银杏叶总黄酮的提取分离工艺研究_邵京

２．１．２ 供 试 品 溶 液 的 制 备 将新鲜银杏叶洗净，于 ６０℃ 烘 干 至 恒 重，粉 碎。
称取粉 末５．０００ｇ，置 于 烧 杯 中，加 入 ５０％ 乙 醇 至 １００ ｍＬ，９０℃ 下 超 声 波 提 取６．０ｈ（超 声 频 率 为２０～ ５０ Ｈｚ），过 滤，留 滤 液。 将 滤 液 用 ３０％ 乙 醇 定 容 于 １００ｍＬ 容量瓶，作为供试品溶液。 ２．１．３ 总 黄 酮 含 量 的 测 定
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖａｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａｌ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒｉａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ，ｍａｔｅｒｉａｌ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｇｉｎｇｋｏ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒｉａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇ－ ｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｏｆ ｆａｃｔｏｒｓ ｗｅｒｅ ｐｒｏｃｅａｄｅｄ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｒｅｓｉｎ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｂｙ ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｔｈｅ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｓｉｎｓ ｆｏｒ ｇｉｎｇｋｏ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ，ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｏｂｓｅｒｖｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｃｏｌｏｕｒｉ－ ｚｅｒｓ，ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｓｏｌｖｅｎｔ ａｍｏｎｇ ｔｈｅｍ ｗａｓ ｃｈｏｓｅｎ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：５０％ ａｌ－ ｃｏｈｏｌ ａｓ ｅｘｔｒａｃｔａｎｔ，ｍａｔｅｒｉａｌ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ １∶２０，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ６ｈａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ９０℃ ．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ Ｄ１０１ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ｒｅｓｉｎ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｅｌｕｔｅｄ ｂｙ ３０％ ａｌｃｏｈｏｌ．Ｂｙ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ ｃｏｎ－ ｔｅｎｔ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓ ３０％ ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｇｉｎｋｇｏｌｉｃ ａｃｉｄｓ ｗａｓ ｂｅｌｏｗ ５×１０－６． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａｌ；ｔｏｔａｌ ｆｌａｖａｎｏｉｄｓ；ｇｉｎｋｇｏｌｉｃ ａｃｉｄｓ
芦 丁 标 准 品 ；无 水 乙 醇 、氢 氧 化 钠 、亚 硝 酸 钠 、碳 酸 钙 （所 有 试 剂 均 为 分 析 纯 ）。 ２ 试 验 方 法 ２．１ 黄 酮 含 量 测 定 ２．１．１ 标 准 曲 线 的 制 作
称取干 燥 的 芦 丁 标 准 品 １０．０ ｍｇ 用 ７０％ 的 乙 醇溶 解，定 容 于 ５０ ｍＬ 容 量 瓶，得 到 浓 度 为０．２００ ｍｇ／ｍＬ 的 芦 丁 标 准 溶 液。 精 密 量 取 ０、０．５、１．０、 ２．０、４．０、８．０ ｍＬ 芦 丁 标 准 溶 液，分 别 置 于 ５０ ｍＬ 容 量 瓶 中，加 入 ３０％ 的 乙 醇 １０ ｍＬ，加 入 ５％ 的 ＮａＮＯ２ 溶液１ｍＬ，摇匀，放置６ ｍｉｎ，加 入 １ ｍｏｌ／Ｌ 的 ＮａＯＨ 溶液１０ｍＬ，以３０％的乙醇溶液定容至刻 度线，放 置 １５ ｍｉｎ，在 ５１０ｎｍ 波 长 下 测 定 吸 光 度 值。以吸光度为横 坐 标，芦 丁 标 准 液 浓 度 为 纵 坐 标 绘制标准曲线。
收 稿 日 期 ：２０１３－０２－２１；修 回 日 期 ：２０１３－０７－２１ 基 金 项 目 ：无 锡 市 现 代 农 业 （生 态 修 复 植 物 ）科 技 创 新 中 心 （ＣＭＥＮ１００２）。 作 者 简 介 ：邵 京 （１９８５－），女 ，江 苏 无 锡 人 ，硕 士 生 ，主 要 从 事 植 物 资 源 开 发 与 应 用 。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｊｊｉａｎｇｄａ＠１６３．ｃｏｍ。
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｇｉｎｋｇｏ Ｂｉｌｏｂａｌ
ＳＨＡＯ Ｊｉｎｇ， ＬＩ Ｂａｉ－ｊｉａｎ
（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｊｉｕｊｉｕ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＣＯ ＬＴＤ ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｗｕｘｉ ２１４０６１，Ｃｈｉｎａ）
银杏叶；ＡＢ－８ 型、Ｄ１０１ 型、ＢＳ－３０ 型 大 孔 吸 附 树 脂 ；Ｄ３１１ 型 阴 离 子 交 换 树 脂 。 １．２ 仪 器 与 试 剂
ＤＧＧ－９１４０Ａ 型 电 热 恒 温 鼓 风 干 燥 箱 （上 海 森 信实验仪器有限公司）；ＪＡ５３００Ｎ 型 电 子 天 平 （上 海 雷韵试验仪器制造 有 限 公 司）；ＤＫ－Ｓ２６ 电 热 恒 温 水 浴锅（上海森信实验仪器有限公司）；ＲＥ－５２ＡＡ 型旋 转蒸发器（上海亚荣 生 化 仪 器 厂）；Ｂｉｌｏｎ９２－ＩＩＤ 型 超 声波细胞粉碎机（上 海 比 朗 仪 器 有 限 公 司）；ＦＤ－１Ｃ－ ５０型冷 冻 干 燥 机 （上 海 比 朗 仪 器 有 限 公 司 ）；ＵＶ－ １７５０紫外 可 见 分 光 光 度 计 （日 本 岛 津 公 司 ）；Ａｇｉ－ ｌｅｎｔ１２００高 效 液 相 色 谱 仪 器 （美 国 安 捷 伦 科 技 公 司）。
通过 单 因 素 试 验 所 得 出 的 结 果 为 依 据，设 计 了 ４因素 ３ 水 平 的 正 交 实 验，选 择 乙 醇 浓 度、料 液 比、 提取时间和提取温 度 为 实 验 因 素，以 黄 酮 提 取 率 为 实 验 指 标 ，进 行 正 交 组 合 实 验 。 ２．３ 分 离 工 艺 的 优 化 ２．３．１ 静 态 吸 附
精 确 称 取５．０００ｇ 银 杏 叶 粉 以３０％ 的 乙 醇 溶 液 作 为 浸 提 试 剂 ，按 料 液 比 １∶２０，分 别 于 ４０℃ 、５０℃ 、 ６０℃、７０℃、８０℃下浸提 ５ｈ，过 滤 后 定 容 到 ２５０ ｍＬ 容 量 瓶 中 ，测 定 黄 酮 提 取 率 。 ２．２．５ 正 交 实 验
准确移取供试 品 溶 液 １．０ ｍＬ，置 于 ５０ ｍＬ 容 量 瓶 ，按 ２．１．１ 中 方 法 测 定 吸 光 度 ，根 据 标 准 曲 线 计 算供试品中的黄酮含量。
黄酮 提 取 率 （％）＝ 提 取 液 中 总 黄 酮 的 含 量 （ｍｇ）／提 取 所 用 银 杏 叶 粉 末 的 质 量 （ｍｇ）×１００。 ２．２ 提 取 工 艺 的 优 化 ２．２．１ 提 取 溶 剂 的 确 定
精确称取５．０００ｇ银 杏 叶 粉，料 液 比 １∶２０，在 ８０℃下分 别 以 蒸 馏 水、ｐＨ 值 分 别 为 ８、９、１０ 的 碱 水、３０％乙 醇、５０％ 乙 醇、７５％ 乙 醇 和 对 应 ｐＨ 的 醇 溶液浸提５ｈ，过 滤 后 定 容 到 ５００ ｍＬ 容 量 瓶 中，测 定其黄酮提取率。 ２．２．２ 料 液 比 的 确 定
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化 学 世 界
２０１３ 年
银杏叶总黄酮的提取分离工艺研究
邵 京 ， 李 百 健
（江苏九久环境科技有限公司，江苏 无锡 ２１４０６１）
摘 要 ：采 用 紫 外 分 光 光 度 法 测 定 银 杏 叶 中 总 黄 酮 的 含 量 ；通 过 单 因 素 试 验 考 察 提 取 溶 剂 、料 液 比 、 浸提时间、浸提温度对银杏黄酮得率的影响，并用正交试验确 定 了 银 杏 黄 酮 提 取 的 最 佳 工 艺；通 过 不 同 型 号 吸 附 树 脂 对 银 杏 黄 酮 吸 附 效 果 的 比 较 ，确 定 了 吸 附 树 脂 的 型 号 ，并 考 察 了 不 同 洗 脱 液 的 洗 脱 效 果 ，筛 选 出 最 佳 洗 脱 液 。 试 验 得 到 最 佳 制 备 工 艺 为 ：以 ５０％ 乙 醇 为 提 取 剂 ，料 液 比 为 １∶２０，浸 提时间为６．０ｈ，浸提温度为 ９０℃；以 Ｄ１０１ 型大孔树脂对提取液进行吸附纯化，用 ３０％ 乙 醇 进 行 洗 脱 分 离 。 利 用 此 工 艺 制 备 的 银 杏 叶 提 取 物 中 黄 酮 含 量 达 ３５％ ，银 杏 酸 含 量 低 于 ５×１０－６。 关 键 词 ：银 杏 叶 ；黄 酮 ；银 杏 酸 中 图 分 类 号 ：Ｒ２８４．２ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：０３６７－６３５８（２０１３）０８－０４６０－０４
精确称取５．０００ｇ银杏叶粉，选择料液比 １∶５、 １∶１０、１∶２０、１∶３０、１∶４０，以 ３０％ 的 乙 醇 溶 液 作 为浸提试剂，于 ８０℃ 下浸提 ５ｈ，过滤后 定 容 到 ２５０ ｍＬ 容量瓶中，测定其黄酮提取率。 ２．２．３ 浸 提 时 间 的 确 定
精确称取５．０００ｇ 银 杏 叶 粉，以 ３０％ 的 乙 醇 溶 液 作 为 浸 提 试 剂 ，按 料 液 比 １∶２０，于 ８０℃ 下 分 别 浸 提３ｈ、４ｈ、５ｈ、６ｈ，过 滤 后 定 容 到 ２５０ ｍＬ 容 量 瓶 中 ，测 定 其 黄 酮 提 取 率 。 ２．２．４ 浸 提 温 度 的 确 定
ห้องสมุดไป่ตู้
第８期
化 学 世 界
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糖以 Ｏ－糖苷键 联 接 而 成，是 极 好 的 天 然 抗 氧 剂，对 自由基 具 有 强 抑 制 作 用 。 ［２，３，４］ 黄 酮 类 化 合 物 还 对 中老年心脑血管 疾 病、老 年 性 痴 呆 症、脑 功 能 不 全、 精 神 障 碍 、记 忆 功 能 衰 退 等 症 有 药 理 功 效 ，同 时 还 具 有抗衰 老、抗 肿 瘤、抗 菌、消 炎 等 疗 效 。 ［５，６］ 但 研 究 发现银杏叶提取物中含有一类被认为具有致过敏性 和致突 变 性 的 酚 酸 类 物 质，被 统 称 为 银 杏 酚 酸 。 ［７］ 银杏叶提取物中的银杏酚酸类物质的含量必须小于 ５×１０－６［８，９］，因 此 如 何 降 低 银 杏 叶 提 取 物 中 的 银 杏 酚酸含量就显得 格 外 重 要。 目 前，我 国 脱 除 银 杏 酚 酸的方法大都是采 用 溶 剂 萃 取，在 脱 除 银 杏 酚 酸 的 同时也降低了银杏 黄 酮 和 内 酯 含 量，而 且 脱 除 效 果 不佳，且工 艺 复 杂、成 本 高 。 ［１０］ 本 实 验 提 供 一 种 制 备 低 酸 值 银 杏 提 取 物 的 方 法 ，工 艺 简 单 、有 效 降 低 银 杏酚酸含量。 １ 材 料 １．１ 试 验 材 料
银 杏 （ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ Ｌ．）是 银 杏 科 银 杏 属 落 叶 乔木。从银杏的叶子中分离纯化得到的银杏叶提取 物因其作用范围广 且 不 良 反 应 少 而 在 药 品、食 品 中 得到广泛应 用 。 ［１］ 目 前，我 国 已 有 大 量 的 银 杏 叶 提
取物作为药品、食 品 原 料 出 口 和 上 市。 银 杏 叶 提 取 物中的主要有效成 分 是 黄 酮 类 化 合 物，银 杏 黄 酮 为 具有 Ｃ６－Ｃ３－Ｃ６ 双芳环多酚结构 物 质，主 要 是 由 山 奈 酚、槲皮素以及异鼠 李 素 等 黄 酮 苷 元 与 葡 萄 糖 等 单