实验三 粉防己生物碱的提取分离与鉴定
粉防己生物碱的提取分离和鉴别
粉防己生物碱的提取分离和鉴别粉防己为植物防己科粉防己Stephania tetrandrd S.Moore的根，又名汉防己，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱，主要是汉防己甲素和汉防已乙素。
汉防己生物碱具有降低血压及镇痛的作用，临床上除用作治疗高血压、心绞痛、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌、扩冠和解热抗炎的作用。
一、实验目的1．掌握生物碱的提取原理和实验操作方法；2．掌握生物碱的基本鉴别法；3．掌握生物碱结构与一般性质的关系；4．熟悉用柱层析分离纯化生物碱单体的方法。
二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）蒸发皿小玻璃蒸发器玻璃层析柱（2.0cmⅹ40cm）（二）试药粉防己乙醇盐酸氯仿无水硫酸钠滤纸丙酮中性三氧化二铝无水硫酸钠甲醇浓氨水硅胶G 凡士林脱脂棉漏斗 CMC-Na改良碘化铋钾试液汉防已甲素和汉防已乙素对照品丙酮苦味酸碘化汞钾试液雷氏铵盐试液三、主要成分的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1～3%，主要为汉防已甲素，含量约1～2%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.4%；以及其它数种微量生物碱。
轮环藤酚碱四、实验原理：1．提取：利用游离的伯、仲、叔胺生物碱具有亲脂性，能溶于乙醇的性质，用乙醇提取总生物碱；2．分离：利用水溶性生物碱（季铵类生物碱）易溶于水而难溶于有机溶剂的性质进行二者的分离；3．粉防己甲、乙素的分离：利用甲、乙素在结构上的不同（二者极性大小不同）用氧化铝柱层析来分离甲、乙素。
五、生物碱的提取分离1．总生物碱的提取、亲脂性与亲水性生物碱的分离95%乙醇300mL水浴回流提取1小时，过滤NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3R=H汉防己甲素汉防己乙素ONOHOCH3CH3OHOOHCH3同法提取0.5小时，过滤5～10mL浓缩物2%盐酸转移至蒸发皿中充分搅拌，残渣做生物碱反应，将滤液放在分液漏斗中先加入50mL氯仿，pH至9-10，振摇萃取，静置分层后，分出氯仿层30mL萃取1次2次，每次20mL，分出氯仿层20g无水硫酸钠，密闭，（上交）加入丙酮适量（共15mL，少量多次），水浴加热溶解，趁热倒入蒸发皿丙酮液加入中性三氧化二铝3g拌匀，水浴上小心蒸干含生物碱的三氧化二铝颗粒2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素低压柱层析在低压下（0.5-3kg/cm2，一般0.3-1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100-200μm）和HPLC（37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50-75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。
防己中生物碱的提取、分离与鉴定
防己中生物碱的提取、分离与鉴定[适用对象]——药学、药剂、环境、中药、中药国际交流、中药知识产权、中药制药工程、中药资源专业[实验学时]——24一、实验目的学习生物碱类成分的一般提取分离法，通过实验要求：（1）掌握生物碱的溶剂提取法和粉防己碱与防己诺林碱的分离方法。
（2）熟悉生物碱的一般理化性质。
（3）熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法。
（4）掌握回流法、萃取法、结晶法等的基本操作过程及注意事项。
二、实验原理本实验是根据粉防己碱和防己诺林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易溶于水，难溶于氯仿的性质提取得到总生物碱。
再利用两者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分离。
三、仪器设备（单口，双口）圆底烧瓶，冷凝管，铁架台，分液漏斗，三角烧瓶，滤纸，微量抽滤器，布氏漏斗，层析槽，毛细管等。
四、相关知识点防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。
总生物碱含量约为1.5~2.3%，主要为粉防己碱和防己诺林碱。
1、粉防己碱（tetrandrine），又称汉防己甲素，分子式C38H42N2O6，在防己中的含量约为1%，为无色针状结晶（乙醚），mp.217~218℃。
易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有机溶剂，几乎不溶于水和石油醚。
粉防己碱R=CH3防己诺林碱R=H2、防己诺林碱（fangchinoline），又称汉防己乙素，分子式C37H40N2O6，在防己中的含量约为0.5%，六面体粒状结晶（丙酮），mp.237~238℃。
溶解度与粉防己碱相似，但因较粉防己碱多一个酚羟基，故极性较粉防己碱稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己碱，可利用此性质相互分离。
五、实验步骤（一）总生物碱的提取称取粉防己粗粉150克，置1000ml圆底烧瓶中，加95%乙醇以浸透并盖没生药为度（约需400ml）。
水浴加热回流1小时（加热期间振摇数次），滤出提取液，药渣再加95%乙醇以浸没为度（约需300ml），如上法再热提一次，滤出提取液，最后将瓶内药渣倒在布氏漏斗上抽滤压干，药渣弃去。
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。
1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。
基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。
常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。
2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。
因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。
一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。
由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。
如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。
许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。
因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。
3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
中药化学实验注意事项1
目录前言 0中药化学实验注意事项 (1)实验一虎杖中蒽醌类成分及白藜芦醇苷提取、分离和鉴定 (5)实验二槐花黄酮苷及苷元的提取、分离和鉴定 (9)实验三粉防己生物碱的提取、分离和鉴识 (14)前言中药化学是一门实践性较强的课程，中药化学实验是本课程的重要组成部分。
要想很好的完成科研任务，不仅需要有良好的理论基础，而且还要熟练地掌握各项实验技能，本试验技能广泛用于中药专业的各个领域，与中药制剂、中药鉴定、中药炮制、中药分析等有密切的联系。
与学过的实验课相比，本试验课有如下特点：1. 一个完整的实验要经过提取、分离、精制、鉴识四个基本过程，实验步骤复杂、需要时间长。
一个实验一般需要十几到几十个小时完成。
2. 中药有效成分含量一般比较低，产率也很低，因此要求大家以认真、仔细、耐心的态度进行试验，培养良好的科研作风。
本实验课注重训练同学们在中药化学方面的基本操作技能，用学到的理论知识解释实验原理及现象，培养独立解决实验问题的能力，因此要求实验前做好预习，实验中勤于动手，善于观察，积极思考，如实记录实验原始记录，实验后认真总结，写出实验报告，提倡写心得体会，发表意见和建议。
中药化学实验注意事项中药化学实验室所用的溶剂、药品很多是易燃、易爆、有毒、有腐蚀性、刺激性的物质，实验操作又常常在加温或减压情况下进行，需用各种电源、电器及其他仪器，操作不慎会造成火灾、爆炸等事故，因此要严格遵守操作规程，谨防事故发生。
1.实验前必须充分预习，搞清实验原理和操作程序，安排好实验计划，实验开始前应检查仪器是否完整、装置是否正确，合格后才能开始实验。
2.实验过程中不能擅自离开，随时注意实验情况，保证实验正常进行，并及时做好实验记录。
3.保持实验室内清洁、安静。
实验台面要干净整齐。
与实验无关的物品不得放在台面上，仪器用后应及时清洗，破损仪器要填写报告单，并注明原因。
4.使用电器设备时应了解操作规程，不要用湿手触摸仪器，真空泵、水浴使用时保持一定水位，防治水干引起爆炸等，实验完毕拔掉电器插销。
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。
1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。
基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。
常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。
2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。
因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。
一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。
由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。
如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。
许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。
因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。
3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
汉防己提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解汉防己生物碱的提取、分离与鉴定方法。
2. 掌握回流提取、低压柱层析等实验操作技术。
3. 学习天然产物中活性成分的提取与分离过程。
二、实验原理汉防己（Stephania tetrandra S. Moore）为防己科千金藤属植物，其根含有多种生物碱，如汉防己甲素、乙素等。
本实验采用回流提取和低压柱层析方法，从汉防己根中提取生物碱，并进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己根粉、95%乙醇、丙酮、硅胶、氧化铝、硝酸银、氨水、氯化钡等。
2. 实验仪器：圆底烧瓶、回流装置、布氏漏斗、抽滤瓶、低压柱层析柱、超声波清洗器、电子天平、紫外分光光度计等。
四、实验步骤1. 汉防己生物碱的提取（1）称取100 g汉防己根粉，置于1000 ml圆底烧瓶中。
（2）加入500 ml 95%乙醇，回流1 h。
（3）过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液。
（4）浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析（1）装柱：取25 cm长、内径1.8 cm的层析柱，用减压干法装硅胶约25 g（高约20 cm）。
（2）拌样加样：取汉防己碱约150 mg，加少量丙酮热溶（刚溶为度），用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱：开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入溶剂，收集不同洗脱组分。
3. 汉防己生物碱的鉴定（1）紫外分光光度法：将提取的生物碱溶液在紫外分光光度计上测定其最大吸收波长。
（2）薄层色谱法：将提取的生物碱溶液点于薄层板上，与已知标准品进行对照，观察其Rf值。
五、实验结果与分析1. 提取结果：经回流提取和低压柱层析，从汉防己根中成功提取出生物碱。
2. 鉴定结果：紫外分光光度法测定，提取的生物碱溶液最大吸收波长为285 nm；薄层色谱法鉴定，提取的生物碱与已知标准品对照，Rf值一致，证明提取的生物碱为汉防己生物碱。
汉防己碱的提取、分离及检验(2)
美国得克萨斯生物医学研究所研究人员发现，中草药提取成分汉防己碱是埃博拉病毒“克星”，有望在今后两到五年内用于治疗埃博拉感染疾病。
生物碱的提取分离实验材料汉防已粗粉试剂、试剂盒丙酮、乙醇、水、石油醚、乙酸乙酯、硅胶、氧化铝、碘化铋钾试剂、丙酮仪器、耗材圆底烧瓶、层析柱、长颈漏斗、滤纸片、气泵、滴管、铁夹、玻璃标口塞接头、玻璃蒸发器一、提取分离实验1. 回流提取100 g汉防已粗粉于1000 ml圆底烧瓶中，加500 ml 95%乙醇，回流1 h，过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液，浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析低压柱层析在低压下(0.5~3 kg/cm2，一般0.3~1.2 kg/cm2)采用颗粒直径介于经典柱层析(100~200 μm)和HPLC(~37 μm)之间的薄层层析用硅胶(或氧化铝)H或G(50~75 μm)作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法，适用于天然产物的常量制备性分离。
（1）装柱减压干法装法，层析柱规格：柱长25 cm，内径1.8 cm，共装硅胶约25 g(高约20 cm)。
（2）拌样加样取汉防已碱约150 mg，加少量丙酮热溶(刚溶为度)用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂(石油醚：乙酸乙酯3：1)，当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂(共约250 ml)，迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧(防加压时接头冲开)，连接气泵接头，控制流速1 ml/min，每10分钟左右一管，收12~15份，洗脱全过程约2小时。
中药综合实验讲义
3） 展开：氯仿-无水乙醇（20:1）20 mL，氨气饱和。 4） 显色：用改良碘化铋钾在展开剂挥尽后，在薄板的两边 1 cm 处显色（其 余部分以玻璃板遮盖），划出两条显色带。 5）洗脱：分别刮下两条硅胶色带，碾碎，装在折叠好滤纸漏斗中，用约 30 mL 95％乙醇缓慢洗脱，浓缩洗脱液，点样检查后用丙酮重结晶。 3．Bűchi 中压柱层析分离和硅胶薄层层析检识的方法分离粉防己甲素和粉 防己乙素。 取中压层析柱一根（1.5 cm x 20 cm），称取中性氧化铝 25 g（100-200 目， 事先用事先以Al2O3:H2O(20:1，W:V)活化），干法装柱，氮气加压填充；取生物 碱粗品适量（约 100mg），加少量氯仿溶解，蠕动泵进样；以氯仿-乙酸乙酯溶 剂线性梯度洗脱，流速：20 mL/min，洗脱程序为：0-3 min，氯仿:乙酸乙酯 （90:10），10 min，氯仿:乙酸乙酯（70:30），15 min，氯仿:乙酸乙酯（0:100）， 洗脱液以每 15 mL一份，自动收集，各样品以薄层层析检查，合并相同部分， 分别回收有机溶剂后用丙酮重结晶，得粉防己甲素和粉防己乙素。 将上述分离所得各样品，进行硅胶薄层层析，条件如下： 薄板：硅胶-CMC 粘合板（5 cm×15 cm，层析用；2.5 cm×7.5 cm，点滴 反应用）； 对照品：粉防己甲素和粉防己乙素的氯仿溶液； 展开剂：氯仿-无水乙醇（9.5:0.5），整个系统以氨气饱和； 显色剂：改良碘化铋钾试剂 【思考题】 1．柱层析，中压柱层析，薄层制备层析实验中为获得好的分离效果，应注
乙醇
238-140℃
注：粉防己乙素也有双熔点现象。
溶解度：与粉防己甲素相似，但在冷苯中粉防己乙素难溶。
3）轮环藤酚碱（cyclanoline）
H3CO HO
汉防已实验报告
一、实验模块中草药提取与活性成分分析二、实验标题汉防己中生物碱类成分的提取与含量测定三、实验日期2023年10月15日四、实验操作者张三、李四五、实验目的本研究旨在通过高效液相色谱法（HPLC）提取汉防己中的生物碱类成分，并对其含量进行测定，为汉防己在中药现代化研究中的应用提供数据支持。
六、实验步骤1. 样品准备取干燥的汉防己粉末，过40目筛，准确称取2.0g，置于50mL容量瓶中，加入50%甲醇溶液，超声提取30分钟，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液待用。
2. 标准溶液配制精密称取汉防己生物碱对照品，加甲醇溶解，配制成一定浓度的对照品溶液。
3. 色谱条件色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm）流动相：甲醇-水（梯度洗脱）流速：1.0mL/min检测波长：254nm柱温：30℃4. 样品测定取上述样品溶液，按照上述色谱条件进行测定，记录峰面积，计算汉防己生物碱含量。
七、实验环境实验在洁净、通风、避光的实验室进行，实验所用仪器包括高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平等。
八、实验过程1. 样品提取将汉防己粉末加入50%甲醇溶液，超声提取30分钟，冷却至室温，过滤，得到汉防己提取液。
2. 标准溶液配制精密称取汉防己生物碱对照品，加甲醇溶解，配制成一定浓度的对照品溶液。
3. 色谱测定按照色谱条件，对样品溶液和对照品溶液进行测定，记录峰面积。
4. 结果计算根据样品溶液和对照品溶液的峰面积，计算汉防己生物碱含量。
九、实验结论1. 通过超声提取法从汉防己中成功提取出生物碱类成分。
2. 汉防己生物碱含量为0.25%，符合《中国药典》规定。
3. 本实验方法简单、快速、准确，为汉防己在中药现代化研究中的应用提供了有力支持。
十、后记或附录1. 参考文献列表[1] 张三，李四. 汉防己中生物碱类成分的提取与含量测定[J]. 中国中药杂志，2023，48（10）：2041-2045.[2] 王五，赵六. 汉防己化学成分及药理作用研究进展[J]. 中草药，2023，54（2）：293-298.2. 实验数据表表1 汉防己生物碱含量测定结果样品编号 | 生物碱含量（%）--------|----------------1 | 0.252 | 0.243 | 0.26平均含量 | 0.25注：实验重复3次，取平均值作为最终结果。
实验四-粉防己生物碱的提取分离与鉴定(1)
实验四粉防己生物碱的提取分离与鉴定（1）【实验目的】1、能够熟练进行粉防己总生物碱的提取。
【实验原理】本实验是根据粉防己生物碱可溶于一般有机溶剂的性质，先用乙醇提取得总碱，再利用粉防己碱、防己诺林碱及轮环藤酚碱的溶解性和极性差异进行分离。
将总生物碱溶于稀酸水，碱化后用苯萃取出粉防己碱，再用三氯甲烷萃取防己诺林碱，轮环藤酚碱为水溶性生物碱，仍留在碱水层；或者将稀酸水碱化后用三氯甲烷萃取出粉防己碱和防己诺林碱。
【实验材料】设备: 500ml圆底烧瓶、锥形瓶、长滴管、分液漏斗、滤纸药品: 粉防己（粗粉）、95%乙醇、10%盐酸、浓氨水、三氯甲烷、碘化铋钾试剂【实验步骤】1．总生物碱的提取：称取汉防已粗粉100g，置于500ml圆底烧瓶中，加95%乙醇浸没药材（约需300ml），水浴上加热回流l小时后，过滤，滤液置于锥形瓶中，药渣再用95%乙醇（约200ml）同法提取2次．每次30分钟，合并3次滤液。
放冷后如有絮状物析出，再过滤一次，澄清溶液浓缩至无醇味，成糖浆状，即得到总生物碱。
2．脂溶性生物碱和水溶性生物碱的分离：将糖浆状总提取物置于锥形瓶中，逐渐加入1%盐酸约100ml，充分搅拌使生物碱溶解，不溶物呈树脂状析出下沉。
静置，滤出上清液，锥形瓶底部的不溶物再用1%盐酸少量多次洗涤，直至洗液对生物碱沉淀试剂反应微弱。
合并洗液和滤液，静置，过滤，所得澄清溶液置于1000ml锥形瓶中，滴加浓氨水调至 pH9～10，移至1000ml分液漏斗中，加150ml三氯甲烷萃取，静置分层后放出三氯甲烷层。
碱水层再用新的三氯甲烷萃取数次，每次用三氯甲烷100ml，直至三氯甲烷提取液的生物碱反应微弱为止（取三氯甲烷液滴在滤纸上喷碘化铋钾试剂显色不明显）。
三氯甲烷液中含脂溶性叔胺碱，而三氯甲烷萃取过的氨性碱水液含有水溶性生物碱。
可取少量三氯甲烷萃取过的氨性碱水液，加盐酸酸化至pH4～5，滴加雷氏铵盐饱和水溶液观察有无沉淀生成。
粉防己中粉防己碱和防己诺林碱的分离制备研究
粉防己中粉防己碱和防己诺林碱的分离制备研究冀德富;王小康;郭嫦娥;裴妙荣【摘要】Objective:To establish a method of separating and preparing tetrandrine and fangchinoline from stephania te-trandra S.Moore. Methods:Tetrandrine and fangchinoline were isolated by column chromatography,and then were identi-fied by TLC. The contents of tetrandrine and fangchinoline were determined by HPLC. Results:The chromatograms of the purified product of tetrandrine and fangchinoline were consistent with the standard product. The contents of tetrandrineand fangchinoline in sample were 100.97%,98.54% respectively. Conclusion:This method is simple and practical.The products are very pure.%目的：建立粉防己中粉防己碱和防己诺林碱的分离制备方法。
方法：采用柱色谱法对粉防己碱和防己诺林碱进行分离，采用薄层色谱法对粉防己碱和防己诺林碱的纯化品进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对其进行含量测定。
结果：经薄层色谱法鉴定粉防己碱与防己诺林碱的纯化品与标准品图谱一致；经高效液相色谱法测定，所得样品中粉防己碱和防己诺林碱的百分含量分别为100.97%和98.54%。
生物碱提取分离鉴定
（二）波谱法
(包括 ，IR，NMR，MS等) 包括UV， ， 包括 ， 等
1. UV法 法 生色团（羰基、双键、苯基和硝基等） 生色团（羰基、双键、苯基和硝基等）在生物碱的 整体结构中时， 可以反映其骨架类型特征 可以反映其骨架类型特征。 整体结构中时，UV可以反映其骨架类型特征。 (1) 生色团在整体结构中 如：
H
别育亨烷 伪育亨烷 表别育亨烷
3α-H， 20-αH ， 3β-H， 20-βH ， 3β-H， 20-αH ，
正、别育亨烷有Bohlmann吸收峰 别育亨烷有 吸收峰
六、生物碱的结构鉴定
3. MS 法 此法在生物碱结构测定中多有应用。 此法在生物碱结构测定中多有应用。 (1) 母核稳定或由于取代基或边链裂解产生特征离子。 母核稳定或由于取代基或边链裂解产生特征离子。 主体或整体由芳香结构组成， ① 主体或整体由芳香结构组成，如：4－喹酮、吖 －喹酮、 啶酮、喹啉去氢阿朴菲等类： 啶酮、喹啉去氢阿朴菲等类：
五、生物碱的提取分离
4.酸水提取液+雷氏铵盐等沉淀法: 4.酸水提取液+雷氏铵盐等沉淀法: 酸水提取液 药材粉末
稀酸水提取多次
药材残渣
稀酸水部分 溶液+沉淀 溶液 沉淀 母液
雷氏铵盐或 磷酸盐、硅酸盐等 磷酸盐、 过滤
沉淀
丙酮溶解
丙酮液
五、生物碱的提取分离
溶液+硫酸铜沉淀 溶液 硫酸铜沉淀
加入饱和硫酸银
总碱2 总碱
总碱3 总碱
五、生物碱的提取分离
3.水或酸水提取后+ 3.水或酸水提取后+强(弱)酸型阳离子树脂法: 水或酸水提取后 酸型阳离子树脂法: 药材粉末
水，或0.5%-1%硫酸或 硫酸或 乙酸室温或回流提取多次
生物碱的提取分离
乙醚部分 水洗 干燥 回收乙醚 总碱1
氯仿部分 水洗 干燥 回收氯仿 ? 总碱2
水溶液部分 丁醇提取 蒸干 总碱3
五、生物碱的提取和分离 3、水或酸水提取后+强(弱)酸型阳离子树脂法: 生药粉末可直接用0.5-1%的硫酸或乙酸液或 水室温下或加热提取。提取得的水溶液部分通 过阳离子交换树脂极性交换,先用水冲柱,再用 稀氨水洗脱,洗脱液浓缩后可得生物碱总碱。 ※用此法,水溶性生物碱和季铵碱可提出。也 可用加NaCl液盐析法极性提取。
H3CO H3CO N OCH3 OCH3 3
1、2、3的酸水提取液
NH4OH简化PH=9，氯仿萃取
碱水层
n-BuOH萃取
氯仿层
NaOH萃取
氯仿层
碱水层
n-BuOH层
（甲）
（乙）
（丙）
碱水层 NH4Cl, 氯仿萃取
（丁）
氯仿层
碱水层 （戊）
方法1, 混合生物碱
pH 梯 度 萃 取 方 法
溶于酸水中 逐步加碱(氨水等)每调一次PH (PH由 低至高),用有机溶剂萃取一次. 生物碱由弱至强依次被分离 方法2,混合生物碱 溶于氯仿中 逐步加酸性缓冲液(Ph由高至低)
生物碱依盐的形式由强至弱被依次分离
提取分离举例
OCH3 O O N OCH3 1 OCH3 O OH 2 H3C N OCH3 O H3CO N CH3
生药残渣
乙醚, 或CHCl 3提取部分
酸水提取多次
酸水部分
五、生物碱的提取和分离
酸水部分
碱化 CHCl 多次 3提 取
水部分
CHCl 3部 分 过 泸 后 用 乙 醚 ,CHCl 3 分别去杂
稀酸部分
CHCl 3或 乙 醚 部 分 干燥 回 收 CHCl 3
北中大中药化学实验指导02基本实验项目-3粉防己生物碱的提取、分离和鉴识
实验三 粉防己生物碱的提取、分离和鉴识粉防己亦称汉防己,为防己科植物汉防己（Stephania tetrandra ）的干燥根，是临床常用中药。
具有祛风湿、止痛、利水消肿、泻下焦湿热等功效。
现代药理实验研究表明，汉防己总生物碱具有镇痛、消炎、降压、肌肉松弛以及抗菌、抗肿瘤作用，为主要有效成分。
粉防己中生物碱含量高达5%~2.3%，其中主要为汉防己甲素（tetrandrine ）和汉防己乙素(fangchineline ，又称防己诺林)，还含少量的轮环藤酚碱（cyclanoline ）。
它们的物理性质如下：1. 汉防己甲素和汉防己乙素均为双苄基异喹啉衍生物，氮原子呈叔胺状态。
汉防己甲素 R = CH 3汉防己乙素 R = H汉防己甲素为无色针状结晶，丙酮中结晶有双熔点：126～127℃/217～218℃。
即，在126～127℃先融化，继续加热至153℃固化，温度上升至217～218℃全熔。
不溶于水，石油醚，易溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂及稀酸水溶液。
UV ：λ0.01NHCl max280nm （ε6887） IR ：υKBr max （cm -1）3050，2800，1605，1580，1235，1215，840汉防己乙素为细棒状结晶，同样有双熔点现象，丙酮中结晶mp134～136℃/238～240℃，甲醇中结晶mp177～179℃/238～240℃。
溶解度与汉防己甲素相似，，但极性稍大，故在冷苯中溶解度小于汉防己甲素，而在乙醇中的溶解度大于汉防己甲素。
具有隐性酚羟基，不溶于NaOH 溶OMe O C H 3O OMeNMeO CH 3H液。
2. 轮环藤酚碱轮环藤酚碱 氯化物 无色八面体状结晶，mp214～216℃碘化物 无色绢丝状结晶，mp 185℃苦味酸盐 黄色结晶，mp 154～156℃轮环藤酚碱为水溶性季铵型生物碱，不溶于低级性有机溶剂。
UV ：λMeOH max nm （logε）223（4.18），286（3.88） IR ：υKBrmax （cm -1）3200，1610，1580，1500， 1280，1245， 885，800一、实验目的1． 掌握生物碱的乙醇提取方法以及脂溶性生物碱与水溶性生物碱分离。
汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定
2、色谱检识 、 色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板 色谱材料：硅胶 硬板 点样：汉防己总碱、 点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己 乙素的0.1%醇溶液 乙素的 醇溶液 展开剂： 氯仿—丙酮 甲醇（ ∶ ∶ ） 丙酮—甲醇 展开剂：①氯仿 丙酮 甲醇（6∶1∶1） 氯仿—乙醇 乙醇（ ∶ ） ②氯仿 乙醇（10∶1） 甲苯—丙酮 乙醇（ ∶ ∶ ） 丙酮—乙醇 ③甲苯 丙酮 乙醇（4∶5∶1） 显色剂：改良碘化铋钾试剂 显色剂： 观察记录： 观察记录：记录图谱及斑点颜色
Oe M H3C N O R O O Oe M N CH3
汉防己甲素 R=CH3 汉防己乙素 R=H
实验器材： 实验器材： 试药：汉防己、 乙醇、 盐酸 氯仿、 盐酸、 试药：汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、 乙醇 氨水、 氢氧化钠 无水硫酸钠、氧化铝、 氢氧化钠、 氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧化铝、 丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、 丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、 碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂 碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、 碘化钾试剂 等 仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、 仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层 析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、 析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、 试管等
实验四 汉防己中生物碱的 提取、 提取、分离和鉴定
实验目的： 实验目的： 1、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。 、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。 2、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。 、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。 3、掌握生物碱的鉴定方法。 、掌握生物碱的鉴定方法。
实验原理： 实验原理： 根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇 的通性，利用乙醇提取总生物碱。 的通性，利用乙醇提取总生物碱。利用季铵 型生物碱易溶于水， 型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂 的性质， 的性质，用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和 水溶性生物碱； 水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸 结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂， 结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂， 在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的 性质反复处理后， 性质反复处理后，在利用两者在冷苯中溶解 度的不同，使它们相互分离。 度的不同，使它们相互分离。
防己中粉防己甲素和乙素的提取分离与鉴定
防己中粉防己甲素和乙素的提取分离与鉴定-适用对象」环境科学「的学、的物制钢专业［实醞学时」24学时实验目的学习生物碱类成分的•般捉取分离法，通过实验箜求：〔1）掌握生物碱的辯剂提取法利粉防己碱与防己诺林碱的分离方法.<2）熟悉生物碱的激理化性质。
<3）熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法匕〈4）掌握回流法"萃取法"結晶法等的星本操件过程及注奁事坝.二、实验原理本实验是根据粉防已碱和防已锻林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易落于水，难溶于氮仿的性质提取得到总生物碱匚冉利用两苕在冷茉屮的溶解度不同，使Z相互分离厂三、仪器设备（单口，双口）园底烧瓶，冷凝管，铁架台*分液漏卜三角烧瓶，谑纸，微量抽滤黙，布氏漏斗，层析槽，毛细管竽口四、相关知识点防已为防已科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的T燥根= 总生物碱含竜约为1*5〜2. 3%,主歿为粉防已碱和防已诺林碱「1、粉防已碱（tetrandrine）, 乂称汉防己甲素「分了式C3R H42N2O Q在防已屮的含量釣为1%,为无色针狀结晶（乙醸），mp・217~2180五、实验步骤（-）总生物减的提取称取粉防已粗粉150克，置1000 ml圆底烧瓶屮，加95%乙醇以浸透并盖没生药为度（约需400 ml）o水浴加热回流1小时（加热期间振摇数次），滤出提取液，药渣冉加95%乙醇以浸没为度（约需300 ml）,如上法再热提一次，滤出提取液，最后将瓶内药渣倒在布氏漏斗上抽滤用干，药渣弃去。
合并两次乙醇提取液，放冷后如有絮状物析出，再抽滤一次，澄清液回收乙醇，浓缩至糖浆状无乙停味为止，得乙醇总提取物。
（-）生物碱的分离1、亲脂性生物碱和亲水性生物碱的分离此氯仿液屮含亲脂性叔胺碱，氯仿萃取过的氨碱性水溶液含亲水性季钱碱。
后者取山少量，加盐酸酸化至PH 4-5,滴加雷氏锁盐饱和水溶液，观察仃无沉淀出现。
2、亲脂性碱中酚性和非酚性碱的分离氯仿萃取液合并约(300- 400 ml)移至1000 ml的分液漏斗屮，以2 %氢氧化钠水溶液40 ml 一次,萃取2次，氯仿液再用水20 ml 一次，洗涤2次。
天然药物中生物碱的提取分离及检测
天然药物中生物碱的提取分离及检测刘琳【期刊名称】《黑龙江医药》【年(卷),期】2014(000)002【摘要】本文对天然药物中生物碱的提取、分离及检测方法作一综述，天然药物中生物碱的存在形式为盐和游离生物碱，所以通常选用无机酸水进行生物碱提取，将有机酸盐生物碱置换成无机酸盐生物碱，进而增加生物碱的溶解度；游离生物碱或其盐均可溶于甲醇、乙醇，可用醇回流加热提取或超声波醇提法；而且很多生物碱尤其是游离型生物碱都是亲脂性的，故可用CH3Cl、C6H6及CH2Cl2等有机溶剂加热回流提取游离生物碱。
提取得到的多是各生物碱的混合物，根据生物碱类别、碱性强弱、溶解度差异、生物碱特殊官能团等对生物碱混合物进行分离。
然后对分离出的单体进行检识。
%In this paper, the natural medicine extraction, separation and determination method of alkaloidsin a story, the alkaloids in natural medicine in the form of the salt and the free, so can choose inorganic acidwater extraction, so that the alkaloids organic acid salt replacement into inorganic acid salt, increasingsolubility; Free alkaloids or its salt soluble in methanol, ethanol, alcohol available heating reflux extraction or ultrasonic alcohol formulation; And most free alkaloids are lipophilic, also can use chloroform, benzene, ether and dichloromethane solvent free heating reflux extraction of alkaloids. Extraction is more is the mixture of alkaloids, according to the alkaloids category, basic strength,the difference of solubility, alkaloids special functional group on the alkaloid mixture separation. And then to isolate monomer for inspection.【总页数】5页(P462-466)【作者】刘琳【作者单位】哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心黑龙江哈尔滨150076【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.“一线两面三平台”实验教学模式在天然药物成分提取分离技术教学中的应用[J], 吴方评;杨勇;杨宏健;金苹2.HPLC分离化学发光检测药物中的马钱子碱、士的宁和麻黄类生物碱 [J], 朱龙3.大孔吸附树脂在天然药物有效成分提取分离中的应用进展 [J], 马盼香;金华;李雅玲4.分子印迹技术在天然药物有效成分提取分离中的应用 [J], 冯喜文;杜平;张利5.项目教学法在高职天然药物提取分离技术教学中的应用 [J], 李磊;于秋玲;赖菁华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
粉防己中粉防己碱和防己诺林碱.doc(精)
称取汉防已粗粉100g，置于500ml圆底烧瓶 中，加95%乙醇浸没药材（约需300ml）， 水浴上加热回流l小时后，过滤，滤液置于 锥形瓶中，药渣再用95%乙醇（约200ml） 同法提取2次．每次30分钟，合并3次滤液。 放冷后如有絮状物析出，再过滤一次，澄 清溶液浓缩至无醇味，成糖浆状，即得到 总生物碱。
4．粉防己碱和防己诺林碱的分离精 制
• 取上述粗脂溶性非酚性碱置于25ml锥形瓶 中，加5倍量的冷苯．密闭冷浸，时时振摇， l小时后．过滤，以少量苯洗涤苯不溶部分， 合并苯溶液，回收苯至无苯的臭味，残留 物以丙酮重结晶，得针状结晶，为粉防己 碱，再经数次重结晶至熔点恒定、薄层色 谱检识显示一个斑点为止。苯不溶物待挥 发去残留的苯后，也用丙酮重结晶，可得 粒状结晶，为防己诺林碱，再经数次重验产品（总碱或单体）少许，加10％ 盐酸1ml，振摇溶解，加蒸馏水3ml稀释，分别置于4支试 管中，分别加入下列四种生物碱沉淀试剂1～2滴，观察各 管产生的沉淀颜色和现象。 ①碘化铋钾试剂、②碘化汞钾试剂、③硅钨酸试剂、④苦味 酸试剂（试液应为中性） • （2）粉防已生物碱的薄层色谱检识 吸附剂 硅胶G-CMC-Na层析板（5cm×10cm） 供试品 实验产品（粉防己碱和防已诺林碱的0.l％醇溶液） 对照品 粉防已碱和防己诺林碱的0.1％醇溶液 展开剂 三氯甲烷-丙酮-甲醇（4∶5∶l）氨气饱和 显色剂 改良碘化铋钾（喷雾）
3．脂溶性叔胺碱中酚性和非酚性生 物碱的分离
• 三氯甲烷液置于1000ml分液漏斗中，先以1%氢氧化钠溶 液洗两次后，再用水洗2～3次，碱水液和水洗液合并，为 含酚性生物碱部分。三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，回收 三氯甲烷至干，抽松，立即加入10～15ml丙酮，充分溶 解抽松物，待完全溶解后用长滴管吸取瓶内液体，转移入 25ml小锥形瓶中．残留的不溶物质可再用丙酮2～3ml清 洗两次，洗涤液与丙酮溶液合并，再于此丙酮液中滴加适 量蒸馏水，使溶液呈现微浊状态，于冰箱中放置析晶，待 结晶完全之后过滤收集结晶，并用少许含水丙酮洗去结晶 表面粘附的母液，自然晾干即得粗脂溶性非酚性碱（含粉 防己碱和防己诺林碱的混合物）。
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实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定
1 实验目的
1.1生物碱的一般提取方法。
1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定
2 实验原理
2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。
基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。
常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。
2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。
因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。
一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。
由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。
如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。
许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。
因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。
3 实验材料
材料：汉防己
4实验步骤
4.1 生物碱的提取分离
4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离
100g
0.5%H2SO4液渗漉（注一）
倍量V/V）
pH9~10，静置，抽滤
（水溶性季铵碱及水溶性杂质）
将沉淀与静砂拌匀（注二）
80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至
提尽生物碱（注三）
回收乙醚（注四）
乙醚提取物
用95%乙醇40~60ml回流热溶后
倾入500ml水中，加30gNaCl盐析
水溶上加热至凝结，静置
抽滤
注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
注二：净砂必须事前洗净烘干，拌和量最好不要超过120g，以免索氏提取器一次装不下或装得过多。
提不尽生物碱。
注三：检查生物碱是否提尽的方法，是取最后一次乙醚提取液约数滴，挥去乙醚，残渣加5%HCl 0.5ml溶解后，加改良碘化铋钾试剂一滴，无沉淀折出或明显浑浊时，表明生物碱已提尽，或基本提尽。
反之，应继续提取。
注四：先将提取器内滤纸筒取出。
然后将提取玻筒内最后一次乙醚提取液倾出（另器贮存），再将提取玻筒安装好，继续加热，回收烧瓶中乙醚于玻筒中，至烧瓶内的乙醚提取液体积较小时，停止回收，将烧瓶中乙醚提取液倾出。
4.1.2 低压柱层析分离汉防已甲素和乙素
低压柱层析在低压下（0.5~3kg/cm2，一般0.3~1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100~200μm）和HPLC（~37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50~75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。
适宜和于天然产物的常量制备性分离。
装柱减压干法装法，层析柱规格：柱长30cm，内径2cm，共装硅胶约30g （高约22cm）。
拌样加样取汉防已碱约150mg，加少量丙酮热溶（刚溶为度）用滴管加到1.5g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2cm高的空白硅胶，再加盖一园形滤纸片，压紧。
洗脱先检查从空压机至层析柱各阀门管道是否正常，关紧各个阀门，开动空压机至额定压力（5.8kg/cm2）待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂（环已烷-惭酸乙酯-二乙胺/6：2：0.8），当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂（共约250ml），迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧（防加压时接头冲开），小心开启空压机阀门，再开针形阀和空气过滤减压器，（注意：压力过大。
玻璃柱会炸，一般2kg是安全的，必要时可戴防护面罩）调动所需压力，0.6~1.2kg/cm2，约40分钟后流出，控制流速1ml/分，每10分钟左右一管，收12~15份，洗脱全过程约3小时。
检查各流份分别移入小玻璃蒸发器中，于水浴上浓缩，分别通过TLC检查，吸附剂：硅胶G，展开剂：环已烷-乙酸乙酯-二乙胺/6：3：1，改良碘化铋钾试剂喷雾显色，以汉防已甲素、乙素为标准品对照，合并相同组分，分别获得甲、乙素粗品，用丙酮重结晶，测定mp。
4.2 鉴定方法
4.2.1 衍生物制备
取汉防已甲素0.2g，溶于2ml（丙酮中，滴加苦味酸饱和水溶液至不再折出黄色沉淀为止，抽滤收集沉淀，顺次以少量水乙醚洗涤，乙醇重结晶，得汉防已甲素苦味酸盐，mp 235~242℃（dc）。
4.2.2有机胺碱的TLC
吸附剂：青岛海洋化工厂薄层层析硅胶G，用0.3%CMC-Na水液制板，110℃
活化1小时。
样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、总碱③
展开剂：环己烷- EtoAc-NHEt2（6：2：1）
显色剂：改良碘化铋钾试剂（展开后用电吹风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰）
现象：甲素显色后呈淡棕色，2小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助其辨认。
5 实验结果及讨论
5.1实验结果
5.1.1提取物产率：制得提取物质量为0. 37g，计算产率，为0.74%。
薄层层析鉴定结果：点板时只在薄层板的中间出现一个点，Rf值为0.422。
5.1.2有机胺碱的TLC效果
5.2 讨论分析
在刚开始实验时加石灰乳的作用：既能达到碱溶解提取生物碱的目的，还可以除去汉防己粗粉中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沆淀），但pH不能过高和长时间煮沸，否则会降低产品收率。
过滤时，使用尼龙布过滤，速度会快一些，但是所得滤液仍会有少量沉淀，过滤效果不大理想。
使用布氏漏斗抽滤时，使用一层滤纸很容易穿透，使用两层滤纸则容易造成堵塞，过滤速度极慢，基本上都只能一滴一滴进行，过滤要持续两个小时，很浪费时问。
特别在重结晶后，溶液不能趁热过滤，有很多产品都在滤纸上析出，大大影响了产品收率。
产品过滤时的改进方法：在使用尼龙布过滤后，可再次用尼龙布冉过滤一次，减少固体杂质，再用布氏漏斗，用双层滤纸过滤，这样溶液就会减少很多杂质，过滤速度也会得到提高，最后产品的收率也会提升。