EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代细胞生物特性的比较研究
奥美拉唑对人脐静脉内皮细胞全基因表达谱的影响及机制分析
奥美拉唑对人脐静脉内皮细胞全基因表达谱的影响及机制分析刘先锋;卢学春;范利;高燕;马聪;罗芸【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2012(032)004【摘要】Objective To characterize the effect of omeprazole on the spectrum of gene expression in the cultured human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) line (EA.hy926),and explore the underlying molecular mechanism.Methods Affymetrix U133 plus2.0 oligonucleotide microarray was used to detect the alteration in the gene expression profiles induced by l×10-5 mol/L omeprazole in HUVECs.Real-time PCR was employed to verify the results of selected differentially expressed genes,and Western blotting was performed to test the expression levels of the related proteins.Results A total of 282 genes were found to show at least 1.5-fold changes in EA.hy926 cells after treatment with omeprazole for 48 h,including 236 up-regulated and 46 down-regulated ones.These genes were involved in the regulation of transcription,inflammatory response,immune response,cell adherence,anti-apoptosis,and signal transduction.Conclusion Omeprazole modulates the function of endothelial cells by regulating the gene expression profiles of multiple pathways.%目的研究奥美拉唑对体外培养人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)基因表达谱的影响,探讨奥美拉唑对内皮细胞作用的分子机制.方法 10-5mol/L奥美拉唑与人脐静脉内皮细胞株共培养48h,运用Affymetrix U133 plus 2.0全基因组表达芯片,检测奥美拉唑对人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响,分子注释系统MAS3.0软件进行聚类分析.RT-PCR验证基因表达谱结果,Western blotting验证相关蛋白水平的变化.结果奥美拉唑作用内皮细胞48h后,基因芯片分析筛选出差异表达大于1.5倍的基因282个,其中上调基因236个,下调基因46个,包括转录调节、炎症反应、免疫反应、细胞粘附、抗凋亡、信号转导等相关基因,RT-PCR和Western blotting结果与基因芯片结果一致.结论奥美拉唑在基因水平通过多条通路调节内皮功能.【总页数】5页(P472-476)【作者】刘先锋;卢学春;范利;高燕;马聪;罗芸【作者单位】解放军总医院南楼血液科,北京100853;解放军第401医院干部病房三科,山东青岛266071;解放军总医院南楼血液科,北京100853;解放军总医院南楼血液科,北京100853;解放军总医院南楼血液科,北京100853;解放军总医院南楼血液科,北京100853;解放军总医院老年病研究所细胞生物学研究室,北京100853【正文语种】中文【中图分类】R975.6;R34【相关文献】1.阿托伐他汀钙对EA.hy926细胞全基因表达谱的影响及生物信息学分析 [J], 高燕;范利;卢学春;刘先锋;马聪;罗芸;赵霞;裴晶2.铁皮石斛多糖对人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响研究 [J], 王瑞君;谢兰;冯娟;赵文龙;郭志方;乔连生;宋维芳3.转化生长因子β对人肾小管上皮细胞全基因表达谱的影响及其生物信息学分析[J], WANG Guo-ping;WANG Jian-feng;CAI Guo-jun;WU Jia-feng4.人脐静脉内皮细胞脂多糖刺激后上调基因表达谱的分析 [J], 梁自文;杨宗城;罗向东5.川芎嗪对培养人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响 [J], 吴红金;吕俊萍;马增春;王升启因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
原代脐静脉内皮细胞与脐静脉内皮细胞株的培养方法及生物特性的比较
ｓｙ ｒｍ ｉＸｎｉ ｇ８ ０ １ ， ｈｎ ； ｅ ａｏａｏｙｏ ｉ ｉｎ ａｄｏａｃｌｒ ｓａｅ ｒｍ ｉ ｉｉｎ ３ ０ １ ｈｎ ． ｉ ，Ｕｕ ｑ， ｉ ａ ３０ １ Ｃ ｉａ ２ＫｙＬ ｂｒｔｒ ｎ ａｇＣ ｒｉｖｓｕａ ｅ ，Ｕｕ ｑ，Ｘｎａ ｇ８０ １ ，Ｃ ｉ ｔ ｊｎ ｆＸ ｊ Ｄｉｓ ｊ ａ
ｈ 脐静脉 内注 ０ １ 的 Ⅱ型胶 原酶 消化 获得 内皮 细胞 ， Ｍ１９生长液 （ ２ ％ 的 内皮 细胞 生长 因子 ） 行 培养 ， Ａ ） ．％ 用 ９ 含 ５ 进 Ｅ． Ｈ ９ ６细胞株 用 Ｍ１９生长液。比较两组细胞 的形 态、 Ｙ２ ９ 超微 结构 、 细胞 纯度检 测 Ｃ ３ Ｄ １抗 体表达 。结 果 ① 形 态： 原代 Ｈ Ｖ Ｃ体 外生长 ３～ Ｕ Ｅ ４ｄ可铺满单层 ， 细胞呈梭形 、 满 ， 涡状排 列生长 ， 饱 漩 传代后 可见管腔样 结构 ； Ａ Ｈ ９ ６细胞株 Ｅ ． Ｙ２
ｏ ｉｌ ｇｃ ｒ ｐ ｒｉｓ ａ ｄ ｔ ｒ ｖ ｄ ｃ ｏ ｄ ｎ ｅ ｆ ｒｃ ｌ ｃ ｌ ｒ ｎ ｅ ａｅ ａ ｉ ｄ ｃ ｅ ｅ ｃ ． ｅ ｏ ｎ ｂ ｏｏ ｉ ａ ｐ ｏ ｅ ｔ ｐ ｏ ｉ ｅ ａ ｃ ｒ ａ ｃ ｏ ｅ ｕ ｔ ｅ ａ ｄ ｒ ｌｔ ｄ ｂ ｓｃ ｍｅ ｉａ ｒ ｓ ａ ｈ Ｍ ｔ ￣ ｌ ｅ ｎ ｏ ｕ ｌ ｒ ｈ ０． ％ ｓ ｌ ｔ ｎ ｏ ｏ ａ ｅ ａ ｅ ｔｐ １ ｏ ｕ ｉ ｆｃ ｌ ｇ ｎ ｙ ｅ ｏ ｓ
胞质 多颗 粒 ， ３可铺 满单层 ， ２— 可长成 复层 。② 超微 结构 ： 透射 电镜 下 ， 原代 ＨＵ Ｅ Ｖ Ｃ里可发现较 多的横切与纵切的韦伯 潘力 小体 ， Ｅ ＨＹ ２ 在 Ａ． ９ ６细胞株 里较 少。③ 细胞纯度检测 ：Ｄ １抗体 的表达 率原代 Ｈ Ｖ Ｃ细胞 大 于 Ｅ ． Ｙ ２ Ｃ３ Ｕ Ｅ Ａ Ｈ ９ ６细胞 株， 两种 细胞 Ｃ ３ 表 达差异有统计 学意义（ ＜０ ０ １ 。结论 脐静脉注 Ⅱ型胶原酶 消化 法配合 Ｍ１９生长液 可迅速 Ｄ１ Ｐ ．０ ） ９ 获 取大量 内皮 细胞 ， 其生物 学特性 明显优 于 Ｈ Ｖ Ｃ株 ， ＵＥ 而细胞株 则 以细胞数 量 多， 培养 方法 简单， 活率 高为特点 ， 成 两
克拉屈滨对人脐静脉内皮细胞活力和代谢的影响
克拉屈滨对人脐静脉内皮细胞活力和代谢的影响陈丽璇;张红;王小华;段锋祺;周兆;刘革修【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2018(034)004【摘要】目的:研究克拉屈滨对人脐静脉内皮细胞EA.hy926生长及分泌活性的影响,探讨克拉屈滨通过抑制内皮细胞活力发挥抗肿瘤的作用机制.方法:采用CCK-8法检测不同浓度(0.4~1 μmol/L)克拉屈滨对内皮细胞活力的影响;用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot 检测细胞凋亡和周期相关蛋白的表达水平;用ELISA法检测上清液肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平;Gries法检测上清液一氧化氮(nitric oxide,NO)含量.结果:克拉屈滨作用48 h对细胞活力有明显的抑制作用,其半数抑制浓度约为3.644 μmol/L,随药物浓度升高和作用时间的延长而抑制作用增强.克拉屈滨作用48 h后,细胞周期被明显阻滞在S期, 0.4 μmol/L时S期细胞约43.74%,1 μmol/L时S期细胞约77.23%.克拉屈滨处理后,各组内皮细胞的凋亡率没有显著差异.克拉屈滨处理后,caspase-3与Bax蛋白水平无明显差异;p21水平随着药物浓度增加而增高,而p53水平随着药物浓度增加而降低(P<0.05).克拉屈滨处理后,上清液中TGF-β1和TNF-α水平升高,VEGF含量减少(P<0.05).克拉屈滨处理后,上清液中NO 含量减少(P <0.05).结论:克拉屈滨能明显抑制内皮细胞EA.hy926的活力,其主要机制与细胞周期阻滞有关.同时克拉屈滨能促进内皮细胞EA.hy926分泌TNF-α和TGF-β1,抑制其分泌VEGF和NO.【总页数】6页(P605-610)【作者】陈丽璇;张红;王小华;段锋祺;周兆;刘革修【作者单位】广州中医药大学,广东广州510405;浙江省台州医院康复科,浙江临海317000;临海市第一人民医院普内科,浙江临海317000;南方医科大学,广东广州510515;暨南大学基础医学院血液研究所,广东广州510632;暨南大学基础医学院血液研究所,广东广州510632【正文语种】中文【中图分类】R965;R329.2+5【相关文献】1.克拉屈滨联合马法兰方案用于儿童FLT-3/ITD阳性难治白血病的疗效分析 [J], 杜振兰; 封志纯; 罗荣牡; 张晓妹; 王娅; 司英健; 陈伟; 谷文静; 邢国胜; 窦凌松2.克拉屈滨治疗经典型毛细胞白血病致间质性肺炎一例报道并文献复习 [J], 傅雷华; 葛国兴; 傅佳萍; 张志坚; 洪攀; 封蔚莹3.联合克拉屈滨预处理方案在难治/复发性急性髓系白血病患者异基因造血干细胞移植中的疗效观察 [J], 王晴晴;夏凌辉4.克拉屈滨联合化疗治疗儿童AML1例 [J], 杨翠云;张晓莉;李毓;罗学群;黄礼彬5.克拉屈滨对人脐静脉内皮细胞的毒性作用及机制 [J], 王小华;陈丽璇;张红;韩娜;段锋祺;周兆;吕林林;肖扬;刘革修因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组人促红细胞生成素体外诱导人脐静脉内皮细胞血管新生作用的实验研究
重组人促红细胞生成素体外诱导人脐静脉内皮细胞血管新生作用的实验研究姚晓艳;李红戈【摘要】Objective: To study the angiogenic role of recombinant human erythropoietin (rH-EPO) on EA. hy926 cells after oxygen and glucose deprivation followed by reoxygenation (OGD/R) in vitro. Methods: Cells were subjected to OGD/R and stimulated by rH-EPO during the reoxygenation procedure. MTT assay, Transwell assay and Matrigel assay were used to detect the angiogenic ability of cells post-OGD. The expressions of vascular endothelial growth factor (VEGF), endothelial nitric oxide synthase (eNOS) mRNA and eNOS protein were also detected. Results: OGD induced a significant decrease in proliferation, migration, and tube formation ability of EA. hy926 cells and the expression of VEGF, eNOS mRNA and protein were significantly decreased. rH-EPO mitigated the OGD-induced damage of proliferation, migration, and tube formation ability of cells and increased the expression of VEGF, eNOS mRNA and protein.Conclusion: VEGF and eNOS probably play critical roles in the angiogenic effects of rH-EPO on cells after OGD.%目的:探讨重组人促红细胞生成素(rH-EPO)对缺血缺氧损伤内皮细胞的血管新生作用及其可能机制.方法:氧糖剥夺-复氧复糖(OGD/R)损伤内皮细胞株EA.hy926,复氧复糖过程中添加rH-EPO;采用MTT还原法、Transwell小室迁移实验及Matrigel小管形成实验评价内皮细胞血管新生能力;ELISA法检测培养上清液血管内皮生长因子(VEGF)含量;实时PCR 法分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA变化;Western Blot法分析eNOS蛋白变化.结果:OGD诱导EA.hy926细胞受损,降低其增殖、迁移和管样结构形成能力,VEGF含量减少,eNOS基因及其蛋白表达均下降;rH-EPO干预后,受损细胞的增殖、迁移和管样结构形成能力提高,VEGF含量、eNOS基因及其蛋白表达均增加(均P<0.05).结论:rH-EPO可促进受损内皮细胞血管新生,VEGF和eNOS可能参与rH-EPO诱导的血管新生过程.【期刊名称】《神经损伤与功能重建》【年(卷),期】2011(006)002【总页数】5页(P79-83)【关键词】重组人促红细胞生成素;血管新生;氧糖剥夺;血管内皮生长因子;内皮型一氧化氮合酶【作者】姚晓艳;李红戈【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】R741;R741.05促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)以往被认为主要由胎肝及成人肾脏产生,作用仅限于调节红细胞生成。
登革病毒2型诱导人血管内皮细胞株EAhy926自噬的研究
３ ，ｎ ４ ± ．，ｅｐｃｖｌ 【ｏｃ ｓ ｎ】 Ｖ ｎ ｎｕｅｈ ｔ ｈｇ ｈ９６ ． ａｄ ． ７５ ｒ ｅｔｅ ．Ｃ ｎｌ ｉ ｓ Ｄ ２ ａ ｄｃ ｅ ｕ ｐａｙ ｆ Ａ ｙ２ ． ３ ４５ ｓ ｉｙ ｕｏ ｃ ｉ ｔ ａｏ ｏＥ
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育项 目（０ Ｋ Ｙ３ ） １ Ｙ Ｐ １
作 者 简介 ： 颖 ， 士研 究 生 ， 究 方 向 ： 感 染免 疫 ， — ａ ：ｈｓｔ ＠１３ ｏ ； 通 信作 者 ： 俊琪 ， 士 ， 教 授 ，－ ａ ： ｕ ｑ 李 硕 研 抗 Ｅｍ ｉ ｏ＿ ａ ｎ ６ ． ｒ ｌ ｉ ｃｎ 黄 博 副 Ｅｍ ｉ ｗ ｒ ７ ４ｈ ６ｈ ｎ ８ｈ ，ｔｅｅ ｅｅ（ ０±７ ％ ，７ ） （２±６ ％ ， ７ ） （ １±８ ％ ，ａ ｄ（ ９±１ ） ｏ ｕｏｈ ｇ ｅｌ ｉ ｏ ｔ ｌ ｒｕ ｓ ） ｎ ６ ０ ％ ｆ ｔｐ ａｉ ｃ ｌ ｃ ｎ ｏ ｇｏｐ ａ ｃ ｓｎ ｒ
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登革病毒 ２型诱导人血管 内皮细胞株 Ｅ ｈ ９ ６自噬的研究 Ａ ｙ２
李 颖 ，郑毅 涛 ，齐 一 鸣 ，黄 俊 琪
（ 山大学 中山医学院免疫教研 室 ∥教育部 热带病 防治研 究重点实验 室 ， 中 广东 广州 ５０８ １０ ０）
人脐静脉内皮细胞的分离及原代培养体会
人脐静脉内皮细胞的分离及原代培养体会杜利君;蒋兴亮【摘要】目的:建立一种操作简便、且能够获得数量较多及活力良好的人脐静脉内皮细胞的分离、培养方法.方法:采用0.1％ IV型胶原酶灌注消化分离人脐静脉内皮细胞,将其置于含有20％胎牛血清、内皮细胞生长因子及肝素的M199培养基内培养,倒置显微镜观察内皮细胞生长情况,免疫荧光方法鉴定内皮细胞的Ⅷ因子相关抗原.结果:细胞呈梭形或椭圆形生长,单层铺路石状排列或呈漩涡状排列.免疫荧光检测结果显示细胞的胞浆内有大量绿色荧光颗粒,Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应.结论:实验建立的人脐静脉内皮细胞分离和培养方法简单、可靠,且能获得足够数量和高纯度的血管内皮细胞,为进一步研究人体大血管内皮细胞的功能奠定了较好的基础.【期刊名称】《川北医学院学报》【年(卷),期】2013(028)001【总页数】4页(P48-51)【关键词】内皮细胞;脐静脉;细胞培养【作者】杜利君;蒋兴亮【作者单位】川北医学院附属医院,四川南充637000【正文语种】中文【中图分类】R329.2体外建立人血管内皮细胞模型是研究人体大血管内皮功能的主要手段之一。
由于内皮细胞株ECV304在形态学、基因学等生物特性上与内皮细胞比较存在明显差异［1］，因此，体外分离和原代培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cells，HUVECs)已成为国内外学者获取内皮细胞的重要途径。
本实验在借鉴其他学者体外分离、培养HUVECs技术的基础上，通过大量的实验并对此加以改良，旨在建立一种操作简便、且能够获得数量较多及活力良好的HUVECs的分离、培养方法，为进一步研究血管内皮细胞的功能及阐明相关疾病的生理和病理机制奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料M199培养液和胎牛血清分别为Invitrogen公司和Hyclone公司产品，IV型胶原酶、内皮细胞生长因子(ECGS)、肝素钠均为Sigma公司产品，胰蛋白酶为Amresco公司产品，PBS、兔抗人Ⅷ因子抗体及FITC标记的羊抗兔IgG抗体为北京中杉金桥公司产品，青霉素和链霉素为华北制药股份有限公司产品。
【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全[修改版]
![【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全[修改版]](https://img.taocdn.com/s3/m/39392e61dcccda38376baf1ffc4ffe473368fd4a.png)
第一篇：【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全【整理总结】关于MTT实验总结－－心血啊！MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
MTT步骤如下：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。
（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。
在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。
（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。
hsa-miR-204-5p对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响
hsa-miR-204-5p对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响张义炜;杨英;潘尚领【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2024(40)2【摘要】目的:探究hsa-miR-204-5p对人血管内皮细胞活力、迁移、周期及凋亡等生物学行为的影响。
方法:使用人脐静脉内皮细胞株EA.hy926构建过表达hsa-miR-204-5p(hsa-miR-204-5p mimics)模型。
通过细胞划痕、Transwell、CCK-8、细胞周期和凋亡率等指标评估hsa-miR-204-5p对内皮细胞功能状态的影响。
接着,使用RNA测序和RT-qPCR寻找并验证hsa-miR-204-5p的下游靶基因,将RNA测序中log2FC≤−0.5、P<0.05的基因和miRWalk数据库预测的hsa-miR-204-5p的下游靶基因取交集,并进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。
结果:过表达hsa-miR-204-5p可以抑制EA.hy926细胞的活力和迁移能力,降低EA.hy926细胞的凋亡率,并使聚集在S期的细胞减少。
富集分析结果发现hsa-miR-204-5p下游靶基因富集在MAPK信号通路,富集在此通路的基因为MAPT、PPP3R1、PRKACB、PTPRR、MAP2K4、CACNA2D2和RPS6KA6。
RT-qPCR结果显示,过表达hsa-miR-204-5p后,MAPT和MAP2K4扩增结果较好且表达为下调。
其中,MAPT下降趋势最明显。
结论:hsamiR-204-5p 可能通过抑制MAPT/MAPK信号通路而影响内皮细胞的活力、迁移和凋亡等生物学行为。
【总页数】8页(P230-237)【作者】张义炜;杨英;潘尚领【作者单位】广西医科大学基础医学院病理生理学教研室【正文语种】中文【中图分类】R543;R363.2;Q752【相关文献】1.胃癌细胞AGS中KDR的表达对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响2.微小RNA-184转染对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞生物学行为的影响3.不同形貌纯钛表面对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响4.人脐静脉内皮细胞来源外泌体对人牙髓干细胞生物学行为的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
融合细胞株Eahy926与亲本人肺腺癌细胞株A549差异表达蛋白的蛋白质组学分析
融合细胞株Eahy926与亲本人肺腺癌细胞株A549差异表达蛋白的蛋白质组学分析王国平;张宁刚;杨金亮;何燕;瞿燕春;蒋沙沙;路泽军;罗锋【期刊名称】《中国生物化学与分子生物学报》【年(卷),期】2007(23)8【摘要】融合细胞株Eahy926是人肺腺癌细胞株A549和人脐静脉内皮细胞杂交而成的永生化细胞株,具有血管内皮细胞的特性,已广泛用于内皮细胞相关研究.本研究应用蛋白质组学技术分析融合细胞株Eahy926与亲本人肺腺癌细胞株A549的蛋白质差异表达,探讨融合细胞生物学特性变化及其机制.对Eahy926和亲本A549的细胞总蛋白质进行双向凝胶电泳,在PDQuest软件辅助下找出差异表达蛋白质点,经肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting,PMF)和串级质谱(tandem massspectrometry,TMS)分析,SWISS-PROT数据库检索,成功鉴定出28个差异蛋白,如CATB、CK8、CK18、annexin A2、GRP78、HSP90、HSP60、vimentin 等一些与分子伴侣、氧化应激、能量代谢、信号转导等有关,并与肿瘤细胞分裂增殖、分化凋亡、侵袭转移、免疫逃逸以及肿瘤血管生长密切关联的蛋白质.研究发现,融合细胞株Eahy926和人肺腺癌细胞株A549的蛋白质组表达谱存在明显差异,这将有助于今后进一步探讨肿瘤细胞与内皮细胞的相互作用机制及其融合细胞的特性,筛选肿瘤增殖和转移相关蛋白质及分子标志物,亦可为肿瘤的抗血管生成治疗提供新思路.【总页数】8页(P652-659)【关键词】融合细胞株Eahy926;人肺腺癌细胞株A549;蛋白质组学;质谱分析【作者】王国平;张宁刚;杨金亮;何燕;瞿燕春;蒋沙沙;路泽军;罗锋【作者单位】四川大学华西医院肿瘤中心生物治疗国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q51【相关文献】1.恶性胶质瘤细胞株的蛋白质组差异表达分析 [J], 赵占考;姜忠敏;刘晓智;齐丽莎;秦晓静2.人耐药肺腺癌A549/DDP细胞株的差异蛋白质组学 [J], 魏瑞;谢云;杨丁懿;贺礼理;彭芳;申良方3.应用LCM和蛋白质组学技术筛选肺腺癌的差异表达蛋白质 [J], 代书炎;李茂玉;李育;覃婉元;梅城;付莹;陈永恒;陈主初;彭芳4.正常人胚肺HELF、人肺腺癌细胞A549和转染RARβ表达载体的A549蛋白质组差异分析 [J], 李尊岭;于雪艳;胡国强;刘师莲;田克立;胡晓燕5.人肺腺癌A549及A549/DDP细胞株差异蛋白质组学分析 [J], 曹立明;胡成平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代细胞生物特性的比较研究
２ Ｏ １ ４年 １月 ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｘｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
Ｖｏ １ ． ３ ７ ＮＯ． １
Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ４
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Ｘｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ，Ｕｒ ｕ ｍｑ ｉ ８ ３ ０ ０ ６ ３ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ）
静 脉 内皮 细胞 株 与 原代 ＨＵＶＥ Ｃ ｓ 平均 光 密 度值 分 别 为 （ ２ ２ ３ ４ ． ０ ２ ±７ ８ ． ７ ８ ） 、 （ ４ １ ３ ８ ． ８ ０ ±５ ９ ４ ． ０ １ ） 。原 代 ＨＵＶ Ｅ Ｃ ｓ 的
染 色 程 度 明显 较 Ｅ Ａ． ＨＹ９ ２ ６细 胞 株 高 ， 差异有统计学意义 （ Ｐ＜Ｏ ． ０ １ ） 。Ｅ Ａ． ＨＹ ９ ２ ６人脐 静 脉 内 皮 细 胞 株 生 长 曲 线
较原代 ＨＵＶＥ Ｃ ｓ 稳 定。 结 论 培养原 代 ＨＵＶ Ｅ Ｃ ｓ 耗时长 ，生长期较 短 ， 易 出现杂细胞 的污染 ， 细胞的增殖 能力
有限 ， 花 费 昂 贵 。Ｅ Ａ． ＨＹ ９ ２ ６细胞 株 虽 生 物 特性 较 差 ， 但 其操作 简便 ， 具 有 一 定 程 度 的 原 代 ＨＵＶＥ Ｃ ｓ 所 具 有 的 生
Ｌ Ｉ Ｈｕ ｉ ，Ｌ Ｉ Ｘｉ ｕ ｊ ｕ ａ ｎ ，Ｇｕ ｌ ｉ ｒ ｅ ｂ ａ Ｘｉ ａ ｙ ｕ ｍａ ｉ ｄ ａ ｎ 。 ，Ａｍａ ｎ ｇ ｕ ｌ ｉ Ｒｕ ｚ ｅ ，Ｗ Ｕ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ，ＮＩ Ｅ Ｙｏ ｎ ｇ ｍｅ ｉ
积雪草酸对血管生成的影响及其机制初探
前言血管新生（neovascularization）可分为两种类型，其中一种主要见于胚胎时期，是指从原位分化的内皮细胞上形成新的血管的过程，称为血管形成（vasculogenesis），即血管从无到有的过程；而另外一种则是由组织中已经存在的成熟血管的内皮细胞发生增殖，形成小的血管的过程，称为血管生成（angiogenesis），血管生成的过程包括血管内皮细胞的激活、血管基底膜的降解、血管内皮细胞的增殖和迁移、新生的毛细血管管腔的形成、周细胞募集并稳定新形成的毛细血管网络、新生血管的成熟。
正常状态下的血管生成短暂且受到严密调控，主要见于个体的生长、发育、伤口的修复和女性子宫内膜周期。
而病理状态下的血管生成是持续且不受控制的，主要见于肿瘤的生长与侵袭过程、类风湿性关节炎、糖尿病视网膜病变、大脑和心脏的梗死[1-4]。
Folkman于1971年就认为肿瘤细胞的生长依赖血管的生成，当肿瘤体积达到2~3mm3以上时就必须靠新形成的血管提供生长所需的氧气与营养物质。
如果抑制肿瘤的血管生成就可以达到治疗肿瘤的目的[5]。
由于被肿瘤细胞募集到其周围的微血管内皮细胞较肿瘤细胞具有遗传学上的稳定性，针对内皮细胞的抗血管生成疗法较传统化疗具有低毒、特异性高以及不易产生耐药，故抗血管生成疗法得到很多学者关注。
目前，一些血管生成抑制剂（angiogenesis inhibitors）如Avastin、Tarceva等已用于临床，取得了一定得疗效，但其实际效果却比动物实验的效果要差，因此单纯针对内皮细胞的治疗在抗肿瘤治疗中的应用将会受到一定的限制。
积雪草为伞科植物积雪草的干燥全草，在我国作为药用植物已有二千余年历史，国内积雪草资源丰富，遍布长江流域以南地区。
专家学者们已对其进行了广泛深入的研究，发现其具有较强的药学活性，较为广泛的药理作用。
积雪草酸（asiatic acid，AA）是积雪草中含量较高的五环三萜酸，分子式为C30H48O5，相对分子量为488.7，结构式见下图，与熊果酸（ursolic acid）结构类似，同属于五环三萜类化合物的乌苏烷型，现有的研究表明两者具有类似的药学活性。
血小板源性生长因子和血小板源性内皮细胞生长因子在内皮细胞和血管平滑肌细胞中的作用研究
血小板源性生长因子和血小板源性内皮细胞生长因子在内皮细胞和血管平滑肌细胞中的作用研究朱晋坤;毛华;尹扬光;董文;杜峰;鲁玉明;熊宗华;邓梦扬【期刊名称】《中国全科医学》【年(卷),期】2015(18)9【摘要】目的：通过体外转染血小板源性生长因子（ PDGF）和血小板源性内皮细胞生长因子（ PD-ECGF）质粒，观察两种生长因子对人脐静脉内皮细胞EAHY926和主动脉血管平滑肌细胞T/G HA-VSMC的影响，评估两种生长因子对血管损伤治疗的可行性。
方法构建人pcDNA 3.1（＋）空载（空载组）、pcDNA 3.1（＋）-PDGF-透明质酸（HA）（PPH 组）和 pcDNA 3.1（＋）- PD-ECGF - HA（PPEH 组）质粒，分别转染入 EAHY926和 T/G HA-VSMC中，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（ MTT法）检测内源性PD-ECGF和外源性PD-ECGF对EAHY926和T/G HA-VSMC细胞增殖的影响；细胞伤痕实验观察内源性PD-ECGF和外源性PD-ECGF对 EAHY926和T/G HA-VSMC细胞迁移速度的影响。
结果 MTT 法检测3组 EAHY926吸光度值比较，差异有统计学意义（ F ＝235.18，P＜0.001），其中PPH组高于空载组和PPEH组（P＜0.05）；空载组与PPEH组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
MTT法检测3组T/G HA-VSMC吸光度值比较，差异有统计学意义（ F＝82.89，P＜0.001），其中PPH 组高于空载组（P＜0.05）；PPEH组低于空载组（P＜0.05）。
MTT法检测转染PPEH质粒的培养基（L-PPEH）对PPH诱导的EAHY926和T/G HA-VSMC增殖的影响，空载组、PPH组、PPH＋L-PPEH组EAHY926吸光度值比较，差异无统计学意义（F＝512.89，P＝0.183）。
空载组、PPH组、PPH＋L-PPEH组T/GHA-VSMC吸光度值比较，差异有统计学意义（F＝317.40，P＜0.001）；其中PPH组高于空载组和PPH＋L-PPEH组（P＜0.05）。
两种人脐静脉内皮细胞培养方法的比较
１ ． １ 实验材料及主要试 剂 、仪器 １ ． １ ． １ 材料 供 ，产妇及其家属签署知情同意书。 １ ． １ ． ２ 主要试 剂
足 月健康 出生 的新 生儿脐带 由太和 医院妇 产科提 而活 细胞 拒染呈无色透 明状 。 随机 观察 ５ 个 视野 ， 活细胞率 （ ％） ＝ Ｍ１ ９ ９培 养基 ，胎 牛血 清 （ Ｈｙ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ 公司） ，胰 酶加 ０ ． ０ ２ ％ 的Ｅ Ｄ Ｔ Ａ消化液灌注 消化法获取 的内皮 细胞 ，活细
胞贴壁数量只达到 ２ ０ ％～ ３ ０ ％，细胞大部分呈梭形 ，少 部分 呈圆 形或椭圆形。 ２ ． ２ 检测细胞活力
种 疾病发生 密切相关 ，血管细胞 的研 究因此成 为动脉粥样 硬化 以及其 他血管疾病研究 的重要方 向 ［ １ － ２ ］ ｏ人们 常用 脐静 脉作为获 取 血管 内皮 细胞 的来 源。本研究 利用健康 婴儿脐带 ，分别 采用 改 良方法 和传统方法来 获取 内皮 细胞 ，结果发 现细胞数量 和细
化 液消化 、方离脐静脉 内皮 细胞 ，用含 ２ ０ ％ 的胎 牛血清的 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ完全培养液 ，于 ３ ７ ｏ Ｃ 、５ ％Ｃ Ｏ 条件下培养 。（ ２ ） 方法 ２ ，用胶原酶 Ⅱ消化脐静脉
内皮细胞 ，用含 ２ ０ ％ 胎牛血 清 ＋细胞生长 因子 ＋明胶铺板 ，于 ３ ７℃、５ ％Ｃ Ｏ ， 条件下培养 。比较两种方法对细胞 活力 、培养细胞数量 等方 面的影
响。结果 ： 以改 良 方法 培养 的内皮细胞 ４ ｈ 贴壁生长 ，细胞数量达到整瓶 的 ８ ０ ％～ ９ ０ ％， ４ ８ ～ ７ ２ ｈ 生长最快 ，细胞融合 ，内皮 细胞呈单层铺路石样外观 。 传 统方法培养的内皮细胞 ２ ４ ｈ 后细胞数量只达到整瓶的 ２ ０ ％ ～ ３ ０ ％，细胞融合较慢 。结论 ：用 Ｏ ． １ ２ ５ ％胰酶加 ０ ． ０ ２ ％的 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ灌注脐静脉消化 内皮细 胞是获取内皮细胞的一种好方法 ， 更加简便 、经济 ，是建立稳定的人脐静脉内皮细胞分离 和培 养的好方法 。
人脐静脉内皮细胞的研究和应用. 看过的综述pdf
约，绝大部分对于人血管内皮的研究不能直接通过 角形，有一个卵圆形的核位于细胞中央，相差显微镜 真看
在体实验来进行，更多情况下，都是建立在体外培养 下，细胞边界清晰，细胞之间可见交错结合。而且经
的工具细 胞 的 基 础 上 来 实 施 的。 长 期 以 来，对 于 人 自体血管内皮细胞的各项研究决大多数是基于人脐
92 h。在培养 3 个月的时候，经过光镜、电镜、免疫组 啊但是可
信吗
化的重新检测，细胞与取材初期相比没有变化。Jaffe
医学综述 2011 年 4 月第 17 卷第 7 期 Medical Recapitulate，Apr 2011，Vol． 17，No． 7
·973·
等［3］的这种方法由于其令人满意的细胞获得量和纯 度得到了后人的纷纷效仿，此后关于获取原代 HUVEC 的方法绝大多数是沿用该办法或略加改进而成［5，6］。
免疫组化提示培养的内皮细胞具有平滑肌表型的肌 球蛋白； 并 且 具 备 红 细 胞 表 面 抗 原 （ ABH 抗 原 系 统） ，其中 H 型抗原高表达，A 和 B 型抗原也存在，但 是表达较 弱。 通 过 这 些 结 果，一 方 面 与 在 体 的 脐 静 脉内皮细胞 进 行 了 呼 应，另 一 方 面 也 与 同 时 培 养 的 平滑肌细胞或成纤维细胞进行了区分。
内皮细胞所有在体功能都可以通过体外培养来 得以实现，这 也 使 研 究 内 皮 细 胞 在 不 同 的 刺 激 和 培 养条件下的反应成为一种可能［7］。如内皮在血管收 缩中发挥的作用，应力、缺氧条件下的细胞反应，血 管重塑和血管形成，凝血和纤溶，与其他细胞（ 平滑 肌细胞、血细胞、肿瘤细胞等） 的相互作用。原代内 皮细胞由于最接近本体细胞，因此，在这些研究领域 具有重大意义。
人脐静脉内皮细胞的生物学特性及细胞内信号转导机制
人脐静脉内皮细胞的生物学特性及细胞内信号转导机制
姚忠祥
【期刊名称】《生理科学进展》
【年(卷),期】1998(029)002
【摘要】本实验对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）合成与释放篾这活性多肽（ＶＰｓ）及其作用机制进行了研究。
结果表明：（１）无神经支配的人脐血管内皮细胞（ＶＥＣ）所含ＶＰｓ较有神经支配的肠系膜血管ＶＥＣ多；（２）这些ＶＰＳ是ＶＥＣ自身合成且能释放到胞外；（３）血管活性肠肽（ＶＩＰ）和Ｐ物质（ＳＰ）使ＨＵＶＥＣ膜上Ｃａ＾２＋通道开放概率明显增加，生长抑制（ＳＯＭ）使其明显降低，但它们均使胞浆内「Ｃａ＾２＋」和ＣＡ
【总页数】4页(P133-136)
【作者】姚忠祥
【作者单位】第三军医大学基础部组织学与胚胎学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R329.25
【相关文献】
1.尾加压素Ⅱ促进乳鼠心肌成纤维细胞分泌胶原及增殖的细胞内信号转导机制 [J], 宋庆刚;吕建庄;杨竞霄
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蒲娟娟;徐标
3.IGF-Ⅰ对体外培养的胎鼠肺成纤维细胞collagenⅠ合成的作用及其细胞内信号
转导机制 [J], 刘丹;白英龙
4.中枢神经轴突再生的细胞内信号转导机制研究进展 [J], 武丽;张丽萍;张曼;夏猛
5.人脐静脉内皮细胞的生物学特性及细胞内信号传导机理 [J], 姚忠祥;蔡文琴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《内皮细胞生物学方法》
《内皮细胞生物学方法》
韩代书
【期刊名称】《国外医学情报》
【年(卷),期】2006(27)2
【摘要】内容评介：血管生物学的广泛研究始于20世纪70年代早期，这一领域的迅速发展主要基于两方面的研究进展，一是1971年提出了肿瘤发展依赖于血管生成的假说，二是在此后两年内成功地培养了内皮细胞。
近几十年在血管生物学领域的研究取得了许多进展，并已应用于临床，试图通过干扰血管的生成来治疗癌症。
在这一研究领域的发展过程中，建立起许多适用于内皮细胞研究的方法和技术。
【总页数】1页(P45-45)
【关键词】内皮细胞;生物学方法;血管生物学;20世纪;内容评介;血管生成;肿瘤发展【作者】韩代书
【作者单位】中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学室教授、主任
【正文语种】中文
【中图分类】R543.5;R446.11
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1.原代脐静脉内皮细胞与脐静脉内皮细胞株的培养方法及生物特性的比较 [J], 古
力热巴;聂永梅;马依彤;杨毅宁;刘芬;陈邦党;吴江
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EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代细胞生物特性的比较研究李慧;李秀娟;古力热巴·夏依买旦;阿曼古丽·如则;吴江;聂永梅【摘要】目的比较培养EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)的优缺点及生物学特性.方法通过倒置显微镜、透射电镜形态学鉴定、Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学检查及生长曲线测定,比较2种脐静脉内皮细胞的形态、生长曲线等差异.结果透射电镜观察到原代HUVECs中发现较多WebelPalade小体,而EA.HY926细胞株较少见.免疫组织化学染色Image-Pro Plus 6.0软件进行分析EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代HUVECs平均光密度值分别为(2 234.02士78.78)、(4 138.80±594.01).原代HUVECs的染色程度明显较EA.HY926细胞株高,差异有统计学意义(P＜0.01).EA.HY926人脐静脉内皮细胞株生长曲线较原代HUVECs稳定.结论培养原代HUVECs耗时长,生长期较短,易出现杂细胞的污染,细胞的增殖能力有限,花费昂贵.EA.HY926细胞株虽生物特性较差,但其操作简便,具有一定程度的原代HUVECs所具有的生物特性,细胞均一以及增长旺盛,可用于较复杂、细胞创伤较大的体外内皮细胞的研究.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2014(037)001【总页数】4页(P36-39)【关键词】EA.HY926细胞株;原代人脐静脉内皮细胞;细胞培养;比较【作者】李慧;李秀娟;古力热巴·夏依买旦;阿曼古丽·如则;吴江;聂永梅【作者单位】新疆医科大学基础医学院生理学教研室,乌鲁木齐830011;新疆医科大学基础医学院病理生理学教研室,乌鲁木齐830011;新疆医科大学第二附属医院心电图室,乌鲁木齐830063;新疆医科大学基础医学院生理学教研室,乌鲁木齐830011;新疆医科大学基础医学院生理学教研室,乌鲁木齐830011;新疆医科大学基础医学院生理学教研室,乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】R329.2+4血管内皮细胞分布于全身各组织器官，传统认为其功能是促进水及小分子物质交换,是位于血液与间质组织间的一层半透性屏障。
近年来发现内皮细胞可分泌多种生物活性物质通过进入循环、旁分泌或自分泌等方式作用于靶细胞，对机体进行调节。
血管内皮细胞功能障碍的发展后果已成为血管性疾病关注的热点[1-2]。
细胞实验已经成为不可或缺的研究方法。
相关的疾病主要有高血压、冠心病、动脉粥样硬化及肿瘤恶化[3]。
对血管内皮细胞功能的研究常用的是脐静脉内皮细胞，主要有原代脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVECs)和EA.HY926人脐静脉内皮细胞株。
本实验在建立原代人脐静脉内皮细胞体外分离和培养方法的同时，比较原代人脐静脉内皮细胞与 EA.HY926人脐静脉内皮细胞株的生物特性，为血管性疾病研究的细胞来源的选择提供理论支撑。
1 材料与方法1.1 材料原代细胞：来源于新疆医科大学第一附属医院产科健康剖宫产产妇分娩后所取的新生胎儿脐带，长度15～20 cm。
EA.HY926人脐静脉内皮细胞株来自上海细胞库。
1.2 试剂 M199培养基(Hyclone 美国)，胎牛血清(Gibco 美国)，内皮细胞生长因子(ECGS Millipore)，Ⅱ型胶原酶(Worthington 美国)，胰酶(Biosharp)，双抗/青链霉素合剂(Gibco 美国)，内皮细胞Ⅷ因子相关抗原免疫组化试剂盒(中杉)，PBS液(自配)，MTT(自配)。
1.3 方法1.3.1 EA.HY926细胞株的培养方法按细胞数>1×105个/mL接种到25 cm2的培养瓶中，M199生长液(含10%的胎牛血清、1%青链霉素合剂、肝素的M199培养基)培养，置于5%CO2细胞培养箱中，24 h后取出观察细胞生长。
1.3.2 原代细胞培养方法无菌条件下取健康剖宫产产妇分娩的新生儿脐带(离体时间<4 h)，长度15～20 cm，在超净台内用D-Hanks 液冲洗脐带表面，去除脐带两端约0.5 cm的易污染及血肿部分以便分清脐静脉;立即用含1%双抗的PBS液冲洗脐静脉管腔至无肉眼血色。
向管腔灌注Ⅱ型胶原酶后用止血钳封闭脐带的两段，置37℃培养箱中消化18 min，其间按压脐带2～3次，使血管壁上的内皮细胞彻底消化下来，加生长液[含 20%的胎牛血清、1%青链霉素合剂、25%的内皮细胞生长因子(ECGS)和肝素的M199培养基[4]]终止消化后收集细胞至50 mL离心管中， 1 000 r/min离心5 min。
弃去上清液，加入2 mL的生长液使细胞重悬并计数,要求>1×106个/mL。
移至25 cm2的培养瓶中，加生长液到4 mL，移至培养箱后立即水平十字架摇动培养瓶使细胞均匀贴壁。
静置培养48 h后换液1次，之后每2～3天换液1次。
显微镜下观察细胞的生长状况, 2～3 d后可传代[5]。
1.3.3 原代细胞及EA.HY926细胞株的鉴定 (1)倒置显微镜形态学鉴定：细胞长满以后，倒置显微镜下观察细胞的形态并照相。
(2)透射电镜形态学鉴定：透射电子显微镜观察内皮细胞超微结构及内皮细胞特异性Webel-Palade小体。
(3)Ⅷ因子相关抗原免疫组化检查：第2代或第3代的内皮细胞按1×105个/mL的浓度种植在35 mm的培养皿中，待细胞生长融合以后，用ABC法进行免疫组化染色，观察及照相;苏木素染色以后观察及照相，不同批次的细胞重复5次，用Image-ProPlus 6.0软件进行平均光密度评分，结果进行统计学分析。
(4)细胞增长曲线的绘制：分别取对数生长期细胞，将细胞按一定密度(最终浓度：原代细胞为1.6×104个/mL，细胞株为2.5×105个/mL)接种于96孔细胞培养板，100 μL/孔，24 h后每孔加入MTT(200 μL/孔),37℃、5%CO2培养箱孵育4 h，小心吸去上清，每孔加入二甲基亚砜150 μL，振摇10 min，在酶标仪490 nm吸光值的条件下测OD值，连续测6 d，以OD值绘制曲线。
2 结果2.1 倒置显微镜下形态学观察比较 EA.HY926细胞株有类管腔样结构形成，但细胞形态单薄，胞内颗粒状物质多，细胞可长成复层(图1a)。
原代HUVECs多呈椭圆形或小三角形、短梭形，第3～4天汇合成单层，细胞边界清楚,胞质丰富，胞核呈圆形或椭圆形，偶见双核，密集处呈铺路石状镶嵌排列，稀疏处为短梭形。
传代培养的细胞形态饱满，伸展呈长梭形，漩涡状排列生长，细胞贴壁牢固；细胞传至第3代出现管腔样结构(图1b)。
2.2 透射电镜观察细胞的超微结构透射电镜下，内皮细胞核清晰，细胞质内微丝、微管结构整齐，在少数细胞核周的细胞质中可见内皮细胞所特有的杆状小体,即Webel-Palade小体,其为质膜所包裹,横切面呈圆形或椭圆形，内有微管样结构。
在EA.HY926细胞株里较少见Webel-Palade小体(图2a)，原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)里可发现较多的横切与纵切的Webel-Palade小体(图2b)。
a： EA.HY926细胞株第4天 b：原代HUVECs 第4天 a: EA.HY926细胞株超微结构 b: 原代HUVECs超微结构图1 倒置显微镜下细胞形态图2 透射电镜下细胞的超微结构(→所示为webel-palade小体)2.3 Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色程度比较细胞质染色成棕黄色颗粒的细胞为内皮细胞，免疫组织化学染色结果判定EA.HY926细胞株染色表现为淡黄色(图3a、3b)，用Image-Pro Plus 6.0软件分析平均光密度值为(2 234.02±78.78)；原代HUVECs细胞质表现为棕黄色颗粒(图3c、3d)，用Image-Pro Plus 6.0软件分析平均光密度值为(4 138.8±594.01)。
原代HUVECs的染色程度明显较EA.HY926细胞株高，差异有统计学意义(P<0.01)。
a：EA.HY926细胞株Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色 b：EA.HY926细胞株Ⅷ因子相关抗原免疫组化苏木素细胞核染色 c：原代HUVECsⅧ因子相关抗原免疫组化染色 d：原代HUVECsⅧ因子相关抗原免疫组化苏木素细胞核染色图3 Ⅷ因子相关抗原的细胞免疫组织化学分析2.4 细胞增长情况原代HUVECs 48 h开始进入生长期，96 h达到高峰后，细胞开始衰老，趋向凋亡(图4a)。
EA.HY926细胞株48 h开始进入生长期，96～120 h达到高峰后，进入稳定生长，生长幅度较小(图4b)。
3 讨论脐静脉内皮细胞是血管细胞实验主要的内皮细胞来源，原代HUVECs研究方法在不断地改进,原代细胞培养的具体方法有组织块移植法、机械刮取法以及酶消化法[6]，酶消化法配制简单,细胞贴壁良好，2～3 d即可传代[5,7]，以其操作简单、费用低廉遂逐渐替代前2种方法。
EA.HY926人脐静脉内皮细胞株是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株，具有血管内皮细胞的特性，已广泛用于内皮细胞相关研究。
本研究对培养EA.HY926细胞株和原代HUVEC进行比较，发现2种细胞的培养方法和生物特性都有一定的不同，主要表现在以下几个方面：(1)2种细胞所用的M199生长液配制成分不同。
(2)在细胞的传代方面，长满的原代HUVECs(25 cm2)用1 mL的0.02 %EDTA+0.05%胰酶消化液消化效果最佳，在2～3 min时间可以消化95%以上的贴壁细胞;而EA.HY926细胞株用0.25%的胰酶消化液效果最佳，在1～2 min时间可消化95%以上的细胞。
(3)透射电子显微镜观察2种细胞超微结构，原代HUVECs中易发现较多的纵切与横切Webel-Palade小体，而EA.HY926细胞株上较少见。
(4)对Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色结果统计分析后，2种细胞染色程度差异有统计学意义，原代细胞染色程度高于EA.HY926细胞株。
(5)由细胞增长曲线可明显看出，原代HUVECs比EA.HY926细胞株脆弱，生长期较短，不能复层生长；而EA.HY926细胞株性能稳定，生长期较长，可复层生长。
a:原代HUVECs生长曲线 b: EA.HY926细胞株生长曲线图4 细胞生长曲线总之，原代HUVECs形态和生物特性较EA.HY926细胞株完整，但培养耗时长，产量低于EA.HY926细胞株，易出现杂细胞的污染，细胞的增殖能力有限，必须加入生长因子，花费较高，且细胞的活力与表型随着供者的代数的不同而不同，造成系统误差较大。