环境卫生学监测及标本采集方法PPT(69张)

棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
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棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
检验方法： 1、将每个采样管敲打80次或1分钟， 2、用灭菌吸管取0.2ml于营养琼脂平板中，再用无菌L棒涂 布整个平板表面，置36℃ ±1℃温箱培养24小时观察结果计 算菌落数
计算方法：
菌落数/C㎡=
平均菌落数×稀释倍数 采样面积×0.2
≤5
≤5
菌区、烧伤病房、重症监护病
房
儿科病房、妇产科检查室、注
III类
射室、换药室、治疗室、供应 室清洁区、急诊室、化验室、
≤500
≤10
≤5
各类普通病房和房间
IV类
传染病房
－
≤15
≤15
以上不得检出致病性微生物，如乙型溶血性链球菌，金黄色
葡萄球菌，沙门氏菌等。
四、所用材料
无菌吸管（0.5ml、5ml、 10ml）、 L棒、棉拭 子 、规格板 、普通琼脂平板、 10ml生理盐水等
三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手 细菌数标准。
环境类别
范围
标准
空气
物体表面 医务人员手
（cfu/ m3） （cfu/ cm2） （cfu/ cm2）
I类
层流洁净手术室、层流洁净
病房
≤10
≤5
≤5
普通手术室、产房、新生儿室
（母婴同室病房）、早产儿室、
II类
普通保护性隔离室、供应室无 ≤200
采样面积：常规监测时被采面积＜100cm2，取全部表面； ≥100cm2，取 100cm2。暴发流行时采样不受此限制。
所用材料：
（1）棉拭子采样法
对于平面物体，用5cm×5cm大小的标准灭菌规格版，放 在被检物体表面，用用浸湿灭菌生理盐水的棉拭子在规格版 内横竖往返均匀涂抹各5次，并随之转动棉拭子，连续采样1 －4个规格板面积。用无菌剪刀剪去手接触部分，将棉拭子装 入放有10ml灭菌生理盐水试管中。
环境卫生学监测及标本采集方法
一、医院感染微生物学监测
医护人员手、空气 、物体表面
医院 环境 卫生 学监 测
血液透析相关监测 消毒剂卫生学监测
压力蒸汽灭菌效果监测
医院消 毒灭菌 及医疗 用品效 能监测
内镜消毒灭菌效果监测 医疗用品的监测 微生物标本的采集
二、样品采集原则
医院重点部门的医护人员手、空气、物表的 微生物学监测应在清洁或消毒以后，医疗操作前 进行。如遇有医院感染流行或疑似环境污染时， 则需要立即进行监测，通过环境微生物检测，可 以及时发现传染源及传播途径。测定物品污染程 度或考核消毒措施的效果，都以样品所含微生物 的数量来计算。因此样品采集要有代表性。送检 时间一般不超过2小时。
2、空气采样
可根据自身条件选用沉降法（空气暴露法）或空气采 样器法。
采样时间：采样时选在消毒处理后，操作前进行采样， 采样前应关好门窗，在无人走动的情况下，静止10分钟进 行采样。
沉降法：
A：布点方法： 室内面积＞30m2设四角及中央5点，4角的布点位置距墙壁 1m处，离地面垂直高度为80-150cm。
计算公式：菌落数/m3 ＝
50000N AT
A＝平板面积（C㎡） T＝平板暴露于空气的时间（min） N＝平均菌落数
3、物体表面的采样
采样时间：根据采样目的选择采样时间，如进行常规物 体表面监测，选择消毒处理后4小时内进行采样，若是暴发 流行时的环境微生物学监测则尽可能对未处理的现场进行 采样。
常用消毒剂中和剂及其浓度表
消毒剂
甲醛
戊二醛
过氧乙酸 含氯消毒剂类
季铵盐类
碘（溴）制剂 酚类 氯已定 汞制剂 醇类 酸类 碱类
中和剂及其浓度
亚硫酸钠（0.1%～0.5%） 氨水 双甲酮（0.1%～1.0%）+吗啉（0.6%～1.0%）
对于门把手，金属，玻璃等曲面小型物体则采用棉拭子 直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，敷料，卫生纸等一次 性物品采样时，用无菌法取样品5g，放入装有10ml灭菌生理 盐水试管中。
检验方法：
1）将采样管敲打80次（或1分钟） 2）用灭菌吸管吸取0.2ml于营养琼脂平皿中，然后用无 菌L棒涂在整个平皿表面，置36°C温箱24小时观察结果。
手消毒效果要求：
卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/c㎡ 外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/c㎡
直接压印法：采样时被检人5指并拢，将平皿上培养 基表面直接压贴在手掌根部至指尖曲面10～20秒后送检。
将所采样本直接置36℃ ±1℃温箱培养24小时，根 据平皿面积计算细菌总数。
菌落数/C㎡= 平皿上菌落平均数 平皿面积（ C㎡ ）
室内面积≤30m2设内、中、外对角线3点，内、外点的布点 位置距墙壁1m处，离地面垂直高度为80-150cm。
B：采样方法：将普通营养琼脂平板或血平板（直径9cm）放 在室内各采样点处，采样高度距地面1.5m，内外及四角距墙 1m，采样时，将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5分钟，盖 好并将平皿置于37 ℃温箱培养，24小时观察结果，并计算5个 平板的平均菌落数。洁净手术室则暴露30分钟。
五、采样方法
1、手卫生监测： 采样时间：一般情况下每季度监测一次。当
发生医院感染流行、高度怀疑或确定与医务人员 手的污染有关时，应及时进行监测。常规监测在 洗手后从事治疗操作前，特殊监测随时采样。
采样方法：棉拭子涂布法和直接压印法，
棉拭子涂布法
被检人五指并拢，用浸湿灭菌生理盐水的棉 拭子在医护人员手指曲面从指根到指端往返涂擦 2次，并随之转动采样棉拭子，采完后剪去操作 者手接触部分，将棉拭子投入10ml灭菌生理盐 水试管内立即送检。
细菌总数/ml＝2个平板上的菌落总数×稀释倍数
评价标准：进水≤200cfu/ml 出水≤2000cfu/ml
5、使用中消毒剂监测
为监测消毒溶液在连续使用过程中的污染菌量，应定期 到各科室采样做生物学测定。
采样方法：用无菌吸管吸取消毒液1ml加至装有9ml含有 相应中和剂的营养肉汤内，以中和消毒药物的残效作用，中 和时间10分钟至1小时。
计算公式： 菌落数/ C㎡＝
平均菌落数×稀释倍数 采样面积×0.2
4、透析液微生物监测
检测方法：用无菌吸管吸取透析液进出水各2～3ml，放入 无菌试管，检测时可视透析液污染程度分别取原液或10倍稀 释液0.5ml放入2个灭菌平皿内，45 ℃ ～48 ℃的营养琼脂 15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，将平板置37 ℃培 养24小时，观察结果。