回流辅助的双水相体系提取防己中粉防己碱
一种提取粉防己碱的新方法
天然产物研究与开发N at Prod R es Dev 2008,20:701-703,697文章编号:1001-6880(2008)04-0701-04收稿日期:2007-08-27 接受日期:2007-11-01*通讯作者Te:l 86-28-85229073;E-m ai:l w angmk@ci b .ac .cn一种提取粉防己碱的新方法崔文峰1,鲍 玲1,周 英1,郁建平1,王明奎2*1贵州大学生命科学学院,贵阳550025;2中国科学院成都生物研究所,成都610041摘 要:本文报道了一种新的提取粉防己生物碱的方法。
粉防己根粉用0.6%稀硫酸渗滤,提取液通过D 72树脂柱,然后用氨水乙醇溶液洗脱,丙酮、甲苯结晶纯化得到粉防己碱纯品。
该方法在提取过程中避免了使用毒性大的溶剂,提高了防己生物碱的提取率,简化了操作,是一种环保型提取工艺,适用于其他中药叔胺和季胺型生物碱的提取。
关键词:防己;粉防己碱;防己诺淋碱;总生物碱;D 72树脂中图分类号:R 284 2文献标识码:AA N ew M ethod for Extracti ng Tetrandri nefro m Stephania tetrandra S .M ooreCU IW en -feng 1,B AO L i n g 1,Z HOU Y ing 1,YU Jian-p i n g 1,WANG M i n g -ku i2*1T he Co llege of B iology,Guizhou Univers it y,Gu i yan g 550025,Ch i na ;2Chengdu Institute of B iology,Chinese A cade my of Sciences ,Chengdu 610041,Ch i naAbstract :A new m ethod was used for the ex tracti ng o f te trandr i ne .T he roo t po w der o f S te p han i a tetrandras was d iffused w it h 0.6%H 2SO 4so l uti on and the d iffusi on passed through D72res i n co l u m n .T he resi n co l u m n w as eluted w ith 0.5M a mm onia -ethanol so luti on and tetrandr i ne w as purified by recrystallization i n t o l uene and acetone .T his extracti ng tech -no l ogy avo i ded t he use of large a m ount of tox i c so l v ents ,i m proved the recovery o f a l ka l o i ds ,and s i m p lifi ed t he operati on ,w hich could be regarded as a g reen extracti ng technology and appli ed t o t he ex tracti on o f tert -a m i ne and a mmon i u m al ka -lo i ds from other Chi nese herbs .K ey word s :S te phania tetrandra S .M oore ;tetrandrine ;fang ch i no li ne ;a l ka l o i ds ;D72resi n粉防己又名防己、汉防己、石蟾蜍,是防己科多年生缠绕藤本植物粉防己S tephani a tetrandra S.M oore 干燥的根。
汉防己生物碱的提取
汉防己生物碱的提取、分离与鉴定汉防己为防己科千金藤属物Stephania tetrandra S. Mcore的根，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱。
主要是汉防己甲素和汉防已乙素。
临床上除用作治疗高血压、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。
一、目的要求通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握下列知识和技能。
1．生物碱的一般提取方法。
2．纯化单体的方法及薄层层析鉴定二、已知生物碱的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含量约1%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.2%；以及其它数种微量生物碱。
1．汉防已甲素（Tetrandrine，汉防已碱，粉防已碱）无色针晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者，150℃左右熔后加热又固化，至213℃复熔。
NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3 R=H 汉防己甲素汉防己乙素O2．汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱）溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。
籍此可以相互分离，用不同溶剂重结昌时，其晶形和溶点不同：乙醇 细棒状结晶 mp 245~40℃甲醇 细棒状结晶 mp177~9℃丙酮 六面粒状晶 mp134℃吡啶-甲醇 mp 121~2℃环已烷-EtocAc mp 156℃3．轮环藤酚碱（Cylanoline ）为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结晶，mp185℃；苦味酸盐为黄色结晶，mp154~6℃。
双水相萃取在中药活性成分提取分离中的应用进展_刘磊磊
双水相萃取在中药活性成分提取分离中的应用进展刘磊磊，李秀娜，赵帅吉首大学林产化工工程湖南省重点实验室，湖南张家界 427000摘要：双水相萃取是一种易于放大、可连续化操作、易于集成技术、绿色环保的新型液/液萃取分离技术，在分离纯化蛋白质、基因、生物纳米分子、细胞和天然产物等领域有着广泛应用。
系统综述近5年该技术在中药活性成分提取分离中的应用进展，以期抛砖引玉，推动中药活性成分分离纯化研究的进步和发展。
关键词：双水相萃取；中药；活性成分；提取分离；天然产物中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)05 - 0766 - 08DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.05.025Advances in application of aqueous two-phase system in separation and purification of active constituents from Chinese materia medicaLIU Lei-lei, LI Xiu-na, ZHAO ShuaiKey Laboratory of Hunan Forest Products and Chemical Industry Engineering, Jishou University, Zhangjiajie 427000, ChinaAbstract: Aqueous two-phase system (ATPS) is a new liquid-liquid fractionation technique that has been extensively applied in the separation and purification of natural products including proteins, genetic material, bionanoparticles, cells, and secondary metabolites. Advantages of the technique include scale-up potential, continuous operation, ease of process integration, low toxicity, etc. This paper reviewed the applications in separation and purification of the active constituents from Chinese materia medica (CMM) in recent five years, so as to promote the development of separation of the active constituents in CMM.Key words: aqueous two-phase system; Chinese materia medica; active constituents; extraction and separation; natural products双水相萃取体系（aqueous two-phase systems，ATPS）一般由2种聚合物、聚合物和盐、离子液体和盐、小分子亲水有机溶剂和盐组成[1-4]。
汉防己碱的提取、分离及检验(2)
美国得克萨斯生物医学研究所研究人员发现，中草药提取成分汉防己碱是埃博拉病毒“克星”，有望在今后两到五年内用于治疗埃博拉感染疾病。
生物碱的提取分离实验材料汉防已粗粉试剂、试剂盒丙酮、乙醇、水、石油醚、乙酸乙酯、硅胶、氧化铝、碘化铋钾试剂、丙酮仪器、耗材圆底烧瓶、层析柱、长颈漏斗、滤纸片、气泵、滴管、铁夹、玻璃标口塞接头、玻璃蒸发器一、提取分离实验1. 回流提取100 g汉防已粗粉于1000 ml圆底烧瓶中，加500 ml 95%乙醇，回流1 h，过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液，浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析低压柱层析在低压下(0.5~3 kg/cm2，一般0.3~1.2 kg/cm2)采用颗粒直径介于经典柱层析(100~200 μm)和HPLC(~37 μm)之间的薄层层析用硅胶(或氧化铝)H或G(50~75 μm)作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法，适用于天然产物的常量制备性分离。
（1）装柱减压干法装法，层析柱规格：柱长25 cm，内径1.8 cm，共装硅胶约25 g(高约20 cm)。
（2）拌样加样取汉防已碱约150 mg，加少量丙酮热溶(刚溶为度)用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂(石油醚：乙酸乙酯3：1)，当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂(共约250 ml)，迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧(防加压时接头冲开)，连接气泵接头，控制流速1 ml/min，每10分钟左右一管，收12~15份，洗脱全过程约2小时。
回流辅助的双水相体系提取防己中粉防己碱
Ａｑ ｕｅ ｏ ｕ ｓ ｔ ｗｏ－ ｐ ｈａ ｓ ｅ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｏ ｕ ｐ ｌ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｈｅ ａ ｔ ｒ ｅ ｌｕｘ ｆ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｎｄ ｒ ｉ ｎ ｅ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｓ ｔ ｅ ｐｈ ａ ｎ ｉ ａ ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｎ ｄ ｒ ａ Ｓ． Ｍ ｏ ｏ ｒ ｅ
Ｊ ｕ １ ．２ ０１ ３
回流辅 助 的双 水 相 体 系提 取 防 己 中粉 防 己碱
罗凯文 ， 戚 雪勇，戈延 茹 ， 蒋学银 ， 朱静静 ， 傅 海珍
（ 江 苏大 学 药 学 院 ，江苏 镇 江 ２ １ ２ ０ １ ３ ）
［ 摘要 ］ 目的 ： 改进粉防己碱 的提取分离工艺 ， 减少环境 污染 ， 降低生产成本 。方法 ： 采用 乙醇／ （ Ｎ Ｈ ） ｓ Ｏ 双水相体 系， 辅以加热 回流 ， 提取并分离纯化防己粉末中粉防 己碱 ， 考察了乙醇质量分数 、 （ Ｎ Ｈ ） Ｓ Ｏ 体积分数 、 料液 比、 ｐ Ｈ、 回流 时间和提取次数等因素对粉防己碱萃取率 的影响， 并建立高效液相色谱法测定萃取液 中粉 防已碱含量 的分析方法。结 果： 在乙醇质量分数为 ２ ０ ％、 （ Ｎ Ｈ ） ｓ ０ 体积分数为 ３ ５ ％、 料液 比为 １： ８ 、 ｐ Ｈ为 ９时， 双水相萃取率为８ ４ ． ５ ０ ％； 回流提
HPLC法测定防己配方颗粒中两种生物碱的含量
表1准确度试验结果（防己诺林碱）
2.4线性关系考察分别精密吸取同一份混合对照品溶液（每1ml含防己诺林碱0.0629mg，含粉防己碱0.1905mg）5、10、15、20、40、60µl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值分别对防己诺林碱和粉防己碱的进样量进行回归处理，分别得回归方程为：防己诺林碱y=899.83x-17.595（相关系数r＝1）；粉防己碱y=824.79x-10.055（相关系数r＝1）。结果表明，防己诺林碱在0.3145µg～3.774µg的范围内与峰面积有良好的线性关系，粉防己碱在0.9525µg～11.43µg的范围内与峰面积有良好的线性关系。
2.7稳定性试验取同一批号供试品溶液（批号：1007021S），自制备后，分别在0、2、4、12、24小时进样，测定防己诺林碱和粉防己碱的含量。结果表明，供试品溶液在24小时内稳定（防己诺林碱RSD%=1.05%，粉防己碱RSD=1.37%）。
2.8重复性试验取同一批号的防己配方颗粒（批号：1007021S）按供试品溶液制备方法平行制备6份，测定两种生物碱的峰面积，计算。结果防己诺林碱和粉防己பைடு நூலகம்的平均含量为11.25mg/g（RSD%=1.73％）和28.41mg/g（RSD=1.28%），表明该方法具有良好的重复性。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：Diamonsil C18反相柱（5µm×250mm×4.6mm）；流动相为甲醇-乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钾水溶液-三乙胺（45：25：30：0.3）；流速为1.0min/min；柱温为35℃；检测波长为280nm；进样量为20μL。在此条件下，理论塔板数按粉防己碱峰计算不得低于4000，粉防己碱峰与相邻的其他峰的分离度应大于1.5。防己诺林碱和粉防己碱对照品、防己配方颗粒和阴性对照色谱图见图1。
中药化学实验指导—实验九 防己中粉防己碱的提取分离与检识
实验九 防己中粉防己碱的提取分离与检识（一）目的要求学习生物碱类成分的一般提取分离法，通过实验要求：1．掌握生物碱的溶剂提取法和粉防己碱与防己诺林碱的分离方法。
2．熟悉生物碱的一般理化性质。
3．熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法。
4．掌握连续回流法（索氏提取器）、萃取法、结晶法等的基本操作过程及注意事项。
（二）主要化学成分的结构及性质防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore 的干燥根。
总生物碱含量约为1.5％～2.3％，主要为粉防己碱和防己诺林碱。
1．粉防己碱(tetrandrine) 又称粉防己甲素，分子式C 38H 42N 2O 6，在防己中的含量约为1％，为无色针状结晶（乙醚），mp.217～218℃。
易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有机溶剂，几乎不溶于水和石油醚。
N H 3C O NO C H 3O RH 3C OO C H 3OC H 3粉防己碱 R=CH 3防己诺林碱 R=H2．防己诺林碱(fangchinoline) 又称粉防己乙素，分子式C 37H 40N 2O 6，在防己中的含量约为0.5％，六面体粒状结晶（丙酮），mp.237～238℃。
溶解度与粉防己碱相似，但因较粉防己碱多一个酚羟基，故极性较粉防己碱稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己碱，可利用此性质相互分离。
（三）实验原理本实验是根据粉防己碱和防己诺林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易溶于水，难溶于氯仿的性质提取得到总生物碱。
再利用两者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分离。
（四）实验内容1．防己总生物碱的提取略2．防己总生物碱的精制略3．粉防己碱和防己诺林碱的分离略4．防己生物碱的检识（1）生物碱沉淀反应取粉防己碱的盐酸水溶液8 ml分置于4支试管中，分别滴加下列试剂2～3滴，观察并记录有无沉淀产生及颜色变化。
①碘化铋钾试剂②碘化汞钾试剂③碘－碘化钾试剂④硅钨酸试剂（2）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na板试样：自制粉防己碱乙醇溶液自制防己诺林碱乙醇溶液对照品：粉防己碱标准品乙醇溶液防己诺林碱标准品乙醇溶液展开剂：氯仿-丙酮-甲醇（6∶1∶1）氨气饱和显色剂：喷雾改良碘化铋钾试剂（五）实验说明及注意事项1．提取总生物碱时，回收乙醇至稀浸膏状即可，不宜过干，否则当加入1％盐酸水溶液后，易结成胶状团块，影响提取效果。
中草药分离方法
中草药分离方法
中草药的分离方法主要包括溶剂分离法、反胶团萃取分离技术、固液萃取分离技术、超临界流体萃取技术、双水相萃取技术以及色谱分离技术等。
其中，溶剂分离法是最常用的方法，主要是将中草药提取物选用不同极性的溶剂进行提取分离。
例如，利用中草药化学成分在不同极性溶剂中的溶解度进行分离纯化，对于脂溶性生物碱，可以利用乙醚进行提取，对于粉防己碱，可以利用冷苯进行处理。
此外，对于中草药的水提液中的树胶、粘液质、蛋白质、糊化淀粉等不溶于乙醇的成分，可以加入一定量的乙醇使其沉淀析出，从而达到与其他成分分离的目的。
对于生物碱类化合物，可以利用其在酸或碱中溶解，在加碱或加酸变更溶液的pH后，成为不溶物而析出以达到分离的目的。
以上方法仅供参考，如需获取更多信息，建议查阅相关文献或咨询专业人士。
粉防己生物碱的提取分离实验报告
粉防己生物碱的提取分离实验报告一、实验目的本实验旨在从粉防己中提取和分离生物碱成分，掌握相关的实验操作技能，了解生物碱的性质和特点，为进一步研究和应用提供基础。
二、实验原理粉防己中的主要生物碱为粉防己碱（汉防己甲素）和防己诺林碱（汉防己乙素）。
这些生物碱具有一定的碱性，可在酸性条件下成盐而溶于水，调节 pH 值后又可游离出来。
利用生物碱在不同溶剂中的溶解度差异，通过萃取、结晶等方法实现分离。
三、实验材料与仪器1、材料粉防己药材（干燥）、盐酸、氢氧化钠、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、无水硫酸钠等。
2、仪器电子天平、回流装置、抽滤装置、旋转蒸发仪、分液漏斗、干燥器、紫外分光光度计等。
四、实验步骤1、提取称取一定量的粉防己粉末，加入适量的盐酸溶液，浸泡一段时间后，加热回流提取。
提取液过滤，收集滤液。
2、碱化与萃取向滤液中加入氢氧化钠溶液，调节 pH 值至 9 10，使生物碱游离。
然后用氯仿进行多次萃取，合并氯仿萃取液。
3、浓缩将氯仿萃取液通过旋转蒸发仪浓缩，得到浓缩液。
4、分离将浓缩液用适量的乙酸乙酯溶解，然后静置，使生物碱结晶析出。
过滤收集结晶，干燥后得到粉防己碱。
5、纯度检测采用紫外分光光度计对所得的粉防己碱进行纯度检测。
五、实验结果与分析1、提取率通过计算得到粉防己生物碱的提取率。
2、纯度紫外分光光度计检测结果显示，所得粉防己碱的纯度达到一定标准。
分析影响提取率和纯度的因素，可能包括药材的质量、提取时间、溶剂用量、pH 值调节的准确性等。
六、注意事项1、实验过程中要注意安全，避免酸、碱等试剂接触皮肤。
2、回流提取时要控制好温度，防止溶剂挥发过快。
3、萃取操作时要充分振摇分液漏斗，保证萃取效果。
4、旋转蒸发仪使用时要按照操作规程，防止出现意外。
七、讨论1、实验方法的优化探讨在现有实验步骤的基础上，如何进一步提高提取率和纯度，例如优化溶剂的选择、改进提取条件等。
2、与其他提取方法的比较对比本实验方法与其他常见的生物碱提取方法的优缺点，为今后的实验选择提供参考。
粉防己碱的药理作用研究进展
粉防己碱的药理作用研究进展
朱洪剑;辛国松;王聪然;宋尚纯;宋明昊
【期刊名称】《中医药学报》
【年(卷),期】2018(046)004
【摘要】近年来国内外学者对中药的重视程度增加,对中药药理作用的研究日益增多.其中粉防己碱是从中药粉防己中提取的一种异喹啉类生物碱,亦是粉防己的主要活性成分.粉防己碱具有多种药理作用,其良好的药理活性逐渐被国内外学者关注.本文通过查阅大量的国内外文献,从抗肿瘤、抗多药耐药、对心血管系统、抗菌、防治消化系统疾病、抗炎的作用以及治疗烫伤、眼科疾病等作用进行了综述总结,为粉防己碱进一步研究与合理开发提供参考.
【总页数】6页(P109-114)
【作者】朱洪剑;辛国松;王聪然;宋尚纯;宋明昊
【作者单位】哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心,黑龙江哈尔滨150076;国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心,黑龙江哈尔滨150076
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
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粉防己中三种双苄基异喹啉生物碱的高效液相色谱法测定
粉防己中三种双苄基异喹啉生物碱的高效液相色谱法测定
何丽一;李宝明;段宏瑾;相楽和彦;大岛俊幸;平山总良
【期刊名称】《中草药》
【年(卷),期】1994(25)12
【摘要】建立了同时测定粉防已StephaniatetrandraS．Moore中粉防己碱、去甲粉防己碱及小檗胺等3种双苄基异喹啉生物碱含量的简便精确的高效液相色谱法，用YGW－C1810μm为固定相及甲醇-乙腈-水（3：1：1）含0．06％二乙
胺为流动相，种生物碱在10min内可以完全分离。
【总页数】2页(P629-630)
【关键词】粉防己;粉防己碱;去甲粉防己碱;小檗胺;中草药
【作者】何丽一;李宝明;段宏瑾;相楽和彦;大岛俊幸;平山总良
【作者单位】中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所;大正制药株式会社,总
合研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R282.710.3
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1.粉防己碱:一种治疗支气管哮喘的双苄基异喹啉类生物碱 [J], 谢林艳;陆娇;柏芳芳;周林福
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北中大中药化学实验指导02基本实验项目-3粉防己生物碱的提取、分离和鉴识
实验三 粉防己生物碱的提取、分离和鉴识粉防己亦称汉防己,为防己科植物汉防己（Stephania tetrandra ）的干燥根，是临床常用中药。
具有祛风湿、止痛、利水消肿、泻下焦湿热等功效。
现代药理实验研究表明，汉防己总生物碱具有镇痛、消炎、降压、肌肉松弛以及抗菌、抗肿瘤作用，为主要有效成分。
粉防己中生物碱含量高达5%~2.3%，其中主要为汉防己甲素（tetrandrine ）和汉防己乙素(fangchineline ，又称防己诺林)，还含少量的轮环藤酚碱（cyclanoline ）。
它们的物理性质如下：1. 汉防己甲素和汉防己乙素均为双苄基异喹啉衍生物，氮原子呈叔胺状态。
汉防己甲素 R = CH 3汉防己乙素 R = H汉防己甲素为无色针状结晶，丙酮中结晶有双熔点：126～127℃/217～218℃。
即，在126～127℃先融化，继续加热至153℃固化，温度上升至217～218℃全熔。
不溶于水，石油醚，易溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂及稀酸水溶液。
UV ：λ0.01NHCl max280nm （ε6887） IR ：υKBr max （cm -1）3050，2800，1605，1580，1235，1215，840汉防己乙素为细棒状结晶，同样有双熔点现象，丙酮中结晶mp134～136℃/238～240℃，甲醇中结晶mp177～179℃/238～240℃。
溶解度与汉防己甲素相似，，但极性稍大，故在冷苯中溶解度小于汉防己甲素，而在乙醇中的溶解度大于汉防己甲素。
具有隐性酚羟基，不溶于NaOH 溶OMe O C H 3O OMeNMeO CH 3H液。
2. 轮环藤酚碱轮环藤酚碱 氯化物 无色八面体状结晶，mp214～216℃碘化物 无色绢丝状结晶，mp 185℃苦味酸盐 黄色结晶，mp 154～156℃轮环藤酚碱为水溶性季铵型生物碱，不溶于低级性有机溶剂。
UV ：λMeOH max nm （logε）223（4.18），286（3.88） IR ：υKBrmax （cm -1）3200，1610，1580，1500， 1280，1245， 885，800一、实验目的1． 掌握生物碱的乙醇提取方法以及脂溶性生物碱与水溶性生物碱分离。
反相高效液相色谱法测定三种中药中粉防己碱
反相高效液相色谱法测定三种中药中粉防己碱
王天勇;杨文远
【期刊名称】《分析测试技术与仪器》
【年(卷),期】1995(001)001
【摘要】本文首次用反相高效相色谱法分离并测定了粉防己，头花千金藤，蝙蝠葛三种中药中的粉防己碱，建立了中粉防己碱分离，测定了色谱方法，色谱条件：ＯＤＳ柱，甲醇－水－三乙胺（８５：１５：０．２５Ｖ／Ｖ）为流动相，紫外检测器测波长２８３ｎｍ。
本研究的扩大中药及植物中粉防己碱药物资源的开发提供了简便，灵敏，准确的分离，测定方法。
【总页数】4页(P31-34)
【作者】王天勇;杨文远
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
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反相高效液相色谱法测定防己黄芪汤中6种活性成分的含量
反相高效液相色谱法测定防己黄芪汤中6种活性成分的含量关皎;张颖;费雪;孙宇慧;王黎明;郝乘仪;冯波;朱鹤云【摘要】目的建立反相高效液相色谱法测定防己黄芪汤中粉防己碱、防己诺林碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸和白术内酯Ⅰ的含量.方法采用Diamonsil C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.2 mol/L乙酸铵0.1％甲酸溶液(A)-乙腈(B);流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL.测定粉防己碱、防己诺林碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷和甘草酸时采用梯度洗脱(0～5min,15％～20％B;5～10 min,20％～30％B;10～15 min,30％～35％B;15～20 min,35％～45％B,V/V),平衡时间为10 min,检测波长为254 nm;测定白术内酯Ⅰ时采用等度洗脱(0～8 min,80％-80％B,V/V),检测波长为220 nm.结果粉防己碱、防己诺林碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷和甘草酸分别在5～250mg/L(R=0.9999)、1～50 mg/L(R=0.9999)、1～50 mg/L(R=0.9996)、5～250 mg/L(R=0.9996)、5～250 mg/L(R=0.9999)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率(n=9)分别为99.3％、98.7％、97.5％、99.1％和99.2％.白术内酯Ⅰ在0.05～2.5 mg/L(R=0.9996)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率(n=9)为97.6％.结论方法结果准确,操作简便,具有良好的重现性和稳定性,可用于防己黄芪汤的质量控制.【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2018(039)005【总页数】5页(P321-325)【关键词】防己黄芪汤;粉防己碱;防己诺林碱;毛蕊异黄酮葡萄糖苷;甘草苷;甘草酸;白术内酯Ⅰ;反相高【作者】关皎;张颖;费雪;孙宇慧;王黎明;郝乘仪;冯波;朱鹤云【作者单位】吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013【正文语种】中文【中图分类】R917防己黄芪汤出自汉代张仲景所著的《金匮要略》，原文记载“风湿，脉浮身重，汗出恶风者，防己黄芪汤主之；风水，脉浮身重，汗出恶风者，防己黄芪汤主之”[1]。
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第23卷第4期2013年7月江苏大学学报（医学版）Journal of Jiangsu University （Medicine Edition ）Vol．23No．4Jul．2013回流辅助的双水相体系提取防己中粉防己碱罗凯文，戚雪勇，戈延茹，蒋学银，朱静静，傅海珍（江苏大学药学院，江苏镇江212013）［摘要］目的：改进粉防己碱的提取分离工艺，减少环境污染，降低生产成本。
方法：采用乙醇/（NH 4）2SO 4双水相体系，辅以加热回流，提取并分离纯化防己粉末中粉防己碱，考察了乙醇质量分数、（NH 4）2SO 4体积分数、料液比、pH 、回流时间和提取次数等因素对粉防己碱萃取率的影响，并建立高效液相色谱法测定萃取液中粉防己碱含量的分析方法。
结果：在乙醇质量分数为20%、（NH 4）2SO 4体积分数为35%、料液比为1ʒ8、pH 为9时，双水相萃取率为84．50%；回流提取1次、时间为2h 时，防己粗提物的得率为19．80mg /g ，纯度为20．30%。
结论：本方法相比于传统提取分离方法如乙醇回流提取以及酸碱法等，操作简便、萃取率高、方法重复性好，所得粗提物纯度较高，可适用于提取粉防己碱。
［关键词］防己；粉防己碱；双水相萃取；高效液相色谱法［中图分类号］Ｒ917［文献标志码］A［文章编号］1671－7783（2013）04－0332－05Aqueous two-phase system coupled with heat reflux for the extraction oftetrandrine from Stephania tetrandra S．MooreLUO Kai-wen ，QI Xue-yong ，GE Yan-ru ，JIANG Xue-yin ，ZHU Jing-jing ，FU Hai-zhen（School of Pharmacy ，Jiangsu University ，Zhenjiang Jiangsu 212013，China ）［基金项目］江苏省普通高校研究生科研创新计划资助项目（CXLX11_0600）［作者简介］罗凯文（1988—），男，硕士研究生；傅海珍（通讯作者），讲师，硕士，E-mail ：hzfu@sohu．com ［Abstract ］Objective ：To improve the method of extraction and separation of tetrandrine from Stephania tetrandra S．Moore in order to reduce environment pollution and cut down the cost of production．Methods ：The ethanol /（NH 4）2SO 4as a two aqueous phase system for the extraction and separation of tetrandrine was studied．The effect of operating parameters ，including the concentration of ethanol and （NH 4）2SO 4，pH and temperature on extraction was studied in depth．Ｒesults ：The extraction rate of tetrandrine in the aqueous two phase system could reach 84．50%．The ratio of solid ：solvent was 1ʒ8，the time of heat reflux were 2h ，the salinity of （NH 4）2SO 4was 35%，the density of ethanol was 20%（w ，%），the pH level was 9，ac-cordingly．The purity and yield of tetrandrine crude were 20．30%and 19．80mg /g accordingly after recy-cling ethanol．Conclusion ：The method of aqueous two phases could be applied to extraction and separation of tetrandrine in industry due to conveniently of procedure ，highly of extraction rate and repeatability．［Key words ］Stephania tetrandra S．Moore ；tetrandrine ；two aqueous phase system ；HPLC 粉防己碱（tetrandrine ），又称汉防己甲素，是从防己等中药中提取的一种药用成分，为双苄基异喹啉类生物碱，临床上具有多种药理活性，如降压、抗肿瘤等［1－2］。
粉防己碱相对分子质量为622．73，在乙醚中析出时为无色针状结晶，几乎不溶于水、石油醚，溶于乙醚以及某些有机溶剂。
粉防己碱的常规提取分离工艺均不同程度地存在有机溶剂用量大、易挥发、处理时间长、环境污染严重等缺点。
目前双水相萃取技术已被广泛用于食品、化工、药物等领域的分离和纯化［3－4］，对于中药中生物碱类成分如罂粟碱［5］等的提取分离也有报道；乙醇回流提取具有溶剂可回收反复使用、不腐蚀设备、无毒、对环境无污染、提取产量高的特点，但提取物常含有水溶性高的杂质，去杂过程操作繁琐。
将双水相与回流提取结合后，能够将提取、分离和富集三者一步完成，提高了效率，同时避免了毒性大的有机溶剂的使用，效果理想。
本文首次将回流提取结合双水相萃取体系用于防己中粉防己碱的提取分离及富集，效果理想，对研究中草药中有效成分的提取分离方法具有很大的参考价值。
1材料与方法1．1仪器与试剂PHS-3C pH计（杭州拓胜自动化仪表有限公司）；BP221S电子天平（精度为0．0001g，德国塞博尼斯公司）；岛津高效液相色谱仪LC-10AT，工作站CLASS-VPVer．5．03（岛津制作所）。
粉防己碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号0713-200208）；防己（安徽福春堂中药材饮片有限公司）；95%乙醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；（NH4）2SO4（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；其余试剂均为分析纯，实验用水为去离子水。
1．2方法1．2．1粉防己碱HPLC测定方法1．2．1．1色谱方法的确定色谱柱为Agilent ZOＲ-BAX SB-C18柱（4．6mmˑ250mm，5μm），流动相为乙腈-甲醇-0．03mol/L磷酸二氢钾（含0．1%三乙胺）（55ʒ25ʒ20），流速0．8mL/min，波长280 nm，进样量20μL。
1．2．1．2标准曲线的制备称取一定质量粉防己碱对照品，精密称定，甲醇溶解并定容至25mL，吸取5mL，定容至50mL，再分别吸取0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，8．0mL定容至10mL，质量浓度分别为5，10，20，40，60，80，100μg/mL，过0．45μm滤膜，按“1．2．1．1”项下方法用HPLC进行含量测定。
1．2．2提取分离方法1．2．2．1回流辅助双水相提取分离粉防己碱回流辅助双水相提取分离防己中粉防己碱，方法原理参考图1。
（a）称取一定质量防己粗粉，加入适当浓度的乙醇溶液以及适量的盐使其成为双水相，其中上相为乙醇富集相，下相为盐富集相，红色八边形小颗粒为防己粉末；（b）回流提取2h，在加热过程中，由于热效应，两相混为一体，乙醇成液滴状（图中蓝色颗粒）均匀混于水相中，粉防己碱进入乙醇液滴，而其他水溶性杂质如多糖类、蛋白质类以及有机酸类进入水相中；（c）调节pH，静置30min，上相为乙醇相，下相为富含盐的水相，粉防己碱富集在上相，而水溶性杂质则分布在下相被除去，图中褐色八角形颗粒为粉末残渣。
分离出上相，旋转蒸发回收乙醇，提取物以少量甲醇溶解，过滤除去盐，旋转蒸发回收甲醇，烘干提取物，即可达到防己中生物碱的初步分离纯化，得到防己粗提物。
图1回流辅助双水相提取分离粉防己碱Fig1Schematic diagram of the HＲE-ATPS processused to extract TET from powders 1．2．2．2乙醇回流提取称取与“1．2．2．1”项下相同质量的防己粉末，加入与“1．2．2．1”项下的双水相体积相同体积的75%乙醇，回流提取2h，过滤，滤液旋转蒸发至少量后，于55ħ烘干，即得乙醇回流提取对照粗提物。
由于此对照实验为传统提取分离方法，因此并未调节乙醇溶液pH。
1．2．2．3酸碱法提取称取与“1．2．2．1”项下相同质量的防己粉末，加入与“1．2．2．1”项下的双水相体积相同的酸水［含0．8%（v/v）硫酸］回流提取2h，Ca（OH）2碱化酸水溶液，静置30min，抽滤，滤渣用1%HCl80mL充分搅拌，抽滤，并用1%HCl洗涤残渣3次，每次15mL，将滤液转移至分液漏斗中，用三氯甲烷萃取3次，每次30mL，将三氯甲烷层用1%HCl洗涤2次，每次10mL，将酸水层合并，转移至分液漏斗中，加60mL三氯甲烷，浓氨水调节pH至9 10，将三氯甲烷层用1%NaOH萃取2次，每次20mL，最后回收三氯甲烷，得到对照粗提物。
1．2．3实验结果的计算相关计算公式：Ｒ=Vt/Vb；K=Ct/Cb；E（%）=100ˑM上/（M上+M下）=100ˑＲK/（1+ＲK）；Y=Mc/M；P（%）=Mp/Mc 式中，Ｒ为双水相体系上下相的体积比，V t为双水相体系上相体积（mL），V b为双水相体系下相体积（mL）；K为粉防己碱双水相体系分配系数，Ct为双水相系统上相粉防己碱的质量浓度（g/mL），C b为双水相系统下相粉防己碱的质量浓度（g/mL）；M上、M下分别代表粉防己碱分配在上下相中的质量，E为粉防己碱在双水相系统上相中的萃取率。
Y为粗提物得率，M c为粗提物质量，M0为防己粗粉质量，P（%）333第4期罗凯文，等．回流辅助的双水相体系提取防己中粉防己碱为粉防己碱纯度，M p 为粗提物中粉防己碱的质量。
2结果与讨论2．1标准曲线的制备应用高效液相色谱仪检测“1．2．1．2”中所配制的溶液中粉防己碱含量，检测波长280nm ，以浓度和峰面积制作标准曲线。