小鼠空肠缺血再灌注损伤后新生淋巴管内皮细胞的超微结构特征
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＊［ 金 项 目］ 日本文部省科学研究基金 （ 基 课题号 ：６９１７ １５０４ ） ［ 者 单 位 ］ 山东省 中医药高等专 科学校解 剖生理教 研室 ， 作 邮政
编码 烟 台 ２ ４ ０ ６１０
两组 小 鼠分 别于 缺 血再 灌术 后 即刻 （ ｈ 、 ｈ １ Ｏ ） ８ 、 天、 天 、 ３ ７天 （ 每次 ２只 ） 用苯 巴比妥 钠 （ ０ｒｇ ｋ ） ５ ／ ｇ ａ 深麻 醉后 ， ４ 甲醛一 酸缓 冲液 （ Ｈ ７ ４ 经 心 脏 用 磷 ｐ ． ） 灌流 固定致 死 ， 速 打 开 腹 腔 ， 取 缺血 再 灌 注 空 迅 摘 肠 ， 部分行 石蜡 包埋用 于免 疫组化染 色光镜 观察 ； 一 另一 部分 被切 成 小 块 （ ｍｍ。 ， １ ） 采用 常 规 戊 二醛 一 锇
酸双重 固定 ， 乙醇逐 级脱 水 ， ｐ ｎ８ ２包埋 ， 后超 Ｅ ｏ １ 最
薄切 片（ ０ ｍ） 醋酸铀 和柠檬 酸铅 染色 后 ， Ｊ Ｍ－ ５ｎ ， 在 Ｅ
１ ０ （Ｅ ，Ｔ ｋ ｏ Ｔ Ｍ 下 观 察 。 ２ ０ Ｊ ０Ｌ ｏ ｙ ） Ｅ
１ ４ 免 疫 组 织 化 学 染 色 ．
石蜡 切 片脱蜡后 ， １ １ 的 ０ ０ Ｍ 柠檬 酸缓 在 ２℃ ．１
冲液 （ Ｈ ６ ０ 中复 活抗 原 １ ｒｉ 进行 染 色 。先 ｐ ． ） ５ ｎ后 ａ
行 ０ ３ 双 氧水 灭 活 内源 性 过 氧化 酶 ， 与 增 殖 细 ． 再 胞 核抗原 （ Ｃ Ｐ ＮＡ） 的抗体 反 应 （ ℃） ４ ，然 后 与过 ４ ２ｈ
循循讲学 杂 ，０ ０ ２ （ ）¨ ～ １ ，５ 志 ２ １ ，０ ４ ： ２ １
◎ ２ １ Ｃ Ｎ ＥＪ ＲＮ Ｃ ＣＩ Ｃ ＡＴ Ｏ ０ ０ ＨＩ ＥＳ ＯＵ ＡＬＯＦ ＭＩＲＯ Ｒ ＵＬ Ｉ Ｎ
小 鼠空肠 缺 血 再灌 注 损 伤后 新 生 淋 巴管 内皮细 胞 的超 微 结构 特 征 ＊
５ｇ Ｏ 。随机分 为实验 组 和对照组 各 １ Ｏ只 。两组 小
鼠均 在标 准实验 室饲养 ， 按标 准给水 、 饮食 和光照 。 １２ 小肠 缺血再 灌注模 型制作 ．
实验小 鼠用 混 合 麻 醉 剂 （ ｔｍｉｅ ５ ｍｇ ｋ ； Ｋｅａ ｎ ０ ／ ｇ
Ｘ ｌｚ ｅ４ ｍｇ ｋ ） 麻醉后 ， ｙａｉ ０ ／ ｇ 深 ｎ 在上 腹部 正 中线 打 开 腹腔 ， 暴露空 肠 （ ～８ ｍ） 将 此 段 肠 管 的 两端 以及 ５ ｃ ，
血再 灌 注 。 １３ 小 肠 组 织 取 样 及 ＴＥ 观 察 ． Ｍ
伤等 。小肠 缺血 再 灌 注损 伤 常见 于消 化道 扭 转 ＿ 、 １ ］
小肠移 植＿ 及 心脏 外 科 手 术。 。有 报告 指 出 ， ２ 。 ］ 缺血 再灌 注损伤后 小肠 黏膜 的再生可 以迅速 恢复 黏膜 的
氧 化酶连 接 的二 级抗 体 反应 ， ＤＡＢ着 色 ； 后在 ９ 随 ５
管再生 过程及 新生 淋 巴管 内皮细 胞主要 的超微 结构
特点 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 实 验动物 与分组 ．
成年 Ｂ Ｂ ｃ 小 鼠 ，Ｏ只 ， ＡＬ ／Ｎ ２ 雌雄 不拘 ， 重 ４ 体 ０
～
毛的 中心 淋 巴管 吸收 。在 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 态结 构 方 面 ， 细淋 巴 毛
管 与有着 完整基 膜 以及 周 细胞 的毛 细血 管 相 比 ， 有 其 独立 的特征 ： 始部 为盲端 ， 起 管壁 由单层 内皮 细胞 构成， 有瓣 膜 ， 没有 完整 的基膜 ， 管腔 内没有 红细胞 ， 内皮 细胞 相互覆盖 ， 形成 向管 腔 内开 放 的单 向活瓣 。
防御功 能 ， 止 细 菌入 侵 ］ 防 。小肠 黏 膜 的血 管 和
淋 巴管再 生更是 这个 过程 中的重要 组成部 分 。关 ］ 于新生淋 巴管 内皮 细胞 的来 源一直 存在争 议 。一部 分学者认 为新生 淋 巴管 内皮 细胞来 自周 围组织 中 已 经存在 的静脉 或 淋 巴管 ， 另一 部 分学 者则 通 过 ］而 体 外细胞 培养和 在体免 疫荧 光多 重染 色 的方 法 ，发 现血液 中存 在一 类细胞 具有分 化成 为淋 巴管 内皮 细 胞 的潜能 ， 而提 出新 生淋 巴管 内皮 细胞 可 能来 自 从 这 些 淋 巴 内 皮 祖 细 胞 ｌ 。 由 于 缺 少 透 射 电 镜 ＿ ８ ］ （ Ｍ） ＴＥ 下新 生 淋 巴管 内皮 细 胞 的超 微 结 构 特 征 的 报 告 ， 这个 争论 仍 在 继续 中 。本 次 实验 首 次运 用 使 Ｔ Ｍ 观察 了小 鼠空肠 缺 血 再灌 注 损 伤后 中心 淋 巴 Ｅ
孟繁伟
［ 图 分 类 号］ Ｒ ６ 中 ３３ ［ 文献 标 识 码 ］ Ａ ． ［ 章编 号］ １０ — １４ 《０ ００ —０ １ —０ 文 ０ ５ ７０ ２ １ ）４ ０ １ ３
巴系统 通过各 级淋 巴管将 富含 蛋 白质 的组织
液吸 收并转 运 到血 液循 环 系统 ， 维 持组 织 对 液的稳 态发挥 着重要 作用 。淋 巴管 同样 也是 周 围组织 中被 激活 的免疫 细胞到 达区域 淋 巴结 的重 要 通路 。另外 ， 由小肠 黏膜 吸收 的营养物 质 ， 特别是 脂 肪 以及 脂溶 性 维 生 素 Ａ、 Ｄ、Ｅ、 主要 经 小 肠 绒 Ｋ
淋 巴管参 与很多疾 病 的发 生及 其 病 理演 变 过 程 ， 如
淋 巴水 肿 、 炎症性 疾病 、 瘤转 移 以及 缺血再 灌注损 肿
供 应此 段肠 管 的肠 系 膜 血 管全 部 用微 血 管钳 夹 闭 ，
阻断血 流 ， 时肠管 颜 色 变 为苍 白， 续 １ ｍｉ 此 持 ５ ｎ后 ， 松 开止 血钳 ， 复肠 管 的血 液供应 ， 恢 然后 将肠管 放 回 腹 腔 ， 合腹壁 。对 照组小 鼠只行 腹壁切 开 ， 行缺 缝 不
编码 烟 台 ２ ４ ０ ６１０
两组 小 鼠分 别于 缺 血再 灌术 后 即刻 （ ｈ 、 ｈ １ Ｏ ） ８ 、 天、 天 、 ３ ７天 （ 每次 ２只 ） 用苯 巴比妥 钠 （ ０ｒｇ ｋ ） ５ ／ ｇ ａ 深麻 醉后 ， ４ 甲醛一 酸缓 冲液 （ Ｈ ７ ４ 经 心 脏 用 磷 ｐ ． ） 灌流 固定致 死 ， 速 打 开 腹 腔 ， 取 缺血 再 灌 注 空 迅 摘 肠 ， 部分行 石蜡 包埋用 于免 疫组化染 色光镜 观察 ； 一 另一 部分 被切 成 小 块 （ ｍｍ。 ， １ ） 采用 常 规 戊 二醛 一 锇
酸双重 固定 ， 乙醇逐 级脱 水 ， ｐ ｎ８ ２包埋 ， 后超 Ｅ ｏ １ 最
薄切 片（ ０ ｍ） 醋酸铀 和柠檬 酸铅 染色 后 ， Ｊ Ｍ－ ５ｎ ， 在 Ｅ
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１ ４ 免 疫 组 织 化 学 染 色 ．
石蜡 切 片脱蜡后 ， １ １ 的 ０ ０ Ｍ 柠檬 酸缓 在 ２℃ ．１
冲液 （ Ｈ ６ ０ 中复 活抗 原 １ ｒｉ 进行 染 色 。先 ｐ ． ） ５ ｎ后 ａ
行 ０ ３ 双 氧水 灭 活 内源 性 过 氧化 酶 ， 与 增 殖 细 ． 再 胞 核抗原 （ Ｃ Ｐ ＮＡ） 的抗体 反 应 （ ℃） ４ ，然 后 与过 ４ ２ｈ
循循讲学 杂 ，０ ０ ２ （ ）¨ ～ １ ，５ 志 ２ １ ，０ ４ ： ２ １
◎ ２ １ Ｃ Ｎ ＥＪ ＲＮ Ｃ ＣＩ Ｃ ＡＴ Ｏ ０ ０ ＨＩ ＥＳ ＯＵ ＡＬＯＦ ＭＩＲＯ Ｒ ＵＬ Ｉ Ｎ
小 鼠空肠 缺 血 再灌 注 损 伤后 新 生 淋 巴管 内皮细 胞 的超 微 结构 特 征 ＊
５ｇ Ｏ 。随机分 为实验 组 和对照组 各 １ Ｏ只 。两组 小
鼠均 在标 准实验 室饲养 ， 按标 准给水 、 饮食 和光照 。 １２ 小肠 缺血再 灌注模 型制作 ．
实验小 鼠用 混 合 麻 醉 剂 （ ｔｍｉｅ ５ ｍｇ ｋ ； Ｋｅａ ｎ ０ ／ ｇ
Ｘ ｌｚ ｅ４ ｍｇ ｋ ） 麻醉后 ， ｙａｉ ０ ／ ｇ 深 ｎ 在上 腹部 正 中线 打 开 腹腔 ， 暴露空 肠 （ ～８ ｍ） 将 此 段 肠 管 的 两端 以及 ５ ｃ ，
血再 灌 注 。 １３ 小 肠 组 织 取 样 及 ＴＥ 观 察 ． Ｍ
伤等 。小肠 缺血 再 灌 注损 伤 常见 于消 化道 扭 转 ＿ 、 １ ］
小肠移 植＿ 及 心脏 外 科 手 术。 。有 报告 指 出 ， ２ 。 ］ 缺血 再灌 注损伤后 小肠 黏膜 的再生可 以迅速 恢复 黏膜 的
氧 化酶连 接 的二 级抗 体 反应 ， ＤＡＢ着 色 ； 后在 ９ 随 ５
管再生 过程及 新生 淋 巴管 内皮细 胞主要 的超微 结构
特点 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 实 验动物 与分组 ．
成年 Ｂ Ｂ ｃ 小 鼠 ，Ｏ只 ， ＡＬ ／Ｎ ２ 雌雄 不拘 ， 重 ４ 体 ０
～
毛的 中心 淋 巴管 吸收 。在 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 态结 构 方 面 ， 细淋 巴 毛
管 与有着 完整基 膜 以及 周 细胞 的毛 细血 管 相 比 ， 有 其 独立 的特征 ： 始部 为盲端 ， 起 管壁 由单层 内皮 细胞 构成， 有瓣 膜 ， 没有 完整 的基膜 ， 管腔 内没有 红细胞 ， 内皮 细胞 相互覆盖 ， 形成 向管 腔 内开 放 的单 向活瓣 。
防御功 能 ， 止 细 菌入 侵 ］ 防 。小肠 黏 膜 的血 管 和
淋 巴管再 生更是 这个 过程 中的重要 组成部 分 。关 ］ 于新生淋 巴管 内皮 细胞 的来 源一直 存在争 议 。一部 分学者认 为新生 淋 巴管 内皮 细胞来 自周 围组织 中 已 经存在 的静脉 或 淋 巴管 ， 另一 部 分学 者则 通 过 ］而 体 外细胞 培养和 在体免 疫荧 光多 重染 色 的方 法 ，发 现血液 中存 在一 类细胞 具有分 化成 为淋 巴管 内皮 细 胞 的潜能 ， 而提 出新 生淋 巴管 内皮 细胞 可 能来 自 从 这 些 淋 巴 内 皮 祖 细 胞 ｌ 。 由 于 缺 少 透 射 电 镜 ＿ ８ ］ （ Ｍ） ＴＥ 下新 生 淋 巴管 内皮 细 胞 的超 微 结 构 特 征 的 报 告 ， 这个 争论 仍 在 继续 中 。本 次 实验 首 次运 用 使 Ｔ Ｍ 观察 了小 鼠空肠 缺 血 再灌 注 损 伤后 中心 淋 巴 Ｅ
孟繁伟
［ 图 分 类 号］ Ｒ ６ 中 ３３ ［ 文献 标 识 码 ］ Ａ ． ［ 章编 号］ １０ — １４ 《０ ００ —０ １ —０ 文 ０ ５ ７０ ２ １ ）４ ０ １ ３
巴系统 通过各 级淋 巴管将 富含 蛋 白质 的组织
液吸 收并转 运 到血 液循 环 系统 ， 维 持组 织 对 液的稳 态发挥 着重要 作用 。淋 巴管 同样 也是 周 围组织 中被 激活 的免疫 细胞到 达区域 淋 巴结 的重 要 通路 。另外 ， 由小肠 黏膜 吸收 的营养物 质 ， 特别是 脂 肪 以及 脂溶 性 维 生 素 Ａ、 Ｄ、Ｅ、 主要 经 小 肠 绒 Ｋ
淋 巴管参 与很多疾 病 的发 生及 其 病 理演 变 过 程 ， 如
淋 巴水 肿 、 炎症性 疾病 、 瘤转 移 以及 缺血再 灌注损 肿
供 应此 段肠 管 的肠 系 膜 血 管全 部 用微 血 管钳 夹 闭 ，
阻断血 流 ， 时肠管 颜 色 变 为苍 白， 续 １ ｍｉ 此 持 ５ ｎ后 ， 松 开止 血钳 ， 复肠 管 的血 液供应 ， 恢 然后 将肠管 放 回 腹 腔 ， 合腹壁 。对 照组小 鼠只行 腹壁切 开 ， 行缺 缝 不