶于碱性水。 2、常用碱液：碳酸钠, 氢氧化钠, 氢氧化钙等
例如：从槐花米提取芦丁过程
槐花米→加6倍量水→煮沸→以石灰乳调 pH=8-9→微沸30min→趁热过滤→残渣再 水煮一次→合并两次滤液→ 60-70℃时以 浓盐酸调节pH=4-5→静置24小时→抽滤
f. 洗脱能力与介质有关
水 < 甲醇或乙醇 < 丙酮 < 稀NaOH水
溶液或氨水< 甲酰胺 < 二甲基甲酰胺 < 尿素水溶液 ⑤ 若用含水移动相(甲醇/水)，则聚酰胺对 苷元的吸附力较强； 以有机溶剂(氯仿/甲醇)做移动相，则相反。
3. 葡聚糖凝胶柱色谱
① Sephadex G（适用于水溶性成分分离）和
碳酸钠氢氧化钠氢氧化钙等槐花米加6倍量水煮沸以石灰乳调ph89微沸30min趁热过滤残渣再水煮一次合并两次滤液6070时以浓盐酸调节ph45静置24小时抽滤水洗至中性60干燥得粗品芦丁沸水重结晶7080干燥得纯品芦丁
第三节
一、提取
提取与分离
1、黄酮苷类与极性较大的苷元(羟基黄酮,双 黄酮,橙酮,查耳酮等)——丙酮,乙酸乙酯,乙醇, 甲醇,甲醇-水(1:1)等提取 2、多糖苷类: 沸水提取 3、花色苷类: 0.1% 盐酸提取 4、黄酮苷元: 氯仿,乙醚,乙酸乙酯等提取
a. 不同类型黄酮化合物，先后流出顺序为：
异黄酮 >二氢黄酮醇 >黄酮 >黄酮醇
b. 相同苷元，洗脱先后顺序为：
甘草黄酮高效提取
甘草中黄酮的分离纯化方法
大孔吸附树脂柱层析分离纯化甘草黄酮 本实验采用AB-8型号的大孔吸附树脂。
装柱：充分吸胀的树脂在搅拌下倒入层析柱 (80×1500 mm)中，装柱后液体必须高于树脂20～ 40mm。
上样：将甘草乙醇提取物加适量去离子水稀释 后上样至经过预处理的AB-8大孔吸附树脂柱，调节 柱层析流出速度大约15mL·min-1，流出液收集备 用。
综合考虑确定最佳提取条件为 A3B2C3D3，即提取时间 60min，料液比 1∶15， 提取温度 70℃，提取次数 3 次，在此条件下，甘草总黄酮提取得率为 98.19%，RSD 为 0.92%。
将三种提取工艺进行比较，结果发现，在提 取得率相近的情况下，超声-微波萃取法所需的时 间大大缩短，显示超声微波协同萃取技术具有低 能耗及高效快速的优点，适合于黄酮类化合物的
超声-微波协同萃取技术
提取时间15 min，料液比1∶30，提取 温度50℃，提取1次的条件下，考察乙醇 浓度为50%，60%，70%，80%，90% 时黄酮的提取得率，确定乙醇浓度。
固定乙醇浓度80%,超声功率50 w，微波频率2450Hz。
通过以上分析并结合单因素分析可以确定关于提取得率的最佳的因素水平组合为 ：提取时间 15min，料液比 1∶15，提取温度 50℃，提取次数 3 次，在此条件下进行 重复实验，得到平均提取得率为 98.80%，RSD 为 0.31%。
薄层色谱 气相色谱 高效液相色谱
实验思路1： 提取——提纯——初步鉴定——分
离——结构测定 实验思路2：
提取——分离纯化——检测
甘草中黄酮的提取方法
黄酮的提取得率受到很多因素的影响 ，根据文献报道及初步实验，本文选择 提取的料液比，提取时间，提取温度， 乙醇浓度及提取次数五个因素进行分析
辣木籽中总黄酮的提取工艺研究
辣木籽中总黄酮的提取工艺研究辣木籽是一种珍贵药用植物，既能作为药用植物，又能当做食用植物，不仅具有药物营养价值，而且对人体的免疫系统、心血管系统具有保健作用。
其中辣木籽富含总黄酮，是其中的一种有效成分，具有多种生物活性，因此提取辣木籽中的总黄酮成为当前的研究热点。
本文以乙醇为提取剂，通过单因素试验以及响应面试验(Maximizing desirability)优化，研究最佳提取条件。
而且，还对提取物进行了理化性质分析。
实验步骤如下：1. 实验材料辣木籽粉，乙醇，等2. 提取条件三种因素分别是：制备粉末的颗粒大小（0.4-0.6mm，0.6-0.8mm，0.8-1.0mm和>1.0mm），浸提剂的质量浓度（30%,40%,50%和60%）和提取时间（30、60、90和120分钟）。
3. 提取总黄酮实验进行固液比为1:20，滴定结果用芸香酸铝复合试剂比色法检测。
4. 构建响应面试验根据单因素试验结果，设计了响应面试验。
中心复合设计法进行设计，三因素的变化范围如下: 提取粉末颗粒大小（0.6-0.8mm）、乙醇质量浓度（40%-60%）和提取时间（60-90min）。
根据试验结果，采用最大化期望值法对三个变量进行优化，得出响应面分析方程。
通过对单因素试验结果的综合分析可以得到：粉末颗粒大小对总黄酮的提取率影响显著，提取剂的浓度对总黄酮的提取率有较明显的非线性影响，提取时间对总黄酮的提取率影响不明显。
通过响应面试验，得到最优提取条件为：粉末颗粒大小0.663mm、浸提剂质量浓度51.6%、提取时间76.9min。
此时，总黄酮提取率为2.73%。
综上所述，我们通过单因素试验和响应面试验优化，得到了提取辣木籽中总黄酮的最佳条件。
最后，对提取物理化数据进行分析，得到提取物的理化性质与前人文献报道相一致，并具有良好的生物活性。
总黄酮提取率随提取剂浓度的增加先升高后降低，提取剂的浓度对总黄酮提取率的影响存在非线性关系，有效提取总黄酮最好的浓度为51.6%。
黄酮提取工艺及应用ppt课件
开发含有黄酮类化合物的保健 品，满足消费者对健康和美容 的需求。
功能性食品领域
将黄酮添加到功能性食品中， 提高食品的营养价值和保健功 能。
日化产品领域
利用黄酮的抗氧化和抗炎活性 ，开发具有护肤、美白、抗衰
老等功效的日化产品。
黄酮产业的发展趋势与前景
市场需求持续增长
随着人们对健康和美容的关注度不断 提高，对黄酮类产品的需求将不断增 长，推动黄酮产业的发展。
02
研究并优化现有的黄酮提取工艺，提高提取效率和纯度，降低
生产成本。
合成具有生物活性的黄酮类似物
03
通过化学合成方法，开发具有更高生物活性或独特功能的黄酮
类似物，以满足不同领域的需求。
黄酮在各领域的应用拓展
医药领域
深入研究黄酮在预防和治疗疾 病方面的作用，拓展其在抗肿 瘤、抗炎、抗病毒等药物中的
应用。
黄酮的生物活性与作用
总结词
黄酮具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等 ，对人体健康有多种益处。
详细描述
黄酮类化合物具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、 抗肿瘤等。其抗氧化作用可以清除自由基，减轻氧化 应激反应对人体的损害，延缓衰老。抗炎作用可以缓 解炎症反应，减轻疼痛和肿胀等症状。抗肿瘤作用可 以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，预防和治疗癌症。此 外，黄酮类化合物还可以改善血管舒张功能、降低血 压和血脂等作用，对人体健康有多种益处。
晶析出，再进行分离和纯化。
膜分离技术
利用膜的选择透过性，将黄酮类 化合物与其它杂质进行分离，得
到高纯度的黄酮类化合物。
05 黄酮的未来发展与展望
黄酮的深入研究与开发
深入研究黄酮的生物活性
01
继续探索黄酮类化合物在抗氧化、抗炎、抗肿瘤等方面的生物
黄酮类化合物的提取
黄酮类化合物的提取1. 引言黄酮类化合物是一类具有重要生物活性的天然产物，广泛存在于植物中。
它们具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等多种药理活性，对人体健康具有积极影响。
因此，黄酮类化合物的提取和研究对于开发新药、保健品以及食品添加剂等具有重要意义。
本文将介绍黄酮类化合物的提取方法，包括传统的溶剂提取法和现代的超声波辅助提取法。
同时还将讨论一些常见的黄酮类化合物提取实验中需要注意的问题，并介绍一些常用的分析方法。
2. 黄酮类化合物的溶剂提取法溶剂提取法是一种常用且有效的黄酮类化合物提取方法。
其基本原理是利用溶剂与植物材料中的黄酮类化合物发生相互作用，从而使黄酮类化合物从植物材料中转移到溶剂中。
2.1 实验步骤1.准备植物材料：选择含有丰富黄酮类化合物的植物材料，如柑橘皮、茶叶等。
2.粉碎植物材料：将植物材料研磨成粉末，增加溶剂与植物材料的接触面积。
3.溶剂选择：选择适当的溶剂，常用的溶剂有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
溶剂的选择应考虑黄酮类化合物在该溶剂中的溶解度以及对环境和人体的安全性。
4.提取过程：将粉碎后的植物材料与选择好的溶剂混合，进行提取。
可以采用冷浸提取、热浸提取或回流提取等方法。
5.过滤和浓缩：将提取液通过滤纸过滤去除固体残渣，并利用旋转蒸发仪等设备将溶剂蒸发浓缩，得到黄酮类化合物的浓缩液。
2.2 实验注意事项1.操作环境要求：在通风良好的实验室中进行操作，避免溶剂蒸气对人体造成伤害。
2.溶剂选择：根据需要提取的黄酮类化合物种类选择合适的溶剂，并注意其安全性。
3.植物材料的处理：植物材料应干燥并研磨成细粉末，以增加提取效果。
4.提取时间和温度：提取时间和温度会影响黄酮类化合物的提取效率，需根据实验需要进行优化。
5.过滤和浓缩：过滤时要注意使用适当的滤纸，以防止黄酮类化合物丢失。
浓缩时要控制温度和压力，避免黄酮类化合物的分解。
3. 黄酮类化合物的超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种高效、快速且环境友好的黄酮类化合物提取方法。
黄酮提取工艺流程
黄酮提取工艺流程黄酮是一种天然的植物化合物，具有广泛的生物活性。
黄酮可以在草本植物、水果、蔬菜等植物中找到，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种保健功能。
黄酮的提取工艺流程主要包括植物材料的选择、提取剂的选择、提取条件的控制等步骤。
首先，选择合适的植物材料是黄酮提取的关键。
一般来说，黄酮含量较高的植物材料有苦参、车前草、柿树皮等。
在选择植物材料时，要考虑材料的来源、成本、收集难度等因素。
其次，选择合适的提取剂。
常见的提取剂有乙醇、乙醚、正丙醇等。
选择提取剂时要考虑其溶解度、毒性、价格等因素。
一般来说，乙醇是较为常用的提取剂，具有良好的溶解性和相对较低的毒性。
然后，控制提取条件。
提取条件包括提取温度、提取时间、料液比等。
不同的植物材料可能需要不同的提取条件，需要通过试验确定最佳条件。
一般来说，提取温度在60-80℃之间，提取时间在1-4小时之间，料液比在1:10-1:20之间。
在进行黄酮提取时，需要先将植物材料进行粉碎，以增加提取效果。
然后将粉碎后的植物材料与提取剂混合，在适当的温度下进行提取。
提取过程中需要不断搅拌，以增加物质的接触面积，促进物质的传质。
提取结束后，通过过滤或离心等方式将提取液与植物渣滓分离。
最后，通过浓缩、结晶等方式得到黄酮纯品。
浓缩可以使用旋转蒸发器、真空浓缩器等设备进行。
在浓缩过程中，需要控制温度和压力，以避免黄酮的破坏。
浓缩后，可以通过结晶、分离、过滤等步骤得到黄酮的纯品。
黄酮提取工艺流程需要科学的实验设计和严格的操作控制，以确保黄酮的质量和提取效果。
同时，还需要进行合适的分析检测，以确定提取物中黄酮的含量和纯度。
总的来说，黄酮提取工艺流程需要根据植物材料的特点和提取剂的性质来选择合适的条件和方法。
通过合理的操作和控制，可以得到高纯度的黄酮产品，为进一步的应用研究提供了基础。
黄酮的提取
预览：总黄的酮取提法方1、熔剂法热水取提、碱性水或碱法稀性醇提法取有、机溶提取法剂2、2. 1波提取法微微波提是取用利不同结的构物质在微波场中吸收微能波的力差，使基异体质中物某的区些或提域取系体中的某组分被选择些性热，加而从被提取物质从基使或体系体分中离进入，介常电较数小，波吸收能力微对差的相提剂[取]。
1种这法方的优是对点取物提有较具高选择的性、取提高、率取提度速快溶剂、量用少、全安节、、能设简单[2备]。
2. 2声波提取法超用超波声取提提取黄法类物酮，是目前质比较新方法的。
原是利用理超声波液在体的中空化作用加植物有速效分成浸的出提取另外，，还用其利次效，应如械机动振扩散、、击等碎，使加其被速取成分的提扩散释放。
超、波声提取具法设备有单简操，作方便提，取时短间，率产，高需无加热，时有同于保护利不稳热成定，省分，节能时提，取率的高点。
优2. 3临界流体萃取超法超临流界体萃取技术是利超临界流体处于临界用温和临度界力压以，上兼有气和体体的双重液特点对，物具质有良的好溶解力能从而，溶作进剂萃取行离分可做。
临界超体流物的质多，一般为很分低量子化合物的，如OC2、CH26NH3、、N2 O等目前。
多用采O2C做萃剂，因取为具它有度大密溶解、能力强、临压界力适中临界温度、近接常温不、响萃影物的取生理活性无毒无、、化味学质性定、稳产过程中生容回收、易无环污染境、格便价宜一等系列点优但单一。
的CO作2取剂只萃对低极、性脂亲化合物有性较强的解能溶力对，多数大极性强的较分组则起不用作，此，在其中因加夹入剂，通过带响溶影剂密度和溶质的夹带与剂子间分的用作来力影溶响质在二化氧流体碳的溶中度和解选择[性5]。
1超界临流萃体取术有技许多传分离统术不技可比的拟点优过程容易：控、制达到平衡的间时、短取萃效高率、无有机剂溶残留、对热性敏物不质破坏易[等1]。
6但它所需的设要备规模大较技，术要高求，资大投安全操作，要高，求以难于用较大规模生的。
银杏黄酮提取技术方案
第三部分： 系统构成、工艺流程和技术指标
三、提取溶媒控制系统---温度控制：
–
–
–
型式： 板式 换热器。 用途和要求：加热提取溶媒，达到工艺要求的温度。 流程和操作：
人工设定加热温度范围，自动控制。 在线温度探测器实时在线检测溶媒的温度值，自动调节。
第三部分： 系统构成、工艺流程和技术指标
三、提取溶媒控制系统---温度控制：
六、提取液浓缩系统---加热蒸发/冷凝回收：
–
蒸发浓缩工艺：
蒸发温度：≤80℃。 加热介质：
– –
饱和蒸汽。 压力≤ 3 kg，温度≤ 130 ℃。 地下水循环。 冷却水循环温度：依照夏天进水温度 25 ℃，回水 30 ℃计算。
冷却介质：
– –
–
流程和操作：
进液：液位自动控制进液。 排液：根据人工设定浓度值，自动控制浓缩液排出。说明：浓度值的设 定，需根据用户对浓缩液甲醇残留量的要求，现场取样检测，得出合格 浓缩液的浓度值。
第三部分： 系统构成、工艺流程和技术指标
工 艺 流 程 示 意 图
第三部分： 系统构成、工艺流程和技术指标
一、喂送料系统：
包括储料、定量控制喂料、物料输送等装置。
第三部分： 系统构成、工艺流程和技术指标
一、喂送料系统---储料：
型式： 料斗 。 用途和要求：
批次性盛装提取原料，保证定量控制喂料器的供给。 – 起到缓冲作用，减轻喂料操作工人的劳动强度。
–
–
–
型式： 三效 动态循环蒸发浓缩器。 用途和要求：
将提取液中的甲醇溶剂蒸发出，并回收再利用。
蒸发量：
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黄酮提取工艺设计思路1、黄酮类化合物含量测定的原理在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成螯合物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色。
黄酮类化合物能与金属离子络合产生有色反应，于波长510nm附近有吸收，可用分光光度法进行测定。
实验采用在碱性条件下，亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮形成红色络合物，在波长510nm附近有吸收可进行比色分析。
在中性或弱碱性及硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成鳌合物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色，硝酸钠还原黄酮，加硝酸铝络合，加氢氧化钠使黄酮类化合物开环，生成2’-OH查耳酮而显色。
利用黄酮类化合物中的3－羟基、4－羟基、5－羟基、4－羰基或邻二位酚羟基，与Al3＋进行络合反应，在碱性条件下生成红色络合物的原理测定其含量2、测定波长的确定取样品溶液和标准溶液2mL，加70 %的乙醇至5 mL, 然后加入5 %的NaNO2 溶液1 mL, 室温放置6min, 再加入10 %的Al(NO3)3 1mL, 混匀, 室温放置6 min, 加入4%的NaOH10mL, 用水稀释至25 mL,混匀, 放置15 min, 在分光光度计上扫描波长从400 nm～600 nm 之间的吸收度, 结果在510nm 波长处有最大吸收值。
配合物在Kmax1= 354nm 及Kmax2= 510nm有两个吸收峰, 经实验后得出Kmax1=354nm波长处得到的工作曲线线性关系及精密度数据均不佳, 故本实验选取Kmax2= 510 nm为测定波长。
3、标准溶液的配制精确称取105℃干燥恒重芦丁对照品50mg, 加乙醇适量, 使之充分溶解, 用乙醇定容到100mL, 摇匀, 制得芦丁溶液。
精确量取芦丁溶液20mL, 置于50mL容量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀, 即得对照品溶液。
每1mL溶液含芦丁对照品0.2mg。
或精密称取干燥至恒重的芦丁标准品10mg, 置50mL容量瓶中, 加无水乙醇20mL, 轻摇使充分溶解,定容, 摇匀, 得0. 2mg /mL芦丁标准液。
精确称取芦丁标准品5mg，用70%乙醇溶解，于50 mL容量瓶中定容，即得每1mL溶液含芦丁对照品0.1mg芦丁标准品溶液。
称取约20mg芦丁标准品于称量瓶中置105℃烘箱下烘干至恒重,干燥器中冷却，精确称取10 mg芦丁标准品，用70%乙醇定容至100 ml为标准液。
4、样品溶液的测定方法4.1、标准曲线的绘制精确量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL, 分别置于25mL容量瓶中。
分别加水至6mL, 加5%亚硝酸钠溶液1.0mL, 混匀, 放置6min; 加10%硝酸铝溶液1.0mL, 摇匀, 放置6min; 加1% 氢氧化钠溶液10.0mL, 再加水至刻度, 摇匀, 放置15min。
用分光光度法在510nm波长处分别测定其吸光度。
以吸光度为纵坐标, 浓度为横坐标, 用最小二乘法对直线进行回归计算，令回归方程为：y=ax+b，绘制标准曲线, 得回归线方程: Y = 11. 321 43X + 0. 00343( r= 0.9998), 在8~40μg/mL的范围内，浓度与吸收度有良好的线性关系。
分别取0. 0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 mL的0. 1mg/mL芦丁标准溶液于6支比色管中，分别加入0. 3 mL 5%亚硝酸钠，放置6 min，加0. 3 mL 10%硝酸铝后放置6 min,，再加1. 0mol/L NaOH 4.0mL，加70%乙醇定容至10 mL，摇匀，放置12min得测定液。
以空白溶液作参比,在λ= 510nm处测吸光度,计算标准液浓度(C)与吸光度(D)的回归方程D = bC + k。
精确吸取芦丁标准液0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 ml分别置于6支具塞试管中，各补70%乙醇至5. 0ml，加5%亚硝酸钠溶液0. 3 ml,，摇匀，放置6 min后，加10%硝酸铝溶液0. 3ml,摇匀，放置6 min后，再加4%氢氧化钠溶液4. 0ml，加水0. 4ml，摇匀，放置15 min后，在510 nm处测吸光度-浓度值，所得吸光度-浓度曲线见图，回归方程如下: A =12. 721 0C - 0. 02903，相关系数r = 0. 9998。
4.2、样品处理取采回的新鲜芦蒿叶，洗净，参考相关文献，在105℃烘至约八成干,剪成约1 cm长度，用粉碎机粉碎，再在105℃烘至恒重。
采用Soxhlet提取法，以无水乙醚为脱脂剂,于43℃水浴中脱脂至充分除去样品中脂类和脂溶性色素。
取出样品滤纸包，先置通风处晾干，再将滤纸包置烘箱中130 ℃烘干，放入干燥器中冷却备用。
4.3、样品处理方法湿热法：将鲜叶置于高压反应釜加压蒸30min，另取鲜叶常压蒸30min。
将阴干叶置于高压反应釜加压蒸15min，另取阴干叶常压蒸15min。
氧化法：（1）H2O2法：将鲜叶、阴干叶分别用用2倍量H2O2浸泡10min（H2O2浓度1%、温度50℃）、10min（2%、40℃）、30min（0.5%、30℃）、30min（2%、50℃）、60min（0.5%、40℃）、60min（1%、30℃）。
（2）KMnO4法：将鲜叶、阴干叶分别用用2倍量KMnO4浸泡10min（KMnO4浓度1%、温度50℃）、10min（2%、40℃）、30min（0.5%、30℃）、30min（2%、50℃）、60min（0.5%、40℃）、60min（1%、30℃）。
4.3、样品溶液的测定4.3.1、分光光度法精确量取样品溶液5. 0 mL, 置于25 mL容量瓶中, 按照2.1中方法进行操作, 在510nm 波长处测定吸光度A1; 再精确量取样品溶液5.0mL, 置于25mL容量瓶中, 加水至刻度, 摇匀, 在510nm 波长处测定吸光度A2。
取2次吸光度的差值, 由回归线方程计算样品中黄酮类化合物的提取率。
4.3.2、HPLC 法取上述样品总黄酮提取液浓缩物，用甲醇溶解，进样前用0.45 μm 滤膜过滤。
高效液相色谱仪：LC- 9A(日本SHMADZU) ；色谱柱：Dima Technologies(C18 迪马公司)，规格：250 mm×4.6 mm；柱温为室温；流速1 mL/min；检测器：SPD-10A；检测波长254 nm；进样量20 μL；流动相：80%甲醇。
在进柱之前，流动相要经过0.45μm 的有机膜过滤，并超声脱气30 min。
5、溶剂选择分别称取样品1g，以提取温度90℃，提取时间2 h ，分别利用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚为溶剂，料液比1:50(g/mL)为提取条件进行常压回流提取，以此结果进行比较。
6、线性范围、回归方程和检出限总黄酮的线性范围在1.0～40μg/ml 之间，所得回归方程为y=0.0033x－0.0109，相关系数为0.9995，检出限为1.0μg/ml。
7、显色剂稳定性实验精确量取标准溶液和样品提取液1.0mL, 同标准曲线和样品测定的操作，分别于配制后每隔5min测定其吸光度考察反应体系的稳定性。
结果显示其RSD值为0. 5097% , 说明样品溶液在1h内稳定。
8、加标回收率实验取已测得黄酮类化合物提取率的样品溶液2.0mL, 加入0.2mg/mL的芦丁对照液1. 0mL, 按实验方法测定, 计算回收率。
加样回收率为99. 12%, RSD 值为2. 135%。
表明, 该方法对黄花菜中黄酮类化合物提取率测量的准确度较高。
回收率= (混合后测得的总黄酮含量-样品中总黄酮含量)/芦丁标准品加入量×100%。
分别取0.2g含总黄酮的样品于两支15ml具塞比色管中，各加入4ml乙醇，其中1管加入0.100mg芦丁标准品作为加标测定管，另1管作为本底管，再按最佳试验条件进行样品处理，用标准曲线法进行计算，重复试验3次，计算回收率。
由表8可知，该方法的回收率为95%~104%，证明该方法的准确度较好。
取5个10mL比色管，在已知黄酮含量的蓖麻叶和蓖麻花提取液中分别加入0.2mg/mL芦丁对照品溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL样液，分别测定黄酮含量，根据所得的总黄酮含量减去加入的标量，再除以样品所含的总黄酮量即可计算出回收率。
回收率%= 样品加标准样测得总黄酮含量−样品中总黄酮含量/加入标准液总芦丁的含量×100%9、精密度实验取5份同一样品溶液各5.0mL, 置于25mL容量瓶中, 按实验方法测定，计算其平均含量和相对标准偏差。
其RSD 值平均为0.162%, 测定结果的相对标准偏差很小, 说明仪器的精密度较高, 实验数据可靠。
在正交试验得出的最佳条件下，样品用超声波提取后测定总黄酮提取量，重复试验5 次，计算保健食品总黄酮提取量为（5.370±0.092）mg，RSD 为1.717%，证明该方法的精密度较好。
按微波提取法同时制备5份试样液，按标准曲线方法对试样液中总黄酮含量进行平行测定。
精密称取车前草供试品3份，每份测试3次,结果见表2，相对标准偏差为3. 20 %(m =3)。
精密移取芦丁标准液1mL，共5 份，分别置于10mL试管中，按1.3.3.2 节操作，计算吸光度的相对标准偏差(RSD)。
10、重现性试验。
取同一批大白口蘑样品6份，在最佳条件下进行萃取，分别测定各自的总黄酮含量，结果表明，其相对标准偏差为1.24%。
在同一实验室、不同时间对样品叶中总黄酮含量进行5次重复测定。
11、金属离子的干扰实验银杏叶提取物作为生物活性物质, 许多金属离子对它的测定都有一定影响。
本实验选取常见的Zn2+ 、Fe3+ 进行实验。
实验表明Zn2+ 对反应无影响, 加入1 mL 100Lgöm L Fe3+ 溶液, 扫描发现在波长510 nm 无吸收峰, 由此可知Fe3+ 对实验测定影响很大。
本实验选择EDTA做掩蔽剂。
12、黄酮类化合物的定性检测12.1、三氯化铝反应取8支试管，分别加入少许经上述各提取方法所得的样品，用95%乙醇完全溶解，每只试管中再加1%三氯化铝乙醇溶液1～2 mL，观察颜色变化情况。
在三氯化铝反应中，原来的黄色加深，并有黄色或黄绿色荧光，原因是与铝离子产生了螯合物而呈现出鲜黄色。
滤纸上无明显颜色变化，紫外灯下显鲜黄色荧光，可能不含4’-羟基黄酮醇和7，4’-二羟基黄酮醇等黄酮类化合物。
黄色或黄绿色：有黄酮类化合物。
12.2、盐酸-镁粉还原反应将经上述各提取方法所得的样品分别溶于盛有95%乙醇的试管中，待完全溶解后加少许镁粉，再加数滴浓盐酸,观察颜色变化情况。
在盐酸- 镁粉还原反应中,溶液呈现出橙黄色或紫红色,这是由于黄酮类化合物被还原生成花色苷元及其二聚物。