传染性支气管炎病毒广西分离株S1基因克隆与序列分析
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（ Ｎ） ［ ， 其 中 Ｓ蛋 白裂 解 为 Ｓ １和 Ｓ ２两 个 蛋 白 ］ 。
月份 ， Ｇ Ｘ６为 １ １ 月份 ， ＧＸ７ 、 ＧＸ ８为 １ ２月份 。
１ ． １ ． ２ Ｓ Ｐ Ｆ鸡胚 购 自广东 新 兴 大 华农 禽 蛋 有 限
公司 Ｓ Ｐ Ｆ实 验 动 物 中心 。
已知 的血 清型 有 ３ ０余种 ｌ １ ］ 。Ｉ Ｂ Ｖ 主要 含有 ３种 结
鉴定并 保存 。８个 分 离株 分 离 时 间 如下 ： Ｇ Ｘ１ 、 ＧＸ ２
为 ４月 份 ， ＧＸ３为 ５月 份 ， ＧＸ ４为 ６月 份 ， ＧＸ５为 １ ０
构蛋 白，即纤 突 蛋 白（ Ｓ ） 、 膜 蛋 白（ Ｍ） 和核 衣壳蛋 白
Ｏｎ ｅ Ｓ ｔ ｅ ｐ ＲＴ — Ｐ Ｃ Ｒ Ｋｉ ｔ Ｖｅ ｒ ． ２ ） 、 ｒ Ｔ ａ ｑ ＤＮＡ 聚 合 酶
动物 医学 进展 ， ２ ０ １ ４ ， ３ ５ （ ３ ） ： ６ ８ — ７ ２
Ｐｒ ｏ ｇｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
传 染 性 支气 管 炎 病 毒 广 西分 离株 Ｓ １基 因克 隆 与序 列 分 析
陈 丽 ，薛 瑜 ， 李 广 伟 ，陈 峰 ， 孙 宝丽 ， 谢 青梅
扩增 ｓ １ 基 因全 长序 列 的 引物 。采 用 Ｒ Ｔ —Ｐ Ｃ Ｒ 方 法 对 ８株 Ｉ Ｂ Ｖ 分 离株 （ ＧＸ卜ＧＸ ８ ） 的 Ｓ １基 因进 行 克 隆测 序 。序 列 分析 结果表 明， ８株 Ｉ Ｂ Ｖ 分 离株 Ｓ １ 基 因全 长均 为 １ ６ ２ ０ ｂ ｐ ， 且集 中分 布在 ２个 分 支， ＧＸ１ 一 ＧＸ ４属 于
ＧＸ １ 一 ＧＸ ８分 离 株 ， 均 由广 东 温 氏 食
品集 团股份 有 限公 司技 术 中心 禽 病 室 于 ２ ０ １ ２年 分 离 自广 西 １ ０ 日龄 ～ ４ ０ 日龄 的 肉鸡 中 ， 经 ＲＴ — Ｐ Ｃ Ｒ
因突 变和 高频 重组 ， 进 而产生 了众多 的血 清型 ， 目前
鸡传 染 性支 气 管炎 （Ｉ ｎ ｛ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ ｂ ｒ ｏ ｎ ｃ ｈ ｉ ｔ ｉ ｓ ，Ｉ Ｂ ）
是 由冠状 病 毒科 冠状 病毒 属 的传 染性 支 气 管炎 病 毒
（Ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ ｂ ｒ ｏ ｎ ｃ ｈ ｉ ｔ ｉ ｓ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ，Ｉ Ｂ Ｖ ） 引 起 的 一 种 急
１ 材 料 与方 法
１ ． １ 材 料
性、 高度 接 触性 传 染 病 ， 主要 侵 害 呼 吸 系统 、 消化 系 统 和泌 尿 生殖 系统 。Ｉ Ｂ Ｖ 由于其 特殊 的复 制机 制 和 Ｒ ＮＡ 聚合 酶校 对机 制 ， 使得 病毒 基 因组 极 易发 生 基
１ ． １ ． １ 毒株
位 于 同一分 支的毒 株 间同源 性较 高 ， 所 有 分 离毒 株 与 我 国使 用 的 常 规 Ｍａ ｓ ｓ型 疫 苗 毒 株 的 同 源性 均 偏 低 。
这 暗 示 目前 广 西 Ｉ Ｂ Ｖ 分 离毒 株 与我 国广 泛使 用 的 Ｉ Ｂ疫 苗毒 株 的遗传 进化 距 离较远 ， 常规 Ｍａ ｓ ｓ 型疫 苗 可 能
第 Ｖ分 支 ， 其裂 解位 点均 为 Ｒ Ｒ Ｆ Ｒ Ｒ； ＧＸ ５ 一 ＧＸ ８属 于 第 工分 支 ， 其 裂解 位 点 均 为 ＨＲＲ Ｒ Ｒ， 为Ｉ Ｂ Ｖ 中 国毒 株
所特 有 。 同时 ， 这 些 分 离株 进化 趋 势与 其分 离时间之 间显 示 出一定 的相 关性 ； 潜在 糖基 化位 点 （ Ｐ ＧＳ ） 分 析 结 果显示， Ｇ Ｘ１ 一 Ｇ Ｘ ４的 Ｐ Ｇ Ｓ分 布一 致且 与 ＧＸ ５ 一 ＧＸ ８的分 布显 示 出一定 的差 异 ； 核 苷酸 同源性分 析 结果表 明 ，
（ １ ． 华南农业大学动物科学学 院， 广东广州 ５ １ ０ ６ ４ ２ ； ２ ． 广 东温 氏食 品 集 团 股 份 有 限 公 司 ， 广 东云浮 ５ ２ ７ ４ ３ ９ ）
摘 要 ： 近年 来 ， 鸡 传 染性 支 气管 炎（ Ｉ Ｂ ）在我 国广 西地 区相 继 暴 发 ， 流行 十分 广 泛 ， 给 养 禽 业 带 来 巨 大
大量 研究 表 明［ ５ ］ ， ｓ １蛋 白可诱 导 血 凝 抑 制 抗 体 和
中和 抗体 ， 血 清特 异性 抗原 决定 簇也 主要 针 对 Ｓ １蛋
白 ， 所以 Ｓ １蛋 白 与 Ｉ Ｂ Ｖ 的 免 疫 原 性 关 系 最 密
１ ． １ ． ３ 主要 试 剂 Ａｘ ｙ Ｐ ｒ ｅ ｐ体 液 病 毒 ＤＮＡ／ ＲＮＡ
小 量 试 剂 盒 和 Ａｘ ｙ Ｐ ｒ ｅ ｐ Ｄ ＮＡ 凝 胶 回 收 试 剂 盒 购 自 Ａｘ ｙ ｇ ｅ ｎ公 司 ； 一步 法反Байду номын сангаас 录试 剂盒 （ Ｐ ｒ ｉ ｍｅ Ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ ＠
切ｌ ８ ］ 。 因此 ， 研究 Ｓ １序列 ， 最 能从 分 子水 平 上揭 示 Ｉ Ｂ Ｖ 的变 异规 律 ， 并对 Ｉ Ｂ疫 苗 预防具 有重 要意 义 。
损 失 。为及 时 了解传 染性 支 气管 炎病 毒 （ Ｉ Ｂ Ｖ） 的 变异 情 况 ， 从 而进 行 更 有 效 的 防控 ， 本研究对 ２ ０ １ ２年 分 离 自广西 的 ８株 Ｉ Ｂ Ｖ的 ｓ １ 基 因进 行 了序 列测 定与 分析 。参 考 Ｎ Ｃ Ｂ Ｉ 上的Ｉ Ｂ Ｖ ｓ １基 因序 列 ， 设计 合 成 了一对
起 不到 很好 的 免疫保 护作 用。
关 键词 ： 传 染性 支 气管 炎病毒 ； Ｓ １基 因 ； 序 列分析
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ９ ． ６ 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ７ ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ３ — ０ ０ ６ ８ — ０ ５
月份 ， Ｇ Ｘ６为 １ １ 月份 ， ＧＸ７ 、 ＧＸ ８为 １ ２月份 。
１ ． １ ． ２ Ｓ Ｐ Ｆ鸡胚 购 自广东 新 兴 大 华农 禽 蛋 有 限
公司 Ｓ Ｐ Ｆ实 验 动 物 中心 。
已知 的血 清型 有 ３ ０余种 ｌ １ ］ 。Ｉ Ｂ Ｖ 主要 含有 ３种 结
鉴定并 保存 。８个 分 离株 分 离 时 间 如下 ： Ｇ Ｘ１ 、 ＧＸ ２
为 ４月 份 ， ＧＸ３为 ５月 份 ， ＧＸ ４为 ６月 份 ， ＧＸ５为 １ ０
构蛋 白，即纤 突 蛋 白（ Ｓ ） 、 膜 蛋 白（ Ｍ） 和核 衣壳蛋 白
Ｏｎ ｅ Ｓ ｔ ｅ ｐ ＲＴ — Ｐ Ｃ Ｒ Ｋｉ ｔ Ｖｅ ｒ ． ２ ） 、 ｒ Ｔ ａ ｑ ＤＮＡ 聚 合 酶
动物 医学 进展 ， ２ ０ １ ４ ， ３ ５ （ ３ ） ： ６ ８ — ７ ２
Ｐｒ ｏ ｇｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
传 染 性 支气 管 炎 病 毒 广 西分 离株 Ｓ １基 因克 隆 与序 列 分 析
陈 丽 ，薛 瑜 ， 李 广 伟 ，陈 峰 ， 孙 宝丽 ， 谢 青梅
扩增 ｓ １ 基 因全 长序 列 的 引物 。采 用 Ｒ Ｔ —Ｐ Ｃ Ｒ 方 法 对 ８株 Ｉ Ｂ Ｖ 分 离株 （ ＧＸ卜ＧＸ ８ ） 的 Ｓ １基 因进 行 克 隆测 序 。序 列 分析 结果表 明， ８株 Ｉ Ｂ Ｖ 分 离株 Ｓ １ 基 因全 长均 为 １ ６ ２ ０ ｂ ｐ ， 且集 中分 布在 ２个 分 支， ＧＸ１ 一 ＧＸ ４属 于
ＧＸ １ 一 ＧＸ ８分 离 株 ， 均 由广 东 温 氏 食
品集 团股份 有 限公 司技 术 中心 禽 病 室 于 ２ ０ １ ２年 分 离 自广 西 １ ０ 日龄 ～ ４ ０ 日龄 的 肉鸡 中 ， 经 ＲＴ — Ｐ Ｃ Ｒ
因突 变和 高频 重组 ， 进 而产生 了众多 的血 清型 ， 目前
鸡传 染 性支 气 管炎 （Ｉ ｎ ｛ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ ｂ ｒ ｏ ｎ ｃ ｈ ｉ ｔ ｉ ｓ ，Ｉ Ｂ ）
是 由冠状 病 毒科 冠状 病毒 属 的传 染性 支 气 管炎 病 毒
（Ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ ｂ ｒ ｏ ｎ ｃ ｈ ｉ ｔ ｉ ｓ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ，Ｉ Ｂ Ｖ ） 引 起 的 一 种 急
１ 材 料 与方 法
１ ． １ 材 料
性、 高度 接 触性 传 染 病 ， 主要 侵 害 呼 吸 系统 、 消化 系 统 和泌 尿 生殖 系统 。Ｉ Ｂ Ｖ 由于其 特殊 的复 制机 制 和 Ｒ ＮＡ 聚合 酶校 对机 制 ， 使得 病毒 基 因组 极 易发 生 基
１ ． １ ． １ 毒株
位 于 同一分 支的毒 株 间同源 性较 高 ， 所 有 分 离毒 株 与 我 国使 用 的 常 规 Ｍａ ｓ ｓ型 疫 苗 毒 株 的 同 源性 均 偏 低 。
这 暗 示 目前 广 西 Ｉ Ｂ Ｖ 分 离毒 株 与我 国广 泛使 用 的 Ｉ Ｂ疫 苗毒 株 的遗传 进化 距 离较远 ， 常规 Ｍａ ｓ ｓ 型疫 苗 可 能
第 Ｖ分 支 ， 其裂 解位 点均 为 Ｒ Ｒ Ｆ Ｒ Ｒ； ＧＸ ５ 一 ＧＸ ８属 于 第 工分 支 ， 其 裂解 位 点 均 为 ＨＲＲ Ｒ Ｒ， 为Ｉ Ｂ Ｖ 中 国毒 株
所特 有 。 同时 ， 这 些 分 离株 进化 趋 势与 其分 离时间之 间显 示 出一定 的相 关性 ； 潜在 糖基 化位 点 （ Ｐ ＧＳ ） 分 析 结 果显示， Ｇ Ｘ１ 一 Ｇ Ｘ ４的 Ｐ Ｇ Ｓ分 布一 致且 与 ＧＸ ５ 一 ＧＸ ８的分 布显 示 出一定 的差 异 ； 核 苷酸 同源性分 析 结果表 明 ，
（ １ ． 华南农业大学动物科学学 院， 广东广州 ５ １ ０ ６ ４ ２ ； ２ ． 广 东温 氏食 品 集 团 股 份 有 限 公 司 ， 广 东云浮 ５ ２ ７ ４ ３ ９ ）
摘 要 ： 近年 来 ， 鸡 传 染性 支 气管 炎（ Ｉ Ｂ ）在我 国广 西地 区相 继 暴 发 ， 流行 十分 广 泛 ， 给 养 禽 业 带 来 巨 大
大量 研究 表 明［ ５ ］ ， ｓ １蛋 白可诱 导 血 凝 抑 制 抗 体 和
中和 抗体 ， 血 清特 异性 抗原 决定 簇也 主要 针 对 Ｓ １蛋
白 ， 所以 Ｓ １蛋 白 与 Ｉ Ｂ Ｖ 的 免 疫 原 性 关 系 最 密
１ ． １ ． ３ 主要 试 剂 Ａｘ ｙ Ｐ ｒ ｅ ｐ体 液 病 毒 ＤＮＡ／ ＲＮＡ
小 量 试 剂 盒 和 Ａｘ ｙ Ｐ ｒ ｅ ｐ Ｄ ＮＡ 凝 胶 回 收 试 剂 盒 购 自 Ａｘ ｙ ｇ ｅ ｎ公 司 ； 一步 法反Байду номын сангаас 录试 剂盒 （ Ｐ ｒ ｉ ｍｅ Ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ ＠
切ｌ ８ ］ 。 因此 ， 研究 Ｓ １序列 ， 最 能从 分 子水 平 上揭 示 Ｉ Ｂ Ｖ 的变 异规 律 ， 并对 Ｉ Ｂ疫 苗 预防具 有重 要意 义 。
损 失 。为及 时 了解传 染性 支 气管 炎病 毒 （ Ｉ Ｂ Ｖ） 的 变异 情 况 ， 从 而进 行 更 有 效 的 防控 ， 本研究对 ２ ０ １ ２年 分 离 自广西 的 ８株 Ｉ Ｂ Ｖ的 ｓ １ 基 因进 行 了序 列测 定与 分析 。参 考 Ｎ Ｃ Ｂ Ｉ 上的Ｉ Ｂ Ｖ ｓ １基 因序 列 ， 设计 合 成 了一对
起 不到 很好 的 免疫保 护作 用。
关 键词 ： 传 染性 支 气管 炎病毒 ； Ｓ １基 因 ； 序 列分析
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ９ ． ６ 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ７ ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ３ — ０ ０ ６ ８ — ０ ５