醋酸纤维薄膜电泳-32页PPT文档资料
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《醋酸纤维薄膜电泳》课件
术。
原理
带电粒子在电场的作用下，以不同 的速度在电场中移动，从而实现分 离。
特点
操作简便、分离效果好、分辨率高 。
发展历程
01
02
03
04
1948年由S.L.Smith和 E.M.Purcell首次提出。
1950年代初期，醋酸纤维薄 膜电泳技术开始应用于实际研
究。
1960年代，该技术逐渐成熟 并广泛应用于生物、医学等领
05
醋酸纤维薄膜电泳与其 他电泳方法的比较
与聚丙烯酰胺凝胶电泳的比较
操作过程
成本
醋酸纤维薄膜电泳的操作过程相对简 单，而聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过 程较为复杂。
醋酸纤维薄膜电泳的成本较低，而聚 丙烯酰胺凝胶电泳的成本较高。
分辨率
聚丙烯酰胺凝胶电泳的分辨率相对较 高，能够更好地分离蛋白质，醋酸纤 维薄膜电泳的分辨率相对较低。
域。
1970年代以后，随着自动化 技术的发展，醋酸纤维薄膜电 泳技术逐渐被自动化仪器取代
。
应用领域
01
02
03
生物化学研究
用于蛋白质、酶、核酸等 生物大分子的分离和纯化 。
医学检验
用于血清蛋白、血红蛋白 、免疫球蛋白等生物样品 的分离和检测。
食品安全
用于食品中营养成分和有 害物质的分离和检测。
02
谢谢观看
一些电泳方法如等电聚焦电泳则适用于分离等电点不同的蛋白质。
02
分离效果
在某些特定的应用中，如分离碱性蛋白质，醋酸纤维薄膜电泳的分离效
果可能不如其他一些电泳方法。
03
稳定性
醋酸纤维薄膜电泳的稳定性相对较高，不易受到温度、pH等因素的影
响，而其他一些电泳方法如凝胶电泳可能对温度、pH等因素较为敏感
原理
带电粒子在电场的作用下，以不同 的速度在电场中移动，从而实现分 离。
特点
操作简便、分离效果好、分辨率高 。
发展历程
01
02
03
04
1948年由S.L.Smith和 E.M.Purcell首次提出。
1950年代初期，醋酸纤维薄 膜电泳技术开始应用于实际研
究。
1960年代，该技术逐渐成熟 并广泛应用于生物、医学等领
05
醋酸纤维薄膜电泳与其 他电泳方法的比较
与聚丙烯酰胺凝胶电泳的比较
操作过程
成本
醋酸纤维薄膜电泳的操作过程相对简 单，而聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过 程较为复杂。
醋酸纤维薄膜电泳的成本较低，而聚 丙烯酰胺凝胶电泳的成本较高。
分辨率
聚丙烯酰胺凝胶电泳的分辨率相对较 高，能够更好地分离蛋白质，醋酸纤 维薄膜电泳的分辨率相对较低。
域。
1970年代以后，随着自动化 技术的发展，醋酸纤维薄膜电 泳技术逐渐被自动化仪器取代
。
应用领域
01
02
03
生物化学研究
用于蛋白质、酶、核酸等 生物大分子的分离和纯化 。
医学检验
用于血清蛋白、血红蛋白 、免疫球蛋白等生物样品 的分离和检测。
食品安全
用于食品中营养成分和有 害物质的分离和检测。
02
谢谢观看
一些电泳方法如等电聚焦电泳则适用于分离等电点不同的蛋白质。
02
分离效果
在某些特定的应用中，如分离碱性蛋白质，醋酸纤维薄膜电泳的分离效
果可能不如其他一些电泳方法。
03
稳定性
醋酸纤维薄膜电泳的稳定性相对较高，不易受到温度、pH等因素的影
响，而其他一些电泳方法如凝胶电泳可能对温度、pH等因素较为敏感
《醋酸纤维膜电泳》幻灯片
故障分析〔6〕
27
在膜上用铅 笔勾划样品 线时，假设 划破膜，就 会形成图中 右下角膜上 的锯齿状条 带。
解决方法： 笔尖要光滑， 用力要均匀 适中。
建议配套使用君意的电泳仪
没有好的稳定的电泳仪，电泳槽很难跑出好的电泳谱带。君意电泳 仪以极其优异稳定的性能，确保每一个电泳槽能跑出精度高，条带直， 分离效果很清晰的电泳谱带。
特别注意电泳仪的选择的适配性
SP7醋酸纤维膜电泳槽当带有的载玻片数量较少时，启动时的电压或电流极低， 对电泳仪的要求较高。用国产的其他电泳仪或是某些国外的电泳仪常常造成 “嘟嘟”的报警。
君意电泳公司凭借雄厚的专业技术，专门研制出用于超低电压专用的电泳仪， 其型号分别是JY-600+ 和Jy-200C。该电泳仪经过北大、清华老师试用在国内， 国外各类超低电压启动的醋酸纤维膜电泳槽和干转槽中，性能非常稳定。
故障分析〔4〕
25
加样处假设 不吸干膜外 表的缓冲液， 样品会不定 向漂移，造 成实验结果 不理想。
解决方法： 用吸水纸吸 干膜外表的 缓冲液。
故障分析〔5〕
26
右侧的膜电 泳时间较短
右侧的膜左 数2、4泳 道由于不溶 颗粒物的影 响而“拖尾 〞。可通过 上样前对样 品进展瞬时 离心得以解 决。
所以恒定电流 应设为：5mA 或4mA (90.5=4.5mA)
醋酸纤维膜的电泳〔5〕
样品中参加 0.05%(g/ml) 溴酚蓝，便 于在电泳过 程中判断样 品泳动状况。
19
醋酸纤维膜的染色、脱色
电泳完毕，将纤维膜浸入 染色液中3分钟。
然后放入第一盒漂洗液中 5分钟
再移至第二、第三盒漂洗 液中。直至蛋白呈红色， 背景无色为止。
实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳.ppt
指南：
电泳仪由电泳槽和稳压电源两部分组成，，两者之间有专门的连 线连接。稳压电源用于调节电压和通电时间。当电泳槽和稳压电 源连接好后，将点好样的醋酸纤维薄膜搭在滤纸桥上，盖上盖子， 通电，调整好电压，进行电泳。注意电泳槽的电极方向，负极应 与醋酸纤维薄膜上的点样原点在同一侧。目前，该电泳仪已改进 为数显式的DYY-6C型。 浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。 在无光泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之 置于盛有缓冲液的平皿中，浸泡30 min方可用于点样。 点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓 冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。在另一 载玻片 上滴一滴血清，点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可 来回移动一次），再将点样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄 膜内，形成均匀的直线。
4. 经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度分为5条区带， 从正极端依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ 球蛋白，经染色可计算出各蛋白质的百分含量。
三、实验器材
1. DYY-6C型 双稳定时电泳仪和 DYY-Ⅲ型电泳槽，均为北京市六 一仪器厂生产 2. 醋酸纤维薄膜（2 cm×8cm） 3. 培养皿：一排桌子公用5套，包括 平衡、染色各用一套，漂洗用3套。 4. 点样器 5. 滤纸 6. 载玻片 7. 镊子 8. 玻棒
5.染色：
电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养 皿中浸泡5 min
6.漂洗：
将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次，直至背 景蓝色脱尽，条带清晰为止，可得到色带清晰的电泳图 谱 。
7.记录和分析实验结果
漂洗完毕后将薄膜取出, 放在滤纸上。将薄膜上的5条色带根据其颜 色深浅、形状、大小及相对位置进行描述、记录在预习本上，并判断 分析其结果。
电泳仪由电泳槽和稳压电源两部分组成，，两者之间有专门的连 线连接。稳压电源用于调节电压和通电时间。当电泳槽和稳压电 源连接好后，将点好样的醋酸纤维薄膜搭在滤纸桥上，盖上盖子， 通电，调整好电压，进行电泳。注意电泳槽的电极方向，负极应 与醋酸纤维薄膜上的点样原点在同一侧。目前，该电泳仪已改进 为数显式的DYY-6C型。 浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。 在无光泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之 置于盛有缓冲液的平皿中，浸泡30 min方可用于点样。 点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓 冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。在另一 载玻片 上滴一滴血清，点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可 来回移动一次），再将点样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄 膜内，形成均匀的直线。
4. 经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度分为5条区带， 从正极端依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ 球蛋白，经染色可计算出各蛋白质的百分含量。
三、实验器材
1. DYY-6C型 双稳定时电泳仪和 DYY-Ⅲ型电泳槽，均为北京市六 一仪器厂生产 2. 醋酸纤维薄膜（2 cm×8cm） 3. 培养皿：一排桌子公用5套，包括 平衡、染色各用一套，漂洗用3套。 4. 点样器 5. 滤纸 6. 载玻片 7. 镊子 8. 玻棒
5.染色：
电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养 皿中浸泡5 min
6.漂洗：
将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次，直至背 景蓝色脱尽，条带清晰为止，可得到色带清晰的电泳图 谱 。
7.记录和分析实验结果
漂洗完毕后将薄膜取出, 放在滤纸上。将薄膜上的5条色带根据其颜 色深浅、形状、大小及相对位置进行描述、记录在预习本上，并判断 分析其结果。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质ppt幻灯片
2.点样
1）用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸 干多余的缓冲液，然后平铺在桌子上（毛面朝 上）。
2）在一次性手套上滴一滴血清（3-5μl），用点样 器在血清上蘸一下，再将点样器轻印在CAM膜的 点样线上，待血清完全渗透到薄膜内后移开。
3.电泳
1）将加样后的薄膜，毛面向下，垂直架于电泳槽的游杆两 端，点样端置于负极，纱布将膜的两端与缓冲液连通 2）将电泳槽的正极和负极分别与电泳仪的正极、负极连接， 打开电源，低压，平衡5min。调节电压至90-150V (110V),稳压电泳45min。 3）待电泳区带展开约25-35mm后，关闭电源。
2.M蛋白血症 单克隆γ球蛋白（M蛋白）血症，主要见于多发性骨
髓瘤、巨球蛋白血症、重链病以及一些良性M蛋白增多症。在β和 γ球蛋白后区段的各部分出现一条致密浓集的M蛋白带。
3.蛋白缺乏症 主要包括a1抗胰蛋白酶缺乏症、γ球蛋白缺乏症等。
临床上较少见，电泳图表现为a1或γ球蛋白缺乏或显著降低。
谢谢观看！ 电各2内清2内在12内1将将电各1薄A这点1醋白这1在 β薄1将各β将将正A清蛋1A正电3电在AA在2内各也这电 在正在aa电电各将将M2内1将这也也脐在调电2内因场蛋醋白蛋a蛋5将5这电各醋白电M1β因场电1也 AM蛋正调cc） ） ） ） ）） ） ） ） ） ） ） ） ）） ） ）111---XXXXXX蛋蛋蛋球球球泳组后蛋后β后染已泳组膜些样酸。些β膜漂组染染常蛋白常泳泳ββ后组可些泳β常β泳泳组染已后已些可染可带β节泳后血中白酸。白白已些泳组酸。泳血中泳可白常节mm---::::::球球球在在醋在将 将醋醋醋将待在在将 在醋将和和和和和和和各各各各各各白白白处处蛋 蛋 蛋： 分 移 白 移 移 色 经 ： 分 的 蛋 时 纤 蛋 的 洗 分 色 色 血 白 缺 血 ： ： 移 分 将 蛋 技血 技 时 分 色 经 移 经 蛋 将 色 将 血 电 槽 移 清 ， 缺 纤 缺 缺 经 蛋 装 分 纤 装 清 ， 槽 将缺 血 电蛋蛋蛋一一酸一加 加酸酸酸加电一一加 一酸加γγγγγγγ组 组组组组组血血 血，，白白白带蛋开开开过编带蛋浸白，维白浸好蛋过过清乏清带带开蛋各白术 清术应蛋过编开编白各过各清压置开中各乏维乏乏编白置蛋维置中各置各 乏清压球球 球球球球球白白白次次纤次样 样纤纤纤样泳次次样 次纤样分 分分分分分症症 症用用电白。。。的号电白润经应薄经润的白的的蛋症蛋电电。白蛋经:蛋:选白的号。号经蛋蛋、至于。各蛋症薄症症号经由白薄由各蛋于蛋 症蛋至蛋蛋蛋蛋蛋蛋蛋性性维性后 后维维维后区性利 利性后 性维后蛋 蛋蛋蛋蛋蛋直直粒%薄、粒%是过将膜过是C%薄薄白白粒粒%白过白择%薄、、过白薄白胎9水种白膜、过电%膜电种白水白 白9白白 白白白白白单单 单手手薄手的 的薄薄薄的带手手的 0手薄的0用 用主主主主主白 白白白白白A======尺尺子膜标子电染薄电染电膜膜电电子子区染电合膜标标染区膜区儿平蛋质电标染泳电泳蛋质平区771117后后 后后后后后--M克克 克11AAAAAA套套膜套薄 薄膜膜膜薄展套套薄 套膜薄--要--要要-要-要带 带光 光光光光光115551和和在依记在泳色膜泳色泳依依泳泳在在带色泳适依记记色带依带血台白的泳记色槽泳槽白的台带55区区 区区区区区XXXXXX薄隆隆 隆33...3上上的上膜 膜的的的膜开上上膜 上的膜包包包包包电 电00密 密密密密密//////铅铅电次的电成处表可处成次次一一电电剪处一的次的的处剪次剪清，质电可的处和可和质电，剪 一%%%A段A段 A段段A段段A段AVV膜γγγ滴滴准滴， ，准准准，约滴滴， 滴准，括括括括括粒 粒度 度度度度度TTTTTT笔笔球球 球场放场败理面将理败放放般般场场下理般电放理下放下、两的泳将理稳将稳的泳两下 般CCCC((的的 的的的的放11××××××一 一 备 一 毛毛 备 备 备 毛 一 一 毛一 备 毛a2aaaa子子值值值值值值AAAA11轻轻蛋蛋蛋中在中的，多血，的在在可可中中，，可压在，，在，部侧迁血，压血压迁侧，可pp各各 各各各各各151111置MMMM00111111滴滴滴面 面面滴滴面 滴面II在 在抗-抗抗抗抗值值划划白白 白VV向漂向关可余清可关漂漂分分向向分可分，漂可分漂分分注移清可电清电移注分 分3部部 部部部部部000000膜膜膜膜在血血血向 向向血血向 血向5电 电))000000胰胰胰胰胰不不一一（（ （,,本洗本键展的蛋展键洗洗为为本本别展为一洗展别洗别原入率蛋展源蛋源率入别 为55分分 分分分分分m以以以以滤%%%%%%稳稳清清清下 下下清清下 清下77场 场蛋蛋蛋蛋蛋同同横横MMMm身缸身之示缓白示之缸缸身身用示般缸示用缸用发等也白示两白两也等用5555出出 出出出出出--毛毛毛毛纸压压66（（（， ，，（（， （，条条条条中 中白白白白白蛋蛋 蛋后，，线线所所一出冲分出一所所一出稳出一一性量不分出部分部不量一1111188现现 现现现现现面面面面上电电垂 垂垂垂 垂,,,,,333区区3区33区%%移 移酶酶酶酶酶白白 白，22222在在，，带带。清液成清。带带定清压清定定肝的同成清分成分同的定一一 一一一一一------朝朝朝朝，泳泳,,,,,555555直 直直直 直带带带带动 动33333缺缺缺缺缺）） ）关同同做做电电晰用五晰电电量晰在晰量量癌巴。五晰组五组。巴量μμμμμμ条条 条条条条条下下下下吸中中中中中44架 架架架 架，，，，速 速llllll乏乏乏乏乏血血 血闭））））））55一一点点荷荷的滤条的荷荷的的为的的的血比条的成条成比的致致 致致致致致的的的的干漂漂漂漂漂mm于 于于于 于即即即即度 度症症症症症症症 症电，，，，，，pp样样相相蛋纸主蛋相相蛋蛋清妥主蛋，主，妥N1NNN密密 密密密密密ii方方方方水洗洗洗洗洗HHnn1电 电电电 电AAAA不 不、、、、、aaaa，， ，源用用用用用用标标。。反反白吸要白反反白白在缓要白两要两缓0浓浓 浓浓浓浓浓缓缓式式式式分llll，，，，，OOOObbbb泳 泳泳泳 泳同 同γγγγγ主主 主。点点点点点点V记记的的电去区电的的电电冲区电者区者冲A，，，，HHHH集集集集集集集冲冲球球球球球浸浸浸浸，每 每 每 每 每。槽 槽槽槽 槽而而l要要 要稀稀稀稀样样样样样样b，，电电泳，带泳电电泳泳液带泳之带之液αααα的的 的的的的的液液蛋蛋蛋蛋蛋入入入入放次次次次次和的 的的的 的达 达1111见见 见溶溶溶溶器器器器器器并并极极图但，图极极图图，，图间，间，MMMMMMM中中，，，，白白白白白巴巴巴巴入55555α游 游游游 游到 到于于 于液液液液在在在在在在用用蛋蛋 蛋蛋蛋蛋蛋移移谱不从谱移移谱谱使从谱有从有使1mmmmm带带αααα缺缺缺缺缺比比比比扫杆 杆杆杆 杆球分 分多多 多2222洗洗洗洗血血血血血血iiiii铅铅白白 白白白白白动动。宜正。动动。。其正。专正专其nnnnn电电乏乏乏乏乏妥妥妥妥描，，，，两 两两两 两蛋离 离发发 发脱脱脱脱清清清清清清笔笔带带 带带带带带的的太极的的在极门极门在荷荷症症症症症缓缓缓缓仪ββββ端 端端端 端白的 的性性 性，，，，上上上上上上,,,,标标。。 。。。。。现现干端现现同端的端的同量量γγγγ等等等等等冲冲冲冲中， ，，， ，之技 技球球球球骨骨 骨进进进进蘸蘸蘸蘸蘸蘸号号象象。起象象一起连起连一会会。。。。。液液液液进点 点点点 点间术 术蛋蛋蛋蛋髓髓 髓行行行行一一一一一一。。。。依。。水依线依线水有有中中中中行样 样样样 样可。 。白白白白瘤瘤 瘤比比比比下下下下下下次平次连次连平不不，，，，扫端 端端端 端增。。。。、、 、色色色色，，，，，，为面为接为接面同同浸浸浸浸描置 置置置 置加巨巨 巨，，，，再再再再再再清。清。清。。，，泡泡泡泡，于 于于于 于一球球 球测测测测将将将将将将蛋蛋蛋此此并3333负 负负负 负条蛋蛋 蛋出出出出0000点点点点点点白白白外外用极 极极极 极甲mmmm白白 白各各各各样样样样样样///，，软白白白iiii， ，，， ，胎nnnn血血 血蛋蛋蛋蛋器器器器器器各各件。。。。蛋蛋蛋纱 纱纱纱 纱蛋症症 症白白白白轻轻轻轻轻轻蛋蛋分白白白布 布布布 布白、、 、质质质质印印印印印印白白析AAA将 将将将 将带重重 重区区区区在在在在在在lll质质bbb各膜 膜膜膜 膜。链链 链，，，带带带带CCCCCC的的种AAAAAA的 的的的 的病病 病的的的的分分MMMMMM蛋ααα两 两两两 两以以 以相相相相111膜膜膜膜膜膜子 子白---端端 端 端端及及 及球球球对对对对的的的的的的大大质与 与与与 与一一 一蛋蛋蛋含含含含点点点点点点小小的缓 缓缓缓 缓些些 些白白白量量量量样样样样样样和和相冲 冲冲冲 冲良良 良，，，。。。。线线线线线线形形对液 液液液 液性性 性ααα上上上上上上状状含222连 连连连 连MMM---，，，，，，也也量球球球通 通通通 通蛋蛋 蛋待待待待待待不不。蛋蛋蛋白白 白血血血血血血一一白白白增增 增清清清清清清致致，，，多多 多完完完完完完，，βββ症症 症---全全全全全全所所球球球。。 。渗渗渗渗渗渗以以蛋蛋蛋透透透透透透在在白白白到到到到到到同同,,, γγγ薄薄薄薄薄薄一一---球球球膜膜膜膜膜膜电电蛋蛋蛋
三血清醋酸纤维素薄膜电泳-32页PPT文档资料
血浆蛋白质的等电点、 平均相对分子量、及正常含量
清蛋白
A
α1
pI
4.88
5.06
相对分子量 6.9
20
（×104）
含量（%） 57~72 2~5
球蛋白
α2 5.06 30
β 5.12 9~15
γ 6.85~7.3 15.6~30
4~9
6.2~12 ~20
实验材料
健康人血浆或动物血浆
试剂
血浆蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱
电泳方向
－
＋
γ
β
α2 α1
A
纤维蛋白原
操作步骤
7、透明 薄膜完全干燥后，浸入透明液中20min后，
取出平贴在玻璃板上（不要留有气泡），完全 干燥后即成透明的薄膜图谱，要作扫描或照相 用。可长期保存。
操作步骤
8、定量（略） ① 洗脱比色法 ② 光密度计扫描法
同工酶谱的改变有 助于对疾病的诊断。
酶 活 性
心肌梗死酶谱
正常酶谱 肝病酶谱
12 3 4 5
心肌梗死和肝病病人血清LDH同工酶谱的变化
血红蛋白的结构
β亚基 α亚基 血红蛋白
地中海贫血：由于α和β珠蛋白 肽链合成异常而导致其比例不均衡引 起的溶血性贫血。
正常人Hb区带：从负极向正极泳速最快的HbA， 占大部分，约95%；HbA后有一较浅 区带为HbA2，
1、pH8.6巴比妥缓冲液
2、氨基黑10B染色液
3、漂洗液 4、洗脱液
定量时用
5、透明液
（试剂配制参见实验讲义）
仪器和器材
1、常压电泳仪、电泳槽
2、醋酸纤维素薄膜（2×8cm）
3、点样器（载玻片或盖玻片）、玻璃板
醋酸纤维薄膜.正式版PPT文档
六、结论与分析
巴比妥2.76g,巴比妥钠15.45g，加水至1000ml。 每个大组500ml
❖ 染色液 每个大组200ml
氨基黑10B0.25g,甲醇50ml,冰醋酸10ml,水 40ml（可重复使用）
❖ 漂洗液 每个组100ml
含甲醇或乙醇45ml、冰醋酸5ml、水50ml
❖ 透明液 每个组200ml
含无水乙醇：冰醋酸＝7：3，本实验不做定 量不用配。
v
d/t dl
u = —— = — = —（ cm2.V-1.S-1)
E
V/l Vt
影响泳动度因素
带电质点的性质
质点所带净电荷的量、质点的大小及质点 的形状。一般说来质点所带净电荷越多，质点 直径越小，越接近球形，则在电场中的泳动速 度越快；反之则越慢。
❖ 溶液的粘度 ❖ 电场强度 ❖ 溶液的pH值 ❖ 溶液的离子强度 ❖ 固体支持物的电渗现象
❖ 5、染色：电泳完毕后，取膜条放在染色液 中浸泡10分钟左右。
❖ 6、漂洗：漂洗数次至无蛋白区底色脱净为 止，可得色带清晰的图谱。保存。
❖ 7、透明：将干燥的电泳图谱放入透明液中 浸泡2-3分钟后取出贴于洁净的玻璃板上， 干后放在两层滤纸中保存。
❖ 8、计算：计算出每条蛋白的泳动度。
注意事项
具有泡沫状的结构，厚度均为120um，有很强的渗透性，对分子移动阻力很小。
五、实验结果
质点所带净电荷ห้องสมุดไป่ตู้量、质点的大小及质点的形状。
76g,巴比妥钠15. 任何一种物质的质点，由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其他带电质点的吸附，会在电场中向一定的电极移动。
76g,巴比妥钠15. 移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。
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5
四、操作步骤
5、染色与漂洗脱色 染色:电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸 泡10min 漂洗脱色:将膜条从染色液中取出后，移置到漂 洗液中，反复漂洗数次，直至背景漂净为止，可 得到色带清晰的电泳图谱
五、记录和分析实验结果
把电泳图谱画在实验报告上 并指出每条区带的种类
6
六、注意事项
实验五
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
1
一、目的
掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和 方法
二、原理
血清中含有多种蛋白质，其等电点均低于pH7.0 在pH 8.6的缓冲液中，它们电离出负离子，带
正电荷，在电场中向正极移动 各种蛋白质的等电点不同，在同一pH值下所带
电荷量不同 分子的大小不同，因此在电场中的泳动速度不
18
醋酸纤维薄膜电泳装置示意图
1、滤纸桥； 2、电泳槽； 3、醋酸纤维素薄膜；
4、电泳槽膜支架； 5、电极室中央隔板
醋酸纤维素薄膜规格及点样位置示意图
（虚线处为点样位置）
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱示意图
1、清蛋白，2、α1－球蛋白 3、α2－球蛋白 4、β－球蛋白 5、γ—球蛋白 6、为点样原点
1、膜的润湿和选择
迎着光辨别无和有光泽面，用镊子将薄膜无光泽 面向下，置巴比妥缓冲液中，自然浸泡30min
选择薄膜颜色一致而无白色斑点的膜 2、制作电桥
将电泳槽置于平台上，将缓冲液倒入电泳槽内， 使两槽缓冲液平衡至同一水平面
于两电极槽各放入2层纱布，一端浸人缓冲液中， 另一端贴附在电泳槽支架
等电点（pI）
4.88 5.06 5.06 5.12 6.85-7.30
相对分子质量/Mr
69 000 200 000 300 000 90 000-150 000 156 000-300 000
30
谢谢你的阅读
知识就是财富 丰富你的人生
1、薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一
2、点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸
去，吸水量以不干不湿为宜
3、点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免
损坏膜片或印出凹陷影响电泳区带分离效果
4、点样应点在薄膜的无光面上，点样量要适量
5、电泳时将薄膜的点样端置于负极端，且点样面
向下
6、控制染色时间
7、过程为防止指纹污染，应戴手套
7
七、思考题
1、电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作？
2、电泳时，点样端置于电场的正极还是负极？ 为什么？
尿中17-羟皮质类固醇的测定
8
9
相关知识
1、电泳 带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极 移动，称为电泳(electrophoresis，EP ) 电泳是对混合物中带电离子的分离和鉴定技术
当纱布全部润湿后，用玻璃棒轻轻挤压在膜支架
上的纱布以驱赶气泡
4
四、操作步骤
3、点样 点样模板的制作 取出浸透的薄膜，夹在两层滤纸内吸干多余的 缓冲液，无光面朝上放在点样模板上 在点样器上均匀地沾上血清，将点样器轻轻地 印在点样区内
4、电泳 将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸 桥上，另一端平贴在阳极端支架上 连接好电泳仪，接通电源，调节电压为100V， 电流为0.6 mA×2×n，电泳60min
什么是醋酸纤维素薄膜电泳
以醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳
14
醋酸纤维素薄膜电泳的特点
吸附作用小，分离效果好 快速省时 灵敏度高，样品用量少 应用面广 易保存，易定量
15
16
产品名称：双稳定时电泳仪 产品型号：DYY-6C型
5-600V 4-400mA 240W
17
卧式电泳槽
同，这样可将各种血清蛋白质分离开 2
三、实验材料及设备
1、样品：新鲜牛血清（无溶血） 2、仪器：DYY-Ⅲ2型常压电泳仪、卧式电泳槽 3、器材：醋酸纤维薄膜(8×2cm) ；点样器；培养皿；
滤纸；直尺、铅笔；镊子；剪刀；和铅笔 4、试剂：pH8.6巴比妥-巴比妥钠缓冲液
漂洗液 染色液
3
四、操作步骤
12
电泳的分类
按有无支持物分
自电泳：在溶液中进行的一种电泳技术 区带电泳：有支持物的电泳
纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳
圆盘电由泳、平板(垂直、水平)电泳、柱 电泳
13
什么是醋酸纤维素薄膜
醋酸纤维是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基 经乙酰化而成
厚度约以0.1-0.15mm
11
电泳的分类
按原理分
区带电泳：在电泳过程中，不同离子成分在 均一的缓冲液体系分离成独立的区带
移界电泳：是在U型管中进行的电泳 等速电泳：当电泳达到平衡后，各区带相随
分出清晰的界面，并以等速移动 等点聚焦：由于不同等电点的两性电解质载
体在电场中，自动形成pH梯度，使被分离物 移动到各自等电点的pH处聚集成很窄的区带
2、基本原理 电荷的来源：由于本身的解离作用或表面上吸附 其它带电质点，在电场中会向一定电极移动 迁移率 ：带电颗粒在单位电场强度下的电泳速度 其泳动速度与所分离的物质所带的净电荷的数 量、颗粒的大小和形状有关
10
3、影响电泳迁移率的因素
电场强度 溶液pH 溶液的离子强度 温
点样模板的制作
1.5cm
26
27
优点
微量 快速 简便 分离清晰 对样品无吸附现象
应用
广泛用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血红蛋 白、酶的分离和免疫电泳等方面
28
血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量
蛋白质名称 白蛋白 α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白
四、操作步骤
5、染色与漂洗脱色 染色:电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸 泡10min 漂洗脱色:将膜条从染色液中取出后，移置到漂 洗液中，反复漂洗数次，直至背景漂净为止，可 得到色带清晰的电泳图谱
五、记录和分析实验结果
把电泳图谱画在实验报告上 并指出每条区带的种类
6
六、注意事项
实验五
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
1
一、目的
掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和 方法
二、原理
血清中含有多种蛋白质，其等电点均低于pH7.0 在pH 8.6的缓冲液中，它们电离出负离子，带
正电荷，在电场中向正极移动 各种蛋白质的等电点不同，在同一pH值下所带
电荷量不同 分子的大小不同，因此在电场中的泳动速度不
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醋酸纤维薄膜电泳装置示意图
1、滤纸桥； 2、电泳槽； 3、醋酸纤维素薄膜；
4、电泳槽膜支架； 5、电极室中央隔板
醋酸纤维素薄膜规格及点样位置示意图
（虚线处为点样位置）
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱示意图
1、清蛋白，2、α1－球蛋白 3、α2－球蛋白 4、β－球蛋白 5、γ—球蛋白 6、为点样原点
1、膜的润湿和选择
迎着光辨别无和有光泽面，用镊子将薄膜无光泽 面向下，置巴比妥缓冲液中，自然浸泡30min
选择薄膜颜色一致而无白色斑点的膜 2、制作电桥
将电泳槽置于平台上，将缓冲液倒入电泳槽内， 使两槽缓冲液平衡至同一水平面
于两电极槽各放入2层纱布，一端浸人缓冲液中， 另一端贴附在电泳槽支架
等电点（pI）
4.88 5.06 5.06 5.12 6.85-7.30
相对分子质量/Mr
69 000 200 000 300 000 90 000-150 000 156 000-300 000
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谢谢你的阅读
知识就是财富 丰富你的人生
1、薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一
2、点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸
去，吸水量以不干不湿为宜
3、点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免
损坏膜片或印出凹陷影响电泳区带分离效果
4、点样应点在薄膜的无光面上，点样量要适量
5、电泳时将薄膜的点样端置于负极端，且点样面
向下
6、控制染色时间
7、过程为防止指纹污染，应戴手套
7
七、思考题
1、电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作？
2、电泳时，点样端置于电场的正极还是负极？ 为什么？
尿中17-羟皮质类固醇的测定
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相关知识
1、电泳 带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极 移动，称为电泳(electrophoresis，EP ) 电泳是对混合物中带电离子的分离和鉴定技术
当纱布全部润湿后，用玻璃棒轻轻挤压在膜支架
上的纱布以驱赶气泡
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四、操作步骤
3、点样 点样模板的制作 取出浸透的薄膜，夹在两层滤纸内吸干多余的 缓冲液，无光面朝上放在点样模板上 在点样器上均匀地沾上血清，将点样器轻轻地 印在点样区内
4、电泳 将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸 桥上，另一端平贴在阳极端支架上 连接好电泳仪，接通电源，调节电压为100V， 电流为0.6 mA×2×n，电泳60min
什么是醋酸纤维素薄膜电泳
以醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳
14
醋酸纤维素薄膜电泳的特点
吸附作用小，分离效果好 快速省时 灵敏度高，样品用量少 应用面广 易保存，易定量
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产品名称：双稳定时电泳仪 产品型号：DYY-6C型
5-600V 4-400mA 240W
17
卧式电泳槽
同，这样可将各种血清蛋白质分离开 2
三、实验材料及设备
1、样品：新鲜牛血清（无溶血） 2、仪器：DYY-Ⅲ2型常压电泳仪、卧式电泳槽 3、器材：醋酸纤维薄膜(8×2cm) ；点样器；培养皿；
滤纸；直尺、铅笔；镊子；剪刀；和铅笔 4、试剂：pH8.6巴比妥-巴比妥钠缓冲液
漂洗液 染色液
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四、操作步骤
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电泳的分类
按有无支持物分
自电泳：在溶液中进行的一种电泳技术 区带电泳：有支持物的电泳
纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳
圆盘电由泳、平板(垂直、水平)电泳、柱 电泳
13
什么是醋酸纤维素薄膜
醋酸纤维是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基 经乙酰化而成
厚度约以0.1-0.15mm
11
电泳的分类
按原理分
区带电泳：在电泳过程中，不同离子成分在 均一的缓冲液体系分离成独立的区带
移界电泳：是在U型管中进行的电泳 等速电泳：当电泳达到平衡后，各区带相随
分出清晰的界面，并以等速移动 等点聚焦：由于不同等电点的两性电解质载
体在电场中，自动形成pH梯度，使被分离物 移动到各自等电点的pH处聚集成很窄的区带
2、基本原理 电荷的来源：由于本身的解离作用或表面上吸附 其它带电质点，在电场中会向一定电极移动 迁移率 ：带电颗粒在单位电场强度下的电泳速度 其泳动速度与所分离的物质所带的净电荷的数 量、颗粒的大小和形状有关
10
3、影响电泳迁移率的因素
电场强度 溶液pH 溶液的离子强度 温
点样模板的制作
1.5cm
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优点
微量 快速 简便 分离清晰 对样品无吸附现象
应用
广泛用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血红蛋 白、酶的分离和免疫电泳等方面
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血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量
蛋白质名称 白蛋白 α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白