TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)
翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明书
罗氏 (Roche)公司 Tunel 试剂盒操作说明书(In situ cell death detection kit-POD法)一、原理：TUNEL （TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA 的断裂情况。
其原理是荧光素（ fluorescein）标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（ TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA 的3’-OH 末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与 HRP 底物二氨基联苯胺（DAB ）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 断裂，因而没有 3‘-OH 形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。
还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含：1 号（蓝盖） Enzyme Solution 酶溶液： TdT 10×、2号（紫盖） Label Solution 标记液：荧光素标记的 dUTP 1×、3号（棕瓶） Converter-POD:标记荧光素抗体的 HRP；自备试剂： PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB 工作液（临用前配制， 5 μl 20 ×DAB+1 μL 30%H2O2+94 μl PBS）、Proteinase K工作液（ 10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl ，pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 溶于 0.1% 柠檬酸钠，临用前配制）、苏木素或甲基绿、 DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl ，pH 7.5， 10 mM MgCl2 ，1 mg/ml BSA ）等。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒显色法-碧云天
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是本试剂盒通过TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
TUNEL法检测细胞凋亡
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
基因组DNA 断裂时，暴露的3'-0H 可以在末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal Deox yn ucleotidyl Tran sferase,TdT）的催化下加上荧光素（FITC）标记的dUTP（fluorescein-dUTP），从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL 法检测细胞凋亡的原理。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂（和细胞凋亡时的断裂方式不同）。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
针对问题2（TUNEL法的实验原理是什么？）：基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让rTDT和bio标记的dUTP进入细胞内，在rTDT的辅助下dUTP与核断裂的DNA 3 -0H结合，再用HRP标记的链霉亲和素与dUTP 上的biot in 结合（每个链霉亲和素至少可以再结合3个biot in 分子），最后用DAB过氧化氢与SP上的辣根过氧化物酶HRP发生氧化、环化反应，形成苯乙肼聚合物而呈现棕褐色，最终通过计数每张切片上不同视野中TUNEL阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。
■1. TUNEL工作原理：简单说就是一一TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是；生物素（biot in ）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT En zyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3' - 0H末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP ）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-0H形成，很少能够被染色。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)说明书
TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品编号 产品名称包装 C1098TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)50次产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB 显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA 。
细胞凋亡时抽提DNA 进行电泳检测，可以发现180-200bp 的DNA ladder 。
基因组DNA 断裂时，暴露的3'-OH 可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP 的催化下通过DAB 显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA 断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性好：TUNEL 检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
(5) 实测效果好：参考图1。
图1. 本试剂盒的检测效果图。
A. HeLa 细胞未处理或用DNase I 室温孵育10分钟后的检测效果图。
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤精
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤精TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling）细胞凋亡试剂盒是一种常用的检测细胞凋亡的方法。
本文将介绍TUNEL细胞凋亡试剂盒的内容及操作步骤。
1.引物溶液：含有dUTP（脱氧尿苷三磷酸）的荧光标记的核苷酸。
2.终止缓冲液：用于停止反应和洗涤。
3. TUNEL酶溶液：含有DNA连接酶（terminal deoxynucleotidyl transferase），用于在DNA断裂的末端添加dUTP标记。
4.正对照组：包括经过DNA内切酶处理的组织切片或细胞，用于确定试剂盒的反应情况。
步骤一：取材将需要检测的组织切片或细胞标本取出，放入离心管或培养皿中。
步骤二：固定用4%的冷乙醇或4%的帕拉醛对组织切片或细胞标本进行固定，固定时间为10-30分钟。
步骤三：洗涤用PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤固定的样本3次，每次洗涤5分钟。
步骤四：蛋白酶消化对组织切片或细胞标本进行蛋白酶消化，以去除背景蛋白质干扰。
消化时间和消化酶的浓度需要根据实验条件进行优化。
步骤五：洗涤用PBS洗涤样本3次，每次洗涤5分钟。
步骤六：加入TUNEL酶溶液将TUNEL酶溶液滴加到样本上，保持湿润。
反应时间为1-2小时，可以根据实验需要进行优化。
步骤七：终止反应加入终止液停止反应，并用PBS洗涤样本3次，每次洗涤5分钟。
步骤八：显微镜观察将样本用荧光或显色试剂染色，然后用荧光显微镜或普通显微镜观察，并拍摄照片。
步骤九：分析数据使用图像分析软件对显微镜拍摄的照片进行图像分析，在感兴趣区域计算标记的细胞数量，并计算相对细胞凋亡率。
值得注意的是，在进行TUNEL细胞凋亡试剂盒检测时，需要根据实验需要进行优化，如反应时间、荧光染色时间、荧光强度测量等。
此外，为了准确地判断细胞中的凋亡现象，可以与其他细胞凋亡指标一起使用，如Annexin V染色、Caspase活性检测等。
翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明书
罗氏 (Roche)公司 Tunel 试剂盒操作说明书(In situ cell death detection kit-POD法)一、原理：TUNEL （TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA 的断裂情况。
其原理是荧光素（ fluorescein）标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（ TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA 的3’-OH 末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与 HRP 底物二氨基联苯胺（DAB ）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 断裂，因而没有 3‘-OH 形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。
还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含：1 号（蓝盖） Enzyme Solution 酶溶液： TdT 10×、2号（紫盖） Label Solution 标记液：荧光素标记的 dUTP 1×、3号（棕瓶） Converter-POD:标记荧光素抗体的 HRP；自备试剂： PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB 工作液（临用前配制， 5 μl 20 ×DAB+1 μL 30%H2O2+94 μl PBS）、Proteinase K工作液（ 10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl ，pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 溶于 0.1% 柠檬酸钠，临用前配制）、苏木素或甲基绿、 DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl ，pH 7.5， 10 mM MgCl2 ，1 mg/ml BSA ）等。
翻译好的 罗氏公司Tunel试剂盒操作说明书
罗氏(Roche)公司Tunel试剂盒操作说明书(In situ cell death detection kit-POD法)一、原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。
还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含：1号（蓝盖）Enzyme Solution 酶溶液：TdT 10×、2号（紫盖）Label Solution标记液：荧光素标记的dUTP 1×、3号（棕瓶）Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5 μl 20×DAB+1μL 30%H2O2+94 μl PBS）、Proteinase K工作液（10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl，pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 溶于0.1% 柠檬酸钠，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase 1（3000 U/ml–3 U/ml in 50 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl2，1 mg/ml BSA）等。
TUNEL染色
相关疾病：•脱水产品名称：罗氏(Roche)公司Tunel试剂盒英文名称：Tunel产品货号：11684817910产品规格：50T试剂级别：试剂级产品产地：USA产品商标：RocheIn situ cell death detection kit-POD法一、原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。
还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含TdT 10×、荧光素标记的dUTP 1×、标记荧光素抗体的HRP；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5 μl 20×DAB+1μL 30%H2O2+94 μl PBS）、Proteinase K工作液（10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl，pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium citrate，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl2，1 mg/ml BSA）等。
TUNEL法检测细胞凋亡
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
基因组DNA断裂时，暴露的3・OH可以在末端脱氧核昔酸转移酶（Terminal DeoxynucleotidylTra nsfe「sse,TdT）的催化下加上荧光素（FITC）标记的dUTP（fluorescein-dUTP）?从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL法检测细胞凋亡的原理。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂（和细胞凋亡时的断裂方式不同）。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
针对问题2 （TUNEL法的实验原理是什么？）:基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让rTDT和bio标记的dUTP 进入细胞内，在rTDT的辅助下dUTP与核断裂的DNA 3'-0H结合，再用HRP标记的链霉亲和素与dUTP上的biotin结合（每个链霉亲和素至少可以再结合3个biotin分子），最后用DAB、过氧化氢与SP±的辣根过氧化物酶HRP发生氧化、环化反应，形成苯乙腓聚合物而呈现棕褐色，最终通过计数每张切片上不同视野中TUNEL阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。
1 .TUNEL工作原理：简单说就是一TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是；生物素（biotin）标记的dUTP在脫氧核糖核昔酸末端转移酶（TdT............................................... 最新资料推■»WBB W MBM* «W aMMM ■*■■»«W OMHV a^HBV MMM «■■■* W«MHMM W埜乂sy “=*=〜=”•* ”s=sEnzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3*-0H 末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin. HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-0H形成，很少能够被染色。
TUNEL法检测细胞凋亡
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL 法检测细胞凋亡的原理。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
针对问题2（TUNEL法的实验原理是什么？）：基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让rTDT和bio标记的dUTP进入细胞内，在rTDT的辅助下dUTP与核断裂的DNA 3’-OH结合，再用HRP标记的链霉亲和素与dUTP上的biotin结合（每个链霉亲和素至少可以再结合3个biotin分子），最后用DAB、过氧化氢与SP上的辣根过氧化物酶HRP发生氧化、环化反应，形成苯乙肼聚合物而呈现棕褐色，最终通过计数每张切片上不同视野中TUNEL阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。
1.TUNEL工作原理：简单说就是——TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是；生物素（biotin）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3'－OH末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。
罗氏TUNEL使用说明书(中文)
罗氏公司TUNEL细胞凋亡检测程序（In situ cell death detection kit-POD法）一、原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。
还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含TdT 10×、荧光素标记的dUTP 1×、标记荧光素抗体的HRP；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70％）、DAB工作液（临用前配制，5 µl 20×DAB＋1μL30％H2O2＋94 µl PBS）、Proteinase K工作液（10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl, pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium citrate，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl，pH 7.5, 10 mM MgCl2，1 mg/ml BSA）等。
TUNE L法检测细胞凋亡
TUNE L法检测细胞凋亡1 原理TUNEL〔terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling, 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法〕是通过检测细胞凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况来评价细胞凋亡的有效方法。
细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程，染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。
然后大约30﹪的染色体DNA 在Ca ²和Mg²依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180～200bp核小体式DNA片段〔核小体式剪切〕。
由于DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口即可产生一系列DNA的3’-OH末端。
增加细胞膜通透性→脱氧核糖核苷酸末端转移酶〔TdT Enzyme〕和荧光素〔fluorescein〕标记的dUTP进入细胞内→在TdT的辅助下dUTP与凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端结合→再用辣根过氧化酶(HRP)标记的抗荧光素抗体与dTUT上的荧光素〔fluorescein〕特异结合〔荧光显微镜观察〕→最后用辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺〔DAB〕、过氧化氢与HRP发生氧化、环化反响，形成苯乙肼聚合物而呈现棕褐色→特异准确地定位正在凋亡的细胞→普通显微镜下观察和计数不同视野中TUNEL阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。
由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。
适用于组织样本〔石蜡包埋、冰冻和超薄切片〕和细胞样本〔细胞爬片、涂片〕的凋亡原位检测。
还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
2 器材与试剂2.1器材：光学显微镜及其成像系统、染色缸、湿盒、各种规格的加样器及枪头、镊子、24孔或6孔板、盖玻片、载玻片、1.5mleppendorf管、平皿、吸管、锡纸、摇床、计时表、荧光显微镜、光镜、MARKER笔、冰盒、恒温箱、加湿器、塑料缸、微波炉等。
TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒AP显色系统
Human atrial natriuretic factor,ANF ELISA Kit人心纳素(ANF)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒AP显色系统
Human Stromelysin-1,ST1 ELISA Kit人基质裂解素(ST1)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Stromelysin-2,ST2 ELISA Kit人基质裂解素(ST2)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin E,FcεRⅠ ELISA Kit人免疫球蛋白E Fc段受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅢ ELISA Kit人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Eotaxin 2/CCL24 ELISA Kit人嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)ELISA Kit96TELISA试剂盒
Human lymphocyte function associated antigen 1,LFA-1 ELISA Kit人淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1/CD11a+CD18)ELISA Kit96TELISA试剂盒
QIA33+TUNEL显色法细胞凋亡检测试剂盒使用说明书_Merck
1. 将玻片浸没于二甲苯中，室温处理5分钟。
再用新鲜二甲苯重复孵育5分钟。
2. 将玻片浸没于100％乙醇中，室温5分钟。
再用新鲜100％乙醇重复孵育5分钟。
3. 90％乙醇，室温浸泡3分钟。
4. 80％乙醇，室温浸泡3分钟。
5. 70％乙醇，室温浸泡3分钟。
6. 1×TBS缓冲液清洗切片，小心干燥样品周围的玻片部分。
• 为使环绕样品的反应体系减小，可以使用蜡笔或疏水标记笔环绕样品画圈。
• 过程中请避免组织样品干燥！（可以用1×TBS 覆盖在样品上）Calbiochem ®FragEL™ DNA Fragmentation Detection Kit, Colorimetric-TdT Enzyme 目录货号QIA33检测检测原理原理原理：：通过DNA 片段末端标记（Fragment End Labeling, FragEL TM）检测凋亡细胞的DNA 片段。
细胞凋亡中, 染色体DNA 双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH 末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将生物素标记和未标记的脱氧核糖核苷酸标记到DNA 的3'-末端，生物素标记的脱氧核糖核酸可以通过Streptavidin-HRP 进行检测，通过DAB 显色，从而检测到凋亡细胞DNA 片段。
由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA 的断裂，因而没有3'-OH 形成，很少能够被染色。
以甲基绿复染，便于从形态学上分辨评估正常细胞和凋亡细胞。
一 石蜡包埋石蜡包埋组织组织组织切片切片切片实验实验实验流程流程流程（1）脱蜡和水合脱蜡和水合（2）样品透性品透性处处理1.以10mM Tris，pH 8.0 缓冲液按1：100 稀释2mg/ml 蛋白酶K（每个样品取1ul 蛋白酶K 加入到99ulTris 缓冲液中）。
2.以100ul 20ug/ml 蛋白酶K 完全覆盖组织样品。
TUNEL联合免疫组化方法
TUNEL联合免疫组化的实验步骤一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)1、常规程序制备石蜡组织块和5 wm厚石蜡组织切片。
2、然后按照TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒的标准步骤进行TUNEL染色。
对于石蜡切片：a. 二甲苯中脱蜡5-10分钟。
换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。
b. 滴加20µg/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分钟(不同组织的最佳作用温度和时间需自行摸索)。
c. 用PBS或HBSS洗涤3次。
注意：这一步必须把蛋白酶K洗涤干净，否则会严重干扰后续的标记反应。
d. 在用PBS配制的3%过氧化氢溶液(3% H2O2 in PBS)中室温孵育10分钟，以灭活切片内源的过氧化物酶。
随后用PBS或HBSS洗涤3次。
注：请勿在用PBS配制的3%过氧化氢溶液中孵育过长时间，否则会出现过氧化氢导致的DNA断裂，从而产生假阳性。
e. 配制生物素标记液：参考下表配制适量的生物素标记液，需充分混匀。
注意：配制好的生物素标记液必须一次使用完毕，不宜冻存。
f. 样品的生物素标记：1. 在样品上加50µl 生物素标记液，37℃孵育60分钟。
注意：孵育时需注意在周围用浸足水的纸或药棉等保持湿润，以尽量减少生物素标记液的蒸发。
2. 用PBS或HBSS洗涤1次，滴加0.1-0.3ml标记反应终止液，室温孵育10分钟。
3. 用PBS或HBSS洗涤3次。
g. Streptavidin-HRP工作液和DAB显色液的配制： a. Streptavidin-HRP工作液的配制：参考下表配制适量的Streptavidin-HRP工作液，需充分混匀。
注意：配制好的Streptavidin-HRP 工作液必须一次使用完毕，不宜冻存。
h. DAB显色液的配制：按照每个样品使用0.2-0.5ml显色液的比例配制适量DAB显色液。
PH1731 TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒显色法
C. 对于石蜡切片： a. 脱蜡，组织切片置于 60℃恒温箱，烤片 30-60min，浸入装有新鲜二甲苯的染色缸，室温放置 15min。浸入另一个装有新鲜二甲苯的染 色缸，重复一次。 b. 洗涤，组织切片浸入 100%乙醇染色缸，室温放置 10min。浸入另一个 100%乙醇染色缸，重复一次。 c. 水化，组织切片浸入梯度浓度乙醇溶液（90%，80%，70%，50%），室温下每步放置 3min。 d. 组织切片浸入 PBS，室温放置 5min。 e. 组织切片用柠檬酸缓冲液（PH=6.2）进行中火修复 5min。（对于有些组织可以用 1xProteinase K 进行通透，即每个组织滴加 50μl 用 PBS 稀释的 1×Proteinase K，室温静置 15-30min，具体通透时间因组织而异，需要自行摸索） 表 1. 准备用于通透的 1×Proteinase K 缓冲液 1×Proteinase K 50×Proteinase K PBS 50ul 反应中所需体积 5ul 45ul 反应数 × × = = 总体积
PH1731 | TUNEL 细胞凋亡原位检测试剂盒 （显色法） TUNEL Apoptosis Detection Kit Ver2.0
Catalog No：PH1731 Size： 20T | 50T Store at -20℃
简介
细胞在发生凋亡时，会激活一些 DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组 DNA。细胞凋亡时抽提 DNA 进行电泳检测，可以发 现 180-200bp 的 DNA ladder。 基因组 DNA 断裂时， 暴露的 3'-OH 可以在末端脱氧核苷酸转移酶 （Terminal Deoxynucleotidyl Transferase， TdT）的催化下加上绿色荧光探针 FITC 标记的 dUTP，之后经过 POD 转换试剂将信号转化成显色反应，方便结果的分析与保存。Tunel 细胞凋亡检测试剂盒不依赖生物素系统进行末端标记，避免了内源性生物素产生的高背景等问题。
TUNEL 法测凋亡操作步骤
TUNEL 法测凋亡操作步骤一、TUNEL检测原理TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是采用非同位素方法来检测细胞在凋亡过程中DNA 的断裂情况，可在原位快速准确地检测单个凋亡细胞。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。
其原理是细胞凋亡发生时，内源性核酸酶激活，使DNA的双链断裂或一条链出现缺口，产生一系列3’-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）作用下，组织细胞原位DNA切口可被标记上生物素-dUTP，即TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl TransferaseBiotin-dUTP Nick End Labeling），可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，显示为棕色（过氧化物酶活性），特异准确地定位正在凋亡的细胞，在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正的或正在增殖的细胞几乎没有DNA 的断裂，因而没有3'-OH 形成，很少能够被染色。
二、试剂盒组份组份10 assays25 assays 储存条件A：Equilibration Buffer 1.0 mL 2.5 mL -20 ℃B：Biotinylated Nucleotide Mix 10 μL 25 μL -20 ℃C：TdT Enzyme 10 μL 25 μL -20 ℃D：500×Proteinase K 10 μL 25 μL -20 ℃20×SSC 15 mL 38mL 4 ℃E：Streptavidin-HRP 10 μL 25 μL 4 ℃F：20×DAB Substrate Buffer 50 μL 125 μL 4 ℃G：20×DAB Chromogen 50 μL 125 μL 4 ℃H：20×Hydrogen Peroxide 50 μL 125 μL4 ℃三、操作流程1.操作流程概览2.细胞样本制备准备：● PBS：8.0g NaCl， 0.2 g KCl， 1.44g Na2HPO4，0.24g KH2PO4，溶于800ml去离子水中，HCl调pH至7.4，加水定容至1L。
TUNEL染色方法
U /100µl
1000 U-2000 U 2000 U-3000 U 3000 U-5000 U
DNaseⅠ(50 U/µl) 用量
20μl-40μl
40μl-60μl
60μl-100μl
DNaseⅠBuffer 用量
80μl-60μl
60μl-40μl
40μl-0μl
9. 在一张样本上滴加 100µl 上述配制好的 DNaseⅠ反应液，室温～37℃处理 10～30min，
Streptavidin-HRP，即用即配，注意避光；
15. 样本周围用吸水纸吸干，每个样本上滴加 50µl Streptavidin-HRP 工作液，加盖玻片放入温盒中，37℃
避光反应 30min；
16. 反应后的样本片浸入 1×PBS 漂洗三次，每次 5min;
17. 配制 DAB 工作液: 计算好样本数量集中配制， 每个样本样本用量为：50 µl dH2O 加入 2.5µl DAB -A
一、TUNEL 检测原理
凯基快速型 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核 DNA 的断裂情况， 其原理是生物 素（Biotin）标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA 的 3′-OH 末端，并可与连接辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨 基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微 镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 的断裂，因而没有 3′-OH 形成，很少能 够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片或爬片）的凋亡原位检 测。
TUNEL原位凋亡检测试剂盒
Va明书
Version 3.2
目 录 Catalog
１／产品概要
背景介绍 细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在生物体进化、内环境的稳定以及系统发育中发挥 着重要的作用。凋亡细胞在形态和生理生化方面会发生一些特征性的改变，比如细胞皱缩， 细胞间连接消失，线粒体膜电位消失，通透性改变，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA降解 成为约180 bp-200 bp的片段；胞膜有小泡状突起，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面，胞 膜结构仍保持完整，最终凋亡细胞遗骸被分割包裹为几个凋亡小体，并迅速被周围专职或非 专职吞噬细胞吞噬。以上改变发生在不同的细胞凋亡阶段。 细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体DNA的降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非 常特异并有规律，所产生的不同长度的DNA片段约为180 bp-200 bp的整倍数，而这正好是 缠绕组蛋白DNA的长度，提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断，产 生不同长度的寡聚核小体片段。实验表明，这种DNA的有控降解是一种内源性核酸内切酶 作用的结果，该酶在核小体连接部位切断染色体DNA，表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异 的梯状Ladder图谱，而坏死细胞的DNA呈弥漫的连续图谱。 检测原理 本试剂盒采用TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)法，应用末端脱氧核糖核苷 酸转移酶 (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)在凋亡细胞断裂的DNA的3´-羟基 (3´-OH)末端催化掺入荧光素-12-脱氧三磷酸尿苷 (FITC-12-dUTP)。FITC-12-dUTP标记的 DNA可 以 用 荧 光 显 微 镜 直 接 观 察 或 者 用 流 式 细 胞 仪 定 量 。 试 剂 盒 中 的 BrightGreen Labeling Mix包含FITC-12-dUTP以及专利的Bright因子。这种独特的小分子化合物可非共 价的与FITC结合，增强其稳定性，并使其信号放大，从而使得标记物更亮，抗淬灭能力更 强。
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤一、试剂盒内容2.终止缓冲液：用于停止DNA链的合成反应，防止假阳性结果的产生。
3.蛋白酶K：用于溶解细胞质膜和核膜，使DNA暴露出来。
4.异硫氰酸荧光素（FITC）标记转移酶：用于检测dUTP与DNA标记的连接。
5.正控组织切片或细胞悬液：用于检验试剂盒的敏感性和特异性。
二、操作步骤1.细胞处理将要测试的细胞分成实验组和对照组，分别处理。
实验组是要测试凋亡的细胞，对照组是不会凋亡的细胞。
2.固定细胞用4%的乙醛或无氧乙醛等适当浓度的固定液固定细胞。
涂片上的细胞需要进行细胞穿孔，可以使用0.1%的Triton X-100进行细胞穿孔。
3.蛋白酶K消化将蛋白酶K溶解在PBS缓冲液中，加入溶液中胶原酶和蛋白酶蚀解，接着加入盛有细胞的离心管中。
将离心管放入37℃恒温水浴中，反应20-30分钟。
4.清洗细胞用PBS缓冲液洗涤细胞3次。
每次用PBS缓冲液冲洗细胞5分钟。
5.脱水将细胞离心，抽去PBS缓冲液，然后使用3%的过氧化氢来进行脱水。
6.TUNEL染色将细胞加入等量的TUNEL试剂液，轻轻混合后，将离心管放入37℃恒温水浴中，反应30-60分钟。
7.洗涤细胞用PBS缓冲液洗涤细胞3次。
每次用PBS缓冲液冲洗细胞5分钟。
8.反应终止使用终止缓冲液反应终止DNA链合成反应，将离心管放入室温中静置10分钟。
9.洗涤细胞用PBS缓冲液洗涤细胞3次。
每次用PBS缓冲液冲洗细胞5分钟。
10.展片与观察将细胞滴在载玻片上，并加入封片缓冲液。
在载玻片上覆盖盖玻片，用显微镜观察。
通过上述步骤，可以使用TUNEL细胞凋亡试剂盒对细胞进行凋亡分析。
该试剂盒可根据DNA末端的3'-OH羟基与终止缓冲液中标记的dUTP之间的连接，用显微镜观察细胞内是否存在凋亡现象。
荧光标记的dUTP可通过荧光显微镜直接观察，而酶标记的dUTP则需要加入相应的底物，通过酶的催化反应后可通过光学密度法或荧光显微镜来定量测定。
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说明书
包装 40µl 960µl 500µl 22µl 1ml 6ml 6ml 6ml 1份
保存条件：
-20℃保存。DAB显色液A和DAB显色液B需避光保存。
注意事项：
¾ 需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)等适当的封片液，用于固定的4%多聚甲醛或 向碧云天订购免疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.1% Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106)。 需自备过氧化氢，除石蜡切片外需自备甲醇。
止显色，如果显色很弱，可以适当延长显色时间，甚至显色过夜。 d. 用PBS或HBSS洗涤3次。 e. 选做(本步骤可不做)：用苏木素染色液(C0107)或甲基绿染色液(C0115)进行细胞核染色。随后用PBS或HBSS洗涤3
次。 f. 直接进行观察，或用95%乙醇脱水5分钟，再用100%乙醇脱水2次，每次约3分钟，再用甲苯透明2次，每次5分钟，随
¾ 本试剂盒有如下优点。(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到 早期的细胞凋亡。(2) 特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。(3) 快速：仅需约2-3 个小时即可完成。 (4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮 细胞的凋亡情况。
后封片观察。染色结果可参考下图：
小鼠卵巢切片TUNEL检测DAB显色结果 棕色为TUNEL染色阳性的凋亡细胞，蓝色为被苏木素染色的细胞核。
常见问题：
1. 出现非特异性显色。 a. 有些细胞或组织，例如平滑肌细胞或组织，nuclease或polymerase的酶活性水平较高，易导致出现非特异性的显色。 解决方法是，取细胞或组织后立即固定并且要充分固定，以阻止这些酶导致假阳性。 b. 使用了不适当的固定液，例如一些酸性固定液，导致出现假阳性。建议采用推荐的固定液。 c. TUNEL检测反应时间过长，或TUNEL检测反应过程中反应液渗漏，细胞或组织表面不能保持湿润，也可能出现非特 异性染色。注意控制反应时间，并确保TUNEL检测反应液能很好地覆盖样品。
5. 配制生物素标记液： 参考下表配制适量的生物素标记液，需充分混匀。注意：配制好的生物素标记液必须一次使用完毕，不宜冻存。
1个样品
5个样品
10个样品
TdT酶
2µl
10µl
20µl
Biotin-dUTP
48µl
240µl
480µl
生物素标记液
50µl
250µl
500µl
6. 样品的生物素标记：
a. 在样品上加50µl 生物素标记液，37℃孵育60分钟。注意：孵育时需注意在周围用浸足水的纸或药棉等保持湿润，以
尽量减少生物素标记液的蒸发。
b. 用PBS或HBSS洗涤1次，滴加0.1-0.3ml标记反应终止液，室温孵育10分钟。 c. 用PBS或HBSS洗涤3次。 7. Streptavidin-HRP工作液和DAB显色液的配制： a. Streptavidin-HRP工作液的配制：
参考下表配制适量的Streptavidin-HRP工作液，需充分混匀。注意：配制好的Streptavidin-HRP工作液必须一次使用完 毕，不宜冻存。
HBSS洗涤3次。注：请勿在用PBS配制的3%过氧化氢溶液中孵育过长时间，否则会出现过氧化氢导致的DNA断裂， 从而产生假阳性。
e. 转步骤5。
4. 对于冷冻切片： a. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。 b. 用PBS或HBSS洗涤2次，每次10分钟。 c. 加入含0.1％ Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。 d. 在用甲醇配制的0.3%过氧化氢溶液(0.3% H2O2 in Methanol)中室温孵育20分钟，以灭活切片内源的过氧化物酶。随后 用PBS或HBSS洗涤3次。 e. 转步骤5。
1个样品
5个样品
10个样品
Streptavidin-HRP
1µl
5µl
10µl
Streptavidin-HRP稀释液
49µlLeabharlann 245µl490µl
Streptavidin-HRP工作液
50µl
250µl
500µl
b. DAB显色液的配制： 按照每个样品使用0.2-0.5ml显色液的比例配制适量DAB显色液。等体积混合适量DAB显色液A和DAB显色液B，充 分混匀后即为DAB显色液。注意：配制好的DAB显色液必须一次使用完毕，不宜冻存。
d. 用PBS或HBSS洗涤1次。 e. 加入含0.1％ Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。 f. 用PBS或HBSS洗涤1次。 g. 在用甲醇配制的0.3%过氧化氢溶液(0.3% H2O2 in Methanol)中室温孵育20分钟，以灭活切片内源的过氧化物酶。随后
¾ 本试剂盒足够检测20个样品。
包装清单：
产品编号 C1091-1 C1091-2 C1091-3 C1091-4 C1091-5 C1091-6 C1091-7 C1091-8
—
产品名称 TdT酶
Biotin-dUTP TdT酶稀释液(选用)
Streptavidin-HRP Streptavidin-HRP稀释液
¾ 如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 对于贴壁细胞或细胞涂片： a. 用PBS或HBSS洗涤1次。 b. 如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。 c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
2. 染色背景很高。 a. 支原体污染。请使用支原体染色检测试剂盒检测是否为支原体污染。支原体染色检测试剂盒(C0296)可以向碧云天订 购。 b. 高速分裂和增殖的细胞，有时也会出现细胞核中的DNA断裂。 c. TUNEL反应过强。可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液稀释TdT酶2-5倍后再按照说明书操作。稀释后的TdT酶需当日 使用。 d. 细胞内的过氧化物酶灭活不充分会导致很多细胞呈现阳性染色，改进过氧化物酶的灭活方法，例如延长灭活时间等 会有所帮助。 e. 所使用的溶液有DNA酶污染。DNA酶污染导致的随即切割会导致产生一定的背景并干扰检测。把溶液高压灭菌可以 有效灭活各种常见DNA酶。
用PBS或HBSS洗涤3次。 h. 转步骤5。 3. 对于石蜡切片：
a. 二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟。90%乙醇2分钟。70%乙醇2分钟，蒸
馏水2分钟。
b. 滴加20µg/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分钟(不同组织的最佳作用温度和时间需自行摸索)。 c. 用PBS或HBSS洗涤3次。注意：这一步必须把蛋白酶K洗涤干净，否则会严重干扰后续的标记反应。 d. 在用PBS配制的3%过氧化氢溶液(3% H2O2 in PBS)中室温孵育10分钟，以灭活切片内源的过氧化物酶。随后用PBS或
TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)
产品编号 C1091
产品名称 TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)
包装 20次
产品简介：
¾ 碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速 简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学 显微镜下观察到凋亡细胞。
8. 样品的DAB显色： a. 在样品上加50µl Streptavidin-HRP工作液，室温孵育30分钟。注意：孵育时需注意在周围用浸足水的纸或药棉等保持
湿润，以尽量减少Streptavidin-HRP工作液的蒸发。 b. 用PBS或HBSS洗涤3次。 c. 滴加0.2-0.5mlDAB显色液，室温孵育5-30分钟或根据显色情况孵育适当时间。注：如果显色很强可以短于5分钟即停
¾ 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳 检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标 记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显 微镜检测到凋亡的细胞，这就是本试剂盒通过TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
3. 标记效率低。 a. 使用乙醇或甲醇固定会导致标记的效率较低。 b. 固定时间过长，导致交联程度过高。此时宜减少固定时间。
¾ TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不 同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
¾ 极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需 要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。
用PBS或HBSS洗涤3次。 h. 转步骤5。 2. 对于悬浮细胞或细胞悬液： a. 收集细胞(不超过200万细胞)，用PBS或HBSS洗涤1次。 b. 涂片，使细胞粘附在载玻片上。可以干燥样品使细胞贴得更牢，或使用适当的粘附试剂。 c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。 d. 用PBS或HBSS洗涤1次。 e. 用含0.1％ Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。 f. 用PBS或HBSS洗涤1次。 g. 在用甲醇配制的0.3%过氧化氢溶液(0.3% H2O2 in Methanol)中室温孵育20分钟，以灭活切片内源的过氧化物酶。随后